OBSERVACIÓN DE PREPARADOS

EN FRECO Y EN SECO
INTODUCCIÓN:
Los preparados en fresco o en seco, son métodos de análisis que nos van apermitir,
gracias al microscopio y otras herramientas de laboratorio, lavisualización de una
complejidad de elementos que a simple vista no son captados por el ojo
humano.Desde la invención del primer microscopio, se tenía una idea de
laexistencia de organismos cuantiosamente pequeños, pero con el tiempo surgió
algo más sofisticado: el microscopio electrónico´. Ahora sí era posible visualizar
subestructuras, líquidos e incluso la verdadera forma del objeto en observación;
cosas que no se podían apreciar con verdadera exactitud antiguamente. Pero no
solo este instrumento ayudaba en la visualización de elementos muy pequeños.
Había que valerse de ciertos procedimientos que permitieran una mejor
proyección de la imagen en la lente del microscopio. Uno de ellos vendría a ser ³los
preparados´, ya sea en fresco o en seco, y que iban a jugar, por separado, un papel
preponderante en una investigación microscópica.

OBJETIVOS:

 Aprender a montar preparaciones en fresco y en seco.

 Observar glóbulos de la sangre y las describiendo las estructuras visibles al
microscopio óptico.
 Reconocer algunas características morfológicas generales de los glóbulos
representativos como los glóbulos rojos y blancos.
 El objetivo de esta práctica es la preparación de una muestra de sarro dental, para
observarlo posteriormente al microscopio.

MATERIALES:
MATERIALES DE LABORATORIO:

Microscopio, Portaobjetos, Mechero de alcohol, Lancetas estériles, Cubetas de

tinción, Soportes de tinción, Frasco lavador.

REACTIVOS QUÍMICOS:

Alcohol absoluto (Metanol ó Etanol), Agua destilada, Tinción 2 (Giemsa) o bien

Tinción 1 (Hematoxilina, Eosina).

MATERIAL BIOLÓGICO:

Sangre fresca (Humana o de cualquier mamífero u otro animal, pero teniendo en

cuenta que las células sanguíneas de aves, etc. presentan algunas diferencias).
 PROCEDIMIENTO Y OBSERVACIÓN:

1) Con una lanceta estéril hacer, previa desinfección con alcohol, una punción en el
pulpejo de un dedo (se elegirá el dedo meñique de la mano izquierda en las
personas diestras y viceversa en las zurdas).
2) Colocar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos.
3) Con otro portaobjetos se procede de la manera siguiente: ponerlo delante de la
gota de sangre hasta que su borde toque la gota; deslizarlo sobre toda la superficie
del primer portaobjetos de manera que se pueda obtener una fina película de
sangre. (Esto se llama “frotis”).

Pasos para lo obtención de un "Frotis"

1) Con otro portaobjetos se procede de la manera siguiente: ponerlo delante de la

gota de sangre hasta que su borde toque la gota; deslizarlo sobre toda la superficie
del primer portaobjetos de manera que se pueda obtener una fina película de
sangre.(Esto se llama “frotis”).
2) Colocar el frotis sobre el soporte de tinción y éste sobre la cubeta de tinción y
añadir unas gotas de alcohol absoluto (Metanol o Etanol) y dejar que el alcohol se
evapore para fijar la preparación.

Podemos elegir entre las dos siguientes tinciones:

TINCIONES

· Tinción simple. Con azul de metileno. Todas las bacterias aparecen teñidas de azul
· Tinción negativa. Con nigrosina o tinta china. El frotis se hace ya con la nigrosina; no hay
que fijarla. Nos sirve para observar la cápsula de las bacterias, que es una estructura
mucosa, indicadora de virulencia.
· Tinciones diferenciales. Nos permiten observar determinadas estructuras de las bacterias
utilizando diferentes colorantes. Son las siguientes:
Tinción de Gram.
Tinción ácido-alcohol resistente (Zeihl Neelsen)
Tinción de esporas (Método de Wirtz).

