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Microbiologia.Modificado

Microbioloxa I (Universidade de Santiago de Compostela)

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Tema 1: Introduccin
Definicin:
Parte de la biologa que estudia seres que no se pueden ver a simple vista
(>0,1mm).
Existen dos tipos de microrganismos:
Con estructura celular: procariotas y eucariotas.
Sin estructura celular: virus, priones y viroides.
Todos los no celulares son parsitos obligados. Ningn microrganismo tiene tejidos
aun pudiendo ser unicelulares o pluricelulares.
Para poder estudiar los microrganismos fue necesaria la invencin del microscopio. El
primer microscopio lo diseo Leeuwenhoek en el siglo XVII, observa muchas cosas la
mas importante los animlculos (protozoos y bacterias).
Posteriormente Hooke desarrollo el microscopio compuesto, con dos lentes. En el siglo
XIX se solucionaran los problemas que causaban las dos lentes: aberraciones
cromticas y esfricas; esto lo logro un fsico, Abbe. La primera fabricacin en serie de
microscopios la llevo a cabo Zeiss.
Durante esos dos siglos se estudiaron muchas cosas distintas. La primera fue la
generacin espontanea, las primeras pruebas contra esa teora fueron los
experimentos de Spallazam. Lleno frascos con agua, la hirvi y los cerro de
hermticamente. Probo as que, si el cristal no se rompa ni se abran los frascos, el
agua no presentaba ningn microrganismo. Los defensores de la generacin
espontanea decan que no creca nada porque eliminaba el oxigeno, necesario para el
crecimiento de microrganismos. Acabaron con ello definitivamente Pasteur y Tyndel.
Pasteur diseo un matraz con cuello de cisne e hirvi el contenido, en el matraz no
creca nada a pesar de estar abierto al exterior y por tanto tener oxigeno. Tyndel
descubri que las esporas de resistencia podan sobrevivir al hervido. As que hirvi el
liquido varias veces para limpiarlo mas.
Pasteur estudio las fermentaciones descubriendo no solo la implicacin de los
microrganismos en ellas sino tambin la vida anaerobia. Uno de los discpulos de
Pasteur, Buchner describi el metabolismo anaerobio.
Otro avance importante de la microbiologa fue el descubrimiento de la relacin entre
los microorganismos y las enfermedades infecciosas. Nombres importantes en este
campo fueron Fracastarins, escribi el primer tratado de epidemiologa; Hunter,
demostr la infecciosidad de algunas enfermedades; y Lister, discpulo de Pasteur que
propuso la esterilizacin del material quirrgico.
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Pero el nombre por excelencia fue Koch que estudiaba el ntrax causando por
Bacillus
anthracx.
Vio que si se infectaba sangre de una animal enfermo en uno sano, el sano
enfermaba. Consigui aislar los microrganismos y cultivarlos en un laboratorio, luego
los inyectaba en un animal sano probando as que este era el microrganismos que
causaba la enfermedad.

Postulados de Koch:

El microrganismo debe estar solo en individuos enfermos nunca en sanos.


El microrganismo debe aislarse a partir de un individuo enfermo.
Tras inyectar el microorganismo en un individuo sano este debe enfermar.
El microrganismo debe poder aislarse desde el individuo infectado
artificialmente.

Al principio se hacan cultivos en medio liquido pero no era til as que se usaron
rodajas de patatas, pan y otros medios naturales. Aqu si se podan ver colonias pero
eran opacas y demasiado hmedas. Se busc un gel til, para encontrarlo se probaron
muchos solidifcates hasta llagar al agar Agar. El grupo de Koch desarrollo tambin las
placas de Petri y las asas de siembra.
El descubrimiento de los virus se realiza durante el anlisis de desarrollo de bacterias.
Para limpiar medios se crearon filtros con un tamao de poro tan pequeo que las
bacterias no lo atravesaban. Se descubri que a pesar de filtrar el suero haba
enfermedades que se desarrollaban igualmente. Estos agentes patgenos se llamaron
VIRUS filtradores. Pero el primero en describir un virus fue Lwaff en 1957.
En el siglo XVIII Jenner prob que algunas enfermedades se podan evitar con
prevencin. Estudio la viruela, inyecto sangre de una vaca infectada en un humano,
que qued protegido de la viruela. De ah la palabra vacuna de vaca.
Pasteur fue mas haya y descubri que los cultivos viejos de bacterias perdan la
capacidad virulenta pero inmunizaban. Trabaj con el clera, pero lo prob tambin
con la rabia y el ntrax.
A finales del siglo XIX se descubren las propiedades de los agentes biogeoqumicos por
Winogradsky y Beijerink. Descubrieron las bacterias auttrofas, pero tambin las que
tienen preferencias por ciertos sustratos: S, P, N
Clasificacin:
Antes de Darwin, los microrganismos se incluan en los reinos animal o vegetal segn
sus caractersticas.

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En 1866 Haeckel incluyo a los microrganismos dentro del reino Protistas. Sin embargo
este reino inclua cosas demasiado diferentes as que se especifico un poco ms y se
crearon los Protistas superiores (eucariotas) y Protistas inferiores (procariotas). En
1974 Murray quiso que se considerasen reinos diferentes a estas dos divisiones, pero
no llego a ocurrir. Ms adelante y ya con estudios moleculares Woese creo los tres
Dominios: Bacterya, Eucarya y Archea.
Diferencias entre procariotas y eucariotas:
Procariotas
ADN circular
No pared nuclear
No nuclolo
No orgnulos verdaderos
Ribosomas 70S (50S+30S)

Eucariotas
ADN lineal
Pared nuclear
Nuclolo
Orgnulos verdaderos
Ribosomas 80S (60S+ 40S)

Caracteres positivos de procariotas:


Presentes en procariotas nunca en eucariotas, aunque no en todos los procariotas.
Caracteres estructurales:
Pared celular
de mureina, formada por dos pptidoglicanos
uno de ellos N-acetil-murmico, nunca presente en eucariotas. Sin embargo esta
caracterstica no est presente en Archea.
Flagelo bacteriano
de flagelina, con
estructura distinta a la de los flagelos de eucariotas.
Vesculas de gas
con membrana
sencilla presentes en bacterias acuticas y que les permiten flotar.
Vesculas de
Chlorobium
o clorosomas, vesculas de membrana sencilla que contienen pigmentos
fotosintticos.
Carboxisomas
son orgnulos llenos de carboxidismutasa que asimilan
CO.
Estructuras membranosas especializadas
unidas a la membrana plasmtica;
existen membranas fotosintticas, nitrificantes, respiratorias
Caracteres fisiolgicos y Bioqumicos: Capacidad de
fijar nitrgeno
atmosfrico.
Capacidad de crecimiento a temperaturas muy elevado (
termfila
).
Quimiolitotrofia
uso sustancias inorgnicas nicamente. Presencia de
poli--hidroxibutirato
.
Anaerobiosis obligada
empleando distintos sustratos.
Fotosntesis
aerobia y anaerobia.
Caracteres negativos de procariotas:
Siempre presentes en eucariotas pero solo en unos pocos procariotas.
Microtbulos
, solo en Spiroquetas.
Esteroles en la membrana
, solo en Microplasmas y
algunas Cianobacterias.

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Tema 2: Tcnicas de estudio:


Microscopio:
Poder de resolucin: distancia mnima a la que podemos diferenciar dos puntos.

P r = AN

rea de campo: superficie de preparacin que se ve con el objetivo correspondiente.


Profundidad de campo: capacidad de ver ms capas de una muestra.
Existen dos tipos generales de microscopio y dentro de estos, varias clase:
Microscopios pticos: campo claro, campo oscuro, fluorescencia y rayos UV.
Microscopios electrnicos: de barrido y de transmisin.
Tambin existen distintos tipos de preparaciones segn el microscopio que vayamos a
usar y el tipo de muestra que queramos observar.
Para microscopio ptico bsicamente hay dos tipos: teidas y frascas. Poder ver los
organismos vivos sin teir permite ver su comportamiento, adems de ciertas
estructuras que se modifican con la tincin o que directamente desaparecen. La
tincin obliga a la fijacin previa. En microbiologa la fijacin se hace, normalmente,
con calor. Lo malo es que la fijacin altera la muestra.
La tincin se hace con colorantes que se fijan a elementos determinados. Tipos de
colorantes: catinicos, con carga positiva se unen a compuestos negativos; anionicos,
con carga negativa se unen a componentes positivos; por ltimo, liposolubles, se unen
a componentes lipdicos.
*Mordiente:
sustancias qumicas no colorantes que se unen a ciertos componentes
celulares permitiendo su nico con colorantes.

