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Química de los alimentos 257 (2018) 295–301

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Química de Alimentos

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Análisis nutricional de suplementos dietéticos de Espirulina: Procedimiento de t

optimización de la digestión asistida por ultrasonido para determinación multielemental
Bárbara D. Nehera, Silvana M. Azcárateb,c, José M. Camiñab,c, Marianela Saviob,c,
a
Instituto de Química de San Luis, Av Ejercito de los Andes 950, D5700BPB San Luis, Argentina
b
Facultad Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de La Pampa, Av. Uruguay 151, L6300XAI Santa Rosa, La Pampa, Argentina Instituto de
C
Ciencias de la Tierra y Ambientales de La Pampa (INCITAP), Mendoza 109, L6302EPA Santa Rosa, La Pampa, Argentina

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACTO

Palabras clave: Arthrospira platensis y Arthrospira maxima son un tipo de microalga azul verdosa utilizada como complemento dietético
Suplementos nutracéuticos de espirulina (Spirulina). Se realizó una digestión asistida por ultrasonido (UAD) de suplementos de espirulina que requiere poco tiempo
Diseño experimental para la determinación de elementos múltiples mediante espectrometría de emisión atómica de plasma inducida por microondas (MPAES).
Digestión asistida por ultrasonido
Se evaluaron mediante un diseño factorial completo varios parámetros como la concentración de ácido (AC), el baño de agua
Componentes nutricionales
termostatizado (TWB), el tiempo de digestión (DT) y la UAD (sonda o baño) que afectan el proceso de digestión. En las
Determinación multielemental
condiciones óptimas −100 °C para TWB, 5% para AC y 10 min para DT­ y seleccionando el baño como sistema UAD adecuado,
las concentraciones de 15 analitos (Al, Ba, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe , K, Mg, Mn, Na, Ni, P, V, Zn).
Los valores están de acuerdo con la recomendación establecida por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) a
excepción de Cd. El conocimiento de la composición multielemental de la Espirulina contribuye a un excelente informe
nutricional y toxicológico para la salud humana.

1. Introducción Mehdi, Abolghasem y Mehran, 2016).

Espirulina es el nombre común de los complementos dietéticos producidos
principalmente a partir de dos especies de cianobacterias, a saber, A. platensis y A.
maxima. Se cultivan a gran escala en numerosos países con fines comerciales (Cencic
y Chingwaru, 2010; FDA, 2017), y se comercializan como suplemento dietético siendo
considerados 'nutracéuticos' por su amplio uso como fuente rica en minerales, proteínas,
antioxidantes, ácidos grasos poliinsaturados, carotenoides, entre otros (Kepekçi, Polat,
Çelik, Bayat, & Saygideger, 2013; Ngo­Matip et al., 2014). Los suplementos de espirulina
han sido certificados como seguros y, por lo tanto, pueden usarse como productos
alimenticios (FDA, 2011).
Actualmente, la espectrometría de emisión atómica de plasma inducida por
microondas (MPAES) es una técnica de plasma desafiante que se utiliza para la
determinación de numerosos elementos traza (Jankowski y Reszke, 2010). Las
principales ventajas están relacionadas con la detección simultánea de múltiples
elementos, alta sensibilidad, amplio rango de respuesta lineal y bajo nivel de ruido
(Jankowski & Reszke, 2010; Zaldarriaga Heredia, Cina, Savio, Gil, & Camiña, 2016). Sin
embargo, desarrollar una metodología analítica adecuada para la preparación de
muestras que permita la introducción a MPAES es una etapa crítica en el proceso
analítico; debe tener en cuenta la veracidad de las mediciones, la disponibilidad de
instalaciones y equipos, la simplicidad del procedimiento y la rapidez de la determinación.

