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INSTITUTO TECNOLGICO DE ACAPULCO

INGENIERA BIOQUMICA
MICROBIOLOGA
ING.QBP. MIGUEL ANGEL DAZ ALDAY
ALUMNA: IRIANA AZUCENA RODRIGUEZ
MEJIA
TINCIONES

13 de Septiembre del 2015

INSTITUTO TECNLOGICO DE ACAPULCO


INGENIERA BIOQUMICA MATERIA: MICROBIOLOGIA
Introduccin:
En este ensayo se hablara de las tinciones diferenciales para observar a las
bacterias que son agrupadas en tres tipos principales: bacilos, cocos, curvos y
helicoidales. Las caractersticas morfolgicas de las bacterias se pueden apreciar
mediante tcnicas microscpicas, ya sea en su estado vivo o muerto. El estudio
microscpico de las bacterias se facilita notablemente al tratarlas con colorantes o
tintes aprecindose su forma y tamao.
.
Contenido:
Tincin de Gram:
Esta tincin separa las bacterias en dos grandes grupos, las gran positivas que
retienen el primer colorante (cristal violeta) y las gran negativas que se tien con el
segundo colorante (safranina). Estas diferencias estn basadas en la estructura y
composicin qumica de la pared celular. Las gran positivas tienen una pared
gruesa de peptidoglucano y adems, muchas de estas bacterias presentan cidos
teicoicos en la pared.
Las gram negativas contienen menos peptidoglicano y su capa es mucho ms
delgada, pero est rodeada de una bicapa ms externa de lpidos, llamada
membrana externa.
1. Se prepara un frotis de E. coli, uno de S. aureus
y
uno
con
una
mezcla
de
ambos
microorganismos.
2. Dejar secar y fijar al calor como se indica.
3. Teir con cristal violeta por un minuto.
4. Enjuagar con agua corriente suavemente y
escurrir.
5. Cubrir el frotis con Yodo de Gram y dejar reposar
por un minuto.
6. Enjuagar con agua corriente y escurrir
7. Decolorar con etanol al 95%. Para esto, incline
el portaobjetos sobre la charola de tincin y
aada goteando el etanol, dejando que corra por
todo el frotis. Para un frotis delgado es suficiente
con 10 a 20 segundos.
8. Detener la accin decolorante lavando con agua.
9. Contrastar con safranina por 20 a 30 segundos,
enjuagar y dejar secar el frotis.
10. Examinar con el objetivo de inmersin.

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Tincin Negativa
La capsula es una capa gruesa de polisacrido (ocasionalmente de polipeptido),
mas externa a la pared celular, que rodea a la bacteria y esta adherida a ella. Sus
dos funciones principales son favorecer su adhesin a las superficies y protegerla
de los predadores. La capsula es difcil de teir con los colorantes, por lo que se
recurre a tinciones negativas. El campo del rededor se tie con un colorante acido,
mientras que la clula se tie con un colorante bsico de otro color. En estas
condiciones se observa un rea brillante translucida alrededor de la clula.
1. Hacer una suspensin ligera en
solucin salina de K. pneumoniae y
mezclar una gota de esta suspensin
con una pequea gota de nigrosina o
tinta china en el borde central del
portaobjetos.
2. Con el extremo de otro portaobjetos
extender la gota a lo ancho del primer
portaobjetos.
Prepare
un
frotis
delgado y otro grueso.
3. Deje secar al aire. NO SE DEBE
FIJAR AL CALOR.
Observe con el objetivo de inmersin

Tincin de Ziehl-Neelsen
Las bacterias llamadas acidorresistentes que al teirlas retienen el primer
colorante (rojo de la fucsina), las no acidorresistentes se tien de azul. Esto es
debido que las bacterias acidorresistentes como (Mycobacterium y Nocardia)
usualmente presentan un alto contenido de lpidos, hasta 60 por ciento del peso
de la pared, lo que hace difcil la tincin, debido a que los iones del colorante no
penetran rpido a travs de las capas de lpidos. Para facilitar la entrada del
colorante, se calienta; una vez teidas, es difcil su decoloracin.

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1. Se prepara un frotis de Staphyloccus sp., uno de


Mycobacterium sp. y uno con una mezcla de ambos
microorganismos.
2. Dejar secar y fijar al calor como se indica.
3. Teir con carbolfucsina y calentar por cinco minutos,
aplicar la llama de un mechero o de un hisopo
impregnado en alcohol por debajo de la lmina. Debe
haber emisin de vapor, sin que la preparacin llegue a
hervir o secarse; agregar colorante cuando se est
secando.
4. Enjuagar con agua corriente suavemente y escurrir.
5. Decolorar con alcohocetona (alcohol-acido) hasta que
solo salga una traza rosada de la preparacin.
6. Enjuagar con agua corriente y escurrir
7. Teir con azul de metileno por un minuto.
8. Enjuagar con agua corriente, escurrir y secar.
9. Examinar con el objetivo de inmersin.
Tincin de esporas
Ciertos gneros de bacterias producen endosporas, estructuras no reproductivas,
resistentes a las condiciones ambientales adversas, as como al calor y a los
compuestos qumicos. Cada clula da una espora y cada espora da una clula.
En condiciones favorables, las bacterias se reproducen normalmente por fisin
binaria, y al volverse desfavorables esporulan. Se tien pobremente, aunque
pueden teirse mejor usando colorantes calientes para que penetren.

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1. Hacer un frotis, secar y fijar al calor
2. Teir con verde malaquita y calentar durante 10 minutos aplicando la
llama de un mechero o hisopo impregnado en alcohol por debajo de la
lamina.
3. Debe hacer emisin de vapor sin que la preparacin lleve a hervir o
secarse.
4. Adicionar mas colorante cuando se este secando.
5. Dejar enfriar la lamina por 1 o 2 minutos.
6. enjuagar con agua corriente por 30 segundos.
7. Teir con safranina por 30 segundos
8. Enjuagar con agua corriente, escurrir y secar.
9. Examinar con el objetivo de inmersin.
Conclusin:
Para concluir este ensayo se observo que las tinciones utilizadas en el laboratorio
de microbiologa permiten el diagnostico oportuno y sugerente de los agentes
infecciosos, por lo que juegan un papel importante en la decisin del tratamiento
inicial de las enfermedades infecciosas. Se debe practicar la tincin adecuada de
acuerdo con el agente infeccioso en sospecha y el tipo de muestra clnica. Las
tinciones son herramientas elementales, vigentes y de uso universal que
coadyudan al diagnostico microbiolgico.
Bibliografa:
https://books.google.com.mx/books?
id=vwB0fgirgN0C&pg=PA75&lpg=PA75&dq=Tinci%C3%B3n+de+esporas+(t
%C3%A9cnica+de+ShaefferFfulton)&source=bl&ots=xYsdEYxcvi&sig=KImGXlRD3UvcF0kPMRhiLCmHfmU&hl
=es&sa=X#v=onepage&q&f=false
https://microinmuno.files.wordpress.com/2011/05/5-tinciones-especiales.pdf
http://bivir.uacj.mx/Reserva/Documentos/rva2011296.pdf