Tipos de tincin:
Tincin simple:
solo usa un colorante. Se usa para ver la morfologa de bacterias.
Normalmente se usan colorantes catinicos. Dentro de las tinciones simples hay
algunas especiales: Negativas: se usa un colorante anionico que no entra en las clulas
sino que tie el medio. No necesita fijacin. Flagelo: es la nica forma de ver flagelos
con microscopio ptico. Utiliza como mordiente cido tnico y un colorante catinico.

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Tincin diferencial:
es la ms usada en microbiologa. Utiliza dos colorantes distintos y
entre ambos un agente decolorante, normalmente alcohol. GRAM: divide las bacterias
en GRAM + y que se diferencian por la estructura de su pared celular. Esta
diferenciacin tiene valor taxonmico. El colorante primario es cristal violeta en una
disolucin de lugol para integrar el colorante. Al aplicar el decolorante las GRAM
pierden el color, y al aadir el colorante secundario, sefranina, se tien de rojo.
Ziehl-Neelsen: es especfico para micobacterias, porque tienen importancia clnica as
que es til detectarlas. Este tipo de bacteria tiene una pared con muchos lpidos por lo
que es difcil de teir. Usa fucsina como colorante primario con calor para asegurarse
de que penetre en las micobacterias. Luego se lava con un decolorante cido alcohol.
Por ultimo se usa azul de metileno para teir el reto de bacterias.
Estudio GRAM

Estudio de Ziehl-Neelsen

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Tema 3: Procariotas
Son la parte ms pequea de la vida con todos los componentes necesarios para vivir.
Se miden en m con un micrmetro ocular. Existen varios tipos de morfologa:
Bacilos
: 0.5-1 m x 2-5 m.
Cocoides
: 0.7-1.3 m.
Espiral
:
- Vibrio: 0.5-1 m x 2-5
- Espirilo: 40 m
- Espiroquetas:

Las bacterias mas pequeas son los micoplasmos estn en el lmite de deteccin del
microscopio ptico 0.1-0.3 m. Los tamaos grandes son difciles de mantener porque
la relacin superficie/volumen disminuye mucho.
Existen morfologas raras por ejemplo las bacterias pedunculadas, cuyo pednculo
forma parte del citoplasma. Tambin bacterias filamentosas y miceliales.
Es posible que tras la divisin, las clulas hijas se queden unidas aunque sean
independientes. Las bacterias en espiral no se unen. Pero los bacilos y los cocos si que
lo hacen, formando estructuras distintas:
Bacilos:
- Diplobacilos: dos bacilos unidos.
- Estreptobacilos: los bacilos forman una cadena.
Cocos:
-

Diplococos: dos cocos unidos.

Estreptococos: los cocos forman una cadena.

Ttradas: cuatro cocos unidos.


Lminas: se forma una lmina de cocos, como mximo 64.
Cbicas: se dividen en tres direcciones formando cubos.
Estafilococos: se dividen en todas direcciones, formando
estructuras irregulares.

En las bacterias procariotas existen dos tipos de estructuras internas:


Estructuras esenciales: Pared celular, Membrana plasmtica, Ribosomas y Genforo
(cromosoma bacteriano).
Estructuras no esenciales: Cpsula, Flagelo, Pili, Vacuolas de gas, Inclusiones de
reserva y Membranas especializadas.

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Ribosomas procariotas:
son ribosomas 70S son un 60% ARN y un 40% protenas. Las
subunidades estn separadas en el citoplasma y su unin esta regulada por iones de
magnesio. Subunidad pequea: ARN 16S y 21 protenas. Subunidad mayor: ARN 55 y
23S y 34 protenas. Solo una de estas protenas esta presente en ambas subunidades,
tiene relacin con su asociacin.
Los orgnulos de procariotas no son verdaderos orgnulos porque tienen una
membrana simple, por ejemplo:
Vesculas de Chlorobium
: o clorosomas. En bacterias fotosintticas verdes. Realizan la
funcin de los cloroplastos.
Vacuolas de gas
: son orgnulos de flotacin. Presentan una membrana de protenas,
rgida, para poder soportar la presin del gas. Pueden ser, muy grandes hasta visibles
al microscopio ptico. Forma cilndrica con un extremo cnico.
Carboxisomas:
cuerpos polidricos de bacterias auttrofas. Fijan CO para usarlo como
sustrato. Contienen, por tanto, carboxilasa para fijar ese carbono.
Adems de estos orgnulos, en el citoplasma tambin nos podemos encontrar
inclusiones de distintas sustancias:
Inclusiones de materiales de reserva:
Nos encontramos dos tipos de sustancias:
Polmeros de glucosa (almidn y glucanos) y poli--hidroxibutinato, exclusivo de
procariotas. Habitualmente solo tienen un tipo de sustancia de reserva. Cuando las
clulas crecen casi no hay reservas pues necesita esas sustancias constantemente, las
reservas se forman durante el reposo cuando la clula esta ms inactiva.
Grnulos Metacromticos:
o de volutina. Aparecen de color rojo cuando se tien con
Azul de Metilo. Son polmeros lineales de fosfato de alto peso molecular.
Normalmente aparecen tras la fase de crecimiento. Se usan como fuente de ATP.
Inclusiones de azufre intracelulares
: principalmente en bacterias rojas y en el gnero
Beggiatoa
. Ocurre cuando en el medio hay sulfuro y normalmente en bacterias que lo
utilizan como sustrato para el metabolismo
Magnetosomas:
cristales intracelulares de magnetita, rodeados por una membrana
de: protenas, fosfolpidos y glicoprotenas. El nmero y disposicin es un carcter
taxonmico. Se usan para detectar corrientes electromagnticas.
rea nuclear:
cromosoma bacteriano condensado. No presenta membrana. En 1963 el
grupo de Cairms extrajo el ADN de
Escherichia coli
. Es una doble hlice circular con
unos 5x10pares de bases. No hay protenas asociadas para la carga del ADN, est
regulado por poliamidas.

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Todo el genoma codifica, no presenta exones ni intrones. La traduccin y transcripcin


estn asociadas y no suele ocurrir una sin la otra. En el citoplasma pueden encontrarse
pedazos de ADN independientes al ncleo.
Membrana citoplasmtica
:
Composicin:
Compuesta por lpidos y protenas, representa el 10% del peso seco de la clula. La
proporcin de protenas frente a lpidos es mayor que la que aparece en eucariotas.
Las membranas procariotas carecen de esteroles, con la excepcin de micoplasmas y
algunas cianobacterias. La principal clase de lpidos son los fosfolpidos.
Existen diferencias entre GRAM + y GRAM -, su causa es el radical unido al fosforo. EN
GRAM- es siempre un fosfatidil-etanolamina, mientras que en GRAM + puede ser
fosfatidil serina, fosfatidil inosital o fosfatidiletanolamina. Algunas presentan
glucolpidos o glupofosfolpidos como lpidos ms abundantes. Tambin pueden
presentar carotenoides y ubiquinonas. Uno de los factores que afectan a la
composicin es el pH.
Aunque carecen de esteroles presentan molculas similares, pentacclicas,
hopanoides. Se sintetizan a partir de los mismos precursores que los esteroles y tienen
su misma funcin.
Otras diferencias se deben a los cidos grasos que forman parte de los fosfolpidos. En
GRAM+ son saturados y ramificados, los principales presentan 14 tomos de Carbono.
EN GRAM- hay
una mezcla e saturados e insaturados, que presenta entre 16 y 18 tomos de Carbono.
La relacin entre saturados e insaturados depende, entre otras cosas, de la
Temperatura; a temperaturas mas altas aparecen saturados, conforme baja la
temperatura van apareciendo mas insaturados. Esto es til para la membrana porque
mantiene regulada la permeabilidad y la fluidez.
Sin embargo, todas estas caractersticas se corresponden con el Dominio Bacterya, las
Archea tienen membranas citoplasmticas diferentes. Los fosfolpidos que aparecen en
Bacterya son esteres de glicerol, en Achea son teres. Los radicales son grupos de
hidrocarbonos isoprenoides, los principales son el fitano (20 carbonos) y el bifitano (40
carbonos). Pueden aparecer otros radicales como azucares polialcoholes, complicando
la estructura.
El componente principal de la membrana son las protenas que comprenden el 60% del
peso de la membrana. Se han detectado entre 50 y 70 pptidos diferentes en la
membrana procariota. Los principales son permeasas (permiten el paso de nutrientes),

