NATURALEZA Y

ESTRUCTURA FINA
DEL GEN

BLGO. ALBERTO LOPEZ

UN GEN ES…….
Un segmento de ADN que contribuye a un
fenotipo/función. En ausencia de una función
demostrable, un gen puede ser caracterizado
por secuencia, transcripción u homología.

Human Gene Nomenclature Committee

2
• Inicialmente se ha considerado como la unidad
básica de la genética al gen  unidad funcional,
unidad mutacional, unidad de recombinación.
• Los genes controlan e influyen en el fenotipo.
• Los genes especifican la estructura de las
proteínas.
• El producto final de la expresión génica es por lo
general una cadena polipeptidica formada por
una serie de aminoácidos cuya secuencia lo
establece el código genético.
El código Genético: Un lenguaje de 4 letras y
aproximadamente 20 palabras y miles de
párrafos

ADN Proteínas
ADN como portador de la información genética
¿Que tipo de información está codificada en el ADN?
¿De que manera de traduce esa información?
Replicación: Copia del ADN
ADN cromosómico o de ARN progenitor
para formar moléculas de ADN o
ARN hijas, respectivamente, con
Transcripción secuencias idéntica a la parental
Transcripción
Reversa Transcripción: Reproducción precisa en
forma de ARN de parte del mensaje
genético contenido en el ADN.
ARN
Transcripción reversa: Formación
de ADN a partir de ARN
(retrovirus)
Traducción
Traducción: síntesis de proteínas,
con una secuencia específica de
Proteína aminoácidos, sobre la base del
emnsaje genético codificado por
el ARN
GENES EUCARIOTES

TERMINADOR

CODIFICADOR
• REGULADOR
• Secuencia de ADN que determina cuándo
el gen debe comenzar a transcribirse
• También controla cuántas veces debe
transcribirse en un tiempo determinado.
• Dos tipos: Amplificadores e Inhibidores
• Cada gen tiene varios de cada uno
• Se encuentran a miles de nucleótidos de
la zona codificante
• Secuencia y número varía en distintos genes
PROMOTOR
• Región del ADN que determina punto donde
ARN polimerasa comienza transcripción.
CODIFICADOR
 ESTRUCTURA DE UN GEN

Promotores Realzadores

Exones Intrones
Sitio de inicio de
Sitio de terminación
la Transcripción
< 100 Kb de la Transcripción

La función del gen depende de los FACTORES de TRANSCRIPCIÓN (FT) que activan a las
ARN pol. Los FT son: los Factores de Transcripción General (se unen a secuencias promotoras
genéricas) y los Activadores de Transcripción (se unen a secuencias promotoras específicas).
Los FT pueden activarse o desactivarse en respuesta a estímulos del entorno del organismo.
• La genética y la bioquímica están estrechamente
relacionadas. La mayoría de reacciones que ocurren
en el organismo son catalizadas y reguladas por
enzimas y proteínas reguladoras, cada una de las
cuales responde a una codificación genética, y por
consiguiente pueden mutar  en consecuencia las
mutaciones pueden alterar las reacciones
metabólicas.

• …..Surge la Genética Bioquímica…..

….rama de la genética que estudia el control
genético de las rutas metabólicas y reacciones
químicas.
• Archibauld Garrod, es considerado como el
padre de la Genética Bioquímica, ya que fue el
primero en sugerir una conexión específica entre
genes y enzimas.
• Alcaptonuria  se hereda de acuerdo a las
leyes de Mendel. Deficiencia en el metabolismo
del nitrógeno, produciendo orina color negro,
coloración negra de cartílagos y tejido conjuntivo,
y artritis.

