Análisis Instrumental

avanzado
Técnicas Espectroscópicas y sus aplicaciones en
ciencias agropecuarias

Luis Sanhueza Vega

Octubre 2020
 Temario de esta sección:
Interacción Luz-materia

Absorción y emisión atómica

Absorción molecular UV-visible

Luminiscencia (Fluorescencia y fosforescencia)

Espectroscopía Infrarroja con transformada de Fourier,

Espectroscopía Raman

Resonancia Magnética Nuclear (NMR)

Acoplamiento de plasma inducido (ICP-OES, ICP-MS)

Antes de comenzar.

Radiación electromagnética:
Coloquialmente = luz
 ¿Cómo se comporta la luz (radiación electromagnética)?

Ondulatorio: luz se caracteriza como una oscilación eléctrica (sinusoidal)

y de campo magnético

Velocidad de la luz 𝑐 = 𝜆𝜈

Se explican fenómenos como la reflexión, difracción, polarización, etc.,

Corpuscular: Formada por pequeñas partículas energéticas

(corpúsculos)
𝑐
𝐸 = ℎ𝜈 = ℎ Unidades de energía= ergios, Joules
𝜆
Se explican fenómenos como absorción, luminiscencia, efecto fotoeléctrico, etc.
 ¿Cómo se comporta la luz (radiación electromagnética)?

Formas útiles de expresar la energía de la radiación electromagnética:

h = constante de Planck (6.62 x 10-27 ergios; 6.62 x 10-34 J s)

𝒄 c = velocidad de la luz
𝑬 = 𝒉𝝂 = 𝒉
𝝀
 Interacción luz - materia

Diferentes Zonas del espectro electromagnético interactuaran con la materia

“de manera diferente”
 Interacción luz - materia

Diferentes Zonas del espectro electromagnético interactuaran con la materia

“de manera diferente”
Estados energéticos de especies químicas

Modelo atómico está basado en la teoría cuántica, desarrollada

inicialmente por Max Planck (1900)

Dos Postulados de la teoría cuántica:

1°. Átomos, iones y moléculas sólo pueden existir en estados
discretos de energía. Si la partícula cambia de estado energético
entonces absorbe o emite una cantidad de energía exactamente
igual a la diferencia de ambos estados.

2° Para el cambio energético entre ambos estados, la

energía involucrada estará relacionada a la diferencia de
ambos estados:
Estados energéticos de especies químicas Absorción de energía

E2
Modelo atómico está basado en la teoría cuántica, desarrollada E1
inicialmente por Max Planck (1900)
E0
Dos Postulados de la teoría cuántica:
1°. Átomos, iones y moléculas sólo pueden existir en estados
discretos de energía. Si la partícula cambia de estado energético
Emisión de energía
entonces absorbe o emite una cantidad de energía exactamente
igual a la diferencia de ambos estados. E2

Mayor estabilidad
2° Para el cambio energético entre ambos estados, la E1
energía involucrada estará relacionada a la diferencia de
ambos estados: E0
𝒄
𝑬𝟏 − 𝑬𝟎 = ∆𝑬 = 𝒉𝝂 = 𝒉
𝝀
 Átomos, iones:
Hidrógeno, Sodio; estaño, plomo,
iridio, etc.,

Absorben sólo ciertas longitudes de onda..

 Átomos, iones:
Hidrógeno, Sodio; estaño, plomo,
iridio, etc.,

Absorben sólo ciertas longitudes de onda..

 Átomos, iones:
Hidrógeno, Sodio; estaño, plomo,
iridio, etc.,

Absorben sólo ciertas longitudes de onda..

 En el caso de moléculas
(compuestos):
También Absorben sólo ciertas
longitudes de onda..

Pero:
 En el caso de moléculas
(compuestos):
También Absorben sólo ciertas
longitudes de onda..

Pero:

Representación de un diagrama de
energías general para una molécula, Nivel
E0 es el nivel fundamental (T amb), E1 y E2
corresponden a los primeros don niveles
excitados. En casda caso se explicitan los
correspondientes niveles vibracionales
 Componentes instrumentales en Espectroscopía Óptica:
1.- Fuentes de radiación.

Fuentes Continuas: Emiten radiación que cambia Fuentes de líneas: emiten pocas líneas
lentamente su intensidad en función de la long. de onda discretas en la región del UV y visible

Lámpara de vapor de Hg
Lámpara de vapor de Na

Láseres: Alta intensidad, luz monocromática

 Componentes instrumentales en Espectroscopía Óptica:
2.- Portamuestras (celdas, cubetas).
En función de la técnica empleada y el método específico, es necesario soportar la muestra en
un receptáculo para su posterior medición. Existen limitaciones instrumentales para cada caso.
 Componentes instrumentales en Espectroscopía Óptica:
2.- Portamuestras (celdas, cubetas).

