Transcripción 4

4 . 1 . El suceso más llamativo que tiene lugar inmediatamente después de la infección de

la bacteria Bacillus subtilis por el bacteriófago SP8 es la síntesis de ARN. Marmury
colaboradores aislaron el ADN del fago SP8, lo desnaturalizaron mediante calor e
inmediatamente centrifugaron en gradiente de densidad de CsCl, apareciendo dos
bandas en el tubo de centrífuga, una ligera (L) y otra pesada (H) de mayor densi-
dad. Aislaron los ADN de cada U7ia de estas dos bandas y los inmovilizaron por
separado en una membrana. Infectaron células deB. subtilis con SP8 en presencia
de P\ el ARN recién sintetizado y, por último, hibridaron el ARN marca-
do con cada una de las dos membranas, resultando que el ARN sólo bibridaba con
la membrana que tenía la banda pesada (H).

A 1.756 A 1.743 1.762

b b
s s
o o
r r
b b
a a
n n
c c

Densidad de flotación Densidad de flotación

ADN de SPS antes de desnaturalizar ADN de SP8 después de desnaturalizar

¿Quépuede deducirse de los resultados obtenidos en este experimento?

76 360 Problemas de Genética

Solución

En p r i m e r lugar, los e x p e r i m e n t o s de desnaturalización y centrifugación e n gradiente

de densidad de CsCl demuestran q u e el A D N d e l fago SPS es de d o b l e hélice. C u a n d o se
centrífuga antes de desnaturalizar c o n calor se obtiene una sola banda ( c o r r e s p o n d i e n t e a
A D N de d o b l e hélice) y c u a n d o la centrifugación se realiza después de desnaturalizar (se-
parar las dos hélices d e l A D N ) c o n calor se o b t i e n e n dos bandas de A D N de diferente
densidad, u n a ligera (L) de m e n o r migración y otra más pesada ( H ) , q u e m i g r a hacia el
f o n d o d e l t u b o cada u n a de estas bandas se corresponde c o n una de las hélices d e l A D N .
Además, estas dos hélices o bandas presentan diferentes porcentajes de G+C, ya q u e p u e -
d e n separarse e n gradiente de densidad.
Los resultados obtenidos al hibridar el A R N marcado c o n P'- y sintetizado i n m e d i a -
tamente después de la infección de E. coli p o r el fago SPS, i n d i c a n que este A R N p r o c e d e
del A D N d e l virus, ya que hibrida c o n una de las dos hélices o bandas d e l fago y , además,
p o n e n de manifiesto q u e este A R N sólo hibrida c o n la banda o hélice pesada ( H ) y n o h i -
b r i d a c o n la hélice ligera (L). Por tanto, la secuencia de este A R N es c o m p l e m e n t a r i a de la
secuencia de bases nitrogenadas de la banda pesada ( H ) i n d i c a n d o este resultado q u e so-
lamente se lleva a cabo la transcripción de la banda pesada ( H ) y q u e la transcripción e n
este virus es asimétrica, es decir, solamente se transcribe una de las dos hélices d e l A D N
del fago SPS. La hélice que se transcribe recibe el n o m b r e de hélice c o d i f i c a d o r a .

Hélice
codificadora

Transcripción
asimétrica

H L L H
ADN ADN SPS ARN
de SPS desnaturalizado marcado

Hélice pesada'H
Hibridación
ARN marcado p^^

2 . 2 . Al centrifugar en gradiente de densidad de CsCl el ADN doble hélice lineal del vi-
rus T4 después de desnaturalizarlo con calor, se obtienen dos bandas, una ligera
 Transcripción 77

(L) y otra pesada (H). Si se híbrida el ARN que se sintetiza a diferentes tiempos des-
pués de la infección de la bacteria E. c o l i por el fago T4 con el ADN de estas dos
bandas por separado, resulta que el ARN temprano hibrida con la cadena ligera (L)
y el ARN tardío hibrida con la banda pesada (H).
Proponga una hipótesis que explique estos resultados.

Solución

La o b t e n c i ó n de dos bandas después de centrifugar e n gradiente de CsCl nos c o n f i r m a

q u e el virus T4 es de d o b l e hélice y q u e ambas hélices tienen distinto porcentaje e n G+C
ya q u e p u e d e n separarse en gradiente de densidad. Los resultados o b t e n i d o s al h i b r i d a r
c o n el A R N sintetizado de f o r m a temprana y c o n el A R N sintetizado más tardíamente, des-
pués de la infección, i n d i c a n que ambos tipos de A R N h a n sido p r o d u c i d o s p o r el A D N d e l
virus T4, ya q u e ambos h i b r i d a n c o n el A D N de T4. Sin embargo, el A D N t e m p r a n o híbri-
da c o n la cadena ligera (L) del virus, mientras q u e el A R N tardío h i b r i d a c o n la cadena
pesada ( H ) . Por tanto, el A R N tardío se ha sintetizado t o m a n d o c o m o m o l d e la cadena pe-