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enzimas biosintticas (formacin de lpidos de pared celular y cpsula) y protenas


productoras de ATP.
Estructura:
AL microscopio electrnico se ve una estructura trilaminar, formada por tres capas:
dos de ellas densas a los electrones y una transparente para ellos.
La teora mas aceptada hoy en da es la del mosaico fluido: una bicapa lipdica con
fosfolpidos hacia dentro y protenas que pueden estar embebidas en la membrana
(protenas hidrofobicas) o atravesarla.
Hay dos tipos de protenas en cuanto a la estructura de la membrana:
Extrnsecas o epiprotenas: asociadas dbilmente a la membrana, se pueden
separar fcilmente se ella.
Intrnsecas o endoprotenas: mayoritarias. Solamente se extraen con solventes
orgnicos y mtodos muy fuertes.
+2

Existen iones como: Ca

y Mg que se combinan con fosfolpidos estabilizando la

membrana.
Algunas Archea no tienen una bicapa sino, una monocapa lipdica.
La membrana plasmtica es un rgano vital si falta la clula se muere.
Funciones:
Difusin facilitada.
Permeabilidad selectiva

Translocacin de grupos.
Transporte activo.

Produccin energtica.
Biosntesis de distintos componentes celulares.
Permeabilidad selectiva:
Limita la entrada de sustancias al interior de la clula. Puede tener lugar de tres modos
principales:
-

Difusin facilitada: paso simple de una sustancia a travs de una protena


transmembrana, a favor de un gradiente. Cuando la sustancia pasa cambia la
conformacin de la protena.
Translocacin de grupos: La sustancia sufre una modificacin al entrar, pero sin
consumo de energa. Los grupos fosfato provienen del fosfoenolpiruvato, al
igual que la energa. Se usa para el transporte de azucares y as una vez
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atraviesa la membrana ya esta fosforilado con lo que es activo para el


catabolismo.
Transporte activo: ocurre a travs de las permeasas y consume energa en
forma de ATP.

Produccin de energa:
Tiene lugar en la parte de la membrana donde estn todas las protenas encargadas de
la cadena de transporte electrnico. En este sentido actan del mismo modo que las
membranas mitocondriales.
Biosntesis de componentes celulares:
La membrana presenta protenas que tienen funcin sintetizadora. Se cree que
pueden tener funcin en la replicacin del ADN y en la sntesis proteica porque se ha
visto un alto nmero de poliribosomas asociados a protenas de la membrana
plasmtica.
Puede presentar sistemas de membrana: mesosomas, es decir, invaginaciones de
membrana con funcin de replicacin; membranas fotosintticas, respiratorias, etc.

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Tema 4: Pared celular


Es un rasgo caracterstico entre procariotas y eucariotas. Mantiene la forma de la
clula, la protege de patgenos y la asla. Su principal componente es el
pptidoglicano, tambin llamado mureina. La concentracin de mureina es una de las
diferencias entre GRAM + (50%) y GRAM (10%).
En GRAM + la pared tiene una estructura amorfa. Mientras que en GRAM la pared
presenta una estructura ordenada y estratificada. Presentan cinco capas siendo L, L y
Lopacas, mientras que L y Lson translucidas. Hay zonas donde se unen la
membrana plasmtica y la pared celular, uniones de Bayer.

La mureina es un heteropolmero, compuesto por dos unidades: N-Acetilglucosamida y


cido N-Acetilmuramico unidos por enlaces glucosdicos (1-4). Del cido
N-Acetilmuramico cuelga una cadena de cuatro polipeptidos: Siendo el primero
L-Alanina, el segundo cido D-glutamico y el cuarto D-Alanina. El tercer pptido es
variable pudiendo ser L-Lisina, cido LL-Diaminopimelico cido
Mesodiaminopimeliaco. Estas cadenas tienen la funcin de unir polmeros de mureina
entre si, el enlace se forma entre el grupo amino de la protena tres de un lado y el
carboxilo grupo del otro lado. Este tipo de enlace es el ms comn y se denomina de
tipo A, pero puede darse un enlace tipo B, entre el segundo y el cuarto pptido.
Adems esta unin puede ser directa o por puentes peptdicos.
En GRAM y algunas GRAM + hay cido Mesodiaminopimeliaco cuyo enlace es
directo. En GAM +, lo ms abundante es la L-Lisina con enlace indirecto. Por ltimo en
Estreptomices el tercer amino cido es LL-Diaminopimelico y el enlace es indirecto con
Glicina. Una caracterstica importante es que en una misma estructura podemos
encontrar el mismo aminocido en distinta conformacin (D-L).
En GRAM los enlaces ocurren en un solo sentido y no en todas las subunidades. En
GRAM + se forman enlaces en mas de un plano y en casi todas las subunidades de
pptidos presentan enlaces.
GRAM +:

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El cido teitoico es un polmero lineal compuesto por polialcoholes y grupos fosfato


unidos por enlaces tipo ester. Existen dos tipos: gliciteitoicos y ribitolteitoicos.
Glicoteitoicos
: se llaman tambin lipoteitoicos por que unen la pared celular con la
membrana gracias a los lpidos. Van a estar unidos covalentemente a la mureina,
contribuyendo a la carga negativa global de la pared. Dan estabilidad y regulan la
permeabilidad.
Los polisacridos son muy abundantes. Son los responsables de la antigenidad
somtica. Si los polmeros presentan azcares y cido urnico sern cido teituronico.
Actan tambin como receptores de bacterifagos.
GRAM :
Los lipopolisacarido son el componente principal de la membrana externa de la pared
Pueden representar el 80% de peso seco de la bacteria. Es responsable de su
antigeneidad somtica. Estn formados por un lpido A y una parte de polisacrido
formada por una zona estable y otra variable. El primer azcar de la parte comn es el
cido Cetodesoxicolato (KDO). En la regin variable o cadena O, existe variedad en el
tipo de azucares y en el orden de estos. Por tanto habr distintos quimiotipos (segn el
tipo de azcar), con diversos serotipos (segn el orden de estos azcares). Tienen
propiedades endotoxinas. Pueden ser detectados por bacterifagos y contribuyen a la
carga negativa global de la pared.
Tambin presenta lipoprotenas y fosfolpidos. Siendo este carcter lipdico de la pared
muy importante para diferenciar GRAM+ de GRAM por mtodos de tincin.
Perdida de la pared celular:
Si el medio en el que se encuentra una bacteria es isotnico esta pierde la pared
celular y se convierte en un protoplasma esfrico. Si se trata de una bacteria GRAM
pueden quedar restos de la pared celular y se llamara esferoplasto.
Tanto los protoplasmas como los esferoplastos son inmviles, no pueden dividirse y
son resistentes a bacterifagos. Son resultado de laboratorio y generalmente no
existen en la naturaleza pues en esta escasean los medio isotnicos, excepto las
formas L de algunas bacterias. Las formas L pueden revertir a la forma original en caso
de ser esferoplastos.
As se postulo que los micoplasmas, bacterias sin pared, provienen de formas L de vida
libre. Se supone que al ser parsitos de homeotermos estaban en medios
homeostticamente protegidos.

