UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

Regulación, Mutaciones,
Biología Molecular Aplicada
Cátedra de Biología Celular y Molecular
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN
GENÉTICA
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN EN
PROCARIOTAS
Operón lactosa en E. coli

La expresión se activa en
presencia de lactosa.

Operón triptófano en E. coli

La expresión se activa en
ausencia de triptófano.
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN
GENÉTICA EN EUCARIOTAS

A nivel de genoma: A nivel traduccional:

• Modificaciones de las bases en el
ADN.
• Remodelación de la cromatina
(epigenética).
A nivel transcripcional:
• Unión de factores de transcripción
• Procesamiento del ARNm.
• Exportación del ARNm
• Degradación del ARNm.
• Interacción con otros ARN.
• Factores de iniciación.
• Factores de represión.
A nivel postraduccional:
• Clivaje
• Modificación covalente
• Plegamiento
• Ubiquitinación.
Regulación en eucariotas
En las células eucariotas los genes cuentan con su propio promotor. Los genes constitutivos únicamente se activan con los
factores de transcripción basales, en cambio en los genes reprimibles o inducibles, lo factores de transcripción específicos
tendrán un papel fundamental ya que su unión propiciará que la RNA-polimerasa reconozca (inducción) o no (represión) al
promotor

https://dmd.unadmexico.mx/contenidos/DCSBA/BLOQUE1/BI/05/BBM1/unidad_
02/descargables/BBM1_U2_Contenido.pdf
FACTORES REGULADORES DE
TRANSCRIPCIÓN
 Potenciador Promotor Gen de Albúmina
ACTIVACIÓN
GÉNICA Elementos
Control
Potenciador Promotor Gen de Cristalina

a) NÚCLEO DE CÉLULAS HEPÁTICAS b) NÚCLEO CÉLULAS DE CRISTALINO

Activadores
disponibles
Activadores
disponibles

Gen de albúmina
Gen de albúmina no expresado
expresado

Gen de cristalina
no expresado Gen de cristalina
expresado
EXPRESIÓN GÉNICA DIFERENCIAL
 Expresión constante
Constitutivos
GENES y continua

ARNr

Gen ARNm Proteínas

ARNt

Regulados De expresión variable

según ubicación y tiempo.

Inducibles Reprimibles
MUTACIONES
 MUTACIÓN
Es una variación inducida o espontánea del genoma, un cambio permanente y heredable en la
secuencia del DNA, en nucleótidos, o bien en la disposición del DNA en el genoma.

Gen
normal
Producto génico
Fenotipo
Proteína normal
normal

Transcripción
Evento mutacional
y traducción

Producto génico
Proteína anormal Fenotipo
(parcialmente funcional o alterado
Gen no funcional) o no se
mutado produce proteína
https://blog.crownbio.com/dna-damage-response#_
 CAUSAS DE MUTACIONES

Mutaciones espontáneas
• Resultan de errores en la replicación
• Genes mutan a diferente ritmo

Mutaciones inducidas
• Inducidas por agentes mutagénicos.

https://ib.bioninja.com.au/standard-level/topic-3-genetics/34-inheritance/gene-mutation-rates.html
 AGENTES MUTAGÉNICOS
FÍSICAS
• Radiación ionizante: Rompen cromosomas y
modifican bases nitrogenadas.
• Radiación no ionizante: Forman dímeros de
pirimidinas.
• Choque térmico.
QUÍMICOS
• Análogos de bases nitrogenadas
(bromouracilo/T, aminopurina/A, etilguanina/G
etc.).
• Sustancias intercalantes (bromuro de etidio,
derivados de la acridina y flavina).
• Agentes alquilantes (nitrosoúreas, mostazas
nitrogenadas, alquilsulfonatos, triazenos, etc.).
• Ácido nitroso.
BIOLÓGICOS
• Virus (VPH, Hepatitis, Epstein-Barr,
Gammaherpesvirus).
• Bacterias (Helicobacter pylori, ¿Fusobacterium
nucleatum-colorrectal, Chlamydia trachomatis-
cervical?).
• Parásitos (Opisthorchis viverrini y Clonorchis
sinensis-vías biliares). https://doi.org/10.3390/v13061039
https://doi.org/10.4274/tpd.galenos.2022.30974
 TIPOS DE MUTACIONES
SEGÚN LA SEGÚN SUS
LOCALIZACIÓN CONSECUENCIAS