Segmento que
se invierte

Genes Genes
5' Tempranos 3' 5' Tardíos 3
Hélice que se transcribe
indicada en color negro intenso
5' 3' 5'
soídraT ^,

3'
Inversión: requiere 1" giro
dos giros de 180^
perpendiculares
5' 3'

Segmento 3' soídraT ^' \

invertido
22 giro
Genes
Tempranos^g, 5' 3 Hélice ligera L
Las regiones de las hélices que
se transcriben se han indicado
3' 5' 3' 5 en color negro intenso
SOipjBl
SBU89
Hélice pesada H
 78 360 Problemas de Genética

sada ( H ) , p o r eso sólo h i b r i d a c o n ella, mientras q u e el A R N t e m p r a n o se ha sintetizado

t o m a n d o c o m o m o l d e la cadena ligera (L), p o r eso sólo c o m p l e m e n t a c o n ella. Estos re-
sultados sugieren de n u e v o que la transcripción es asimétrica, ya q u e u n g r u p o de genes
(los q u e se expresan t e m p r a n o e n la infección) se transcriben a partir de la hélice ligera
(L) y o t r o g r u p o de genes (los de expresión tardía) se transcriben a partir de la hebra pe-
sada. Sin embargo, la diferencia c o n el fago radica en q u e e n el caso de virus T4 ambas
hélices p u e d e n ser empleadas c o m o m o l d e para p r o d u c i r ARN, a u n q u e e n una misma zo-
na sólo se transcribe una de las dos hélices. Puede ser que o r i g i n a l m e n t e e n el fago T4
solamente se transcribiera una de las dos hélices tanto para los genes t e m p r a n o s c o m o pa-
ra los tardíos y que posteriormente u n inversión e n el A D N d e l virus diera c o m o resultado
la transcripción de hélices distintas e n regiones diferentes para ambos tipos de genes. Pa-
ra q u e se p u e d a dar una inversión se requieren dos giros de 180° perpendiculares, u n o
q u e invierte la secuencia de bases y o t r o p e r p e n d i c u l a r al p r i m e r o q u e m a n t i e n e la p o l a -
r i d a d de las hebras de A D N . El esquema explica c ó m o mediante una inversión e n el A D N
de virus T4 se p u e d e pasar de la transcripción de una sola hélice a la transcripción de a m -
bas e n distintas regiones:

4 . 3 . El material hereditario del virus 0 X 1 7 4 tiene la siguiente composición de bases ni-

trogenadas-. 25% de A, 24% de G, 33% de Ty 18% de C. Con este virus se infecta
un cultivo bacteriano que crece en un medio con p^^, y se recogen los virus de la
descendencia después de que han Usado todas las bacterias. Con los virus así obte-
nidos se infecta otro cultivo bacteriano que crece en un medio normal. Poco
después de esta infección se extrae todo el ADN del cultivo y se centrifuga en un gra-
diente de CsCl, obteniéndose tres picos o bandas diferentes de ADN, que presentan
las siguientes características:

A (%) G (%) T (%) C (%) Radiactividad

Pico 1 25 24 33 18 +
Pico 2 27 23 27 23
Pico 3 29 21 29 21 +

Cuando se prueba la capacidad de cada uno de estos ADN para hibridar con el
ARN extraído después de la infección de este virus, resulta que sólo se produce hi-
bridación c o n le ADN del pico 3 en las condiciones experimentales apropiadas.
¿Por qué el ARN sólo hibrida con el ADN del pico 3?

Solución

La identificación de los picos o bandas de A D N 1 , 2 y 3 se ha llevado a cabo e n el p r o -

blema n° 3 d e l capítulo de replicación de los ácidos nucleicos. El p i c o 1 corresponde al
A D N d e l virus, el p i c o 2 es el A D N d o b l e hélice de la bacteria y el p i c o 3 es la f o r m a r e p l i -
cativa (de d o b l e hélice) d e l A D N del virus. El A R N extraído p o c o después de la infección
de E. coli p o r este virus hibrida solamente c o n el A D N d e l pico 3, p o r tanto, este resultado
 Transcripción 79

indica q u e el A R N procede d e l A D N d e l virus, p e r o q u e la banda q u e se ha e m p l e a d o co-

m o m o l d e para p r o d u c i r el A R N es la hélice de nueva síntesis (la q u e n o está marcada
radiactivamente) de la forma replicativa d e l víais, p o r esta causa el A R N n o hibrida c o n e l
p i c o 1 . El siguiente esquema resume l o q u e sucede cuando 0X7/•í infecta a E. coli:

ADN de una
hélice del fago

4 . 4 . Poco tiempo después de la infección de E. coli por el fago T2 se sintetiza ARN en el

interior de la bacteria. Con el fin de determinar si ese ARN está codificado por el
ADN del fago o de la bacteria, se realizó el siguiente experimento: el ARN extraído
después de la infección, marcado con p^' se incubó a 65° C, por una parte con ADN
desnaturalizado de E. coli marcado con PP, y por otra con el ADN desnaturaliza-
do de T 2 marcado también con PP. En ambos casos la mezcla se dejó enfriar
lentamente y se centrifugó en un gradiente de densidad de CsCl.
Las partículas (J emitidas por el p^^ y el IP tienen diferentes energías y, por tanto,
pueden distinguirse por medio de un contador de centelleo.
¿Qué resultados experimentales esperaría obtener si el ARN que se sintetiza inme-
diatamente después de la infección estuviese codificado por el ADN del fago T2F.