Para evaluar la calidad de los productos de Espirulina, es necesario analizar
componentes como el contenido de proteínas (hasta un 70%), junto con la cantidad de
ácidos grasos esenciales, aminoácidos esenciales, vitaminas, pigmentos antioxidantes
(ficobiliproteínas, carotenoides), clorofila y polisacáridos, también es importante evaluar
el contenido mineral nutricional y toxicológico. Los metales traza en las células de las
algas están presentes en cantidades extremadamente pequeñas; sin embargo, son un
componente esencial de la ficofisiología. Cobalto (Co), cobre (Cu), hierro (Fe), manganeso
(Mn), níquel (Ni) y zinc (Zn) son los seis metales traza más importantes que necesitan
las algas para diversas funciones metabólicas ( Akbarnezhad,
Como alternativa a la digestión en horno de microondas (MW) convencional para la
preparación de muestras, la digestión asistida por ultrasonidos (UAD) es actualmente
una tendencia creciente en la química analítica (Ilander & Väisänen, 2007; Lima, Da
Costa, Ferreira, Richter, & Munoz , 2014; Lima, Lima, Richter, & Muñoz, 2016; Priego­
Capote & Luque de Castro, 2004a, 2004b; Vudagandla, et al., 2017). Las aplicaciones
de la UAD para la extracción de lípidos, proteínas, flavonoides, carotenoides y
compuestos aromáticos están bien informadas en la literatura (Dey & Rathod, 2013;
Krug & Piovezani Rocha, 2016). Sin embargo, un estudio que compara diversos tipos de
ultrasonido para la digestión mineral con suplementos de espirulina no ha sido confirmado.

Autor para correspondencia en: Instituto de Ciencias de la Tierra y Ambientales de La Pampa (INCITAP), Mendoza 109, L6302EPA Santa Rosa, La Pampa, Argentina. Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales, Universidad Nacional de La Pampa, Av. Uruguay 151, L6300XAI Santa Rosa, La Pampa, Argentina.
Dirección electrónica: msavio@exactas.unlpam.edu.ar (M. Savio).

