Accede a apuntes, guías, libros y más de tu carrera

coloracion-gram-y-coloracion-de-ziel-neelsen

9 pag.

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

 Coloración
Gram
ESTUDIANTE: DIANA PILAR AMARO PEREZ

Coloración Gram:
El procedimiento de tinción mayormente utilizado por bacteriología, nos
permite dividir a las bacterias en dos grandes grupos taxonómicos. Gram
positivas y Gram negativas, según sea su comportamiento frente a la tinción.

Método de tinción:

 Las células fijadas al portaobjeto por calor son teñidas con un

colorante básico (cristal violeta o violeta genciana) el cual es captado
de forma similar por todas las bacterias.
 se lava con agua
 luego se cubren con lugol (fijación)
 se lava con agua
 Luego son tratadas con una mezcla de alcohol-acetona(decoloración)
 por último, se aplica un colorante de contraste (safranina o fucsina

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

Resultados:

Al examinar microscópicamente un extendido que contenga una flora

bacteriana mixta coloreado por este método se observan las
características:

Bacterias Gram positivas:

retienen el colorante violeta
inicial.

Bacterias Gram negativas:

son decoloradas por el
disolvente orgánico, y toman
el segundo colorante. (se
observan de color rosa)

las bacterias Gram positivas

y gramnegativos se tiñen de
distinta forma debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.

Gram positivas:

tienen una gruesa capa de mureina

o peptidoglicano (de 20 a 80 nm de
espesor) en su pared.

Gram negativas:

tienen una capa de peptidoglicano (2

nm) más fina y una capa más externa
de lipopolisacáridos, lipoproteínas y
lípidos.

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

Procedimiento:

1. Con un asa de siembra tome una colonia y extiéndala en una porta con el
fin de preparar un frotis bacteriano y fije la preparación (Ver práctica
Preparación de un frotis bacteriano para el procedimiento).

2. Tiña con cristal violeta durante 30

segundos.

3. Tirar el exceso de colorante

4. Añadir lugol, esperar un minuto

5. Decolorar con etanol al 95%, 20 segundos.

6. Lavar con agua.

7. Añadir el colorante de contraste,

safranina, esperar 1 minuto.

8. Lavar con agua.

9. Observar al microscopio (x40, x100). Leer

el apartado de prácticas Uso del microscopio

Ejemplos de bacterias grampositivas

1. Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis,

infecciones localizadas y posibles gastroenteritis.
2. Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el
trayecto respiratorio, así como de fiebre reumática.
3. Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal,
endometritis y neumonía.
4. Streptococcus faecalis. Usual en infecciones en vías biliares y
urinarias, habita en el colon humano.
5. Streptococcus pneumoniae. Responsable de neumonías e infecciones
en las vías respiratorias, así como otitis, meningitis y peritonitis.
6. Streptococcus sanguis. Causante de endocarditis, cuando ingresa al
torrente sanguíneo a través de lesiones en su hábitat, la boca y la
mucosa dental.

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

 7. Clostridium tetani. Bacterias responsables de los tétanos, entran al
cuerpo desde el suelo por traumatismos en las extremidades.
8. Bacillus antracis. Se trata de la conocida bacteria del ántrax, tanto en
su versión cutánea como en la pulmonar.
9. Clostridium botullinum. Causante del botulismo clásico y el infantil,
habita en el suelo y en los alimentos mal conservados.
10. Clostridium perfringes. Esta bacteria segrega toxinas que
destruyen la pared celular, y es responsable de las gangrenas gaseosas,
la enteritis necrosante y la endometritis.