Solución

El A D N de E. coli muestra una d e n s i d a d diferente al A D N d e l fago 72, de manera q u e

a m b o s p u e d e n separarse e n u n gradiente de densidad de CsCl.
Si el A R N q u e se sintetiza inmediatamente después de la infección se ha p r o d u c i d o a
partir d e l A D N d e l virus 72, el A R N marcado c o n sólo hibridará c o n el A D N de 7 2 p e r o
n o hibridará c o n el A D N de E. coli. Por tanto, si después de la hibridación realizamos u n a
centrifugación e n gradiente de densidad de CsCl, encontraremos q u e e n el caso de la h i -
80 360 Problemas de Genética

bridación c o n el A D N desnaairalizado de 72 aparecerá una banda de A D N que presentará

radiactividad debida al P''' y radiactividad debida al H'' (tritio) correspondiente a la h i b r i d a -
ción d e l A R N c o n el A D N del fago 72. Sin embargo, cuando la hibridación se realiza c o n el
A D N de E. coli, n o encontraremos bandas de A D N que presenten simultáneamente ambos
tipos de radiactividad, ya que el A R N n o hibridaría c o n el A D N de E. coli. En este caso o b -
servaríamos dos bandas c o n densidades diferentes, una correspondiente al A D N de E. coli
q u e presentará radiactividad debida al H ' , y otra banda correspondiente al A R N que mos-
trará radiactividad debida al P'-.

Emisión de (ARN) Emisión de Emisión de

H> (ADN) (ARN)

Emisión de tf (ADN)

E. coli ARN T2~

A

Densidad de flotación Densidad de flotación

Hibridación ADN T2 con ARN Hibridación ADN E. cali con ARN

4 . 5 . Parte de la secuencia de rihonucleótidos de un ARN mensajero es la siguiente:

5 - CCAUCAUGAGAGACCCUUGCUAACGC - 3 '

Indicar la secuencia de bases nitrogenadas de las dos hélices del segmento de ADN
que ha originado este ARN-m. Señalar los extremos 5'y 3' de cada hélice de ADN
e indicar la hélice codificadora y la estabilizadora.

Solución

La secuencia de bases nitrogenadas se obtiene s i g u i e n d o las reglas de c o m p l e m e n t a r i -

d a d de bases y r e c o r d a n d o que el uracilo ( U ) del A R N aparea c o n la adenina ( A ) d e l A D N .

ADN
5'- c e A T C A T G A G A G A C C C T T G C T A A C G C-3' H . estabilizadora

3 ' - G G T A G T A C T C T CT G G G A A C G A T T G C G - 5 ' H . codificadora

I Transcripción
5 ' - C C A U C A U G A G A G A C C C U U G C U A A C G C - 3 ' ARN
 Transcripción 81
La hélice codificadora es la que se transcribe y se t o m a c o m o m o l d e para p r o d u c i r el
A R N , la hélice q u e n o se transcribe es la estabilizadora.

4 . 6 . Si se analiza la secuencia de bases nitrogeyiadas de una de las dos hélices de un

segmento de ADN de E. coli que es transcrito en ARN mensajero, se obtiene el si-
guiente resultado:
TTTACAACTGTTAATrCAGTGAGCTTGATCATATTACGCGGAGGGTAGCTCTGCTTACAAG

Suponiendo que la Timina (T) subrayada es la primera base transcrita y que el triplete
subrayado corresponde al codón de iniciación de la traducción del mensajero (AtJG):
a) Identifique las dos secuencias promotoras, indicando la caja de Pribnow.
b) Determine la secuencia y la polaridad de bases en el ARN recién transcrito.
c) ¿Por qué la mayoría de las regiones promotoras son ricas en pares A-T?