https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2018.03.011 Recibido el
5 de diciembre de 2017; Recibido en forma revisada el 27 de febrero de 2018; Aceptado el 5 de marzo de 2018
Disponible en línea el 8 de marzo de
2018 0308­8146/ © 2018 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
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desarrollado todavía.
Por lo tanto, en este trabajo se propone una UAD rápida y sencilla para la preparación de
muestras de Espirulina. Se realizó un diseño experimental para decidir qué sistema ultrasónico
se utilizará y encontrar la condición óptima para el tratamiento de la digestión. Para evaluar el
aseguramiento de la calidad, se realizó por parte del MPAES la determinación multielemental
de muestras de Espirulina adquiridas de diferentes empresas farmacéuticas, reportando la
concentración de elementos mayores, menores y tóxicos.
2. Experimental
2.1. reactivos
Se produjo agua desionizada ultrapura (resistividad de 18,2 mΩ) mediante un ultrapurificador
Millipore (Darmstadt, Alemania). El HNO3 concentrado (Merck, Darmstadt, Alemania) se obtuvo
mediante destilación en un sistema de destilación por subebullición Berghof® (Eningen,
Alemania). El paso de calibración se utilizó en una matriz de 5% HNO3, con 100 μg mL­1 de
estándares multielementos (SPC, Quebec, Canadá).
2.2. Muestreo
Se adquirieron en Argentina suplementos nutracéuticos de espirulina de diferentes
empresas farmacéuticas. Un total de once (11)
Se analizaron muestras de suplementos de espirulina: cinco comprimidos y seis cápsulas. Las
muestras de tabletas se trituraron usando un mortero.
Mientras tanto, las cápsulas se retiraron del envoltorio y los polvos se utilizaron directamente
para el análisis.
2.3. Procedimiento analítico para la preparación de muestras.
Digestión asistida por ultrasonido: Se pesaron con precisión muestras de espirulina (0,6 g
de polvo seco) y se transfirieron a matraces de polipropileno (PP) sin metal con tapón de rosca.
Un ácido oxidante fuerte, como HNO3, se usa ampliamente para mejorar la mineralización del
material orgánico, mejorando la digestión de la muestra mediante la formación de complejos de
elementos solubles (Krug & Piovezani Rocha, 2016). Así, las muestras se acidificaron con
HNO3 al 5% y se colocaron en un baño de agua termostatizado a 100 °C durante 30 min.
Luego, se realizó UAD durante 10 minutos utilizando un baño de agua con ultrasonido.
Las suspensiones obtenidas, enfriadas a temperatura ambiente, se diluyeron hasta 20 ml con
agua desionizada. Finalmente, las muestras se centrifugaron durante 5 min a 3000 rpm y el
sobrenadante se utilizó para las determinaciones analíticas. También se procesaron reactivos
en blanco.
Los estudios comparativos se lograron mediante MW utilizando 0,6 g pesados con precisión
de muestras secas, transferidos a un tubo de politetrafluoroetileno (PTFE) de 100 ml
herméticamente sellado y añadidos con 5 % v/v de HNO3.
Luego estos tubos se colocaron en el sistema de microondas Anton Paar y se realizó un
programa de dos pasos (15 min hasta 240 °C y luego se mantuvo durante 10 min a 240 °C).
Posteriormente, todas las muestras se transfirieron a un tubo volumétrico de 20 ml y se
diluyeron con agua desionizada para marcar.
2.4. Instrumentación
La determinación multielemental se llevó a cabo mediante MPAES Agilent MP 4100 (Santa
Clara, EE. UU.), que consta de un nebulizador One Neb inerte, una cámara de nebulización
ciclónica de vidrio de doble paso y un sistema de muestreo automático SPS3. Se empleó un
monocromador Czerny­Turner con un detector de matriz de dispositivo de carga acoplada
(CCD). MPAES 4100 funciona “con aire”, utiliza un generador de nitrógeno en línea (Agilent
4107), que toma el aire del ambiente y lo separa en nitrógeno. El flujo de gas plasma se fijó en
20 L min­1 y el flujo de gas auxiliar se fijó en 1,5 L min­1 . Para la determinación multielemental,
se aplicaron configuraciones comunes: tiempo de absorción de 13 s, tiempo de estabilización
del plasma con aspiración de muestra de 15 s, tiempo de lectura de 3 s (leído por triplicado) y
tiempo de lavado de 20 s.
Se utilizó corrección de fondo automática. Los parámetros operativos, como la posición de
visualización y la presión del nebulizador, se optimizaron para
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cada elemento.
Para la preparación de las muestras se utilizó un baño María de ultrasonido Testlab
(Buenos Aires, Argentina) con una frecuencia de 40 kHz y una potencia de 160 W así como una
sonda de ultrasonido con una frecuencia de 20 kHz y una potencia de 50 W. Además, el MW se
llevó a cabo utilizando un sistema de microondas Anton Paar MW 3000 (Graz, Austria). Los
materiales de vidrio y plástico utilizados durante el estudio se limpiaron con ácido nítrico al 10%
durante 24 h antes de su uso y se lavaron con agua desionizada ultrapura.
2.5. Análisis de los datos
El diseño experimental, como conjunto de herramientas estadísticas y matemáticas, fue
útil para desarrollar, mejorar y optimizar el proceso de digestión utilizando un diseño factorial
completo de dos niveles que involucra cuatro variables que influyen en la digestión de la
muestra. Los datos experimentales se procesaron mediante el uso del paquete de software
estadístico Unscrambler X 10.3 (CAMO­ASA, Trondheim, Noruega).
Todos los cálculos relacionados con calibraciones, cifras de mérito, estudios de
recuperación, correlaciones y comparaciones, y las pruebas estadísticas correspondientes se
realizaron utilizando MATLAB (2014b). Se utilizó un ambiente basado en las rutinas conocidas
(disponibles en www.iquironicet.gov.ar/des­cargas/univar.rar) así como otras rutinas caseras
(Olivieri, 2015).
3. Resultados y discusión
3.1. Optimización de las condiciones de preparación de muestras.
3.1.1. Fase de selección Los
efectos de los ultrasonidos sobre el rendimiento y la cinética de la digestión difieren según
la naturaleza del material a extraer. Los organismos Arthrospira presentan una matriz orgánica
compleja como consecuencia del peptidoglicano en la pared celular, además en los
suplementos nutracéuticos de Spirulina es posible encontrar la presencia de excipientes
utilizados para la elaboración de cápsulas (Ciferri, 1983). Por tanto, cuando se trabaja con
matrices complejas, la selección de las condiciones óptimas para el pretratamiento de la
muestra es una tarea difícil que requiere una cantidad considerable de tiempo y análisis. Por
esta razón, y con el fin de conocer las mejores condiciones para la digestión de la muestra de
Espirulina, se seleccionó la UAD y se construyó un diseño factorial completo de dos niveles
tomando en cuenta los parámetros que a la vez dan información sobre las principales
contribuciones e interacciones. relación entre variables (Dejaegher & Vander Heyden, 2011;
Leardi, 2009).
En consecuencia, la digestión de la muestra podría realizarse en dos diseños generales
de sistema asistido por ultrasonido: baños de agua o sondas. Los principales factores que
favorecen la mejora de la digestión con potencia ultrasónica son los efectos mecánicos que
inducen una mayor penetración del disolvente en los materiales y mejoran la transferencia de
masa, facilitando la liberación de los componentes de la muestra. Los baños de agua con
ultrasonidos se utilizan con frecuencia porque son más económicos que las sondas; aunque las
sondas muchas veces requieren un tiempo de digestión más corto (Krug & Piovezani Rocha,
2016).
Los usos del ultrasonido han podido mejorar, acelerar o automatizar la preparación de
muestras, potenciar la calidad, reducir el tiempo de procesamiento, los riesgos químicos y
físicos además de ser amigables con el medio ambiente (Krug & Piovezani Rocha, 2016; Priego­
Capote & Luque de Castro, 2004a , 2004b). Por esta razón, los factores analizados de los
sistemas UAD fueron: baño (bUAD) y sonda (pUAD), sumado a concentración de ácido (AC),
baño maría termostatizado (TWB) y tiempo de digestión (DT). Estos factores se evaluaron en
dos niveles cada uno (Tabla S1), niveles bajo (­) y alto (+): 1% y 5% para AC, 50 °C y 100 °C
para TWB, y 2 min y 10 min para DT, en ambos, bUAD o pUAD, respectivamente.
Teniendo en cuenta que la espirulina contiene diferentes concentraciones de analitos, se
adquirió una situación de compromiso para optimizar el método propuesto utilizando cuatro de
los analitos en estudio. Así, la evaluación consistió en la determinación multielemental de Ca,
K, Mg,
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Fig. 1. Diagrama de Pareto que ilustra los efectos principales y de interacción de los factores que afectan el sistema de digestión A: baño de agua termostatizado (TWB), B: concentración de ácido (AC), C: tiempo de digestión
(DT), y D: sistemas de digestión asistida por ultrasonidos (UAD), para las respuestas (RAS) estudiadas de a) Ca, b) Mg, c) K y d) Na.