Ocronosis
• El responsable es el ácido
homogentísico, que se excretaba en
cantidades elevadas en la orina.
• Se debe a un gen recesivo que daba
lugar a un fallo en la reacción
metabólica del paso de ácido
homogentísico a ácido
maleilacetoacético.
• Garrod comprendió que la posición de un
bloqueo metabólico puede identificarse por
la acumulación, en el organismo, de la
sustancia inmediatamente anterior al paso
bloqueado.
• Les denominó “Errores congénitos del
metabolismo” (errores innatos del
metabolismo).
• Desde entonces se han identificado
numerosas enfermedades producidas por
deficiencias enzimáticas: enzimopatías.
• Galactosemia : deficiencia de la galactosa uridil
transferasa causa insuficiencia hepática, desnutrición
y cataratas.
• Fenilcetonuria: deficiencia de la fenilalanina
hidroxilasa, causa retraso mental.
• Enfermedad de Tay Sachs : deficiencia de la
Hexosaminasa A causa hipotonia muscular,
hiperexcitabilidad ante el ruido, convulsiones y
ceguera y muerte.
ERRORES INNATOS DEL METABOLISMO (EIM)
HIPOTESIS UN GEN UNA ENZIMA

• George Beadle y Edward Tatum estudiaron mutantes en

Neurospora crassa.
• Los mutantes nutricionales son incapaces de crecer en
medios mínimos, mientras que las cepas normales de
Neurospora pueden crecer en medios mínimos que
contienen sustancias simples como azúcar, algunas sales y
ácidos orgánicos, una fuente de nitrógeno (nitrato y tartrato
amónicos) y la vitamina biotina. Las estirpes mutantes
nutricionales incapaces de vivir en medio mínimo también se
las denomina cepas auxótrofas.
• Las cepas mutantes nutricionales necesitan, para crecer,
que se añadan al medio mínimo determinadas sales,
vitaminas, aminoácidos u otras sustancias. Los medios
mínimos a los que se les ha añadido alguna sustancia se les
denomina medios suplementados.
• Irradiaron conidios de Neurospora para producir
mutaciones.
• Cada espora es transferida a un medio enriquecido
que contiene todo lo que la Neurospora necesita
normalmente para su crecimiento.
• Si no se observa crecimiento en el medio mínimo,
puede haber ocurrido una mutación que torna a este
mutante incapaz de producir un aminoácido particular.
• Hicieron subcultivos de los mohos que crecen en el
medio enriquecido, pero no en el medio mínimo. Se
prueba su capacidad para crecer en medios mínimos
suplementados solamente con uno de los
aminoácidos.
• Detectaron numerosos auxótrofos: no pueden crecer
en medio mínimo, sin que sea enriquecido con
nutrientes específicos.
•
Por ejemplo, un
moho que ha perdido
la capacidad para
sintetizar el
aminoácido prolina es
incapaz de sobrevivir
en un medio que
carece de este
aminoácido. Luego
se hacen pruebas
para descubrir qué
paso enzimático de la
síntesis de la prolina
fue bloqueado.
• Estudiaron los mutantes para arginina.
• La arginina permitía el crecimiento de todos los mutantes,
pero las mutaciones se localizaban en tres lugares
diferentes.
• Loci: arg-1, arg-2 y arg-3.
• Los auxótrofos de cada uno de los 3 loci diferían en su
respuesta a la ornitina y citrulina, que están relacionados con
el metabolismo de la arginina.
• Los arg-1 eran capaces de crecer si se les añade ornitina,
citrulina o arginina al medio mínimo.
• Los arg-2 solo crecen si se les añade arginina o citrulina.
• Los arg-3 crecen solo cuando se les añade arginina.
 Enzima X Enzima Y Enzima Z
• Precursor Ornitina Citrulina Arginina
• Arg-1 tienen X defectuosa.
• Arg-2 tienen Y defectuosa.
• Arg-3 tienen Z defectuosa.
• La enzima defectuosa origina un bloqueo de alguna ruta
biosintética.
• Modelo Hipótesis un gen- una enzima: los genes son
responsables de la actividad de las enzimas, cada gen
controla una enzima concreta.
 Beadle & Tatum - 1941