GERMINALES SOMÁTICAS M. DE M. DE M. NUTRICIONAL M. LETAL

PÉRDIDA DE GANANCIA O BIOQUÍMICA
FUNCIÓN DE FUNCIÓN

NIVELES MONOPLOIDIA
MUTACIONALES EUPLOIDIAS
POLIPLOIDIA

MONOSOMIA
GÉNICAS CROMOSÓMICAS GENÓMICAS ANEUPOLIDÍAS
TRISOMIA

https://www.youtube.com/watch?v=-l8lRmUqOXc&t=588s
 MUTACIONES GÉNICAS
Púrica por púrica o
Transiciones pirimidina por pirimidina
Sustitución de
bases
Púrica por pirimidina o
Transversiones
viceversa

Transición Posible cambio Transversión

de bases

Purina Purina Purina Pirimidina

Pirimidina Pirimidina Pirimidina Purina

 EFECTOS FENOTÍPICOS DE LAS MUTACIONES

Mutación

Codón transcrito

Cisteína Cisteína Triptófano Codón stop Aminoácido traducido

Normal Mutación Mutación Mutación
silenciosa de cambio sin sentido Resultado
de sentido
Ms. Pablo Chuna Mogollón / 06 de agosto - 2013
Ms. Pablo Chuna Mogollón / 06 de agosto - 2013 20
 MUTACIÓN SILENCIOSA

Normal
Cadena de 3 T A C T T C A A A C C G A T T 5
ADN molde 5 A T G A A G T T T G G C T A A 3
ARNm 5 A U G A A G U U U G G C U A A 3
Proteína Met Lis Fen Gli
Stop
NH2 COOH

Sustitución de un par de nucleótidos

A en lugar de G

3 T A C T T C A A A C C A A T T 5
5 A T G A A G T T T G G T T A A 3
U en lugar de C
5 A U G A A G U U U G G U U A A 3
Met Lis Fen Gli
Stop
 MUTACIÓN DE CAMBIO DE SENTIDO
Normal
Cadena de ADN molde 3 T A C T T C A A A C C G A T T 5
5 A T G A A G T T T G G C T A A 3
ARNm 5 A U G A A G U U U G G C U A A 3
Proteína Met Lis Fen Gli
Stop
Extremo amino Extremo carboxilo

Sustitución de un par de nucleótidos

T en lugar de C

3 T A C T T C A A A T C G A T T 5
5 A T G A A G T T T A G C T A A 3
A en lugar de G
5 A U G A A G U U U A G C U A A 3
Met Lis Fen Ser
Stop
Variante alfa B.1.1.7 SARS Cov-2 N501Y
Cambio de asparagina (N) por tirosina (Y)
Variante G SARS Cov-2 D614G
Cambio de aspártico (D) por glicina (G)
Variante delta B.1.6172 L452R y E484Q
Cambio de leucina (L) por arginina (R)
Cambio de glutámico (E) por glutamina (Q)
 MUTACIÓN SIN SENTIDO
Normal
Cadena de ADN molde 3 T A C T T C A A A C C G A T T 5
5 A T G A A G T T T G G C T A A 3
ARNm 5 A U G A A G U U U G G C U A A 3
Proteína Met Lis Fen Gli
Stop
Extremo amino
Extremo carboxilo

Sustitución de un par de nucleótidos

A en lugar de T
3 T A C A T C A A A C C G A T T 5
5 A T G T A G T T T G G C T A A 3
U en lugar de A
5 A U G U A G U U U G G C U A A 3
Met
Stop
MUTACIÓN DE CORRIMIENTO DE MARCO DE LECTURA: INSERCIÓN

