Prueba de influenza.

La influenza es una infección vírica que afecta principalmente a la nariz, la garganta, los
bronquios y, ocasionalmente, los pulmones. La infección dura generalmente una semana y
se caracteriza por la aparición súbita de fiebre alta, dolores musculares, cefalea malestar
general importante, tos seca, dolor de garganta y rinitis. El virus se transmite con facilidad
de una persona a otra a través de gotículas y pequeñas partículas expulsadas con la tos o los
estornudos. La influenza suele propagarse rápidamente en forma de epidemias estacionales.
La mayoría de los afectados se recuperan en una o dos semanas sin necesidad de recibir
tratamiento médico. Sin embargo, en niños pequeños, personas de edad y personas aquejadas
de otras afecciones médicas graves, la infección puede conllevar graves complicaciones de
la enfermedad subyacente, provocar neumonía o causar la muerte.

Hay cuatro tipos de virus de la gripe estacional: A, B, C y D. Los causantes de las epidemias
estacionales son los virus gripales de tipo A y B.

 Los virus de la gripe A se clasifican en subtipos en función de las combinaciones de dos

proteínas de su superficie: la hemaglutinina (HA) y la neuraminidasa (NA). Los subtipos
actualmente circulantes en el ser humano son el A(H1N1) y el A(H3N2). El A(H1N1)
también se conoce como A(H1N1) pdm09, pues fue el causante de la pandemia de 2009
y posteriormente sustituyó al virus de la gripe estacional A(H1N1) que circulaba hasta
entonces. Todas las pandemias conocidas han sido causadas por virus gripales de tipo A.

 Los virus de tipo B no se clasifican en subtipos, pero los circulantes actualmente pueden
dividirse en dos linajes B/Yamagata y B/Victoria. Los virus de la influenza tipo B son
una causa importante de enfermedad respiratoria aguda estacional en todo el mundo.

 Los virus de tipo C se detectan con menos frecuencia y suelen causar infecciones leves,
por lo que carecen de importancia desde el punto de vista de la salud pública.
 Los virus de tipo D afectan principalmente al ganado y no parecen ser causa de infección
ni enfermedad en el ser humano.

Diagnóstico de influenza.

RIDT.

Existen varias pruebas disponibles para detectar los virus de la influenza en muestras
respiratorias. No obstante, en el medio las más comunes se denominan "pruebas de
diagnóstico rápido de la influenza" (RIDT). Las RIDT detectan los antígenos del virus que
estimulan una respuesta inmunitaria. Estas pruebas arrojan resultados dentro de un lapso
aproximado de 10-15 minutos; sin embargo, no son tan precisas como otras pruebas de
detección de la influenza. Por lo tanto, puede tener influenza incluso si el resultado de la
prueba rápida es negativo.

Entre sus desventajas se encuentra que la sensibilidad es de calidad inferior ante las pruebas,
los resultados de falsos negativos son frecuentes, especialmente cuando la actividad de la
influenza es alta. En ese sentido, la sensibilidad de las RIDT para detectar antígenos virales
de la influenza B es más baja que para detectar antígenos virales de la influenza A. Si bien la
especificidad es alta, también puede haber falsos positivos, especialmente en los momentos
en los que la actividad de la influenza es baja,

Pruebas moleculares.

Por otra parte, las pruebas moleculares de detección rápida detectan el material genético del
virus de la influenza. Los ensayos moleculares de detección rápida pueden arrojar resultados
al cabo de 15-20 minutos y son mucho más precisos que las RIDT.

Las pruebas de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR),

cultivos virales y pruebas de inmunofluorescencia son más precisas. En estas pruebas, el
personal del servicio de salud pasa un hisopo por la parte interna de la nariz o la parte de
atrás de la garganta y luego envíe el hisopo para analizar.

PCR INFLUENZA A/B + VSR.

La recolección de muestras debe realizarse con hisopos de nylon flocado y colocarse
inmediatamente en 3 ml de medio de transporte viral. No se recomiendan hisopos con puntas
de algodón y mangos de madera.

Las muestras deben ser recolectadas por personal capacitado y considerando todas las
instrucciones de bioseguridad, incluido el uso de equipo de protección personal apropiado
frente a virus respiratorios.

Los tubos de colecta se deben etiquetar correctamente. Las muestras deben recolectarse lo
más cerca posible del inicio de la enfermedad (idealmente dentro de los 3-4 días posteriores
al inicio de los síntomas clínicos) y refrigerarse (4-8°C) inmediatamente después de la
recolección.

Tipos de especímenes/muestras y procedimientos,

La muestra recolectada de la nasofaringe es el espécimen del tracto respiratorio superior ideal

para las pruebas de influenza.

Hisopado nasofaríngeo.

1. De debe informar al paciente sobre el procedimiento a realizar pidiéndole que se siente y

que incline la cabeza hacia atrás (70º) para que sea más fácil obtener la muestra.
2. Introduzca el hisopo en la fosa nasal. Es importante mencionar que el hisopo debe
alcanzar una profundidad igual a la distancia desde las fosas nasales hasta la abertura
exterior del oído para una mejor extracción de la muestra. Se debe mantener el hisopo en
la misma posición durante varios segundos para absorber las secreciones.
3. Retirar lentamente el hisopo, girándolo al mismo tiempo. El proceso debe replicarse en
la fosa nasal contralateral utilizando el mismo hisopo.
4. Colocar la punta del hisopo en un tubo con medio de transporte viral estéril.