+ Ornithine
Medium

+ Citruline

+ Arginine
Minimal
Gene A Gene B Gene C

Tipo Precursor Enz X Ornithine Enz Y Citruline Enz Z Arginine

normal

BLOQUEO
Mutantes
Precursor Ornithine Enz Y Citruline Enz Z Arginine
clase I

Mutantes
clase II Precursor Enz X Ornithine Citruline Enz Z Arginine

Mutantes
clase III Precursor Enz X Ornithine Enz Y Citruline Arginine

23
Pigmentos oculares en Drosophila
• Beadle y Ephrussi trabajaron en transplantes de discos
imaginales de una larva de Drosophila a otra.
• Cada uno de los grupos de células de la larva que están
determinados para formar una determinada estructura del
individuo adulto se denomina "disco imaginal". Por ejemplo,
existe un "disco imaginal" para los ojos, otro para el primer
par de patas, etc.
• La técnica que desarrollaron consistió en tomar el
"disco imaginal" de ojo de una larva donadora y
trasplantarlo a una larva receptora, en una región de
la larva receptora que va a dar lugar al abdomen.
Como consecuencia, cuando la larva receptora del
injerto termina su desarrollo y se convierte en imago,
el adulto resultante tiene un ojo extra o
supernumerario en el abdomen.
• Determinar si un disco de ojo mutante transplantado
a una larva silvestre se alteraría debido al nuevo
ambiente.
• Utilizaron 26 mutaciones distintas para el color de los
ojos, transplantando tejido embrionario del ojo a
larvas silvestres.
• Los tejidos transplantados se desarrollaron como un
ojo adicional.
• En la mayoría de los transplantes el nuevo ojo se
desarrollaba con el color de la cepa de la cual procedía 
desarrollo autónomo.
• Hubieron 2 excepciones: vermilion y cinabar.
• Se expresaría el fenotipo silvestre debido a la penetración
de una sustancia difusible presente en el abdomen de las
larvas silvestres. (receptoras).
• ¿esta sustancia era idéntica en vermilion y cinabar?
• Realizaron transplantes entre vermilion y cinabar.
• Existen 2 reacciones implicadas en la sintesis del
pigmento marrón.
• Cada reacción produce un producto difusible en los tejidos
de la larva silvestre.
En el transplante de vermilion a cinabar, el tejido injertado recibe la
sustancia posterior al punto de bloqueo y puede continuar la ruta hasta
formar el pigmento marrón o xantomatina, apareciendo un ojo extra de color
normal. Sin embargo, en el trasplante inverso, de cinabar a vermilion, la
larva receptora (vermilion) contiene gran cantidad de triptófano en sus
tejidos y no puede suministrar el compuesto posterior al punto de bloqueo
del tejido de disco imaginal de ojo injertado cinnabar, por tanto, el disco
imaginal de ojo contiene gran cantidad de formilquinurenina y no puede
continuar la ruta apareciendo un ojo extra cinnabar.
La formilquinurenina difunde e
ingresa al tejido vermilion, donde la
enzima cn+ la convierte en
hidroxiquinurerina, la que luego se
convierte en pigmento marron  se
recupera ojo silvestre.

La receptora vermilion no tiene

formilquinurenina, por lo que no se
produce hidroxiquinurerina;
además no existe la enzima cn+. 
color rojo brillante.
UN GEN: UNA PROTEÍNA/ UN GEN : UN
POLIPÉPTIDO : LAS HEMOGLOBINAS.