y Na en muestras de Espirulina, evaluándose como respuesta de diseño la relativa variables de respuesta (Long, Zhang & Lei, 2013; Witek­Krowiak,
señal analítica (RAS) de cada elemento. Para evaluar el modelo Chojnacka, Podstawczyk, Dawiec y Pokomeda, 2014). El objetivo de optimización es
falta de ajuste, se llevó a cabo una réplica de los experimentos. encontrar las condiciones de operación que aseguren el cumplimiento de
Los experimentos se realizaron en orden aleatorio para garantizar la los criterios de cada respuesta. Así, los factores TWB, AC y DT utilizando bUAD
independencia de resultados y minimizar los efectos de factores no controlados. fueron tomados en cuenta para evaluar los efectos más importantes sobre la
Luego, una fase de selección para la determinación de los factores que afectan sistema.
la digestión de la muestra se realizó sobre los resultados del diseño. Análisis de Los datos experimentales proporcionados por el diseño factorial completo se realizaron
La varianza (ANOVA) y el valor p se utilizaron para evaluar la importancia de mediante análisis de regresión. La relación entre cada respuesta.
los efectos, principales efectos y sus interacciones mutuas sobre la eficiencia y las variables se ajustaron a las siguientes ecuaciones polinómicas.
de cada extracción de analito se representan en los diagramas de Pareto (Fig. 1). A
Ca 87,2 1,3 CA 0,6 DT 0,4 CA DT = − − +
Una sola variable representa un efecto principal, mientras que aquellas caracterizadas en
conjunto indican una interacción entre ellas (Leardi, 2009). Pareto =
Mg 70,2 0,1+TWB
− 2,5+ CA 0,1 TWB A C
Se utilizaron gráficos para evaluar la significancia de las variables utilizadas en el
K 85,3
= − 1,5
− CA
+ 0,8 DT
T 0,5 CA D
diseño experimental para el valor de respuesta elegido. Valores positivos
(barras azules) denotan una relación proporcional directa de la variable Na 110,5 0,3 TWB 4,6 CA 0,5 DT 0,1 TWB CA = − − + +
con la respuesta; mientras que los valores negativos (barras rojas) reflejan una inversa
relación. Utilizando un valor de confianza de p = 0,05, basado en un valor nulo siendo Ca, Mg, K y Na las respuestas predichas (RAS), y TWB,

