UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

“Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional”

FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA

CURSO: ENZIMOLOGÍA - LABORATORIO

TEMA: ACTIVIDAD INHIBIDOR TRIPSINA

INFORME DE LABORATORIO N° 5
Apellidos y Nombres Código

Esteban Pacheco, Angélica Margarita 20211646

Gutiérrez Candia, Antonella Georgina 20211650
Rivadeneyra Cardenas, Ector Adrian 20180120
Torres Anaya, Brenda 20211663

GRUPO N°4

2023 - II
1. INTRODUCCIÓN

La actividad del inhibidor de tripsina es un fenómeno biológico crucial que

desencadena una serie de eventos en organismos vivos, desde plantas hasta
animales. La tripsina es una enzima clave en la digestión de proteínas,
descomponiendo péptidos en aminoácidos esenciales para el crecimiento y
desarrollo celular. Los inhibidores de tripsina, por otro lado, son moléculas
diseñadas para regular esta actividad en diversos contextos biológicos.

Esta actividad tiene una importancia fundamental en la regulación del

equilibrio proteolítico en organismos, influyendo en procesos como la defensa
contra patógenos, la germinación de semillas, la respuesta inmune y la
protección contra depredadores. Además, el estudio de los inhibidores de
tripsina ha cobrado relevancia en aplicaciones industriales y médicas,
destacando su potencial en el desarrollo de fármacos y la mejora de la
resistencia de cultivos agrícolas.

Esta área de investigación proporciona una comprensión más profunda de los

mecanismos biológicos que subyacen en la regulación de la actividad de la
tripsina y abre nuevas oportunidades para aplicaciones prácticas que van
desde la medicina hasta la agricultura sostenible. Explorar la dinámica de los
inhibidores de tripsina no sólo arroja luz sobre la biología molecular, sino que
también ofrece posibilidades emocionantes para abordar desafíos clave en
diversos campos científicos y tecnológicos.

2. OBJETIVOS

Principal : Medir la actividad del inhibidor tripsina en unidades de enzima

inhibida.

Secundario: Medir la actividad de la tripsina en una muestra de soja.

3. FUNDAMENTO

Para medir la actividad del inhibidor de tripsina se realiza inicialmente la

extracción del inhibidor y luego se determina la actividad de la enzima en
presencia del inhibidor, comparándola con un estándar sin inhibidor. La
actividad del inhibidor de tripsina se expresa en unidades de tripsina inhibida
(UTI) por miligramo de muestra, considerando un incremento de absorbancia
de 0.01 como 1 unidad de tripsina.
4. MARCO TEÓRICO
4.1. Tripsina

Es un tipo de enzima proteasa que permite la hidrólisis de enlaces

peptídicos apoyando, de esta manera, con la digestión. Es secretada
por el páncreas de forma inactiva; como tripsinógeno, para luego ser
activada en el intestino delgado (Christiansen, 2022). Trabaja junto con
otras enzimas proteasas llamadas pepsina y quimotripsina.

La poca producción de este tipo de enzima puede ser indicativo de una

insuficiencia pancreática o de una fibrosis quística, por ello su análisis
médico en heces resulta muy útil para la determinación de alguna
enfermedad que impida la absorción correcta de los nutrientes.

4.2. Inhibidores

Son moléculas que disminuyen la actividad de la enzima permitiendo

una regulación enzimática. Estas pueden ser caracterizadas según el
punto de unión con la enzima o si es que pueden revertir o no su
acción.

4.2.1. Inhibidores de tripsina

Estos inhibidores regulan la actividad proteolítica de la tripsina

disminuyendo su velocidad de reacción. Sin embargo, este
proceso en ciertos casos, resulta perjudicial para la digestión
correcta de nutrientes; específicamente proteínas, generando
una deficiencia de aminoácidos en el sistema. Esto último
puede desencadenar otras enfermedades; tales como
alergenicidad, o generar problemas de manera indirecta; por
ejemplo con la disminución de triptófano en el sistema que
permite la formación de serotonina, un neurotransmisor que
permite la sensación de bienestar.
 Figura I. Principales fuentes animales y vegetales de
inhibidores de tripsina

Fuente:
https://uvadoc.uva.es/bitstream/handle/10324/7486/TFG-M-N17
0.pdf?sequence=1

Este tipo de inhibidores pueden encontrarse en setas, cereales,

plantas leguminosas como frijoles, maíz o arroz o de alguna
fuente animal. (García, 2014). Debido a su naturaleza proteica
su acción puede ser desactivada principalmente con calor ya
que de esta manera se logra su degradación (Quicazán y
Caicedo, 2012).
5. RESULTADOS

Tabla N° 1
Resultados experimentales de Absorbancia con Efecto de Inhibidor de Tripsina

Absorbancia Absorbancia C.V.