• La demostración de que la relación entre

los genes y las enzimas es de tipo
informacional, es decir, el gen lleva la
información o codifica para una enzima, se
realizo estudiando las hemoglobinas
humanas.
UN GEN: UNA PROTEÍNA/ UN GEN : UN
POLIPÉPTIDO : LAS HEMOGLOBINAS.
• Las hemoglobinas humanas son tetrámeros, están
formados por cuatro cadenas polipeptídicas. Los glóbulos
rojos contienen varios tipos de hemoglobinas:
• Hemoglobina adulta mayoritaria (HbA): α2β2 formada
por dos cadenas de tipo α (141 aminoácidos) y dos
cadenas de tipo β (146 aminoácidos).
• Hemoglobina adulta minoritaria (HbA2): α2δ2 formada
por dos cadenas de tipo α y dos cadenas de tipo δ (146
aminoácidos). La secuencia de aminoácidos de δ difiere
solamente en 10 residuos con la cadena β. Constituye el
2,5% de la hemoglobina adulta y se encuentra junto con
la hemoglobina HbA.
• Hemoglobina fetal (HbF): α2γ2 formada por dos
cadenas de tipo α y dos cadenas de tipo γ (146
aminoácidos). La cadena γ difiere en 39 aminoácidos con
la cadena β y en 41 aminoácidos con la cadena δ.
Constituye entre el 70 y el 80% de la hemoglobina total
del recién nacido y desaparece entre los 6 y 12 meses de
vida extrauterina.
• Hemoglobinas embriónicas (HbE): pueden tener cuatro
cadenas ε (ε4), dos cadenas α y dos ε (α2ε2) o bien dos
cadenas γ y dos ε (γ2ε2). Se encuentran en el desarrollo
embrionario, aunque ocasionalmente pueden aparecer en
el período fetal.
• Momentos del desarrollo en los que se sintetizan los diferentes tipos de
cadenas polipeptídicas de las hemoglobinas.
• La similitud de las secuencias de aminoácidos de las cadenas
polipeptídicas α, β, γ , y δ sugiere un origen común de los genes que las
codifican a partir de una secuencia ancestral mediante el mecanismo de
duplicación.
UN GEN: UNA PROTEÍNA/ UN GEN : UN
POLIPÉPTIDO