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Tema 5: Estructuras externas de la pared celular


Glicocalix:
Capa mucosa o gomosa externa a la pared que es secretada tanto por GRAM + como
por GRAM .
Capsula: Material compacto, difcil de extraer.
Capa mucosa: material gomoso, fcil de extraer.
Composicin:
principalmente polisacridos pueden ser:
Homopolisacridos: un solo azcar.
Heteropolisacridos: azcares, amino cidos y cidos urnicos.
Las cpsulas pueden tener uso industrial.
Su formacin depende de las condiciones del medio externo.
Funciones:
adherencia en patgenos, supervivencia resistencia a fagocitos o a
deglucin por protozoos, resistencia a la desecacin.
Capa S:
Existe solo en algunos tipos de bacterias y es externa a la capsula. Presenta una
estructura paracristalina.
Flagelo:
Son apndices largos, pueden medir dos veces lo que la clula, entre 12 y 18nm, pero
son muy finos. No son visibles a no ser que se tian de una forma especial o que se
trate de un mechn de flagelos. Se dan unos pocos casos de bacterias en que los
flagelos estn cubiertos, pero nunca de membrana.
Predominan en bactericilos. En caso de eliminacin son fcilmente recuperables,
Presentan tres partes:
Filamento: 11 cadenas paralelas de flagelina. Constituyen el antgeno H.
Gancho: ms grueso que el filamento, est en la base de este y se forma de una
nica protena. Une el filamento con el rgano basal.
rgano basal: inserto en la membrana y la pared, formado por un anillo o
varios que rodena al filamento. Se encarga del movimiento. Es distinto en
segn el tipo de GRAM: En GRAM presenta cuatro anillos, dos en la pared y
dos en la membrana; y en GRAM + tiene solo tres anillos, uno en la pared y dos
en la membrana.
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Adems este rgano presenta protenas mot (motoras) que hacen girar el
flagelo, y protenas fli (conmutadoras) que activan o inhiben el movimiento.
GRAM

GRAM +

Los flagelos de Archea son todava ms finos y no son de flagelina. Presentan un


movimiento ms lento que el de los flagelos de bacterias.
Disposicin:
Polar: Un solo flagelo monotrico, muchos lofotrico y uno en cada polo
anfotrico.
Peritrico: flagelos todo alrededor de la clula.
Mixto: un flagelo polar y muchos peritricos.

El flagelo es una estructura rgida cuyo movimiento es rotacional, habitualmente en


sentido antihorario. El movimiento es distinto segn la disposicin del flagelo, los
flagelos polares son mas rpidos, el ms rpido es el de
Vibiro alginolytus
(1700 rpm=
160m/s). En bacterias peritricas los flagelos se coordinan, coalescencia, lo que hace
que sean ms lentos.

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Tactismo:
Qumotaxis y Fototaxis, seran ejemplos de tactismo pero podran ser positivos o
negativos, es decir, pueden favorecer el movimiento de una bacteria hacia el estmulo
o escapar de l.
Movilidad deslizante:
Tambin ll amado gliving es un tipo de movimiento que no necesita flagelos, solo se
da sobre superficies gelatinosas. Es muy lenta y la presentan en bacterias fibrosas y
cianobacterias.
En espiroquetas los filamentos axiales se comprimen y luego se liberan bruscamente.
Efecto muelle.
Pili:
Solo se encuentra en GRAM , son ms cortos que flagelos y son rgidos. Estn
formados por protenas, pilinas, y no tienen estructuras de anclaje. Hay dos tipos:
Pili tipo i: antes conocidos como fimbrias. Muchos, anchos y con funcin de
adherencia.
Pili tipo f: son menos abundantes, ms estrechos y largos. Codifican en
plsmidos conjuntivos. Llevan a cobo la conjugacin. Son receptores para
bacterias.
Esporas:
Funcin de resistencia o de diseminacin. Hay dos tipos:
Actinomicetos: tipo de bacterias similares a los hongos, la espora son
diseminativas, no de resistencia. Varias por bacterias.
Endosporas: estructuras de resistencia no diseminaticas. Solo una bacteria. Es
criptobiotica.
Las endosporas se dan tanto en GRAM como +. Son muy resistentes al calor y la
desecacin. Pueden estar en este estado muchsimo tiempo.
La razn de esporulacin puede ser la concentracin de sustancias las condiciones
adversas, la superpoblacin. Adems tiene que estar en un momento concreto del
ciclo celular, tras la duplicacin, siendo este punto la etapa 0 del proceso de
esporulacin.
Etapa 1:
condensacin de los dos cromosomas hijos para formar un filamento axial.

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Etapa 2:
formacin del septo de la espora, mediada por la protena Fits Z. La divisin
ser desigual, la parte pequea dar lugar a la espora y la grande al esporangio.
Tambin comienza el proceso de invaginacin.

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Tema 6: Virus
Son parsitos obligados que se reproducen dentro de las clulas y aprovechan sus
estructuras para su propio desarrollo. Son patgenos peligrosos porque presentan una
gran capacidad de mutacin y por tanto son difciles de tratar.
El primer medio de proteccin contra una enfermedad fue contra un virus, aunque en
aquel momento no se saba que lo era, la Viruela por Jenner. Primera vacunacin.
Ivanowsky y Bergerink descubrieron el primer virus, causante del mosaico del tabaco.
Pero fue Stanley quien describi su estructura: protenas y cidos nucleicos (ADN
ARN).
Las protenas forman una cpside que rodea al cido nucleico, que puede ser
unicatenario o bicatenario. Esta cpside proporciona su especificidad al virus. Adems
la cpside puede estar rodeada por membrana plasmtica, esta membrana no la
construye el virus, sino que procede de la clula en la que fue formado, se denominan
virus envueltos. La membrana est cubierta de glicoprotenas fabricadas por el virus y
que median la unin virus-husped.
Adems de cidos nucleicos dentro de la capsula de algunos virus puede haber:
polimerasas, neurominidasas o lisozimas.
Estructura de la cpside:
Icosadrica
Bacilariforme o filamentosa
Pleomorfica o compleja
Infeccin por virus:
Adsorcin al husped
Penetracin: normalmente perdiendo la cpside, descpsidacin.
Formacin de estructuras: replicacin, transcripcin y traduccin; formacin de
la cpside.
Ensamblaje de nuevos virus.
Liberacin de los nuevos virus o Infeccin latente o Infeccin crnica o
Transformacin en una clula maligna.

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Liberacin de nuevos virus


Clula tumoral

Infeccin latente

Infeccin crnica

Replicaccin:
ADN bicatenario:
ADN se replica para formar los nucleotidos de los hijos. Adems ese
ADN se transcribe para sintetizar las proteinas de la cpside. Formandose nuevos virus
en el ncleo de la clula husped.
ADN monocatenario:
pimero el ADN se duplica para formar una hebra bicatenaria.
Esta se replica y forma los nuclotido de los hijos. Adems de la traduccin para formar
las protnas de la cpside.
Los Hepadnoviroides:
tienen ADN bicatenario y adems presentan
reversotranscriptasa. As el ADN se transcribe a ARN que en el citoplasma se
retrotranscribe en ADN. Este ADN citoplasmatico es el que se usa para formar nuevos
virus.
ARN monocatenario positivo:
se sintetiza la cadena complementaria al replicarse el
ARN + va a los nuevos virus y el ARN se usa para la sintesis de proteinas
ARN monocatenario negativo:
en este caso es el ARN el que se combierte en el
nucleotido del virus. Mientras que el ARN + se traduce a proteinas.
ARN monocatenario con reversotranscriptasa:
el aRN se retrotranscribe a ADN este se
replica y forma ADN bicatenario. EL ciclo continua del mismo modo que el de un virus
de ADN bicatenario.
ARN bicatenerio:
er replica y forma el genoma virico. Adems de eso se traduce y
forma las proteinas de la cpside.
Liberacin:
Puede ser por lsis celular o sin destruccion celular, un proceso similar a la penetacin
pero a la inversa.
Se clasifican por el tipo de clula a las que parasiten:
Vegetales: Algas, hongos y plantas vasculares.
Animales
Bacterias. Bacteriofagos y cianobacterias.