Tubos Absorbancia Promedio
del blanco corregida (%)

SOYA
M.
0.445 0.423
Estándar
0.022 0.4475 6
R.
0.450 0.428
Estándar
M. Soya I
(0.5/25 0.122 0.098
mL)
0.024 0.1285 6.2
R. M.
Soya I
0.135 0.111
(0.5/25
mL)
M. Soya
II (0.1/25 0.361 0.342
mL)
0.019 0.3635 7
R. M.
Soya II
0.366 0.347
(0.1/25
mL)
CAMOTE
M.
0.475 0.451
Estándar
0.024 0.447 1
R.
0.466 0.442
Estándar
M.
Camote 0.177 0.152
(2/25 mL)
0.025 0.15 1.3
R. M.
Camote 0.173 0.148
(2/25 mL)
M.
Camote 0.140 0.115
(3/25 mL)
0.025 0.114 1.3
R. M.
Camote 0.137 0.112
(3/25 mL)
 Tabla N° 2
Resultados experimentales de Unidades de Tripsina Inhibida (UTI)

Grado de inhibición UT (Unidades

Tubos UTI/mg de harina
(%) de tripsina)

SOYA

M. Estándar

- 42.55 UT -
R. Estándar
M. Soya I
(0.5/25 mL)
75.44 10.45 UT 160.5
R. M. Soya
I (0.5/25
mL)
M. Soya II
(0.1/25 mL)
19.04 34.45 UT 202.5
R. M. Soya
II (0.1/25
mL)
CAMOTE
M. Estándar
- 44.65 UT -
R. Estándar
M. Camote
(2/25 mL)
66.41 15 UT 37.06
R. M.
Camote
(2/25 mL)
M. Camote
(3/25 mL)
74.58 11.35 UT 27.75
R. M.
Camote
(3/25 mL)

Cálculo del grado de inhibición y Actividad de Tripsina Inhibida (UTI/mg):

a) Para soya 0.5/25 mL:

Grado de inhibición: 100 − ( 11.35

44.65 )×100 = 78. 44%
1000 mg de harina 100 mL

𝑥 = 5 mg 0.5 mL

Además,

5 mg 25 mL

𝑦 = 0.2 mg 1 mL

32.1 UTI 0.2 mg

𝑧 = 160.5 UTI 1 mg

b) Para soya 0.1/25 mL:

Grado de inhibición: 100 − ( 34.45

42.55 )×100 = 19. 04%
1000 mg de harina 100 mL

𝑎 = 1 mg 0.5 mL

Además,

1 mg 25 mL

𝑏 = 0.04 mg 1 mL

32.1 UTI 0.04 mg

𝑐 = 202.5 UTI 1 mg

c) Para camote 2/25 mL:

Grado de inhibición: 100 − ( 15

44.65 )×100 = 66. 41%
1000 mg de harina 100 mL

𝑚 = 20 mg 2 mL

Además,

20 mg 25 mL
 𝑛 = 0.8 mg 1 mL

29.65 UTI 0.8 mg

𝑝 = 37.06 UTI 1 mg

d) Para camote 3/25 mL:

Grado de inhibición: 100 − ( 11.35

44.65 )×100 = 74. 58%
1000 mg de harina 100 mL

𝑞 = 30 mg 3 mL

Además,

30 mg 25 mL

𝑟 = 1.2 mg 1 mL

33.3 UTI 1.2 mg

𝑠 = 27.75 UTI 1 mg

6. DISCUSIÓN

Los resultados obtenidos indican diferencias significativas en la actividad

inhibitoria entre ambas harinas, esto podría tener implicaciones importantes
en su uso como ingredientes alimentarios.

La actividad del inhibidor de la tripsina en la harina de soya fue

considerablemente más alta en comparación con la harina de camote. Este
hallazgo es consistente con la literatura existente, que sugiere que la soya
contiene altos niveles de inhibidores de proteasas, incluyendo inhibidores de
la tripsina (Liener, 1981; Grant et al., 1995). Estos compuestos son
reconocidos por su capacidad para interferir con la digestión de proteínas y,
por lo tanto, pueden afectar la calidad nutricional de los alimentos que los
contienen (Friedman & Brandon, 2001).