prueba de hipótesis, los valores que exceden este límite (línea horizontal) se consideran AC y DT la linealidad y los coeficientes del modelo interactivo.

significativos para los valores de respuesta. Se llevó a cabo un análisis de varianza para justificar la significancia y

Los resultados del diseño demostraron que las variables TWB, AC y DT adecuación del ajuste del modelo de regresión. Importancia estadística de la

y las interacciones entre TWB­AC y AC­DT fueron significativas, afectando la respuesta El modelo se estableció en p ≤ 0,05. El valor F del modelo para RAS de Ca,

(nivel de confianza del 95%). Las interacciones producidas Mg, K y Na fueron 15,1, 20,9, 13,2 y 5,4, respectivamente, lo que indica

entre estas variables eran esperadas porque cuanto más larga sea la digestión que los modelos eran significativos. Así, los coeficientes de determinación.

proceso, cuanto más largo sea el contacto entre la muestra y el reactivo de digestión bajo (R2 ) de los modelos fueron superiores a 0,82 para todas las respuestas. Además,

temperatura específica alcanzada en el sistema. Por esta razón, los resultados relativamente coeficiente de variación alcanzó valores bajos: 3,4, 4,1, 3,7 y

demostró que el DT mínimo proporciona una digestión ineficaz para el 4,4% para los modelos Ca, Mg, K y Na, respectivamente, lo que demuestra que el

muestras. Por otro lado, el uso de UAD no presentó efectos significativos sobre RAS, por la variación fue aceptable y satisfactoria (Long et al., 2013). Finalmente,
de la evaluación de los valores residuales se pudo corroborar que
lo que bUAD o pUAD podrían usarse indistintamente. En consecuencia, por simplicidad y
rapidez del procedimiento, además de evitar una posible contaminación cruzada con la los datos no presentan desviación de la normalidad (Fig. S1). En todos los casos,

sonda, se utilizó bUAD. No se requirió la transformación de la respuesta.

elegido para la siguiente fase de optimización de las condiciones de digestión de la muestra Para visualizar los efectos interactivos de variables independientes.

de espirulina. En cuanto a las respuestas, se desarrollaron gráficos de superficie de respuesta

tridimensionales (3D) mediante las ecuaciones del modelo mencionadas anteriormente. Las relaciones
entre las variables independientes y los valores de respuesta podrían ser
3.1.2. Fase de optimización Se ve notablemente en las superficies de respuesta 3D, como se muestra en la Fig. S2. las variables
Para confirmar las condiciones óptimas, se lleva a cabo una fase de optimización. Se combinaron TWB, AC y DT que afectan RAS de cada analito estudiado.
se realizó evaluando la relación entre independientes y en dos gráficos de superficie 3D mientras que la otra variable se mantuvo constante.