Normal
Cadena de ADN molde 3 T A C T T C A A A C C G A T T 5
5 A T G A A G T T T G G C T A A 3
ARNm 5 A U G A A G U U U G G C U A A 3
Proteína Met Lis Fen Gli
Stop
Extremo amino
Extremo carboxilo

Inserción de par de nucleótidos: causa immediata mutación sin sentido

Extra A

3 T A C A T T C A A A C C G A T T 5
5 A T G T A A G T T T G G C T A A 3
Extra U
5 A U G U A A G U U U G G C U A A 3
Met
Stop
MUTACIÓN DE CORRIMIENTO DE MARCO DE LECTURA: DELECIÓN

Cadena de ADN molde

3 T A C T T C A A A C C G A T T 5
5 A T G A A G T T T G G C T A A 3
ARNm
5 A U G A A G U U U G G C U A A 3
Proteína
Met Lis Fen Gli
Extremo amino Stop
Extremo carboxilo

Deleción de par de nucleótidos: causa extensiva m. cambio de sentido

A pérdida
3 T A C T T C A A C C G A T T 5
5 A T G A A G T T G G C T A A 3
U pérdida
5 A U G A A G U U G G C U A A 3
Met Lis Leu Ala
 DELECIÓN DE TRES PARES DE NUCLEÓTIDOS
Normal
3 T A C T T C A A A C C G A T T 5
Cadena de ADN molde
5 A T G A A G T T T G G C T A A 3
ARNm 5 A U G A A G U U U G G C U A A 3
Proteína Met Lis Fen Gli
Stop
Extremo amino Extremo carboxilo

Deleción de 3 pares de nucleótidos: pérdida de un aminoácido

T T C pérdida
3 T A C A A A C C G A T T 5
5 A T G T T T G G C T A A 3
A A G pérdida
5 A U G U U U G G C U A A 3
Met Fen Gli
Stop
MUTACIONES CROMOSÓMICAS Chromosome
Rotura rejoins

1. Deleción Segmento
se pierde

Rotura

Genes

Paso 1 Paso 2
2. Duplicación

Segmento Unión en el
removido cromosoma
homólogo

Rotura

Genes

Paso 1 Paso 2 Paso 3

b. Alteraciones cromosómicas equilibradas

1. Inversión
Rotura
Segmento Segment
rota rejoins
180°
Rotura

Genes

Paso 1 Paso 2 Paso 3

Translocación
Mutaciones Genómicas
• Alteran el número de cromosomas.
• Afectan cientos a miles de genes.
• Generan consecuencias sindrómicas.
• Se produce inestabilidad cromosómica.
NO DISYUNCIÓN EN MEIOSIS I MEIOSIS I

Meiosis I
No disyunción normal

MEIOSIS II NO DISYUNCIÓN EN MEIOSIS II

Meiosis II Meiosis I
Normal Normal
No disyunción

Gametos

Número de n1 n1 n1 n1 n1 n1 n n

cromosomas
Gametos anormales Gametos anormales Gametos normales
Genes Genotipo Ambiente Fenotipo
- Alelos
(variantes
génicas)
• Frecuencia <1%.
• Originan nuevos alelos.
• Son generalmente deletéreas,
Mutación asociadas con patologías.
• Fuente principal de variabilidad

• Frecuencia >1%.
• Presencia de al menos 2 alelos.
Polimorfismo • Asociadas con variantes no
patológicas.

Lodish, 2016.
BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA
 POLIMORFISMOS Y MARCADORES MOLECULARES
Polimorfismos (gr. poli = muchos, gr. Alelo tipo silvestre
morfo = forma e ismo = proceso), es
decir, “de muchas formas”.

