SEPARACION DE PIGMENTOS FOTOSINTETICOS

Valentina Monsalve, Jenny Rueda y Sebastián Osma

valentina.monsalve.2021@upb.edu.co jenny.rueda.2021@upb.edu.co
juan.osma.2019@upb.edu.co
Laboratorio de Biología Celular - NRC 19945 - Universidad Pontificia Bolivariana

RESUMEN

El presente informe pretende establecer y desarrollar un manejo correcto de la técnica instrumental de

la cromatografía en papel, de igual manera, determinar la composición de mezclas problemas por medio
de la cromatografía en papel. Y así mismo observar y determinar el proceso y los resultados de la
fotosíntesis, como ocurre la absorción de la luz por los pigmentos fotosintéticos, para convertir la
energía solar en energía química.

PALABRAS CLAVE

 Pigmentos
 Compuesto
 Solvente
 Fotosíntesis
 Arrastre
 Reacciones
 Luz

INTRODUCCION

Las hojas son los órganos fundamentales, en el que se cocina el alimento del árbol, este proceso se
llama fotosíntesis. Las hojas absorben sustancias simples del medio, como el agua y las sales minerales
disueltas en ella que viajan desde el suelo a las hojas y Dióxido de carbono,CO2, que se encuentra en el
aire. Las hojas tienen pigmentos que captan la energía del sol, el más importante es la clorofila que es de
color verde, pero hay otros pigmentos como las xantofilas (amarillos y pardos) y los carotenos
(anaranjados y rojizos).

La energía solar capturada por la clorofila y sus pigmentos auxiliares se utiliza para convertir el agua y el
dióxido de carbono en glucosa (un azúcar) y oxígeno. Este proceso es la fotosíntesis. Los días de otoño
son más cortos, por lo tanto, advierte a los árboles de que falta menos para el invierno. Los árboles
comenzaron a cerrar la cocina y empezaran a arrojar sus hojas. En invierno, dependerán de las reservas
de alimentos almacenados para su sustento. La producción de clorofila se detiene y los demás

1
pigmentos presentes en las hojas empiezan a verse, ya que antes estaban ocultos por el intenso color
verde de la clorofila.

La cromatografía es una técnica que se utiliza para separar mezclas. Debido a la acción capilar o
capilaridad, el alcohol en el que se disuelve el pigmento mueve el papel hacia arriba. Los pigmentos con
menor solubilidad y mayor masa tienen menor adherencia al papel( se quedan pegados más abajo),
mientras que los pigmentos con mayor solubilidad y menor masa continúan ascendiendo con el
contenido de alcohol. Dado que cada pigmento tiene una solubilidad y masa diferente, en la tira de
papel se forman franjas coloreadas según se van depositando los pigmentos.

ASPECTOS RELEVANTES DE LA PRACTICA

 Explique cómo un laboratorio criminalístico podría usar cromatografía en papel para
determinar si el lápiz labial encontrado en una escena del crimen coincide con el
lápiz labial de un sospechoso.

Los de criminalística deben crear una “biblioteca” con las muestras de lápiz labial de los sospechosos, y
la muestra de lápiz labial encontrada en la escena del crimen.

Las diferentes marcas de lápices labiales tienen composiciones únicas de moléculas orgánicas, que
proporcionan señales de cromatografía distintas. Esto quiere decir que cada lápiz labial tiene
características distintas, entre estas se encuentra la polaridad, la cual es la característica esencial para
lograr escoger un disolvente que pueda demostrar la separación y así poder apreciar las distancias
recorridas por los pigmentos de lápiz labial de las distintas muestras, siendo así, luego de lograr escoger
el disolvente que logre separar y diferenciar todas las muestras labiales de los sospechosos, se hace una
comparación usando el mismo disolvente, con la muestra de lápiz labial encontrada en la escena del
crimen, de esta manera, la distancia recorrida por el lápiz labial encontrado en la escena del crimen, se
podrá comparar con las muestras de los sospechosos. Si el Rf de la muestra de la escena del crimen
coincide con el Rf de la muestra de un sospechoso, se podrá afirmar la culpabilidad de este.

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DESARROLLO EXPERIMENTAL

Analizaremos el proceso de extracción de distintos pigmentos fotosintéticos vegetales por medio de la

cromatografía en papel, este proceso será realizado en cuatro pigmentos vegetales distintos, y cada
pigmento en dos solventes diferentes, los cuales serán: éter-acetona y alcohol isopropílico.

1. Ingresamos al siguiente enlace: Paper Chromatography (Simulator) : Class 11 : Biology : Amrita

Online Lab (olabs.edu.in)
Esta es la aplicación mediante la cual realizaremos el experimento.

Aquí tenemos las opciones de elegir el extracto de pigmento vegetal y el solvente.

comenzaremos analizando los cuatro diferentes extractos, en el solvente éter-acetona.