Plasticas, vidrio, quarzo (Uv-vis, luminiscencia)

PotencialZ, (zetasizer)
 Componentes instrumentales en Espectroscopía Óptica:
5.- Analisis de datos
Espectroscopía de absorción
atómica:
• Absorción Atómica con llama (Flame Atomic Absorption Spectrometry, FAAS)

• Absorción atómica con calentamiento electrotérmico o absorción atómica con horno de grafito.
 Espectroscopía de absorción atómica

Componentes del Instrumento de Absorción

Atómica de llama
Absorción atómica es el proceso en el cual se mide la cantidad de luz
absorbida por los átomos.

-Lámpara de cátodo hueco

-Llama para la atomización
-Monocromador (obtención de radiación monocromática)
-Detector (fototubos, tubos fotomultiplicadores, etc)
-Sistema de lectura y procesamiento de la señal
Espectroscopía de absorción atómica
Horno de grafito

20 uL de muestra
 Espectroscopía de absorción atómica

La lámpara de cátodo hueco tiene Ar a baja presión (1 a 5 Torr). Al aplicar la diferencia de potencial, el gas
se excita y se dirige al cátodo produciendo eliminación de átomos. Estos mismos átomos producen
choques con otros, haciendo que éstos se exciten, para luego emitir.

Se emite las líneas de emisión del elemento del cual está constituido el cátodo.
 Espectroscopía de absorción atómica

1.- Fuente de luz.

Proceso de emisión de luz desde la lámpara de cátodo hueco

 Espectroscopía de absorción atómica

2.- Tipos de llama.

 Espectroscopía de absorción atómica

3.- Proceso de atomización

Método del horno de grafito (ventajas)

• La muestra se coloca en un recipiente de grafito

y es calentada eléctricamente.
• La permanencia es mayor que en la llama y la
temperatura alcanzada también es mayor
produciendo una detección más sensible (LD
menor).
• Se utiliza argón para purgar y además evita la
oxidación del tubo.
• Se utiliza un programa de temperatura de 3
etapas: secado, calcinación, atomización
Desventajas.
Ionización: Una forma de minimizar la ionización es agregando otro elemento con potencial
de ionización menor. Este efecto se observa a concentraciones bajas.

Autoabsorción: Desviación a concentraciones altas. Los atomos absorben radiación de

los átomos vecinos y no de la fuente de excitación.

Interferencia Química
• Se produce por la presencia de compuestos que forman productos estables con el
analito. Por ej. Ca con fosfato.
•
Se agrega otro metal que forme un compuesto más estable con fosfato o se sube la
Temperatura.
 Espectroscopía de absorción atómica

Visualización general del equipo de absorción atómica

La muestra es
vaporizada en la
llama

La muestra se
aspira (spray) hacia
la llama.
 Espectroscopía de absorción atómica

Visualización general del equipo de absorción atómica

 Espectroscopía de absorción atómica

Analogía a la espectroscopía de absorción atómica

 Espectroscopía de absorción atómica

Analogía a la espectroscopía de absorción atómica

Espectro lunar
 Espectroscopía de absorción atómica

Analitos a medir y cuantificar … a tener en cuenta:

¿Qué analito es medible en absorción atómica? Siempre en solución líquida

Tabla Periodica
H He
Li Be
Flame Only
B C N O F Ne
Protocolos de tratamiento de muestra
Na Mg Flame & Furnace Al Si P S Cl Ar
K Ca Sc Ti V Cr Mn Fe Co Ni Cu Zn Ga Ge As Se Br Kr • disolución,
Rb Sr Y Zr Nb Mo Tc Ru Rh Pd Ag Cd In Sn Sb Te I Xe
Cs Ba La Hf Ta W Re Os Ir Pt Au Hg Tl Pb Bi Po At Rn • Fusion con peróxidos
Fr Ra Ac
Ce Pr Nd Pm Sm Eu Gd Tb Dy Ho Er Tm Yb Lu
• digestión, etc.,
Th Pa U Np Pu AmCmBk Cf Es Fm Md No Lr
Dependerá de:
varian

¿Qué concentraciones permite analizar? Analito a analizar,

Concentraciones en ppm (y ppb)
Matriz de la muestra
 Análisis Cuantitativo

• A = KbC

• K = Involucra la eficiencia en la atomización y el paso al estado

excitado. (Sensibilidad del método)