• Las proteínas están conformadas por sub

unidades proteícas  cadenas
polipeptídicas.
• Anemia Falciforme
• Normal: HbAHbA
• Afectado: HbSHbS
• Diferencia bioquímica entre hemoglobina
normal y falciforme.
Cadena alfa : 141 aminoácidos.
Cadena beta : 146 aminoácidos.
• Ingram (1956) demostró que una alteración en un gen
con herencia autosómica recesiva en la especie humana,
producía una alteración en la secuencia de aminoácidos
de una proteína (hemoglobina), de forma que la relación
entre los genes y las enzimas era de tipo informacional,
un gen llevaba información o codificaba para una cadena
polipeptídica.
EL EFECTO DE POSICION
• Bar es un fenotipo mutante en el ojo de Drosophila; se
hereda como una mutación dominante ligada al X
(Semidominante).
• Los ojos en barra se producen por una reducción en el
número de facetas.
• Hembras:
• XB+XB+ : 779
• XBXB+ : 358
• XBXB : 68
• Aparecen también hembras con un
número aún menor de facetas
Son las doble bar (BD) XB+XBD : 45
XBDXBD: 24
• El fenotipo Bar no
es el resultado
solo de un
cambio químico
en el gen, sino de
una duplicación.
• En el efecto de
posición, la
misma cantidad
de información
génica da lugar a
fenotipos
alterados
dependiendo de
la posición del
gen.
Estructura fina del gen
• El gen es la unidad funcional, pero puede
subdividirse en porciones mas pequeñas
dispuestas linealmente, capaces de mutar
y recombinar.
• La unidad de mutación y recombinación
mas pequeña equivale a un solo par de
nucleótidos.
Recombinación intragénica
y Cartografía genética fina.
• Seymour Benzer profundizó los estudios
de la estructura fina del gen.
Utilizó técnicas clásicas de recombinación
con virus bacterianos: fago T4, que es
virulento para E. coli, y utilizó el locus rII
para estimar los detalles de la estructura
del gen.
Las características de los fagos se
manifiestan en la morfología de las
“calvas” (halos de lisis) que se forman
después de la lisis de las células
bacterianas.
• Los loci r son los responsables de la rapidez de
lisis bacteriana, de tal manera que los alelos
silvestres (rII+) producen una lisis lenta de
E.coli, lo que origina calvas pequeñas.
• Los mutantes r-, producen calvas mas grandes
y de bordes mas nítidos, por lo que producen
una lisis rápida.
• Utilizó mutantes rII; en condiciones de
multiplicidad de infección sobre la cepa B de
E. coli y recogía los lisados.
• Los fagos T4 normales (rII+): infectan y lisan
a las cepas B y K de E. coli. En la cepa B
producen calvas pequeñas y vellosas.
• Los fagos T4 mutantes de lisis rápida (rII-):
infectan y lisan a la cepa B de E. coli
produciendo calvas grandes y nítidas. Infectan
a la cepa K de E. coli pero no pueden lisarla.
• Entonces, los lisados los sembraba sobre la
cepa E. coli K12.
• Únicamente los escasos fagos
recombinantes intragénicos podrían infectar
y lisar a dicha cepa, produciendo calvas de
tipo silvestre.
• Determinó el porcentaje de recombinación y
lo usó como una estimación de las
distancias entre las mutaciones ( en este
caso sería una distancia intragénica).
• Se infecta E. coli K simultaneamente con 2 mutantes rII distintos (infeccion
mixta). Normalmente un mutante rII no puede lisar E. coli K, ni genera
fagos descendientes. Sin embargo si los dos mutantes complementan, se
produce la multiplicacion de los fagos y la lisis. Si los dos mutantes no
complementan no hay multiplicacion de fagos ni lisis.
• Benzer demostró que los genes no son
indivisibles y pueden subdividirse por
recombinación.
• Un gen está compuesto de sub elementos
que pueden recombinar. El sub elemento
mas pequeño que no es divisible por
recombinación es un par de nucleótidos.
• La recombinación intragénica permite
elaborar mapas genéticos detallados.
• El gen era, según Benzer, una secuencia lineal
de material genético en la cual las mutaciones
pueden producirse en lugares diferentes 
mutones; y pueden recombinar entre sí de forma
que se restituya el genotipo silvestre; a las
unidades de recombinación les llamo recones.
• El mutón, en extremo, podría ser un par
nucleotídico y el recón, la distancia entre dos
pares nucleotídicos consecutivos.
• Identificó sitios mas mutables que otros, a los
que denominó puntos calientes.
 En la recombinación intragénica, es posible la
complementación entre dos alelos mutantes de un gen:
Lo que Benzer observo es recombinación entre dos
versiones mutantes de un gen, para dar lugar a un gen
funcional.

Fago con una mutación puntual en un gen

*
Fago con una mutación puntual distinta en el
* mismo gen
Evento (extremadamente improbable) de
recombinación intragénica

Bacteriófago con una versión silvestre del gen

Los experimentos de Benzer permitieron interpretar los resultados del análisis genético
a la luz de los conocimientos sobre la naturaleza molecular del gen
RECOMBINACIÓN EN VIRUS