2. Así mismo, observando la muestra, podemos diferencial los tonos (colores), para así poder
diferenciar los distintos pigmentos.

 VERDE ESPINACA
 ARCE EN PRIMEVERA/VERANO
 ARCE EN OTOÑO/INVIERNO
 FOLLAJE DE OTOÑO

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 SOLVENTE ETER-ACETONA
 Verde espinaca

 Arce en primavera/verano

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 Arce en otoño/invierno

 Follaje de otoño

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3. Después de diferenciar los pigmentos, la misma aplicación nos da la opción de observar una
escala, en la cual podemos ver el valor Rf.

 Vede espinaca

 Arce en primavera/verano

6
 Arce en otoño/invierno

 Follaje de otoño

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4. Así mismo, haremos la misma comparación grafica de los distintos extractos de pigmentos,
ahora en solvente de alcohol isopropílico.

SOLVENTE ALCOHOL ISOPROPILICO

 Vede espinaca

 Arce en primavera/verano

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 Arce en otoño/invierno

 Follaje de otoño

5. Así mismo, Después de diferenciar los pigmentos, la aplicación nos da la opción de observar una
escala, en la cual podemos ver el valor Rf. Ahora con el solvente alcohol isopropílico.

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 Vede espinaca

 Arce en primavera/verano

10
 Arce en otoño/invierno

 Follaje de otoño

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 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

6. Estas graficas que nos da la aplicación, nos deja observar una escala (regla), con la cual
podemos ver la distancia recorrida por cada compuesto, y la distancia recorrida por el solvente,
teniendo esta información, podemos hacer la formula de Rf para corroborar y comparar
nuestros resultados, con los resultados que nos da la aplicación.

PIGMENTOS EN SOLVENTE ETER-ACETONA

 Pigmento verde espinaca en solvente éter-acetona:

 Pigmento arce en primavera/verano en solvente eter-acetona

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 Pigmento arce en otoño/invierno en solvente eter-acetona:

 Pigmento follaje de otoño en solvente éter-acetona:

PIGMENTOS EN SOLVENTE ALCOHOL ISOPROPILICO

 Pigmento verde espinaca en solvente alcohol isopropílico:

 Pigmento arce en primavera/invierno en solvente alcohol isopropílico;

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  Pigmento de arce en otoño/invierno en solvente alcohol isopropílico:

 Pigmento follaje de otoño en solvente alcohol isopropílico:

Cuando las distancias del solvente y del pigmento son visibles, se puede determinar el valor Rf (factor de
retención) de cada punto o la distancia de movimiento de cada compuesto en la placa. El Rf
característico de cada compuesto depende del disolvente utilizado y del tipo de placa de TLC utilizada.
De esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de
un compuesto conocido (preferiblemente cuando se hacen diluir en la misma placa de CCF). Lo ideal es
que se logre separar los compuestos y tengan una distancia considerable, se debe considerar la
polaridad del solvente, para que los pigmentos avancen y así se puedan separar correctamente.

Después de hacer el respectivo análisis de la comparación de las tablas que nos proporciona la
aplicación, con las tablas nuestras, hechas con la formula de Rf, podemos observar que la tabla
predeterminada que muestra la aplicación presenta una gran variación respecto a nuestros resultados,
ya que a pesar de que ambos valores Rf están proporcionados con los mismos datos, la aplicación tiene
un margen de error bastante significativo, con respecto a nuestras tablas.

Muchas veces en las cromatografías se suele denominar a la fase móvil como solvente, lo cual es cierto
siempre que la cromatografía use como fase móvil un líquido menos polar que el agua. En esos casos se
suele denomina "frente de disolvente" en lugar de frente de fase móvil. El valor de Rf es un parámetro
que nos permite asegurarnos de que no hay analito en la muestra, pero por sí solo no puede garantizar
la presencia del analito.

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IMPORTANCIA DE LA LUZ EN LA FOTOSINTESIS

Las plantas necesitan luz para la fotosíntesis y la fotosíntesis es el proceso mediante el cual las plantas
obtienen alimento. Los requisitos son diferentes para cada especie: algunas plantas requieren mucha
luz, mientras que otras requieren muy poca luz. Pero no todas las luces son iguales. La luz natural es la
más fuerte y poderosa, por lo que es mejor asegurarse de que todas las plantas (incluso las de interior)
reciban luz natural durante al menos unas pocas horas al día.