Solución

a) U n a de las secuencias p r o m o t o r a s es la caja de P r i b n o w cuya secuencia consenso es 5'

TATAAT 3', q u e se encuentra diez bases antes (-10) de la p r i m e r a base q u e se transcri-
be ( T ) y que es reconocida p o r la A R N - p o l i m e r a s a para comenzar la transcripción. Otra
secuencia p r o m o t o r a está situada 35 bases antes (-35) de la p r i m e r a q u e se transcribe
( T ) y su secuencia consenso es 5' T G T T G A C A 3'. Seguidamente se i n d i c a n ambas se-
cuencias p r o m o t o r a s (intensificadas y subrayadas) e n la hélice c o d i f i c a d o r a y
estabilizadora del segmento de A D N estudiado:
Hélice codificadora
3' T T T A C A A C T G T T A A T T C A G T G A G C T T G A T C A T A T T A C G C G G A G G G T A G C T C T G C T r A C A A G 5'

5 AAATGTTGACAATTAAGTCACTCGAACTAGTATAATGCGCCTCCCATCGAGACGAATGTTC 3'
Hélice estabilizadora

La secuencia de la hélice codificadora, la hélice q u e se transcribe, es la q u e se t o m a co-

m o m o l d e para sintetizar el A R N que crece en la dirección 5' ^ 3'. Por tanto, t e n i e n d o e n
cuenta que la p r i m e r a base que se transcribe es la T i m i n a subrayada y q u e el t r i p l e t e su-
b r a y a d o (TAC) se corresponde c o n el de iniciación 5' A U G 3 ' d e l A R N mensajero, la
p o l a r i d a d de la hélice codificadora sería la siguiente:

3' TTTACAACTGTTAATTCAGTGAGCTTGATCATATTACGCGGAGGGTAGCTCTGCTTACAAG 5'

b) La secuencia y p o l a r i d a d de las bases e n el A R N recién transcrito se o b t i e n e n t e n i e n d o

e n cuenta q u e el A R N se sintetiza en la dirección 5' - * 3', p o r tanto el A R N sintetizado
crece e n ese sentido c o m e n z a n d o p o r una A d e n i n a (base c o m p l e m e n t a r i a ) a la p r i m e -
ra T i m i n a d e l A D N q u a se transcribe. Por tanto, la secuencia d e l A R N sería:

Hélice codificadora
3' TTTACAACTGTTAATTCAGTGAGCTTGATCATATTACGCGGAGGGTAGCTCTGCTTACAAG
_ _ ^ _ 5'

Transcripción |

ARN 5'AUCGÍGACGAAUGTTC3'
82 360 Problemas de Genética

c) Para que la transcripción tenga lugar es necesario q u e las dos hélices d e l A D N se se-
paren. Probablemente, la mayoría de las regiones p r o m o t o r a s c o m o la caja de P r i b n o w
son ricas en pares A - T d e b i d o a que la A R N - p o l i m e r a s a p u e d e c o n m a y o r f a c i l i d a d
comenzar a separar las dos hélices de A D N para llevar a cabo la transcripción, ya q u e
la energía necesaria para separar ambas hélices es menor.
Es importante destacar que la primera base que se transcribe n o coincide c o n la prime-
ra que se traduce a proteínas, es decir, que existe una distancia entre la p r i m e r a base
transcrita (T) y el c o d ó n de iniciación de la traducción (TAC), de f o r m a q u e los A R N - m
mensajeros tienen p o r el extremo 5' una región que se d e n o m i n a "líder" , más o menos
larga, y q u e n o se traduce en aminoácidos. En este problema, para simplificar, la distan-
cia que se ha puesto entre la primera base transcrita (T) y el triplete de iniciación (TAC)
es m u c h o más p e q u e ñ a de l o habitual, ya que la región "íder" suele ser m u c h o m a y o r

4 . 7 . La siguiente secuencia de bases nitrogenadas se ha encontrado en las regiones ter-

minadoras del ADN de muchos genes en E. c o l i :

5 ' - T T A A A G G C T C C T T T T G G A G C C T T T T T T TT-3'
3 ' - A A T T T C C G A G G A A A A C C T C G G A A A A A A A A - 5 '

a) ¿Qué nombre reciben este tipo de secuencias y qué tipo de estructuras pueden
originar? Haga un esquema.
b) Teniendo en cuenta que la hélice codificadora es la situada abajo, obtenga la
secuencia de rihonucleótidos terminadora del ARN transcrito e indique la es-
tructura a la que daría lugar esta secuencia.

Solución

a) Este t i p o de secuencias r e c i b e n el n o m b r e de secuencias palindrómicas, ya q u e la se-

cuencia de bases nitrogenadas se lee igual e n las dos hélices e n la dirección 5' -> 3'.
U n e j e m p l o de palíndromo gramatical es la frase " D A B A L E A R R O Z A LA ZORRA EL
A B A D " , que se lee igual e n ambos sentidos. T a m b i é n , p u e d e n existir palíndromos q u e
presentan e n el centro u n a serie de nucleótidos q u e n o t i e n e n c o n q u i e n aparearse,
p o r e j e m p l o : " D A B A L E ARROZ A LLLLLLL A ZORRA EL A B A D " . La existencia de pa-
líndromos en el A D N p e r m i t e que aparezcan regiones de a u t o a p a r e a m i e n t o o zonas
e n las q u e u n a hélice aparea consigo misma e n vez de c o n la c o m p l e m e n t a r i a . En el
siguiente esquema se señala la secuencia palindrómica existente e n esta región t e r m i -
n a d o r a d e l A D N y se p o n e n de manifiesto las regiones de a u t o a p a r e a m i e n t o e n f o r m a
de h o r q u i l l a :
 Transcripción 83