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Por lo tanto, se puede observar que el RAS para los cuatro analitos del estudio cambia
significativamente cuando el AC aumenta del 1% al 5% y cuando el DT
aumentado de 2 min a 10 min. Sin embargo, el comportamiento del factor TWB es
no es igual para todos los analitos: los valores más altos de RAS para Ca, Mg y K fueron
se encontraron a 100 °C mientras que para el Na se alcanzaron a 50 °C. Esto demuestra que el
El AC influyó en la extracción, y se recomendó el uso de ácido nítrico al 1%.
no es suficiente para una digestión cuantitativa. Por otro lado, la diferencia entre DT es
razonable ya que aumenta el tiempo de salida de bUAD
proporcionando más energía y temperatura en el seno de suspensión
(Machado, Dol, Rodríguez­Arce, Cesio y Pistón, 2016).
Se eligió la optimización del rango numérico de TWB, AC y DT y
Se maximizó el RAS para cada analito. Según estos resultados y
Considerando el mejor valor de compromiso de la respuesta conjunta, las condiciones
óptimas de digestión fueron 100 °C para TWB, 5% para AC y 10 min.
DT para obtener el RAS más alto. Así, el RAS teórico calculado por
ecuación polinómica y los factores del modelo optimizados para Ca, Mg, K y
Na fueron 97,3%, 99,0%, 97,0% y 93,8%, respectivamente.
Además, experimentos de confirmación en las condiciones óptimas.
se llevaron a cabo. Luego, los resultados experimentales obtenidos se compararon con
los resultados teóricos para validar los resultados predictivos.
modelo. Los valores RAS de los experimentos validados de Ca, Mg, K y
Na fueron 93,5%, 95,7%, 92,0% y 89,6%, respectivamente, que estuvieron en
Estrecho acuerdo con los resultados previstos, logrando errores de predicción.
inferior al 10%.
3.2. Optimización automática interna del instrumento.
En MPAES, el plasma tiene visualización axial para una sensibilidad óptima y
mejores límites de detección, aunque esté orientado verticalmente para
Manejo mejorado de la matriz. La mejor posición de visualización en el instrumento.
se evaluó para cada longitud de onda del elemento con el objetivo de alcanzar la
mejor rendimiento analítico. Además, para adquirir la más alta capacidad analítica
señal para cada elemento, es necesario determinar la presión del gas nebulizador.
optimizado para transformar la solución de muestra en una fina niebla de
gotitas finamente divididas. Estos flujos transportan la muestra a la región de
atomización. Una vez optimizado el equipo cambia automáticamente
para cada analito por lo que se dice que la determinación es casi simultánea.
Los cambios de la señal analítica en función de la posición de visualización y
La presión del gas en el nebulizador se resume en la Tabla 1.
3.3. Comparación previa al tratamiento
La extracción de analitos depende en gran medida de su interacción con el
reactivos y la matriz en la que se encuentran. Además, el tamaño de las partículas de
una muestra sólida juega un papel decisivo en las suspensiones.
estabilidad durante la aspiración, el transporte y la introducción de la muestra, así como
como eficiencia de atomización. Es deseable en estudios MPAES que las partículas
se transportan eficientemente a través del sistema de introducción de muestras, y
que los procesos de descomposición de partículas así como la atomización/
Las excitaciones de los analitos son idénticas a las obtenidas con las soluciones (Krug
& Piovezani Rocha, 2016).
Comparando la digestión UAD con MW, MW tiene un sello hermético que
Permite la descomposición completa de las muestras a altas temperaturas.
y presiones, evitando volatilización analítica o pérdida de muestra. En
Por otro lado, el UAD es un sistema abierto, lo que hace que no se alcance la
temperatura y presión necesarias para una digestión completa.
eficientemente, influyendo mucho en el tamaño de partícula de la muestra. Sin embargo,
existen estudios que utilizan UAD como pretratamiento de muestras que alcanzan
resultados satisfactorios. (Krug & Piovezani Rocha, 2016; Machado, Dol,
et al., 2016; Machado, Bergmann & Pistón, 2016; Ruiz Díaz et al.,
2015).
Para evaluar si la muestra propuesta y seleccionada
preparación (bUAD) es comparable al MW convencional, una recuperación
Se evaluó el estudio. Se seleccionaron al azar tres muestras y se les añadió
con 5 μg g−1 y 100 μg g−1 para elementos menores y elementos mayores,
respectivamente. Las digestiones se realizaron por triplicado como se indica en
subsección 2.3, y la determinación multielemental se llevó a cabo mediante
MPAE. La Tabla 2 expone el porcentaje de recuperación de analitos, que muestra que
las recuperaciones de casi analitos (Ag, Al, Ba, Be, Ca, Cd, Co, Cr, Cu, Fe,
K, Mg, Mn, Na, Ni, P, Pb, V, Zn) estuvieron entre 85 y 115%. Además, el método bUAD
se comparó estadísticamente con MW utilizando al menos
(α = 0.05, n = 3), y no hubo diferencias significativas entre ambos tratamientos, lo que
demuestra que bUAD podría proponerse como
una opción interesante, rápida y económica para el pretratamiento de
Muestras de suplementos nutracéuticos de espirulina.
Es importante resaltar que el sistema MW cuenta con un rotor de 16 posiciones,
permitiendo solo unas pocas muestras a la vez, mientras que el bUAD propuesto
permite un mayor número de muestras en el mismo período de tiempo (50 muestras
podría ser digerido en el baño de ultrasonidos mientras se realiza una digestión
en megavatios). Los tubos se colocaron en la región de mayor intensidad de cavitación,
también según la literatura (Krug & Piovezani Rocha,

