UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE COAHUILA

INGENERIA DE LAS FERMENTACIONES

10 IBIO B

Mutagenesis
al azar
Equipo 1
Chi Salinas Rosalinda
Mejia Briones Valeria Yoselin
Castillo Carrillo Adrian
MC. Itzcoatl Muñoz Jimenez
García Leija Luis David
Solis Gaona Karla Denisse
 CONCEPTO

Modificacion del material genetico que resulta estable y transmisible a

las celulas de la produccion de mutaciones sobre el ADN clonado o no
Cuando la mutagenesis se realiza de forma in vitro es cuando se puede dar la
mutagenesis al azar , que es la mutación puntual introducida en posiciones aleatorias
de un gen de interes
 REACCION DE CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)
Utilizando una polimerasa de ADN propensa a errores o con
agentes mutagénicos

Se basa en la taq (polimerasa termoestable obtenida del

microorganismo “thermus aquaticus” que pueden incorporar
nucleotidos incorrectos en presencia de altos niveles de Mg+2 y
Mn+2
 Agentes químicos y físicos de
la mutagenesis

Mutágenos químicos: son compuestos químicos capaces de alterar las

estructuras del ADN de forma brusca, como por ejemplo el ácido
nitroso (agente desaminizante), brominas y algunos de sus compuestos.

Mutágenos físicos: son radiaciones que pueden alterar la secuencia y

estructura del ADN. Son ejemplos la radiación ultravioleta que origina
dímeros de pyrimidine (generalmente de timina), y la radiación gamma
y la alfa que son ionizantes Uno de los dos compuestos químicos que
las células usan para elaborar los
elementos fundamentales del ADN y el
bloquean la REPLICACIÓN DEL ADN. ARN
 Agentes fisicos
Aquí se incluyen las radiaciones atómicas, Rayos X producen esterilidad en plantas,
animales y hombre. También afectan a los tejidos como huesos, nervios, músculos,
hígado, riñón, etc. Además la radiación es un proceso físico mediante el cual la enegía
viaja por el espacio.
Alteran la secuencia y la estructura del ADN
 Radiaciones ionizantes:
Esta energía es capaz de ionizar la materia, es decir, de arrancar electrones de
la corteza de los átomos y, por tanto, es capaz de producir daños
irreversibles en los tejidos

Radiaciones NO ionizantes
las radiaciones no ionizantes no emiten la energía suficiente como para
producir tales modificaciones en el átomo, pero sí que pueden tener efectos
nocivos sobre la salud HUMANA

Uno de los dos compuestos químicos que

las células usan para elaborar los
elementos fundamentales del ADN y el
ARN
 Electromagnetica
Se describe como ondas de energía
eléctrica. Por ejemplo: Rayos gamma y la
alfa ,Rayos X, Radiación Ultravioleta,
choque termico
Cospuscular
Está formado por partículas
atómicas y subatómicas que se
mueven a grandes velocidades y
provocan daños cuando chocan
con otras partículas incluyendo
las moléculas biológicas. Por
ejemplo: partículas alfa y
pastículas beta.
TIPOS DE MUTACIONES CROSOMATICAS
 agentes químicos
Análogos de bases: Como el 5-
Bromouracilo (5BU), que puede
remplazar la timina (T) en el ADN,
alterando la base complementaria
normal (adenina). Cuando se reproduce
el ADN, esta sustitución provoca errores
en la lectura del genoma, lo que
conduce a mutaciones
Álcali alquilantes: Gas mostaza, ácido
dimetil sulfónico, dietilsulfónico,
metilmetanosulfónico, etilmetanosulfónico,
etc
Reaccionan con átomos nucleofílicos del
ADN, especialmente con las bases guanina y
adenina, formándose enlaces covalentes que
bloquean la duplicación correcta del ADN
y provocan errores en la replicación, lo cual
resulta en mutaciones
 agentes químicos
Compuestos ICR (Intercalantes de
Epóxidos: Al interactuar con
color naranja): Acridina y
las bases nitrogenadas del
derivados, se insertan entre las
ADN, forman aductos que
bases nitrogenadas del ADN,
impiden la reparación natural
alterando la conformación del
de lesiones en el ADN, lo que
doble hélix y la función de las
también puede llevar a
enzimas involucradas en la
mutaciones
replicación y la transcripción, lo
que puede desencadenar
mutaciones
Identificar las mutaciones
Prueba de
Ames
Usada para evaluar la
capacidad de un
compuesto químico para
causar mutaciones en
bacterias.
Capacidad del
compuesto para revertir
mutaciones en genes
especificos de la bacteria.
Ensayos de Secuenciación
micronúcleos de ADN
Es usada para identificar
Usados para detectar la
mutacoines específicas en
presencia de mutaciones
la secuendia de ADN de
cromosómicas en células.
un organismo.Se basa en
Se observan fragmentos de
la comparación de la
cromosomas que se
secuencia de ADN de un
separan durante la división
organismo mutado con la
celular y se acumulan en el
secuencia de ADN de un
citoplasma de la célula
organismo no mutado
 efectos de la mutagénesis al
azar en los organismos

Los efectos en los organismos dependen de la ubicación y el tipo de mutación que se

produzca.