Autoapareamiento

TT TTTn
5'- T T
3'-
AA c G
cT G
A
C G
c G
Gc
G
Cu
C A
G
G G G C
A T G C
A T A U
A T
UU
A
A u11
A 5'-

b) La hélice codificadora es la que se transcribe y , p o r tanto, la que se t o m a c o m o m o l d e

para sintetizar el A R N que crece e n la dirección 5' 3'. Si realizamos la transcripción
de la hélice q u e nos h a n i n d i c a d o c o m o codificadora, obtenemos la siguiente secuen-
cia e n el A R N :

Hélice codificadora
ADN 3 ' - A A T T T C C G A G G A A A A C C T C G G A A A A A A A A - 5 '
l
Transcripción

l
ARN 5 ' - U U A A A G G C U C C U U U U G G A G C C U U U U U U U U - 3 '

La región t e r m i n a d o r a del A R N mensajero tendría la secuencia indicada a n t e r i o r m e n t e

q u e finaliza c o n una zoria nca e n uracilos y la estructura que podría f o r m a r d e b i d o a la
existencia de u n palíndromo sería la q u e aparece e n el esquema anterior.

' 4 . 8 . La ARNpolimerasa dependiente de ADN o transcriptasa es el enzima encargado de

realizar la transcripción. Este enzima carece de actividad exonucleasa 3'~^ 5', por
tanto, carece de la actividad correctora que sí poseen las ADN polimerasas.
84 360 Problemas de Genética

a) ¿Esperaría niveles altos o bajos de error en la transcripción en comparación con

la replicación?
b) ¿Por qué es importante la corrección de pruebas en la ADN polimerasa y no en
la ARN polimerasa?

Solución

a) D a d o que la A R N - p o l i m e r a s a carece de actividad exonucleasa 3' 5' y , p o r tanto, n o

posee actividad correctora de pruebas, los niveles de error en transcripción c o m p a r a -
dos c o n la replicación d e b e n ser mayores y de h e c h o son más altos. Sin embargo, h a y
q u e tener e n cuenta que los A R N mensajeros en general t i e n e n una vida m e d i a m u y
corta, siendo inestables y degradándose c o n rapidez; de f o r m a q u e siempre se están
sintetizando nuevos A R N - m y, p o r consiguiente, siempre habrá disponibles A R N - m
c o n la secuencia correcta.
b) Los errores n o corregidos que comete la A D N - p o l i m e r a s a durante la replicación s o n
mutaciones que p e r m a n e c e n en el A D N durante las sucesivas generaciones celulares,
a d e m á s estos errores se p u e d e n transmitir de una generación a la siguiente. Sin e m -
bargo, los errores que comete la A R N - p o l i m e r a s a e n la síntesis de A R N sólo afectan a
la célula e n q u e se ha p r o d u c i d o el error y e n baja m e d i d a , ya que c o m o se ha d i c h o
anteriormente habrá m u c h o s A R N - m mensajeros c o n la secuencia n o r m a l y algunos
( m u y pocos) c o n el error.

4 . 9 . La mayoría de las especies de ARN mensajero eucaríótico pueden purificarse a par-

tir de mi extracto celular, haciendo pasar el ARN celular total a través de una
columna que contenga polímeros largos de timina unidos a un soporte sólido.
¿Cuál es la base molecular de este procedimiento de purificación?

Solución

Los mensajeros eucarióticos, una vez terminada su transcripción, sufren u n procesa-

m i e n t o p o s t e r i o r Las dos primeras modificaciones consisten en la adición de una caperuza
(Cap) p o r el e x t r e m o 5' q u e consiste en la adición de una 7 - m e t i l guanosina e n la direc-
c i ó n incorrecta, 5'con 5'. Parece ser q u e esta capeaiza p o r el e x t r e m o 5' sirve para proteger
al A R N de la degradación p o r ese extremo. La segunda modificación consiste e n la adición
de una larga cola de adeninas (de 150 a 200 residuos) p o r el e x t r e m o 3', llamada cola de
p o l i - A . Esta cola de p o l i - A parece estar relacionada c o n la protección contra la degrada-
c i ó n d e l A R N - m p o r el e x t r e m o 3'. Precisamente, la existencia de esta cola de p o l i - A e n
los A R N - m eucarióticos es la que p e r m i t e que p u e d a purificarse el A R N - m m e d i a n t e co-
lumnas que t i e n e n largos polímeros de T i m i n a u n i d o s a u n soporte sólido, ya que estos
largos polímeros de T i m i n a c o m p l e m e n t a n y aparean c o n las colas de p o l i - A de los m e n -
sajeros, q u e d a n d o éstos retenidos e n la c o l u m n a .