tabla 1
Figuras de mérito modelado de datos computarizados; y posición de visualización optimizada y presión del gas nebulizador para alcanzar la mejor señal analítica para cada analito en el MPAES.

Analitos λ Posición de visualización Presión del gas del nebulizador Sensibilidad (×104 ) LOD LOQ RSD
(Nuevo Méjico) [μgg ­1 ] [μgg ­1 ] [%]

Ag 328.068 −20 220 2.90 0,59 1.74 3.86

Alabama 396.152 0 220 1.23 113,84 326.10 1.37
Licenciado en Letras 455.403 0 220 5.65 1.08 3.22 4.50
Ser 234.861 0 140 34.29 0,65 1,94 2.76
California 422.673 −20 240 124.07 5.18 15.42 3.53
Cd 228.802 −10 220 1.33 0,61 1.81 3.32
Co 340.512 −20 220 0,53 0,57 1.71 2.66
cr 425.433 −20 220 1,67 0,68 2.01 5.80
Cu 324.754 −20 220 6.41 0,62 1,85 3.39
fe 371.993 −10 220 0,47 287,98 856,74 2.14
k 776.491 −10 220 2.07 831.74 2382.56 1,79
magnesio
285.213 −20 240 135,71 1,63 4.85 1,78
Minnesota 403.076 −10 180 1,63 0,49 1.46 3.52
N/A 589.592 −10 240 172,18 1,76 5.24 8.72
Ni 352.454 −10 220 0,99 0,66 1,96 5.00
PAG 213.618 −10 220 0,02 367,54 1063.04 3.34
Pb 283.305 −20 220 0,19 5,70 16,34 1,86
V 437.923 0 180 0,75 0,69 2,04 4.57
zinc 481.053 −20 140 0,94 0,96 2,87 3.76

λ: longitud de onda; LOD: límite de detección; LOQ: límite de cuantificación; RSD: desviación estándar relativa.
Todos los parámetros se calcularon considerando 15 puntos de calibración y 3 réplicas por muestra.

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Tabla 2 Tabla 3
Porcentajes de recuperación de los analitos (n = 3) determinados después de la muestra propuesta Análisis de linealidad.
método de preparación (bUAD) en comparación con el convencional (MW).
Parámetro del analito
analito Recuperación [%]
Rango de linealidad Pendiente ± SDa Fexpb R2 Falta de ajuste
BUAD megavatio
(μgg ­1 ) (valor p)c