Ejemplos de bacterias gramnegativas

1. Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y

meningocococemias, coloniza las vías respiratorias humanas y asciende
a las meninges por vía sanguínea.
2. Neisseria gonorrhoeae. Conocidísima por ser la causante de la
gonorrea, común enfermedad de transmisión sexual.
3. Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, está involucrada
en las llamadas “diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal,
sepsis e infecciones urinarias.
4. Salmonella typhi. Bacteria responsable de la enfermedad conocida
como fiebre tifoidea, suele transmitirse por vía fecal-
oral: contaminación de aguas, mala disposición de excretas o higiene
defectuosa.
5. Salmonella enteritidis. Suele ocasionar enterocolitis y septicemia con
abscesos si llega a pasar del intestino a la sangre.
6. Haemophilus influenzae. Bacilo usualmente aerobio, es responsable de
numerosas meningitis, otitis, sinusitis, bronconeumonías, celulitis y
artritis séptica.
7. Bordetella pertussis. Causante de la enfermedad conocida como Tos
ferina, de alta mortalidad infantil.
8. Brucella abortus. Ocasiona la brucelosis, una enfermedad del ganado
que se transmite al hombre por contacto con los animales o por ingesta
de lácteos sin pasteurizar.

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

9. Francisella tularensis. Responsable de la llamada “fiebre del conejo” o
tularemia, se transmite al hombre mediante vectores (ácaros u otro
tipo de exoparásitos) de los conejos, ciervos y animales semejantes.
10. Pasteurella multocida. Bacilo anaeróbico, transmitido por la mordedura
de animales domésticos infectados, tales como perros y gatos. Se
disemina a través de la piel e infecta el sistema respiratorio, causando
también celulitis.

EJEMPLOS:

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

 Coloración De
Ziel Neelsen
Coloración De Ziel Neelsen:
La tinción de Ziehl-Neelsen en una técnica de coloración para identificar
microorganismos alcohol-ácido resistentes (AAR). El nombre de este
procedimiento de microbiología hace referencia a sus autores: el
bacteriólogo Franz Ziehl y el patólogo Friedrich Neelsen.

Fundamentos:

• Las paredes celulares de ciertos

parásitos y bacterias contienen
ácidos grasos que les confieren la
propiedad de resistir la
decoloración con alcohol-ácido,
después de la tinción con
colorantes básicos.

• Ácido-alcohol resistencia
(AAR.)

Procedimiento:

1. Desparafinar e hidratar hasta llegar al agua destilada.

2. Colorear con Fucsina Básica Fenicada solución según Ziehl durante 30

minutos a temperatura ambiente.

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

3. Lavar bien con agua corriente.

4. Decolorar con Alcohol-

Clorhídrico 8:2, hasta que las
secciones aparezcan de color
rosado pálido.

5. Lavar bien con agua corriente,

durante 8 minutos.

6. Contrastar, sumergiendo la
lámina en la Solución de Azul de
Metileno diluida durante 30
segundos. Las secciones deben ser
de color azul pálido. El exceso de
contraste puede enmascarar los
bacilos.

7. Lavar con agua y luego con agua destilada. 2 Versión 3: JMBOCT17

CEIVD16ES

8. Deshidratar rápidamente con Etanol al 96% y Etanol absoluto 2 cambios

de cada uno, aclarar con 2 cambios de xileno, 2 minutos cada uno.

9. Montar con medio de montaje.

10. Observar al microscopio.

La tinción de Ziehl-Neelsen:

 Al calentar la preparación hasta

emisión de vapores se favorece la
fusión de las ceras y aumenta la
energía cinética de las moléculas
facilitando la penetración del
colorante a la célula.

 Al suspender el calentamiento y lavar con agua fría se provoca la

solidificación de las ceras.

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

  El proceso de decoloración es muy enérgico por lo tanto cualquier
bacteria que no contenga abundantes lípidos perderá el colorante
primario y tomará el colorante de contraste

RESULTADOS

• Bacilos ácido alcohol resistentes (BAAR ó Zn+)

•No ácido alcohol resistentes (NAAR ó Zn-)

Mycobacterium tuberculosis

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com

Nocardia sp.

Cryptosporidium sp.

Descargado por ronald gutierrez (ronald_36@hotmail.es)

Encuentra más documentos en www.udocz.com