Las proteínas y los ácidos nucleicos

tienen la propiedad de presentarse Polimorfismo
en diferentes formas moleculares o sinónimo o silente
en múltiples alelos, lo que tiene
implicaciones en las patologías
humanas.
Polimorfismo no
sinónimo
Polimorfismos de ADN
Diferencias en la secuencia
nucleotídica.
Polimorfismo no
Los polimorfismos son originados sinónimo
por mutaciones y pueden ser
evaluados por las técnicas de
marcadores moleculares.
 POLIMORFISMOS Y MARCADORES MOLECULARES
Marcador: Morfológico Bioquímico Genético
Es un parámetro que indica la presencia de
una variación.
Variación en el Proteínas o
Pueden encontrarse marcadores fenotipo. enzimas.
Basado en ADN
morfológicos, bioquímicos y genéticos.

Técnicas desde
Pruebas amplificación
Es observable.
específicas hasta
Marcador Genético: secuenciamiento.
Segmento de nucleótidos que es parte de un
gen o se encuentra en una ubicación Los marcadores pueden ayudar a
cercana. relacionar una enfermedad con el
gen responsable.
Dado que los segmentos de ADN cercanos Los marcadores genéticos se usan
en un cromosoma tienden a heredarse para evaluar la herencia de un gen
que no ha sido identificado, pero
juntos, se puede establecer la ubicación
cuya ubicación aproximada se
física en un cromosoma. conoce.
 POLIMORFISMOS Y MARCADORES MOLECULARES
SNPs cada 1000 o 3000 pb
en secuencias codificantes
Los marcadores polimórficos más utilizados para
realizar un perfil genético son:
• Polimorfismos de un solo nucleótido o
nucleótido único (single nucleotide
polymorphism, SNP).
• Polimorfismos de longitud de fragmentos
de restricción (restriction fragments length
polymorphism, RFLP).
• Número variable de repeticiones continuas
o en tándem (variable numbers of tandem
repeats, VNTR). Se diferencian dos tipos:
minisatélites y microsatélites.
• Repeticiones cortas y continuas (short
tandem repeats, STR).
 GWAS: Estudios de Asociación de Genoma Completo
Casos Controles
Son estudios libres de hipótesis para identificar la relación
entre regiones genéticas (loci) y características
(incluyendo enfermedades).
Variante con
frecuencia más alta
Los GWAS evalúan todas las variaciones presentes en el en casos (enfermos)
que en controles
genoma para asociarlas con los elementos genéticos (sanos).
responsables de la aparición de la característica.

Al comparar una población de individuos que presenta

que presenta la característica, con otra que no la presenta,
se puede hacer una asociación genotipo-fenotipo.

Se caracterizan dos poblaciones: una de casos (enfermos)

y una de controles (sanos). El secuenciamiento y posterior
análisis bioinformático de cada persona en estas
poblaciones es seguido de un test de asociación entre
cada mutación y la enfermedad. https://www.ebi.ac.uk/training/online/courses/gwas-catalogue-exploring-snp-trait-associations/what-is-gwas-catalog/what-are-genome-wide-association-studies-gwas/
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-
55522010000200010#:~:text=GWAs%20es%20una%20t%C3%A9cnica%20muy,resoluci%C3%B3n%20que%20anteriormente%20eran%20inalcanzables.
 GWAS: Estudios de Asociación de Genoma Completo
GWAS han identificado asociaciones estadísticamente significativas entre
cientos de genes y enfermedades complejas comunes incluyendo: diabetes tipo
I y tipo II, enfermedad inflamatoria del intestino, cáncer de próstata y cáncer de
seno, asma, enfermedad coronaria, fibrilación auricular, tuberculosis, artritis
reumatoide, esquizofrenia, etc.
Plataformas para los estudios GWAS

https://doi.org/10.1038/s41576-019-0127-1
BLOTTING Y ELECTROFORESIS
Técnicas que permiten identificar una molécula específica.
• Primero se separan las muestras por electroforesis en gel (separación
por carga y tamaño) en condiciones desnaturalizantes.
• Luego, la molécula separada se transfiere a una membrana, se fija y se
hibrida con una sonda o anticuerpo marcado.

Northern Blotting
Para detección y cuantificación de niveles de ARNm.

Southern Blotting
Técnica que permite identificar una secuencia específica de ADN.