• b = Paso a través de la llama

• C = Concentración de átomos en la llama

Se puede analizar 67 elementos, la muestra debe estar líquida (sin

sólidos en suspensión) y disponer al menos 2-4 mL.
Espectroscopía UV-vis:
1.- Aspectos teóricos de la técnica: Ley de Lambert - Beer

También conocida como Ley de Absorción

1.- Aspectos teóricos de la técnica: Ley de Lambert - Beer

También conocida como Ley de Absorción

𝐼
Transmitancia: 𝑇 =
𝐼0
𝐼
%𝑇 = 𝐼0
𝑥 100 %

𝐼0
Absorbancia: 𝐴 = 𝑙𝑜𝑔
𝐼
1.- Aspectos teóricos de la técnica: Ley de Lambert - Beer

Se relaciona con:

• Concentración de las especies (c)

• Distancia recorrida por el haz incidente (l)

• Naturaleza de la sustancia (coeficiente de extinción molar, épsilon,

e)
1.- Aspectos teóricos de la técnica: Ley de Lambert - Beer

Se relaciona con:

• Concentración de las especies (c) 𝑨=𝜺𝒍c

• Distancia recorrida por el haz incidente (l)

• Naturaleza de la sustancia (coeficiente de extinción molar, épsilon,

e)
1.- Aspectos teóricos de la técnica: Ley de Lambert - Beer

Se relaciona con:

• Concentración de las especies (c) 𝑨=𝜺𝒍c

• Distancia recorrida por el haz incidente (l)

• Naturaleza de la sustancia (coeficiente de extinción molar, épsilon,

e)

Válido para soluciones diluídas, con valores de absorbancia no superior

a 1 unidad
Ley de Lambert – Beer (Espectroscopía UV-vis)
𝑨=𝜺𝒍c
Formas de la Ley de Beer :
A) en función de la longitud de onda (“cuasi”-analítico)
Ley de Lambert – Beer (Espectroscopía UV-vis)
𝑨=𝜺𝒍c
Formas de la Ley de Beer :
B) en función de la concentración
 Componentes instrumentales en Espectroscopía Óptica:
2.- Portamuestras (celdas, cubetas).

Limitaciones:

• Absorción de energía por parte

de la celda
Plasticas, vidrio, quarzo (Uv-vis, luminiscencia) Pellet KBr (FTIR)

• Incompatibilidad con solventes

• Incompatibilidad con fuentes de

radiación

PotencialZ, (zetasizer) Tubos NMR

 Ley de Lambert - Beer

Espectrofotómetro UV vis

Requerimientos Procedimentales:

Muestra que absorba dentro del rango ultravioleta - visible

Muestra soluble (Bajas concentraciónes = 10-5 a 10-3 M)

Solvente adecuado (Transparente en el rango deseado)

 Ley de Lambert - Beer

Espectrofotómetro UV vis
 Ley de Lambert - Beer

Espectrofotómetro UV vis
Espectroscopía Ultravioleta-visible

Ventajas:
• Equipo versátil
• Técnica relativamente económica
• Aplicable a numerosas sustancias
• Técnica económica
• Sensibilidad y reproducibilidad
Espectroscopía Ultravioleta-visible

Ventajas:
• Equipo versátil
𝑨 = 𝑨𝟏 + 𝑨𝟐 + 𝑨𝟑 + ⋯
• Técnica relativamente económica
𝑨 = (𝜺𝒍𝒄)𝟏 +(𝜺𝒍𝒄)𝟐 +(𝜺𝒍𝒄)𝟑 + ⋯
• Aplicable a numerosas sustancias
• Técnica económica
• Sensibilidad y reproducibilidad
Aplicaciones:

• Determinación de concentraciones de analitos (puros o tratados químicamente)

• Determinación de características espectroscópicas en tintes (optoelectrónica, celdas
solares)
• Conocimiento general (estructuras electrónicas)
• Aplicación a mezclas (siempre que estas no interfieran)
Limitaciones experimentales:

Sólo aplicable a concentraciones diluidas (no superior a 0.001 M)

Épsilon depende del índice de refracción de la

muestra
Limitaciones experimentales:

Limitaciones químicas:
Limitaciones experimentales:
Limitaciones químicas:
Si la muestra es sensible a la radiación incidente
Limitaciones experimentales:
Limitaciones químicas:
Si la muestra es sensible a la radiación incidente
Luminiscencia (emisión molecular):
Recordando y complementando información