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En las plantas la mayor parte sern virus de ARN monocatenario. Agunos pueden
atacar a plantas y animales. Para las algas, hongos, levaduras y protozoos hay ARN
mono y bicatenario solo virus de AND bicatenario.
El genoma bacteriano destruye el ADN del hospedador y pone a su servicio la
maquinaria replicariva de la clula parasitada.
Por sus caracteristicas tienen que ser criados en clulas vivas, no en medios sinteticos.
Eso era un problema en su inicio, se obserban animales o plantas. Tambin se usaban
huevos de gallina fecundados que se dejaba crecer cinco das, se arrancaba un pedazo
de cscara y se inyectaba el virus, y se dejaba crecer incubando los huevos a 36C para
mutiplicar el virus. Era un mtodo que ahorraba espacio.
Con el desarrollo de las tecnicas de manipulacinde tejido se podan obtener clulas
de tejidos concretos y mantenerla en crecimiento en medios especiales, se les llamaba
cultivos primarios. Se vio que haba veces en que por sus caractersticas las cluals
podan durar mas tiempo, se llamaron cepas celulares, en algunos casos mutaba y se
volvian tumorales. Asi se consiquieron las lineas clulares de cultivo continuo, que es el
metodo ms comn para mantener virus.
Efecto citoptico (ECP):
es el efectoconcreto de un virus sobre la clula. Sierve como
criterio preliminar de clasificacin.
Una vez tenemos el virus la morfologa podemos conocerla por la microscopia
elctrnica.
Tenemos partculas mas pequeas:
Virusoides
: cidos nucleicos aislado de ARN o ADN, que son satelites de otros virus, se
encapasidan en otros virus, y se potencia la enfermedad que cause el virus. No pueden
replicarse por si mismos, precisan entrar con el virus.
Viroides:
Son de ARN monocatenario desnudo, sin protenas asociadas, de entre 250 y
400 nucleotidos. Forman estructuras tpicas, con bucles y asas, y cuando la forman
pueden considerarse como dobles cadenas aunque no lo sean. Esto le da resistencia ,
sobre todo en ataque enzimaticos. Estudiando sus secuencias se vio que sus secuancias
eran parecidas a las de intrones. Suelen causar enfermedades en las plantas.
Prin:
proteinas infectivas asociadas a encefalomielitis que se transmiten a humanos
por parte de animales. En 1982 Prusiner descubrio el agente que causaba la
enfermedad, se provocaba por acumulacin de priones alternos a proteinas que se
situabana en el cereboro. La diferencia bsica es el tipo de helices que forman, en la
protena normal el 3% es helice , en la alterada (prin) el 43%. Da lugar a la muerte
neuronal.

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Tema 7: Nutricin bacteriana


Las bacterias son los organismos ms sencillos, que a partir de nutrientes dan lugar a
sus componentes. Las macromolculas las sintetizan ellos mismos con las sustancias
que capatan del madio. Al criarlas en un medio de cultivo tienen que estar presentes
los nutrientes necisario y adems en las cantidades aproriadas. Todas las clulas
necesitan: HO, fuentes de energa y electrones y adems necesitamos fuentes de N,
C, S y P. Estos son elementos esenciales, son el 95% del peso seco de la clula.
Hay una serie de elementos minerales necesarios, macronutrientes (K, Mg, Ca, Fe, Na,
Si) y micronutrientes o oligoelementos, se necesitan en mucha menor cantidad (Zn, Cu,
Co, Mn)
Adems se necesitan factores de crecimiento, son compuestos orgnicos como
vitaminas, amino cidos, bases nitrogenadas o cidos grasos.
El agua es el principal nutriente en teminos de cantidad y el resto de nutrientes tienen
que estar en disolucin para poder entrar en la clula. El augua solvata materiales
orgnicos e inognicos, aporta H y O acta en las reacciones y es esancial para la
funcin enzimatica.
Necesita una fuente de energa, y dependiendo del tipo hay:
Fottrofos: luz como fuente de energa.
Qumiotrofos: obtienen energa por oxidacin de compuestos orgnicos o
inorgnicos
- Fermentcin: anaerobios donde los compuestos actuan como
donadores y acetores de elactrones. Homofermentativos vs
Heterofermentativos.
Segn la fuente de electrones:
Lititrofos: compuestos inorgnicos
Organotrofos: compuestos orgnicos
Segn la fuente de carbono:
Es el medio mas abundante en la clula el 50% de la biomasa.
Autotrofos: Usan CO como fuente de Carbono.
Heterotrofos: Usan compuestos orgnicos como fuente de Carbon

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Nitrogeno:
Las bacterias pueden utilizar una gran variedad de fuentes: inorgnica (NH,
amoniaco; y N atmosferico) y tabin fuentes orgnicas (lsis de protenas, peptidos
pequeos y bases nitrobenadas)
En un medio de cultivo se dan criofilizados, como medio. Se piensa que es as porque
los damos hidrlizados, las bases pueden utilizarlo todo, si las damos libres no son
asequibles.
En ambientes acuticoas hay poco N y las bacterias necesitan menos cantidad.
Asimilacin de nitrogeno:
Primer paso: asimilacin de amoniaco. Pasa directamente a forma orgnica,
aminacin directa del cido -cetoglutarico a - cetoglutarato. Por la
glutarato deshidrogenasa con gasto de NADH. A su vez puede aadir un
segunado amoiaco para dar lugar a glutamina, por la glutamina sintetasa con
gasto de ATP. Son los primeros compuestos que se forman al asimilarse el NH.
Segundo paso: El glutamato se une a oxalcetato para dar -cetoglutarato,
por la transaminasa. La Gluamina ms el cido - cetoglutarico da lugar a dos
molculas de glutamato por la Glutamato sintetasa con gasto de NADH.
Otra fuente inorgnica son los nitratos, que son reducidos a amoniaco para saguir ese
proceso. La reduccin de nitrato a amoniaco no se conoce muy bien, son una serie de
pasos cn varios intermediarios.
Tercer paso: el nitrogeno atmosfrico tambin puede ser usado como fuente.
+
Para incorporarlo se reduce a NH
, y una vez ah lo integramos . El proceso
est catalizado por la nitrogenasa que tiene dos componentes: el primero es
una proteina con Fe y Mo, el segundo solo contiene Fe. Para que pueda ejercer
su funcin nacesita poder reductor y ATP. Pueden variar entre unos grupos y
otros. No se han detectado intermediarios.
Azufre
:
Los amino cidos que contienen azufre se pueden utilizar como fuente de este
nutriente, pero la mayora de los organismos usan el in sulfato como fuente
inorgnica. La utilizacin ocurre por un proceso conocido como reduccin asimiladora
del sulfato, para distinguirla del proceso que usan las bacterias que respiran con
sulfato como receptor de electrones.
Sintesis de sulfato activo (PAPS= fosfato de fosfoadenosina). Se necesitan dos
molculas de ATP.
Reduccin del sulfato activo a sulfito. Se forma poder reductor como NADPH.
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Reduccin del sulfito a SH y este se incorpora a un amino cido, primero a la