Aspirado nasofaríngeo/nasal.
1. Informar al paciente sobre el procedimiento a realizar. Indicarle que se recueste y
ayudarle a colocar su cabeza hacia atrás a 70º.
2. Conectar la sonda al aparato de succión.
 3. Introducir la sonda en la fosa nasal. La sonda debe alcanzar una profundidad igual a
la distancia desde las fosas nasales hasta la abertura exterior del oído.
4. Comenzar la succión de forma suave. Después retirar lentamente la sonda, girándola
suavemente.
5. Colocar la muestra en un tubo con medio de transporte viral estéril.

Lavado nasofaríngeo/nasal.
1. Informar al paciente sobre el procedimiento a realizar. Indicarle que se recueste y
ayudarle a colocar su cabeza hacia atrás a 70º.
2. Conectar la sonda al aparato de succión.
3. Insertar varias gotas de solución salina normal estéril en cada fosa nasal.
4. Introducir la sonda en la fosa nasal. La sonda debe alcanzar una profundidad igual a la
distancia desde las fosas nasales hasta la abertura exterior del oído.
5. Retirar lentamente la sonda, girándolo al mismo tiempo.
6. Colocar la muestra en un tubo con medio de transporte viral estéril.

Hisopado nasal.

1. De debe informar al paciente sobre el procedimiento a realizar pidiéndole que se siente y

que incline la cabeza hacia atrás (70º) para que sea más fácil obtener la muestra.
2. Introducir el hisopo en la fosa nasal girándolo suavemente hasta encontrar resistencia.
3. Girar el hisopo varias veces contra la pared nasal y repetir el procedimiento en la fosa
nasal contralateral con el mismo hisopo.
4. Retirar y colocar la punta del hisopo en un tubo con medio de transporte viral estéril.

Hisopado nasal y de faringe combinado.

1. Debe informar al paciente sobre el procedimiento a realizar pidiéndole que se siente y

que incline la cabeza hacia atrás (70º) para que sea más fácil obtener la muestra.
2. Introducir el hisopo en la fosa nasal girándolo suavemente hasta encontrar resistencia.
3. Girar el hisopo varias veces contra la pared nasal y repetir el procedimiento en la fosa
nasal contralateral con el mismo hisopo.
4. Retirar y colocar la punta del hisopo en un tubo con medio de transporte viral estéril.
5. Para el frotis faríngeo, tomar un segundo hisopo de poliéster seco, insértelo en la boca y
frote la faringe posterior y las amígdalas. Evitar el contacto del hispo con la lengua.
6. Colocar la punta del hisopo en el mismo tubo.

Almacenamiento y transporte de muestras.

Las muestras deben mantenerse refrigeradas entre 4 – 8 °C para posteriormente enviarse al

laboratorio donde deben ser procesadas dentro de las primeras 24 a 72 horas desde la
recolección. Si las muestras no pueden enviarse dentro de este período, deben mantenerse
congeladas a -70 °C o menos.

Durante el transporte al laboratorio de referencia, se debe vigilar que la cadena de frío se

mantenga. Los tubos deben transportarse en posición vertical y asegurados en un recipiente
con tapón de rosca o en una gradilla dentro de una caja de transporte.

Interpretación de resultados.

PCR una muestra se considera positiva si los resultados de las pruebas usando dos objetivos
diferentes de PCR (por ejemplo, cebadores específicos para el gen M universal y el gen
porcino de hemaglutinina H1) son positivos pero la PCR para H1+ H3 humanos es negativa.
Si la RTPPCR para objetivos múltiples de hemaglutinina (HA) (es decir, H1, H3, y H1
pandémico) arroja resultados positivos en la misma muestra, se debe descartar primero la
posibilidad de contaminación de PCR repitiendo el procedimiento de PCR usando ARN
nuevo extraído de la muestra original o ARN extraído de otra muestra. Si se obtienen
resultados positivos repetidos para objetivos HA múltiples, esto aumenta la posibilidad de
coinfección, lo que se debe confirmar por secuenciación o cultivo viral.

Positivo para Influenza.

Se detectó la presencia del virus de la influenza en la muestra analizada. Indica que la persona
está infectada con el virus en el momento en que se tomó la muestra. Este resultado sugiere
que la persona probablemente tiene influenza y puede requerir tratamiento médico adecuado,
como antivirales o medidas de apoyo.

Negativo para Influenza.

Este resultado indica que no se detectó la presencia del virus de la influenza en la muestra
analizada. Sin embargo, es importante tener en cuenta que un resultado negativo no descarta
completamente la posibilidad de tener influenza. Puede haber varias razones para un
resultado negativo, como la etapa temprana o tardía de la infección, una muestra inadecuada
o la presencia de otras cepas de virus que no fueron detectadas por la prueba específica
utilizada.