Western Blotting
Método de detección y cuantificación de niveles de proteínas

Electroforesis: Separación por

carga y tamaño en un gel, bajo
un campo eléctrico.
INMUNOENSAYO ENZIMÁTICO
 Librerías de ADN
Enzimas de Restricción
• Cortan secuencias específicas de Aplicaciones
ADN generando extremos
pegajosos o romos. - Inserción de genes en plásmidos
• Protegen a las bacterias de la vectores durante experimentos
infección de fagos al digerir al ADN de expresión génica y clonación.
del fago después de la infección.
• El ADN celular es protegido por - Digieren ADN para originar
metilasas que bloquean la segmentos de tamaño diferente.
actividad de las enzimas de
restricción.

https://www.britannica.com/science/restriction-enzyme
Tecnología del ADN Recombinante: Ingeniería Genética
• La manipulación del ADN mediante
las enzimas de restricción ha
permitido modificar organismos para
producir proteínas y metabolitos de
interés clínico como la insulina
recombinante o los anticuerpos
monoclonales.

https://www.onlinebiologynotes.com/wp-content/uploads/2018/10/insulin-production-by-recombinant-DNA-technology.jpg
 Sistemas de Edición de Genomas basados en Nucleasas
Edición de Genomas
Existen 3 sistemas que permiten la edición
de genomas en secuencias específicas:
• Nucleasas Dedos de Zinc (ZFNs).
• Nucleasas efectoras de tipo activador de
la transcripción (TALENs).
• El Sistema de Repeticiones
Palindrómicas Cortas Agrupadas y
Regularmente Interespaciadas en
conjunto con la proteína asociada 9
(CRISPR/Cas9).

Las nucleasas de estos sistemas escinden

ambas hebras de ADN con precisión y el
daño se repara a través de los mecanismos
NHEJ (recombinación no homóloga/unión
de extremos no homólogo) y HDR
(reparación homóloga dirigida), dando
lugar de este modo a interrupciones de
genes e inactivación del gen diana.
https://www.synthego.com/blog/genome-editing-techniques
https://www.nature.com/articles/s41392-019-0089-y/tables/1
Terapia Génica
Técnica terapéutica
que modifica las
células de un paciente
mediante técnicas de
edición genética para
insertar la variante
correcta de un gen
originalmente
defectuoso o no
funcional.

Se usa para tratar

enfermedades
genéticas hereditarias
(hemofilia,
drepanocitosis) y
trastornos adquiridos
(leucemia y algunos
tipos de cáncer).
https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/cellular-gene-therapy-products/what-gene-therapy
https://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1137-66272005000100002
 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

Técnica que permite amplificar el ADN a partir del tercer

ciclo, generando miles de millones de copias de un
segmento flanqueado por primers diseñados a priori
tomando como molde una sola hebra.

Se fundamenta en la actividad de la polimerasa

termoestable de T. aquaticus que amplifica a
temperaturas de 72°C y la desnaturalización del
ADN a temperaturas elevadas y renaturalización
al bajar la temperatura.
 RT-qPCR: PCR CUANTITATIVA CON TRANSCRIPTASA REVERSA
• En la RT-PCR, se usa la transcriptasa
reversa para sintetizar cADN
utilizando ARN como molde. Luego,
el cDNA es utilizado para producir
ADN de cadena doble (dsDNA).

• La técnica se puede acoplar con el

uso de un termociclador que
combina la amplificación y la
detección en un mismo paso.

• Se usa un fluoróforo que genera

fluorescencia que se mide en el
termociclador en tiempo real
mientras ocurre la amplificación.

• El ADN se cuantifica al correlacionar

el producto de la PCR de cada uno
de los ciclos con una señal de
intensidad de fluorescencia.
https://link.springer.com/article/10.1208/s12248-020-00532-2/figures/7
Secuenciación
Conjunto de técnicas que permiten
determinar la secuencia nucleotídica de
los ácidos nucleicos.