cisteina y de ese al que sea.
Fosforo:
Se encuentra en forma de fosfato. Lo utilizan para formar fosfolpidos, cidos nucleicos
y coenzimas. La mayoria de las bacterias pueden usar fosfatos orgnicos e inorgnicos.
Desde los orgnicos la reaccin ms importante es la de la gliceralddehido-3-fosfato
deshidrogenasa, se incorpora Pi para la sntesis.Desde compuestos inorgnicos se
incorpora a partir como fosfato gracias a la accin de las fosfatasas situadas en el
periplasma, entre la membrana y la pared celular, y en funcin del pH hay fosfatasas
cidas y alcalinas.
Potasio:
Se usa como cofactor para la sintesis de algunas portenas.
Magnesio:
Estabiliza enzimas, membranas ribosomas y cidos nucleicos. Las GRAM + necesitan 10
veces ms magnesio que las GRAM , por los peptidoglicanos y por la esporulacin. Las
bacterias fotosnteticas necesitan magnesio para la clorofila.
Calcio:
Es esencial para la esporulacin y adems actua como cofactor de enzimas proteasas.
Hierro:
Es necesario en casi todos los microorganismos. Actua como transportador de
electrones en citocromos. Muchos microorganismos forman compuestos orgnicos,
siderofilos, que son captadores de hierro pues lo separan de otros compuestos de los
que est formando parte. Hay dos tipos de compuestos siderofilos:
Hidoxamatos o sederaminas: derivados del cido hidroxonico.
Fenolatos o sideroforos de tipo catecol: derivan del fenol.
Hay bacterias que no usan ninguno sideroforo por lo que para cultivarlas hay que
+2
incluir F e en el medio.
Sodio:
Su necesidad depende de los organismos, los marinos necesitan mucho mientras que
los de agua dulce no lo necesitan.
Silicio:
Es necesario para organismos como diatomeas con cubierta de silicio.
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Oligoelementos:
Cobalto: se usa para la sintesis de vitamina B
Zinc: estabilizador de proteinas.
Molibdeno: forma parte de algunas enzimas con funcin de oxidacin-reduccin.
Manganeso: es un cofactor de enzimas.
Factores de crecimiento:
Sustancias necesarias para el crecimiento especifico que no pueden ser sintetizadas
por los microorganismos. Un ejemplo seran vitaminas, amino cidos, purinas y
pirimidinas.
Un microorganismo que no necesita factores de crecimiento es un Prototrofo. Si no
puede sintetizar por si mismo los factores de crecimiento es un Auxotrofo.
Vitaminas:
algunos microorganismos requieren complejos vitaminicos muy
elavorados, como Estreptococos, otros en cambio no necesitan vitaminas,
bacterias entericas. La mayora de las vitaminas actuan como cofactores de
enzimas.
Amino cidos:
pueden suministrarse como amino cidos libres o en peptidos
pequeos.
Bases puricas y pirimidinicas:
Adems de lo odbio actuan como coenzimas. Se
pueden apartar como cidos nucleicos o libre.
Algunas bacterias necesitan
factores sanguineos
como anillos porfirinicos. Por
este motivo hay que cultivarlos en sangre
Haemophilus
.
Incluso la
N-acetilglucosamina
para
Bifidobacterium
. En el aparato digestivo de
lactantes.

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Tema 8: Factores fisicoqumicos para el crecimiento.


Temperatura:
Al aumentar la temperatura primero se acelera el metabolismo pero a partir de un
punto se paraliza, luego decrece y acaba por detenerse. La temperatura optima esta
siempre mas cerca de la temperatura mxima que de la mnima.
Rangos de temperatura de crecimiento:
Estenotermos: rango limitado, la temperatura mxima y la mnima son muy
cercanas.
Euritermos: rango amplio, mucha distancia entre la temperatura mxima y la
mnima.
Esas temperaturas sin embargo pueden ser muy variadas. As segn la temperatura
optima de un organismo lo clasificamos en:
Psicrofilos: o criofilos. Crecen a temperaturas muy bajas 0C. Dentro hay dos
clases: Obligados o facultativos. Presentan enzimas con temperaturas optimas
bajas y sus membranas presentan muchos cidos grasos insaturados, as la
membrana en mas fluida a pasar del fro.
Mesofilos: temperatura optima entre los 30 y los 40C, su mnimo est en 10C
y su mximo a 45C.
Termofilos: temperatura media sobre los 60C mnima a 40, la temperatura
mxima depende de si son Hipertermofilos, cuyo optimos son los 80C; o no lo
son. Sus enzimas y proteinas son resistentes a las altas temperaturas, al igual
que su membrana y ribosomas.
La temperatura siempre influye positivamente en el crecimiento, as las bacterias
termofilas crecen mucho mas deprisa que las Psicrofilas.
El pH:
El pH ptimo para un organismo varia segn sus caracteristicas pero normalmente ast
entre 5 y 9. Hay organismos acidofilos y alcalofilos
Independientemente del pH al que viven su pH interno es siempre neutro (o similar).
La actividad de los microorgnismos modifican el pH del medio.
Presin osmotica o Salinidad:
Osmofilos:
organismos que soportan una alta salinidad. Pieden ser facultativos u
osmotolerantes, soportan la alta salinidad; y obligados, necesitan o soportan la alta
concentracin de sal. Si lo que necesitan o soportan es sal (NaCl) diferenciamos:

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Halotolerantes: entre 2-4% de NaCl


Halofilos: entre el 2 y el 15% de NaCl, son bacterias marinas.
Halofilos extremos: necesitan una concentracin de NaCl entre el 15-30%
No halofilos

Si lo que necesitan o soportan es el azucar hablamos de Sacarofilos.


Presin hidrostatica:
Barotolerantes:
soportan o necesitan altas presiones y normalmente se relacionan con
la temperaturas.
Barofilos:
Necesitan presiones altas no pueden crecer a presiones normales.
Necesidades de Oxgeno:
Un medio con un potencial redox positivo tiene una gran cantidad de O y sera un
agente oxdante. Un medio con un potencial redox negativo tiene poco O y ser
reductor.
Aerobios obligados: necesitan O para vivir.
Anaerobios:
- Facultativos: viven sin oxgenos pero crecen ms en presencia de O.
- Aerotolerantes: vivien con oxgeno para crecer ms en ausencia de O.
- Obligados: el oxgeno es letal para ellos.
- Microfilos: crecen en ambientes con poco oxgeno. Soportan el O y no
pueden vivir sin l, pero en pequeas cantidades.

Al utilizar el O se forman HO y el O , que son txicos y por tanto deben de ser


eliminados. Las bacterias anaerobias obligadas no tienen las enzimas necesarias para
catalizar estas sustancias: superoxdo-dismutasa y catalasa, por lo que se envenenan.

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Tema 9: Divisin celular


El primer paso es el crecimiento citoplasmatico que empuja a la membrana
citoplasmatica para que crezca. Tambin empuja la pared celular, la tensin es mayor
en las capas mas exteriores y son estas las primeras en romperse afectadas por la
lisina. Se incorporan ms peptidoglicanos para que la pared crezca y conforme se van
construyendo las paredes exteriores se van rompiendo las interiores hasta que toda la
pared halla crecido en su totalidad.
Luego se da la replicacin del ADN en un momento dado acumula ADN que sealiza el
comienzo de la replicacin. Esta replicacin esta regulada tambin, por protenas SpoJ,
que se unen a los origenes de replicacin.
Cuando ya se han formado los cromosomas comienza la formacin del septo regulada
por la protena FtsZ.
Este es modlo de fisin binaria y es el tipo de reproduccin ms abundante pero no el
nico: Esporulacin en
Streptomices, Nocordia
forma un filamento que
posteriormente se divide e
Hyphemicrobium
por gemacin.
Crecimineto de la poblacin microbiana:
Es causada por el crecimiento de una clula pero se distingue por el crecimieno
general de una colonia a lo largo del tiempo. Tiene varias fases:

Latencia:
la velocidad de crecimiento durante esta fase es cero, sera mientras
la clula se prepara para dividirse. Ser ms larga si las clulas estan daadas o
si viven en un medio pobre en nutrientes.
Induccin enzimatica: si cambia la fuente de C o N, se puede volver a
entrar en fase de latencia hasta que se formen las enzimas necesarias para
catalizar esta nueva fuente. De la inducci enzimatica derica el crecimiento
diausico, en caso de que en un medio existan dos fuentes de nutrientes una
ms facil de explotar que la otra, cuando se termina la primera hay un tiempo
de latencia antes de poder explotar la segunda, pues se necesitan enzimas
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inducibles. Solo no hay latencia si inoculamos un cultivo en un mismo medio,


transpasamos.