[Véanse los problemas 21.8 y 21.9 del capítulo dedicado a la genética humana.]
 Transcripción 85

4 . 1 0 . A partir de eritrocitos de conejo se ha conseguido aislar el ARN mensajero maduro

(ARN-m) que lleva información para la JS-globinay el ARN recién transcrito o ARN
heterogéneo nuclear (ARN-hn). También, ha sido posible aislar el segmertto de ADN
que lleva la información para la J^globina. Mediante la técnica de los "lazos R"
desarrollada por White y Hogyiess es posible hibridar ARN con ADN de doble hélice
a altas temperaturas y en presencia de formamida. En estas condiciones, los híbri-
dos ADN-ARN son más estables que las moléculas de ADN doble hélice. Como
consecuencia, el ARN hibrida cotí la secuencia complementaria de ADN y despla-
za a la otra hélice de ADN que queda sin aparear formando un "lazo R". Si se
hibrida, por un lado, el ARN-m de la jS-globina con el segmento de ADN que lo ha
originado, y por otro, el ARN-hn (recién transcrito) de la JS-globina con el segmento
de ADN que lo originó y se analizan los resultados al microscopio electrónico, se ob-
tienen la siguientes imágenes:

ADN
Lazo R /
LazoR y f
/ J
\ -\j
/ — / ^ \^X
í p ^ ARN-hn ) ^
ARN-m

El ADN se ha dibujado en trazo continuo y el ARN-hn y ARN-m en trazo discontinuo

a) ¿Qué interpretación daría a estas imágenes?

b) ¿Qué tipo de organizacióti parecen sugerir que tienen los genes en eucariontes?
c) ¿Podría tener alguna ventaja evolutiva este tipo de organización?
d) ¿Invalidan estos resultados la "hipótesis de la secuencia" propuesta por Crick?

Solución

a) Los resultados obtenidos i n d i c a n q u e hay una zona d e l A R N - m m a d u r o q u e n o h i b r i -

da c o n el A D N d e l g e n de la ^ g l o b i n a , ya que e n el centro se observa la aparición d e
u n lazo de A D N d o b l e hélice y a ambos lados la existencia de dos lazos R. Sin embar-
86 360 Problemas de Genética

go, el A R N - h n (recién transcrito) hibrida en toda su l o n g i t u d c o n el A D N d e l g e n de la

P - g l o b i n a sin q u e aparezcan e n el centro zonas o lazos de A D N d o b l e hélice. Por tan-
to, parece q u e la diferencia existente en el tamaño d e l A R N - h n y d e l A R N - m se debe
a q u e existiría u n procesamiento que eliminaría una parte d e l centro d e l A R N - h n . Es-
tas regiones d e l A D N d e l g e n de la (3-globina que n o se t r a d u c e n e n a m i n o á c i d o s en la
proteína reciben el n o m b r e de Intrones y aquéllas que sí se t r a d u c e n e n a m i n o á c i d o s
son los Exones. En el siguiente esquema se da una interpretación a los resultados o b -
tenidos c u a n d o se hibrida el A R N - m c o n el A D N d e l g e n de la ( i - g l o b i n a .

Intrón (ADN de doble hélice)

\ Lazo R /
ADN (

Lazo R \ ^Exón
^ ARN-m
^ Exón
El ADN se ha dibujado en trazo continuo y el ARN-m en trazo discontinuo

b) Según estos resultados los genes eucarióticos parecen presentar una estructura de t i p o
fragmentada, de manera que los exones (zonas q u e se traducen a proteínas) se alter-
n a n c o n los intrones (zonas que n o se traducen y se retiran d u r a n t e el procesamiento
del A R N ) .
cj A l g u n o s autores han p r o p u e s t o la Teoría de la c o m b i n a c i ó n de los exones. Esta teoría
está basada e n el hecho de que muchas proteínas presentan diferentes zonas o d o m i -
nios c o n distintas actividades o funciones, de f o r m a que m u c h o s de estos d o m i n i o s
están codificados p o r distintos exones. Por tanto, bastaría c o n la existencia de u n o s
cuantos exones (se estima que 7.000 serían suficientes) c o n diferentes capacidades o
funciones que convenientemente mezclados podrían dar lugar a la aparición de p o l i -
péptidos que combinarían capacidades catalíticas distintas. Este hecho supondría una
i m p o r t a n t e ventaja evolutiva.
d) La "hipótesis de la secuencia" propuesta p o r Crick indica que existe una relación lineal
entre la secuencia de nucleótidos en el A D N y la secuencia de aminoácidos e n las p r o -
teínas. La demostración de la "hipótesis de la secuencia" fue llevada a cabo p o r Yanofsky
y colaboradores trabajando c o n el g e n A de la triptófano sintetasa de E. coli y también
 Transcripción 87

p o r Sarabhai y colaboradores estudiando mutantes de terminación á m b a r q u e afectan