Reacción de las plantas ante el exceso o falta de luz

Tanto el exceso como la falta de luz pueden tener un impacto negativo en las plantas. Demasiada luz
hará que las hojas pierdan su verde y se vuelvan blancas, con bordes y manchas marrones. Además, el
tamaño de la muestra se reducirá, a veces se arrugará o incluso se quemará. Como respuesta natural a
este fenómeno de sobredosis, las plantas tenderán a crecer mirando hacia el lado opuesto de la planta
receptora de luz. Por el contrario, cuando la planta recibe menos luz de la que necesita, la planta
parecerá débil. Rara vez florecen, las flores son pequeñas y se caen antes de que se complete el
desarrollo, los tallos son débiles y las hojas se vuelven amarillas y se caen rápidamente.

Además de recibir la cantidad justa de luz (ni excesiva ni insuficiente), también es necesario asegurarse
de que la luz llegue a todas las partes de la planta de manera uniforme. Si solo una parte de la planta
recibe luz y la otra no, todo su desarrollo tenderá a desviarse hacia el ámbito de la iluminación.

EXPERIMENTO 1: Como afecta a la fotosíntesis el cambio de la intensidad lumínica y la distancia de la

luz?

 Comience con la fuente de energía de 40W y observe la formación de burbujas por 1

minuto. Reinicie la simulación y cambie a 100W. Estos datos están registrados en la
siguiente tabla:

 Reinicie la simulación y pruebe si cambiando la distancia de la luz se afectará la tasa de

fotosíntesis.

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-DISTANCIA DE 50 cm.

-DISTANCIA DE 100 cm.

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 ¿Cómo afectan la intensidad lumínica y la distancia de la luz, la tasa de fotosíntesis?

El término fotosíntesis se refiere a la reacción entre el dióxido de carbono y el agua en presencia de luz
para producir carbohidratos y oxígeno. La velocidad de este proceso depende en gran medida de la
cantidad de luz. A medida que aumenta la radiación fotosintética activa (RFA), la respuesta fotosintética
también es mayor. Las plantas almacenan y utilizan los carbohidratos producidos durante la fotosíntesis
como fuente de alimento. Cada planta comienza su proceso de fotosíntesis con diferentes niveles de
energía luminosa (llamados puntos de compensación de luz).

Generalmente, más luz equivale a un mayor nivel de fotosíntesis. Sin embargo, a medida que aumenta
la intensidad de la luz, la velocidad de la fotosíntesis finalmente alcanza su punto máximo. El punto
donde la intensidad de la luz no aumenta la tasa de fotosíntesis se llama punto de saturación de luz.
Cuando se alcanza este punto, la curva de la tasa de fotosíntesis se vuelve plana (Figura 1).

Figura 1, Gráfico del punto de compensación de la luz y del punto de saturación de la luz.

EXPERIMENTO 2: Como afecta la fotosíntesis el color de la luz.

 Reinicie la simulación y realice las pruebas para cada uno de los colores (claro, rojo, verde,
azul). Usando el bulbo de 100W, a una distancia de 50 cm. Registrados en la siguiente tabla.

¿ Como afecta el color de la luz la tasa de fotosíntesis? ¿ por qué importa el color de la luz?

Las plantas realizan la fotosíntesis entre 400 y 700 nm; este intervalo se denomina radiación
fotosintéticamente activa (RFA). La clorofila es el pigmento verde de las hojas y es responsable de
absorber la energía RFA. Tiene dos puntos clave de absorción: la luz azul y la luz roja. Las hojas absorben
muy poco verde y lo reflejan. Por eso vemos el color verde de las hojas.

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-Luz ultravioleta: La luz ultravioleta provoca daños en el ADN, reduce la velocidad de la fotosíntesis,
disminuye el florecimiento y la polinización, y afecta el desarrollo de las semillas.

-Luz azul: Corresponde a uno de los puntos críticos de absorción; por lo tanto, el proceso fotosintético
es más eficiente cuando hay luz azul. La luz azul es responsable del crecimiento vegetativo y de las hojas,
y es importante para las semillas y las plantas jóvenes porque ayuda a reducir el estiramiento de la
planta.

-Luz roja: Este es el otro punto crítico de absorción de la luz para las hojas. El fitocromo (un
fotorreceptor) dentro de las hojas es más sensible a la luz roja y responde a esta. La luz roja es
importante en la regulación del florecimiento y la producción de frutos. Además, ayuda a aumentar el
diámetro del tallo y estimula la ramificación.

-Luz verde: Estimula la germinación de manera efectiva a través del fitocromo A y B, también establece
un grupo activo de fitocromos que pueden ser activados por las bombillas verdes que son usadas para
trabajar cuando las luces están apagadas.

El siguiente grafico muestra como la clorofila absorbe la luz. Examine el grafico para ayudar a
comprender los resultados del experimento.

La clorofila es el pigmento que hace que las hojas sean de color verde, y absorbe las longitudes de onda
violeta, azul y la luz roja. Debido a que refleja la luz verde, parece verde. Los diferentes pigmentos
absorben energía luminosa de diferentes longitudes de onda. El modo de absorción del pigmento se
denomina espectro de absorción de la sustancia.