En algunos casos, las mutaciones pueden ser beneficiosas y mejorar la adaptación del organismo a su
entorno, mientras que en otros casos pueden ser perjudiciales y afectar negativamente la función
normal del organismo.
Las mutaciones pueden afectar la estructura y función de las proteínas, lo que puede tener un
impacto en la viabilidad celular, la reproducción y la capacidad de respuesta a estímulos externos.
En algunos casos, las mutaciones pueden ser letales y causar la muerte del organismo.
La mutagénesis al azar se utiliza a menudo en la investigación genética para generar diversidad
genética y seleccionar mutantes de interés para características deseadas
TECNICAS DE TAMIZAJE

Cuando una célula sufre de una

mutación debe de ser identificada,
esto se da utilizando distintos métodos
de separación a través de cultivos in
vitro o cultivos in vivo.
In vitro

Los más empleados en la industria son la micropropagación, los cultivos

de células en suspensión dentro de biorreactores y los cultivos de raíces
en cabellera.
Dependiendo de la capacidad mutada, los factores del cultivo se ven
alterados, así como el sustrato en el que crece. Dando por ejemplo una
cepa de levadura que fermenta a diferente temperatura o una bacteria
con resistencia a antibióticos.
In vivo

Cuando se cultivan células para que sobrevivan en organismos

vivos específicos ya sean animales o plantas para que se
sustenten de dichos organismos ya sea para la erradicación de
plagas o generar simbiosis.
 Ejemplos de Microorganismos de
tamizaje
Thermus thermophlilus

Se caracteriza por un sistema de competencia natural, una

elevada temperatura de crecimiento (62-75 C dependiendo
de la cepa), una rápida tasa de crecimiento, una alta
eficiencia de transformación y un sistema de competencia
natural que permite la transformación de ADN exógeno.
Es precisamente su capacidad de crecer a alta temperatura
la que ha permitido su uso para la obtención de proteínas
termoestables mediante evolución dirigida.
 Escherichia
coli

Es con diferencia, el microorganismo mas

utilizado como hospedador debido a su alta
eficiencia de transformación, su rápida tasa
de crecimiento, su capacidad de mantener
estable el ADN plasmático, el detallado
conocimiento del genoma y la
disponibilidad en el mercado de técnicas
rutinarias de biología molecular que
permiten su fácil manipulación.
 Pichia pastoris

La levadura metanotrófica que se utiliza para la producción heteróloga de mas de

1000 proteínas, gracias a que, al ser un organismo eucariota, tiene el capacidad de
producir proteínas solubles correctamente plegadas con las modificaciones
postraduccionales adecuadas proteolítico. Además, su cultivo en fermentadores en
continuo da lugar a densidades celulares muy altas (> 130 gr de biomasa celular seca
por litro de cultivo).
 Saccharomyces
cerevisiae

La levadura hospedador que tiene una mayor

eficiencia de transformación que P.pastoris, tambien
lleva a cabo modificaciones post-traduccionales y
dispone de un mecanismo muy eficaz de secreción de
proteínas. Una ventaja muy atractiva de S.cerevisiae es
que, a diferencia de lo que ocurre en E.coli y
P.pastoris, tiene una elevada frecuencia de
recombinación homologa que facilita la creación de
diversidad génica in vivo a partir de varios genes
parentales.
 Thermus
aquaticus

El método mas utilizado en evolución dirigida por su

sencillez y eficacia parea introducir mutaciones en el
material genético es la reacción de PCR propensa a
error. Esta técnica hace uso de ADN polimerasa que
exhiben baja fidelidad durante la amplificación génica.
La ADN polimerasa Taq de la bacteria termófila
Thermus aquaticus es la mas empleada en reacciones de
epPCR. La Taq polimerasa es una enzima robusta que
carece de actividad exonucleasa, lo que se traduce en
una elevada frecuencia de error intrínseca (mutaciones
por nucleótido y por duplicación).
 tipos de mutaciones que pueden ocurrir

1. Substitutiones: Cambio de una base por otra, lo que puede resultar en aminoácidos
diferentes en la proteína.
2. Deletiones: Baja de pares de bases, lo que provoca una disminución en la longitud
del ADN y, por lo general, un corto marco de lectura que conduce a la formación
de proteínas truncadas o sin función.
3. Inserciones: Alta de pares de bases, lo que puede llevar a la expansión de
repeticiones o la introducción de nuevas secuencias en el ADN.
4. Duplicaciones: Repetición de segmentos de ADN, lo que puede aumentar la
longitud del gen y modificar la expresión génica.
5. Frameshift mutations: Inserciones o deletiones impar que cambian el marco de
lectura y provocan la síntesis de proteínas con secuencias erróneas.
 Patologías

Síndrome Características y síntomas de la mutación

Retraso mental, ojos oblicuos, piel rugosa,

Síndrome de Down
crecimiento retardado

Síndrome de Anomalías en la forma de la cabeza, boca

Edwards pequeña, mentón huido, lesiones cardiacas

Labio leporino, lesiones cardiacas,

Síndrome de Patau
polidactilia
 Síndrome Características y síntomas de la mutación

Síndrome de Escaso desarrollo de las gónadas, aspecto

Klinefelter eunocoide

Elevada estatura, personalidad infantil, bajo

Síndrome del duplo
coeficiente intelectualm tendencia a la
Y
agresividad y al comportamiento antisocial

Síndrome de Aspecto hombruno, atrofia de ovarios,

Turner enanismo

Síndrome de Triple Infantilismo y escaso desarrollo de las

X mamas y los genitales externos