• La secuenciación Sanger está limitada

a la determinación del orden de un
fragmento de ADN por reacción con
una longitud máxima de 700pb.

• Las plataformas de próxima

generación (NGS) pueden secuenciar
millones de fragmentos de ADN en
paralelo en una reacción,
proporcionando gran cantidad de
datos.

10.1089/wound.2012.0379
https://www.researchgate.net/publication/260197220_An_Introduction_to_Functional_Genomics_and_Systems_Biology
 Omas
Sufijo que se usa para referirse a
todas las moléculas presentes
en la célula en un momento
determinado.

Genoma: El conjunto de todo el

material genético de una célula.

Transcriptoma: Conjunto de
todas las moléculas de ARN
expresadas en una condición
específica.

Proteoma: Conjunto de todas

las proteínas presentes en la
célula.

Metaboloma: Conjunto de todos

los compuestos químicos
presentes en la célula.
 Ómicas
Disciplinas que permiten
estudiar un gran número de
moléculas, implicadas en el
funcionamiento de un
organismo.

Se basan en la disponibilidad
de gran cantidad de
información gracias a las
tecnologías de alto
rendimiento.

Utilizan técnicas
bioinformáticas para analizar
la información biológica
obtenida.

https://www.researchgate.net/publication/263055658_Integrating_omic_approaches_for_abiotic_stress_toleran
ce_in_soybean
PROYECTO • Es el esfuerzo internacional para determinar la secuencia completa del genoma humano entero.
Administrado por el Instituto de Investigación del Genoma Humano:

GENOMA
• https://www.genome.gov/human-genome-project

• Los datos se pueden acceder desde la página del NCBI:

HUMANO • https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/?term=homo+sapiens
PROYECTO • Establecido en los EEUU en 1990 con iniciativas públicas y privadas.

GENOMA
• El primer borrador fue presentado el 2003, incluyendo la secuencia del 97% de la eucromatina
del genoma humano haploide.

HUMANO • El primer genoma humano completo se publicó el 31 de marzo de 2022, incluyendo secuencias
codificantes y no codificantes.
PROYECTO Organización Estructural del Genoma Humano

GENOMA Constituido por una secuencia de 3.2 x 109 nucleótidos, organizado y compactado en 23 pares de
cromosomas (22 pares de autosomas y 2 cromosomas sexuales).

HUMANO Contiene +20,000 genes o regiones codificantes de proteínas constituidos por exones e intrones
en una proporción de secuencias de 1:24).

Presenta alta cantidad de segmentos o regiones con secuencias repetitivas que incluyen
transposones, regiones intergénicas, seudogenes, repeticiones cortas, repeticiones largas y
repeticiones en tándem.

Sólo el 1% del total del genoma humano, corresponde a regiones exónicas con un total de 180,000
exones (aproximadamente 10 exones por cada gen).

El 24% lo abarcan las regiones intrónicas.

https://www.elsevier.es/es-revista-gaceta-mexicana-oncologia-305-articulo-
organizacion-estructural-funcional-del-genoma-X1665920113687258
Resumen Genoma Humano según diferentes bases de datos

https://bmcbiol.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12915-018-0564-x
PROYECTO
GENOMA
HUMANO
Distribución de Proteínas en el
Exoma
• Factores de transcripción (2,067
correspondiente al 12%)
• Transferasas (8.8%),
• Proteínas de unión al DNA (8.5%)
• Proteínas transportadoras (6.4%)
• Proteínas receptoras (6.3%)
• Moléculas de señalización (5.6%)
• Enzimas moduladoras (5%)
• Proteínas no clasificadas (4061 que
corresponden al 23.6%).

https://sitn.hms.harvard.edu/flash/2017/strength-numbers-genetic-sequencing-large-populations-shaping-future-medicine/
Integración
de los datos
ómicos

La gran cantidad de
datos generados por
los estudios -ómicos,
es analizada mediante
bioinformática y luego
debe ser integrada
para su correcta
interpretación clínica.

https://doi.org/10.1016/j.jbi.2020.103466