• La recombinación en virus se descubrió por

Delbrück, Bailey y Hershey en 1946.
• El primer estudio completo de la recombinación
en virus se llevó a cabo por Hershey y Rotman
(1949) en el virus T2 analizando virus normales y
dobles mutantes. Pare ello utilizaron el sistema de
infección mixta en condiciones del alta
multiplicidad, consistente en asegurarse de que
cada bacteria del medio del cultivo es infectada
simultáneamente por los dos tipos de virus, el
normal y el doble mutante.
• Las mutaciones que analizaron en el fago T2 fueron las
siguientes:
• Mutantes de lisis rápida (r-) que producen calvas o halos
lisis grandes y de bordes nítidos, mientras que los virus T2
normales (r+) dan lugar a calvas pequeñas y de bordes
difusos.
• Mutantes (h-) con un distinto rango de hospedador que son
capaces de lisar tanto a la cepa B como a la cepa B/2 de
E. coli. Los fagos T2 normales solamente lisan o matan a
la cepa B de E. coli.
• Hershey y Rotman infectaron simultáneamente con fagos
normales (r+h+) y con fagos dobles mutantes (r-h-) un
cultivo bacteriano, con los descendientes de esta infección
volvieron a infectar un cultivo en “césped” formado por una
mezcla de las cepas B y B/2.
• Los tipos de calvas o halos de lisis que se
observaron fueron los siguientes:
• - r-h-: Calvas grandes con bordes nítidos y
sin turbidez.
• - r+h+: Calvas pequeñas con bordes
difusos y con turbidez.
• - r-h+: Calvas grandes con bordes nítidos y
turbidez.
• - r+h-: Calvas pequeñas con bordes difusos
y sin turbidez.
La ausencia de
turbidez se debe a
que el virus ha
matado a los dos
tipos de cepas
bacterianas la B y la
B/2, mientras que la
presencia de
turbidez se debe a
que el virus a
matado solamente a
la cepa B pero no a
la cepa B/2.
• En el siguiente esquema se indican los diferentes tipos de virus
descendientes y los tipos de calvas o halos de lisis detectados.
• Cuando se lleva a cabo la infección mixta anterior, aparecen
virus descendientes de tipo parental (dobles mutantes y
normales) y virus descendientes de tipo recombinante (r+h- y r-
h+).
• Cada vez que se da un entrecruzamiento entre los loci
analizados aparece un virus recombinante r+h- y otro virus r-
h+. De forma que el número de virus descendientes r+h- debe
ser aproximadamente igual que el de virus r-h+. Lo mismo
sucede con los virus de tipo parental, se espera que existan
aproximadamente igual cantidad de descendientes r+h+ que de
virus r-h-.
• Cuanto más lejos estén dos loci en el genoma viral o ADN del
virus más probable es que se de un entrecruzamiento entre
ambos y la frecuencia de recombinación (Fr) será mayor.
Cuanto más cerca estén dos genes menor será la probabilidad
de entrecruzamiento y menor será la frecuencia de
recombinación.
• La forma de estimar la frecuencia de recombinación es, por
consiguiente, semejante a la manera empleada en
eucariontes. La frecuencia de recombinación es igual a la
frecuencia con la que aparecen virus recombinantes en los
descendientes multiplicada por cien.

• Fr = (Recombinantes/Total) x 100
 hr+ X h+r

[hr+] 42

[h+r] 34

[h+r+] 12

fr = 24/100 = 0.24 [hr] 12

Hacia 1950, Benzer utilizo el tremendo poder de resolución del análisis genético
en fagos para detectar recombinación intragénica en T4 (locus rII)
 COMPLEMENTACION
• Capacidad de dos mutaciones recesivas
para restaurar el fenotipo silvestre.
• Benzer constató que dos cepas mutantes
del fago rII al infectar a bacterias K12, la
combinación de ambos mutantes podía
infectar y lisar a la K12.
• Benzer propuso que durante la infección
simultánea, cada mutante proporcionaba a
la otra algo de lo que carecía.
Cada cepa mutante
producía el producto
génico de tipo silvestre
que estaba mutado en la
otra cepa, y así en
conjunto restauraban la
función completa de tipo
silvestre.
Aquellas mutaciones
que complementan
corresponden a grupos
de complementación
distintos, mientras que
las que no
complementan se sitúan
en el mismo grupo de
complementación.
• Entonces:

Un locus Dos locus

Cruzamiento parental a 1 a 1 X a2 a 2 aaBB X AAbb

Descendencia a1 a2 AaBb

Fenotipo mutante silvestre