Fase exponencial:
el crecimiento es continuo, su velocidad depende de las
condiciones, si un organismo est en condiciones ptimas puede crecer ms
lento que otro que este en peores condiciones pero cuyo crecimiento sea ms
rpido; por ejemplo los procariotas se dividen mucho mas deprisa que los
eucariotas. En laboratorio cultivamos en medios cerrados con nutrientes finitos
con lo que el crecimiento no es indefinido.
Fase estacionaria:
ocurre cuando el crecimiento finaliza, la velocidad de
crecimiento se hace cero, esto puede ocurrir por dos motivos principales o
enpiezan a escasear los nutrientes o se acummulan productos de desecho
txicos. Estas bacterias estn activas pero no en divisin. Si ocurre por
agotamiento de nutrientes no hay aumento ni de masa clular ni de nmero de
clulas, pero si se da por acumulacin de sustancias txicas la masa clular
aumentara durante un tiempo mientras que el nmero de clulas permanecer
estable.
Fase de muerte:
la velocidad de crecimiento se vuelve negativa. Puede ocurrir
lsis clular co lo que el nmero de clulas y la masa disminuyen al mismo
tiempo; por muerte sin lsis con lo que el nmero de clulas viables disminuye
pero no la masa celular. Esto nos permite determinar el efecto de un
antibiotico en una poblacin bacteriana:
- Bacteriosttico: inhibe el crecimento pero no mata a las clulas.
- Bacterizida: provoca la muerte pero no la lsis.
- Bacterrialitico: produce la muerte clular por lsis.

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Toma de datos
:
Medida del nmero de clulas:
Exiten mtodos que nos permiten contar el nmero de clulas totales o el nmero de
clulas viables, incluso hay mtodos que nos permiten contabiizar ambas cosas.
N de clulas totales: recuento al microscopio, usando una cuadricula de
tamao y volumen conocidos; y contador electrnico de partculas, segn el
tamao del surco podemos ser ms o menos discriminativos segn el tamao
pero no podemos estar seguros de que todo lo contado sean clulas.
N de clulas viables: recuento en placa, por diluciones seriadas; filtracin de
membrana, cuyo tamao de poro va de los 0,22 a los0,45 m; NMP (nmero
ms probable), estimacin por medio de tablas estadisticas.
N de clulas totales y viables: tien los nucleotidos para saber que clulas se
estn dividiendo y cuales no. Citometria de flujo (rodamina 123 las clulas
viables se forman cadenas dobles un color , se forman cadenas simples otro
color) Microscopio de fluorescencia, emite luz de diferentes longuitudes de
onda segn halla replicacin o no la halla.
Medida la masa celular:
Exiten mtodos que nos permiten medir la masa celular de forma directa o indirecta,
en decir con clulas vivas o con cluas muertas.
Mtodos directos: peso en seco o peso en humedo. Adems podemos medir el
contenido de lipopolisacridos, cido muramico o nitrogeno de la clula, en
clulas vivas medimos el ATP.
Mtodos indirectos: turbidimetro, medimos la turbidez de la suspensin sin
daar las clulas.
DO = 2 logT siendoDOladensidadpticayT latransmutancia

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Tema 12: Control de microorganismos


Definicin de conceptos:
Agente antimicrobinano:
se utiliza para denominar agentes tanto fsicos como
qumicos que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos.
Agente microbiosttico
:
aquellos agentes antimicrobianos que inhiben el crecimiento

de los microorganismos.
Agente microbicida o germicida
:
aquellos agentes antimicrobianos que causan la

muerte del microorganismo.


Esterilizacin:
eliminacin de todos los organismos presentes en un material, incluidas
las esporas y otros agentes infecciosos.
Desinfeccin:
destruccin de las formas vegetativas de patgenos, pero no de las
endosporas bacterianas. Su funcin es eliminar los microorganismos causantes de
enfermedades, pero tambin reduce la poblacin microbiana.
Antisepsis:
utilizacin de agentes antimicrobianos qumicos para la eliminacin de
formas vegetativas de patgenos de tejidos superficiales.
Quimioterapia:
antimicrobianos qumicos utilizados para eliminar o inhibir el
crecimiento microbiano en tejidos internos.
Factores que influyen en la accin antimicrobiana:
Algunas de las variables que afectan a la efectividad de un agente antimicrobiano son:
Tamao de la poblacin: poblaciones menos densas mueren ms rpidamente
que las ms densas, debido a la cintica logartmica de la muerte celular.
Concentracin del agente antimicrobiano:
Cuanto menor la concentracin, mas

despacio acta. Sirve tambin para medir la potencia del agente.


Tiempo de exposicin al agente antimicrobiano.
Temperatura a la que se encuentra el microorganismo cuando se expone al
agente antimicrobiano. En general, mayores temperaturas incrementan la
eficiencia.
Naturaleza del material a tratar
:
por ejemplo cuando se trata de esterilizar un
lquido mediante calor, a mayor viscosidad del lquido menor eficiencia del
tratamiento, mientras que el pH cido favorece la efectividad.
Caractersticas de los microorganismos presentes:
existen diferencias entre la

resistencia a distintos agentes antimicrobianos de los distintos tipos de


bacterias.

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En general las bacterias Gram + son ms resistentes al calor, pero mas


vulnerables ante antimicrobianos qumicos. La edad de las bacterias afecta
tambin a su sensibilidad: una poblacin que est creciendo exponencialmente
suele ser menos resistente que una en fase estacionaria.
Modos de accin de los agentes antimicrobianos:
Los posibles mecanismos de accin de los agentes antimicrobanos estn relacionados
con los daos producidos en las principales estructuras celulares.
Alteracin del citoplasma.
Inactivacin de enzimas
Alteracin de la estructura de la membrana celular o de la pared celular.
Control por agentes fsicos:
Los agentes fsicos se utilizan para controlar el crecimiento microbiano y esterilizar
objetos y medios de cultivo. Exiten varios tipos de agentes fsicos:
Calor:
Es el mtodo ms comn de esterilizacin en microbiologa. El calor puede ser aplicado
en ambiente hmero o en ambiente seco, teniendo aplicaciones diferentes:
Calor hmedo
: es ms efectivo que el calor seco, porque produce coagulacin y
desnaturalizacin de protenas. La esterilizacin hmeda puede ser clasificada
como:
- Esterilizacin por vapor
:
La utilizacin de vapor a presin, lo que
permite alcanzar temperaturas superiores a los 100C, es la base del
autoclave.
- Pasteurizacin: proceso de tratamiento con calor hmedo a bajas
temperaturas que reduce la poblacin microbiana en leche y otros
alimentos sensibles al calor. No es un mtodo de esterilizacin ya que
no destruye esporas. La pasteurizacin destruye bacterias patgenas y
mejorando la vida til de los alimentos al reducir la poblacin de
bacterias que podran degradarlos. Los mtodos d pasteurizacin mas
comn son el HTST, calentando a 71.7C durante 15 segundos,
enfrindose despus rpidamente; y la variante UHT a 135C durante
2-5 segundos o a 141C durante 2 segundos.
Calor seco:
necesita temperaturas ms elevadas. Se utiliza para la esterilizacin
de material de vidrio y metal, y en algunos casos se utiliza para esterilizar
polvos y aceites. Se utilizan hornos de esterilizacin y requiere un tiempo de
exposicin largo para la esterilizacin completa: 2 horas a 160C o 1 hora a
180C.

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La muerte celular se produce debido a la oxidacin de los componentes celulares y


desnaturalizacin de protenas. Una alternativa de esterilizacin con calor seco es la
incineracin, que se utiliza para la destruccin de material hospitalario contaminado,
animales de experimentacin, esterilizacin de las asas de siembra metlicas
Fro:
Aunque algunas bacterias pueden crecer a 0 C , temperaturas por debajo de 0C
inhiben el metabolismo. La congelacin se utiliza en la industria para la conservacin
de alimentos y en el laboratorio para almacenar frmacos, compuestos orgnicos o
muestras que podran verse alteradas por el crecimiento microbiano. Para ello es
suficiente la congelacin a -20C. Debido a que la congelacin no mata los
microorganismos sino que solamente detiene su crecimiento, es tambin es un
mtodo utilizado para la preservacin de cepas microbianas. Los cultivos se congelan a
-70C o en nitrgeno lquido a -196C, de forma que se impide la contaminacin con
otros microorganismos
Radiaciones:
Entre las radiaciones de elevada energa utilizadas para la esterilizacin distinguimos
radiaciones no ionizantes e ionizantes.
Radiaciones no ionizantes:. La radiacin UV es absorbida por algunos
compuestos intracelulares, que puede verse seriamente daado. Es ms
efectiva a 260 nm, que es el mximo de absorcin del ADN. Al incidir la
radiacin UV sobre el ADN se forman dmeros de pirimidina, de forma
que dos pirimidinas contiguas en la misma cadena se unen mediante
puentes. Si estos enlaces anmalos no son corregidos se originarn
errores de lectura y replicacin, originando mutaciones o muerte
celular. La capacidad de penetracin de la luz UV es muy baja, no
pudiendo atravesar el vidrio o lquidos, por lo que slo se utiliza para la
esterilizacin de superficies (cmaras de flujo laminar), la esterilizacin
de aire en quirfanos o salas aspticas o la generacin de mutantes. En
algunos casos especficos tambin puede usarse para la esterilizacin de
agua.
Radiaciones ionizantes:
Los rayos X y rayos gamma, debido a su elevada

energa, causan la ionizacin de las molculas y la aparicin de radicales


libres txicos que destruyen componentes celulares como el ADN y las
protenas. Presentan un mayor poder de penetracin. Aunque son muy
efectivas contra formas vegetativas y endosporas, no siempre son
efectivas contra virus.