El espectro de absorción de la clorofila incluye las longitudes de onda de la luz azul y rojo anaranjado,
como lo muestran sus picos a aproximadamente 400-475 nm y 650-675 nm. Vale la pena mencionar que
la longitud de onda absorbida por la clorofila a es ligeramente diferente de la longitud de onda
absorbida por la clorofila b.

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Cuando una molécula de pigmento absorbe un fotón, entra en un estado excitado. En otras palabras,
tiene energía extra y ya no se encuentra en un estado normal o básico. A nivel subatómico, la excitación
ocurre cuando un electrón asciende a una órbita de mayor energía más lejos del núcleo. Solo los fotones
con la energía adecuada pueden mover electrones entre los orbitales para excitar el pigmento. De
hecho, es por este motivo que distintos pigmentos absorben luz de distintas longitudes de onda: las
"brechas de energía" entre los orbitales son diferentes en cada pigmento, es decir, en cada caso se
necesitan fotones de diferentes longitudes de onda para proporcionar un impulso de energía que
coincida con esas brechas.

CONCLUSIONES

En esta práctica de laboratorio se comprendió que la separación de los distintos pigmentos se realiza
mediante un mecanismo físico de adsorción, en el que se establecen una serie de equilibrios adsorción-
desorción, en función de la polaridad de cada pigmento y de las fuerzas intermoleculares que pueden
establecer los componentes de la fase estacionaria y la estructura del solvente de la fase móvil.

Es por esto que los solutos polares serán disueltos por disolventes polares al establecerse interacciones
electrostáticas entre los dipolos, y los disolventes apolares disuelven las sustancias apolares por
interacciones entre dipolos inducidos.

Si se desea lograr la separación de una mezcla de solutos tanto polares como apolares, se debe hacer
una mezcla de disolventes polares y apolares, agregando la experimentación, para así lograr definir los
porcentajes de solvente para obtener una separación exitosa.

Así mismo, la fotosíntesis es el conjunto de reacciones químicas que posibilitan casi la totalidad de la
vida en la tierra, ya que es la única ruta para fijar el carbono presente en todas las células vivas. Siendo
así, comprendimos la importancia de mantener un equilibrio entre la luz recibida, y la distancia de la luz,
ya que, dependiendo de estas características, depende el funcionamiento y desarrollo de las plantas, así
mismo logramos diferenciar los factores que afectan y favorecen a la fotosíntesis, por ende, es de vital
importancia el cuidado y preservación de las plantas ya que son los únicos seres que pueden realizar
este proceso.

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 BIBLIOGRAFIA

Dennise y Perfil, VT mí. (s / f). Katya Dennise. Recuperado el 17 de marzo de 2021, sitio web de
Blogspot.com: http://katya00.blogspot.com/2011/12/proyecto-cromatografia.html

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20
https://es.khanacademy.org/science/biology/photosynthesis-in-plants/photorespiration--c3-c4-cam-plants/
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Separación de aminoácidos empleando cromatografía

en capa fina.
Experimento virtual.
http://biomodel.uah.es/lab/#thinlayer
Directamente: http://biomodel.uah.es/lab/cromat/TLC-aa.htm

http://amrita.olabs.edu.in/?sub=79&brch=17&sim=124&cnt=4

http://www.iesjovellanos.com/archivos/extraccion_yseparacion_pigmentos_vegetales.1286904835.pdf
https://botanica.cnba.uba.ar/Trabprac/Tp6/Pigmentos.htm

PROCEDIMIENTO ALTERNATIVO
SEPARACION DE PIGMENTO VEGETALES POR SEPARACION SIMPLE
La alternativa para la cromatografía, presentada en este trabajo, es la separación simple, siendo usada en el
caso de separación de pigmento vegetales
Para este se necesitan materiales como mortero, embudo, etanol, tetracloruro de carbono, éter de petróleo,
entre otros…
Consiste en adicionar las hojas de espinaca en el mortero, unto con un solvente extractante, en este caso es el
etano, triturando la mezcla hasta que las hojas pierdan su color. Posteriormente filtrarlo y agregar 2 o 3 ml
de esta sustancia a un tubo de ensayo, y a este adicionarle un solvente orgánico halogenado, siendo el
caso del tetracloruro de carbono, agitar y dejar reposar.
Los pigmentos procederán a separarse según su adsorción o afinidad con los solventes .
Al observar el tubo de ensayo donde se encuentran los solventes, se distinguiran dos zonas, correspondientes a
los distintos pigmentos fotosintéticos presentes en las hojas de espinaca Con base en su solubilidad en
alcohol y tetracloruro de carbono, estas regiones heterogéneas e inmiscibles se identifican en el siguiente
orden:
1. clorofila a + b + Tetracloruro de C.
2. xantofilas y carotenoides + Alcohol

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