a la proteína de la cabeza del víais T4. La "hipótesis de la secuencia" n o se invalida p o r
la existencia de intrones. A n i v e l d e l A D N se c u m p l e , ya que en la mayoría de los ca-
sos descritos hasta el m o m e n t o n o se altera el o r d e n relativo de los exones d u r a n t e el
proceso de retirada de los intrones d e l A R N , p o r consiguiente, sigue existiendo u n a re-
lación lineal entre la secuencia de nucleótidos y la secuencia de a m i n o á c i d o s e n los
polipéptidos. En u n e x p e r i m e n t o similar al realizado p o r Yanofsky e n eucariontes o b -
servaríamos q u e el o r d e n relativo de las mutaciones en el A D N y de los a m i n o á c i d o s
cambiados e n la proteína codificada p o r el g e n analizado sería el m i s m o , p e r o las dis-
tancias genéticas entre mutaciones e n el A D N y las distancias entre los a m i n o á c i d o s
alterados e n el polipéptido podrían n o ser equivalentes.

4 . 1 1 . Un determinado gen eucariótico consta de tres exones y dos intrones y está orga-
nizado según se indica en la siguiente figura:

HÉLICE CODIFICADORA
Promotor Finalizador

Antilíder Exón 1 Intrón 1 Exón 2 Intrón 2 Exón 3 Antitráiler

31 5'
TAC ATT A
t

Primera base Ultima base

transcrita transcrita
Primer triplete Triplete de
traducido terminación

Suponga que dispone del segmento de ADNgenómico que lleva la información pa-
ra este gen y que además tiene aislados el ARN-hn recién transcrito y el ARN-m
maduro producido a partir de estegeii. Dibuje un esquema de lo que esperaría ob-
servar al microscopio electrónico cuando se hibrida, por un lado el ADN del gen y
el ARN-hn y, por otro lado el ADN del gen y el ARN-m, empleando en ambos casos
la técnica de los "lazos R" desarrollada por White y Hogness.

Solución

El A R N - h n (recién transcrito) será de igual l o n g i t u d que el A D N d e l g e n q u e l o ha o r i -

g i n a d o , ya que este A R N - h n aún n o ha sido procesado. Por tanto, c u a n d o se h i b r i d e el
88 360 Problemas de Genética

A R N - h n c o n el A D N d e l gen, observaremos u n único lazo R. Sin e mb a rg o , el A R N - m es

más p e q u e ñ o ya que durante el procesamiento d e l A R N - h n se habrán retirado los dos i n -
trones existentes (intrones 1 y 2) y solamente quedarán los tres exones. Por tanto, c u a n d o
h i b r i d e m o s el A R N - m c o n el A D N d e l g e n encontraremos la existencia de tres lazos R
( A D N de una hélice) correspondientes a los tres exones presentes e n el A R N - m y dos la-
zos de A D N d o b l e hélice correspondientes a los dos intrones q u e n o están en el A R N - m .
En el siguiente gráfico se muestra u n esquema de l o que se observaría al h i b r i d a r el
A R N - h n y el A R N - m c o n el A D N del gen.

Intrón 2

El ADN se ha dibujado en trazo continuo y el ARN-hn y ARN-m en trazo discontinuo

4 . 1 2 . Si se aisla el ADN de E. coli cuando se está expresando la información que contiene

y se observa al microscopio electrónico se obtietien imágenes como las representadas
en las siguientes figuras:

A B
 Transcripción 89
¿Qué tipo de genes son los que se estáte transcribiendo en el caso de la figura A
y en el caso de la figura B?
b) ¿Cómo comprobaría sus hipótesis?

Solución

a) En la figura A se observa una fibra central de la que salen hacia ambos lados fibras la-
terales cada vez más largas q u e tienen unidas varias partículas. Probablemente, se trata
de la transcripción y traducción de genes estructurales, de f o r m a q u e la fibra central se-
ría el A D N que lleva la información para los polipéptidos, y las fibras laterales q u e v a n
a u m e n t a n d o en l o n g i t u d de u n e x t r e m o al o t r o serían fibras de A R N - m . Así, esta región
del A D N se estaría transcribiendo simultáneamente p o r varias A R N - p o l i m e r a s a s . En el
p u n t o de unión de estas fibras laterales de A R N a la fibra central de A D N se observaría
la presencia de la molécula de A R N - p o l i m e r a s a que está l l e v a n d o a cabo la transcrip-
ción. Las partículas de m a y o r tamaño que se encuentran unidas a las fibras laterales de
A R N serían ribosomas q u e estarían realizando la traducción de los A R N - m . En bacte-
rias la traascripción y la traducción tienen lugar simultáneamente. Cada fibra d e
A R N - m está siendo traducida simultáneamente p o r varios ribosomas. Además, fijándo-
nos e n la f o r m a de punta de flecha que tienen las imágenes obtenidas p o d e m o s
d e d u c i r la dirección de transcripción, de manera que el o r i g e n de la transcripción es-
taría e n la p u n t a de la flecha y el final se situaría en la parte más ancha.