TINCIÓN DE GRAM

Es la más importante en bacteriología. Gracias a ella distinguimos dos tipos de bactrias:

Gram +. Son aquellas que se tiñen con cristal violeta (colorante primario)
Gram -. Son aquellas que se tiñen con safranina (colorante secundario)
Protocolo:
Frotis
Fijación
Cristal violeta (2 minutos)
Lugol (un minuto).

Es un mordiente que aumenta la afinidad de la célula por el colorante anterior.

Alcohol 96º o acetona. Decolora la preparación. 45 segundos.
Lavar con agua
Safranina (un minuto)
Lavar con agua, secar y observar

Las gram + aparecerán violetas, y las gram - aparecerán rosas. Las diferencias entre + y -
obedecen a la estructura de su pared celular:
Las gram + tienen una pared muy gruesa que contiene muy pocos lípidos, mientras que las
gram - son muy delgadas y contienen gran cantidad de lípidos.

Dejar secar la porta al aire (aireando en forma de abanico) o bien al calor muy
lento de la llama del mechero (no debe quemar en el dorso de la mano el
portaobjetos).

Distintos tipos celulares de la sangre

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA:
Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos teñidos
de color rojo. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los
bordes. Tamaño: De 7 a 8 micras de diámetro y de 1 a 2 micras de grueso.
Los glóbulos blancos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, teñido de
morado. Hay varias clases de leucocitos:

1.-Linfocitos: De tamaño aproximado al de los glóbulos rojos (de 8 a 10 micras);

tienen un núcleo redondeado que ocupa casi todo el glóbulo.

2.-Monocitos: Son los leucocitos mayores (de 12 a 20 micras); poco frecuentes;

núcleo grande y redondo; son los más móviles y su función principal es la
fagocitosis.

3.-Polimorfonucleares o granulocitos: De tamaño entre 9 y 12 micras. Con el

núcleo fragmentado o arrostrado; tienen abundantes granulaciones en su
citoplasma; los Neutrófilos (los más abundantes) tienen sus granulaciones
pequeñas y teñidas de azul pálido. Los Basófilos (los menos abundantes) tienen sus
granulaciones más grandes y teñidas de color azul. Los Eosinófilos (poco
abundantes) tienen sus granulaciones teñidas de rojo.

Las Plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.
Asimismo pueden aparecer formas juveniles de los distintos glóbulos.

La observación microscópica de sangre es importante para saber la Fórmula

Leucocitaria

DIBUJO DE CELULAS SANGUINEAS

Hf=Hematíe(frente)…-Hp=Hematíe(perfil)
L= Linfocito.-M= Monocito.- N= Neutrófilo.- B= Basófilo.- E= Eosinófilo
DISCUCÍON:

Las preparaciones al fresco son muy fáciles de preparar; se prepara una disolución acuosa
donde se introduce el microorganismo, se pone una gota en un porta, se tapa con un cubre y
se observa.
Se emplean para observar la morfología de bacterias, especialmente de espiroquetas. Sirve
también para observar la movilidad de las bacterias y para observar cambios citológicos;
mitosis, esporulación, etc. También sirve para observar inclusiones (grasas, etc.)

Las preparaciones fijadas y teñidas son las más utilizadas en Microbiología por dos razones:
La tinción facilita la visualización de la bacteria
Con varios colorantes clasificamos la bacteria en distintos grupos.
La mayor desventaja es que la bacteria ya está muerta.
Protocolo:
Frotis o extensión del microorganismo
Fijación con la llama de un mechero
Adición de uno o varios colorantes
Lavar con agua, secar y observar

CONCLUCIÓN:

PREPARADOS EN FRESCO
Muestra biológica viva
Preparado con abundante agua
Se observa con objetos a seco (4x, 10x, 40x)
No utiliza colorante

PREPARADOS EN SECO
Muestra biológica muerta y fijada
Preparado libre de agua(deshidratado)
Se observa con objetivo de inmersión (100x)
Utiliza colorantes

BIBLIOGRAFÍA:
Fuente: www.joseacortes.com/practicas/sangre.htm Departamento de Ciencias
Naturales. IES Alpajés

Confección de preparados. Carlos Eduardo Núñez. cenunez.com.ar. 2008

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Publicado porJhonatan Sajami Puertas
Published by: Jhonatan Sajami Puertas on Oct 07, 2010
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