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Los rayos gamma pueden ser utilizados tambin para la esterilizacin de alimentos,
aunque existen restricciones en su uso por el posible efecto de la radiacin sobre las
propiedades del alimento.
Filtracin:
Es el mtodo alternativo a la esterilizacin por calor cuando se trata de esterilizar
lquidos termosensibles o gases. Se utilizan filtros con tamao de poro demasiado
pequeo para que pasen los microorganismos, pero suficientemente grandes para
permitir el paso del lquido. Estos filtros retienen las bacterias, pero dejan atravesar los
virus. Los filtros de profundidad estn formados por material fibroso o granular de
distinta naturaleza que forma un entramado que retiene gran parte de las bacterias.
Suelen utilizarse como pre-filtros para eliminar las partculas de gran tamao que
colmataran los filtros esterilizantes. El tipo de filtro ms comn utilizado en la
esterilizacin de lquidos es el filtro de membrana. Existen distintos tipos de filtros de
membrana que se componen de polmeros que permiten el control del tamao medio
del poro ( entre0,45 y 0,22 m). stos ltimos son los que garantizan la eliminacin de
todas las bacterias, ya que las bacterias ms pequeas conocidas miden alrededor de
0,3 m.
Un tipo de filtros especficos denominados filtros de aire particulado de alta eficiencia
(HEPA
) se utilizan en las cabinas de flujo laminar y de seguridad biolgica. Estos filtros
son unos filtros de profundidad que permiten eliminar el 99,9% de las partculas de 0,3
m presentes en el aire. En las cabinas de flujo laminar el aire es forzado a travs de un
filtro HEPA proyectndose una vez estril en forma de cortina vertical en la ventana de
la cabina.
Control por agentes qumicos:
Son utilizados en la desinfeccin, no destruye las esporas y por lo tanto no son
esterilizantes. Existen sin embargo algunos como el xido de etileno o el
glutaraldehido que s eliminan esporas y por lo tanto deben clasificarse dentro de los
agentes esterilizantes. Los tipos ms comunes de agentes qumicos son:
Fenoles: Antiguamente se usaban para la desinfeccin pero en realidad
esterilizan. Es muy daino para el cuerpo humano.
Alcoholes: Son desinfectantes. El ms usado en laboratorio es el Etanol.
CHCHCH
Halogenos: Se utilizan para desinfectar lquidos y superficies. Los ms comunes
son el Cl (cloro) y el I (iodo).
Aldehdos: Tienen accin desinfectante. El ms usado es el formol o
formaldehdo.

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Sales de amonio cuaternarias: Actan, adems de como desinfectantes, como


detergentes. As el detergente solubiliza las grasas disminuyendo la tensin
superficial con lo que favorecen la accin desinfectante.
Gases: Son esterilizantes y son el Oxido de Etileno y la Betapropillactona.
Metales pesados: Son agentes antimicrobianos. Utilizamos Hg (mercurio), Zn
(zinc) y Ag (plata.
Agua oxigenada: Es un desinfectante, utilizable sobre la piel.
HO
Clorexidina: Presenta efectos antimicrobianos y antisepticos.
Coeficiente fenlico (CF):
Se utiliza para medir la eficiencia de un agente qumico, se llama as porque usa como
base el Fenol, con lo que el CF del fenol ser 1. Lo definiriamos como la menor dilucin
del agente que mata a los microorganismos en 10 min pero no en 5.

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Tema 13: Gentica microgina


Mutacin
: cambio de la secuencia de ADN que es hereditario, pudiendo afactar a
secuencias cortas o largas.
Recombinacin:
intercambio de material gentico entre dos elementos genticos.
Marcador:
genes que nos van a avisar en caso de mutacin.
Efactos sobre la fitness:
Mutacin letal.
Mutacin seleccionable: es ventajosa.
Mutacin no selccionable: no es ventajosa, ms bien es neutra.
La mayor parte de las mutaciones van a ser de los dos ltimos grupos y van a afectar al
crecimiento de las bacterias. Por eso es necesario identificarlas.
Mtodo de Screening:
Para buscar al mutante cultivamos en una placa con un medio general las bacterias.
Cuando ya hayan crecido y se presenten colonias, entonces apretamos un placa limpia,
con un medio selectivo contra la nuestra y dejamos crecer las colonias. Solo los
mutantes creceran en el medio selectivo y como es una copia de la placa original
podemos saber que colonias de la original son mutantes.
Actualmete este porceso est automatizado.
Tipos de mutaciones:
Segn el origen de la mutacin:
Espontneas: ocurren por errores de replicacin, son poco frecuentes.
Inducidas: son provocadas por factores externos.
Si solo cambia una base nitrogenada:
Mutacin silenciosa: cambio en la tercera base del codn, da lugar al mismo
amino cido.
Mutacin sin sentido: cambio en la segunda base, da lugar a un codn STOP.
Mutacin equiparable: cambio en la primera base, da ugar a un amino cido del
mismo tipo.

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Microinsercin y microdeleccin:
Retromutacin
Mutagnesis dirigida:
Mutagnesis qumica:
- Analogos de base: sustancias que se cambian por una base pero que no
lo son.
- Agentes intercelulares:
- Sustancias que reaccionan con el ADN
Mutagnesis fsicas
Recombinacin (HGT):
*HGT: Transferencia Horizontal de Genes.
Es la mayor fuente de mutacin en microorganismos.
Transformacin:
importacin de ADN de un microorganismos a otro. Si a informacin
proviene de un virus se denomina transinfeccin.
En GRAM + el ADN entra directamente en la clula, mientras que en GRAM entre
dentro de vesiculas denominadas transfosomas. No todas las clulas son competentes
de forma natural, es decir hay clulas que no pueden llevar a cabo la transfomacin
por si solas.
Transduccin:
transferencia de ADN de una clula a otra a traves de un fago.
Normalmente estos virus formados no son infectivos y necesitan ayuda de otro para
entrar en la clula, a este otro virus lo llamamos Helper y es un virus funcional. Hay dos
tipos de transduccin:
Tansduccin generalizada: se empaqueta cualquier regin del ADN del
hospedador en el virin. Normalmente estos virus formados no son infectivos y
necesitan ayuda de otro para entrar en la clula, a este otro virus lo llamamos
Helper y es un virus
funcional.

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Transducin especifica: se integra una regin especifica del ADN del


hospedador en el virin. Sera la zona periferica al punto de unin del ADN
virico y el ADN celular. Se da por un problema en la
esciin.

Conjugacin:
transferencia gentica que involucra contacto clula a clula.
*Plamido F: molcula de ADN circular. Contiene genes que regulan la replicacin.
Contiene elementos transponibles que permiten la integracin en el cromosoma del
redeceptor.
Tipos de plasmidos:

Episoma: puede integrarse en el cromosoma.


Plasmidos conjugaivos: como el plasmido F.
Plasmidos de resistencia: como el plasmido R.
Plasmidos de virulencia.
Plasmidos cripticos: no savemos para que codifican.

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