Por otro lado, la actividad inhibitoria observada en la harina de camote fue

significativamente menor. Esto se atribuye a la menor presencia de
inhibidores de proteasas en el camote, esto nos sugiere que su harina es
más digerible y, por ello, es más adecuada para ciertas aplicaciones
alimentarias donde la digestibilidad de la proteína es un factor importante
(Birk, 1985).
Es importante destacar que los inhibidores de la tripsina no solo afectan a la
digestión de las proteínas, sino que también han sido estudiados por sus
posibles beneficios para la salud, como la reducción del riesgo de ciertas
enfermedades y su uso en el tratamiento de trastornos pancreáticos (Kumar
et al., 2012). A pesar de ello, la presencia de estos inhibidores en la dieta
debe ser balanceada, puesto que niveles excesivos de estos pueden
conducir a una deficiencia en la absorción de proteínas y aminoácidos
esenciales (Gilani et al., 2005).

En el caso de la harina de soya, el procesamiento térmico es una estrategia

ampliamente utilizada para reducir la actividad de los inhibidores de la tripsina
y mejorar la calidad nutricional del producto final (Hajos et al., 1995). Los
resultados de esta práctica sugieren que un tratamiento similar podría no ser
tan crítico para la harina de camote como para la de soya, aún así, estos
estudios adicionales serían de gran utilidad para determinar las condiciones
óptimas de procesamiento que maximicen la retención de nutrientes y la
digestibilidad de las proteínas sin comprometer la seguridad alimentaria.

Cabe resaltar que existe una variabilidad en la actividad del inhibidor de la

tripsina entre diferentes variedades de soya y camote. La genética de la
planta y las condiciones de cultivo pueden influir significativamente en la
concentración de estos inhibidores (Shewry & Casey, 1999; Vandenborre et
al., 2011). Por lo tanto, la selección de variedades específicas que presenten
los niveles más bajos de inhibidores de la tripsina podrían ser una estrategia
viable para mejorar la calidad nutricional de la harina de soya y camote.

En conclusión, mientras que la harina de soya presenta una mayor actividad

inhibitoria, lo que requiere procesos de inactivación de inhibidores para su
consumo seguro, la harina de camote muestra una actividad mucho menor, lo
cual nos podría ofrecer ventajas en términos de digestión y aplicabilidad en
diferentes contextos alimentarios. Sin embargo, es esencial tener en cuenta
que la actividad del inhibidor de la tripsina es solo uno de los muchos factores
que contribuyen a la calidad nutricional de las harinas. Otros componentes,
como el contenido de fibra, vitaminas, minerales y compuestos bioactivos,
también deben ser considerados para obtener una evaluación integral.
7. REFERENCIAS

Birk, Y. (1985). The Bowman-Birk inhibitor. Trypsin- and chymotrypsin-inhibitor

from soybeans. International Journal of Peptide and Protein Research,

25(2), 113-131.

Christiansen, S. (2022, 11 septiembre). What is Trypsin? Verywell Health.

https://www.verywellhealth.com/trypsin-4777708

Friedman, M., & Brandon, D. L. (2001). Nutritional and health benefits of soy

proteins. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 49(3), 1069-1086.

García, C. (2014). Inhibidores de proteasas en leguminosas. Recuperado 20

de noviembre de 2023, de

https://uvadoc.uva.es/bitstream/handle/10324/7486/TFG-M-N170.pdf?s

equence=1

Grant, G., More, L. J., McKenzie, N. H., & Pusztai, A. (1995). The effect of

heating on the haemagglutinating activity and nutritional properties of

bean (Phaseolus vulgaris) seeds. Journal of the Science of Food and

Agriculture, 68(4), 503-511.

Gilani, G. S., Cockell, K. A., & Sepehr, E. (2005). Effects of antinutritional

factors on protein digestibility and amino acid availability in foods.

Journal of AOAC International, 88(3), 967-987.

Hajos, G., Gelencsér, E., Grant, G., Bardocz, S., Pusztai, A., & de Valdez, G.

F. (1995). Biological effects and survival of trypsin inhibitors and the

agglutinin from soybean in the small intestine of rats. Journal of

Agricultural and Food Chemistry, 43(1), 165-170.

Kumar, V., Sinha, A. K., Makkar, H. P. S., & Becker, K. (2012). Dietary roles of

non-starch polysaccharides in human nutrition: a review. Critical

Reviews in Food Science and Nutrition, 52(10), 899-935.

Shewry, P. R., & Casey, R. (Eds.). (1999). Seed Proteins. Kluwer Academic

Publishers.

Quicazán, M., & Caicedo, L. (2012). Inactivación del inhibidor de tripsina

durante el tratamiento térmico de bebidas de soya. Recuperado 20 de

noviembre de 2023, de

https://www.redalyc.org/pdf/1698/169823914105.pdf

Vandenborre, G., Smagghe, G., & Van Damme, E. J. M. (2011). Plant lectins

as defense proteins against phytophagous insects. Phytochemistry,

72(13), 1538-1550.