Transcripción de genes estructurales Transcrición de genes con información para

con información para polipéptidos ARN-r (ribosómico) o ARN-t (transferente)

ARN-polimerasa ARN-polimerasa
ARN-m ADN ADN

ADN

A B

En la figura B se observa prácticamente l o m i s m o q u e e n la A , c o n la única diferencia

de q u e las fibras laterales q u e v a n a u m e n t a n d o de tamaño de u n e x t r e m o al o t r o n o tie-
90 360 Problemas de Genética

n e n partículas unidas. Por tanto, p r o b a b l e m e n t e estas imágenes corresponderían a la

transcripción de genes c o n información para el A R N ribosómico q u e n o se traduce a
proteínas y q u e p o r tanto n o tendría u n i d o s ribosomas, o b i e n podría c o r r e s p o n d e r a
la transcripción de genes c o n información para el A R N - t (transferente), q u e t a m p o c o
se traduce a proteínas. En p r i n c i p i o , la única f o r m a de distinguir entre transcripciones
de genes c o n información para el A R N - r o para el A R N - t sería m e d i r los tamaños de
las unidades de transcripción, ya que los genes c o n información para el A R N - t s o n mas
p e q u e ñ o s q u e los que llevan información para el A R N - r . Por tanto, la fibra central se-
ría A D N , las fibras laterales que v a n a u m e n t a n d o e n tamaño serían A R N y e n la unión
de las fibras de A R N al A D N estarían situadas las moléculas de A R N - p o l i m e r a s a .
b) Si realizamos una digestión c o n ARN-asa ( e n z i m a q u e digiere el A R N ) deberían desa-
parecer las fibrillas laterales y permanecer la fibra central de A D N . Si la digestión la
realizamos c o n A D N - a s a (enzima que digiere el A D N ) dejaríamos de observar la fibra
central de A D N y seguiríamos observando las laterales de A R N . Naturalmente, este tra-
t a m i e n t o l o realizaríamos e n ambos casos (figuras A y B).

A.AZ.En determinados organismos se producen fenómenos de "amplificación génica"

cuando se necesita gran cantidad de un determinado producto. Por ejemplo, en los
oocitos de anfibios se producen una gran cantidad de nucléolos. La acción de los
genes que llevan información para el ARN 45 S, precursor del ARN ribosómico, se
observó en los nucléolos de oocitos de anfibios al microscopio electrónico, obte-
niéndose el siguiente tipo de imágenes:

a) Explique las itnágenes obtetiidas indicatido el proceso que representan.

b) ¿Qué tipo de organización de los genes para el ARN 45 S sugieren estas imá-
genes?

Solución

a) En las imágenes presentadas se observa la aparición de u n a serie de figuras e n f o r m a

de p u n t a de flecha unidas entre sí p o r una fibra. Las puntas de flecha t i e n e n todas el
 Transcripción 91

m i s m o t a m a ñ o y la misma orientación y están formadas p o r m u l t i t u d de p e q u e ñ a s f i -

bras q u e salen de la fibra central que u n e las distintas puntas de flecha. Por tanto,
t e n i e n d o en cuenta que estamos observando la acción de los genes que l l e v a n i n f o r -
mación para el A R N 45 precursor d e l A R N ribosómico, estas imágenes p r o b a b l e m e n t e
representan la transcripción de estos genes. De manera que cada p u n t a de flecha esta-
ría f o r m a d a p o r una fibra central de A D N q u e contendria la información para el A R N
45 S y las fibrillas laterales que a u m e n t a n de tamaño desde la p u n t a al e x t r e m o o p u e s -
to de la flecha, serían fibras de A R N e n diferentes estados de transcripción, estando el
o r i g e n de la transcripción en la p u n t a de la flecha y el final e n la parte ancha. D e for-
m a q u e cada gen esta siendo transcrito simultáneamente p o r varias A R N - p o l i m e r a s a s .
Por tanto, podríamos observar en el p u n t o de unión de la fibrillas laterales de A R N a la

ADN espaciador ADN espaciador ADN espaciador

Dirección de transcripción
92 360 Problemas de Genética

fibra central de A D N le existencia de una A R N - p o l i m e r a s a . Además, si se trata el m a -

terial extraído de estos nucléolos de los oocitos de anfibios c o n ARN-asa ( e n z i m a q u e
digiere el A R N ) desaparecerían todas las fibras laterales. Si se trata c o n A D N - a s a desa-
parece la fibra central que mantiene unidas todas las puntas de flecha.
b) Estas imágenes sugieren q u e los genes para el A R N 45 S precursor d e l A R N ribosómi-
co están agrupados e n una zona d e l genoma y repetidos varias veces e n tándem, ya
q u e las puntas de flecha se encuentran una a continuación de otra c o n la m i s m a o r i e n -
tación y separadas p o r u n corto segmento de A D N espaciador.