Ag 97,45 ± 2,76 103,21 ± 3,12 Ag 1,74–120,00 29022 ± 368 1,596 0,998 0,188
Alabama 93,65 ± 5,08 99,98 ± 1,06 Alabama 326,10–2000,00 12291 ± 191 2,381 0,997 0,068
Licenciado en Letras 99,93 ± 0,19 96,14 ± 3,17 Licenciado en Letras 3,22–120,00 56532 ± 563 1,170 0,999 0,389
Ser 105,56 ± 9,45 87,20 ± 9,58 Ser 1,94–40,00 342868 ± 5671 0,890 0,999 0,587
California 96,40 ± 2,65 94,24 ± 3,39 California 15,42–300,00 1240664 ± 18193 1,146 0,998 0,413
Cd 105,12 ± 1,02 96,15 ± 8,03 Cd 1,81–120,00 13302 ± 389 1,564 0,999 0,199
cr 96,13 ± 16,57 84,34 ± 10,41 Co 1,71–120,00 5285 ± 49 1,392 0,998 0,267
Cu 97,15 ± 2,19 99,43 ± 0,87 cr 2,01–120,00 16652 ± 223 1,291 0,999 0,317
fe 99,96 ± 3,19 98,71 ± 0,54 Cu 1,85–120,00 64145 ± 816 2,097 0,999 0,082
k 97,10 ± 5,07 98,88 ± 6,36 fe 856,74–12000,00 4726 ± 64 0,786 0,999 0,694
magnesio
99,28 ± 1,86 94,07 ± 4,52 k 2382,56–20000,00 20741 ± 235 2,243 0,998 0,082
Minnesota 98,44 ± 0,90 99,47 ± 1,97 magnesio
4,85–300,00 1357110 ± 13170 1,145 0,999 0,405
Mes 98,70 ± 1,91 99,98 ± 3,22 Minnesota 1,46–120,00 16308 ± 210 1,382 0,998 0,272
N/A 100,96 ± 9,27 89,83 ± 12,31 N/A 5,24–600,00 1721787 ± 30124 0,897 0,999 0,596
Ni 98,97 ± 6,45 89,53 ± 9,37 Ni 1,96–120,00 9945 ± 113 1,598 0,998 0,188
PAG 99,88 ± 6,23 98,98 ± 5,20 PAG 1063,04–12000,00 219 ± 2 0,781 0,999 0,698
Pb 99,02 ± 2,74 92,57 ± 6,21 Pb 16.34–60.00 1892 ± 53 0,915 0,997 0,575
V 97,99 ± 2,89 89,08 ± 5,09 V 2,04–120,00 7551 ± 93 1,384 0,998 0,271
zinc 100,09 ± 7,02 98,47 ± 9,54 zinc 2,87–120,00 9364 ± 98 1,546 0,998 0,205

a
Valores expresados como media ± Intervalo de Confianza (IC). SD = valores de desviación estándar.
b
Prueba F para la determinación de linealidad. Ftab = 2,892.
C

2016; Mason y Lorimer, 2002; Muñoz, Oliveira y Angnes, 2006; Dado que el valor p de la falta de ajuste es mayor o igual a 0,10, el modelo
es adecuado para los datos observados.
Nascentes, Korn, Sousa y Arruda, 2001). Por lo tanto, a pesar del hecho
que el horno microondas sea seguro para los usuarios, permita la descomposición completa
Para evaluar si las recuperaciones fueron estadísticamente diferentes al 100%, se aplicó
de las muestras a altas temperaturas y presiones; la UAD
una prueba de hipótesis. Las recuperaciones son
tiene las ventajas de mejorar la productividad, la simplicidad del procedimiento y
considerado estadísticamente diferente al 100% cuando t experimental (texp)
Rapidez de determinación como se prueba en este trabajo.
valor excede el valor crítico t(α,υ) en el nivel α y υ = n − 1 grados de
libertad (n = número de muestras) (Olivieri, 2015). Considerando el 95%
3.4. Rendimiento analítico
nivel de confianza, valores texp para todos los analitos en las muestras de validación
fueron inferiores al valor crítico t(0,025,2) = 4,303, lo que indica que las recuperaciones no
3.4.1. Veracidad
fueron estadísticamente diferentes al 100%.
Para este protocolo de validación, la veracidad debe evaluarse utilizando un
material de referencia certificado. Sin embargo, como no estaba disponible en nuestro
laboratorio, la veracidad se evaluó mediante pruebas de adición y recuperación 3.4.4. Límite de detección y cuantificación.

con criterios de aceptación entre 85% y 115% (Camera et al., 2017). Según las últimas recomendaciones de la IUPAC, la estimación de

En este estudio, casi todos los analitos alcanzaron el porcentaje de recuperación. El límite de detección (LOD) debe cumplir con dos condiciones: (1)

dentro de estos rangos, como se muestra en la Tabla 2. debe basarse en la teoría de la prueba de hipótesis, teniendo en cuenta
las probabilidades de una decisión falsa positiva y falsa negativa, y (2)
3.4.2. Precisión debe incluir todas las diferentes fuentes de error, tanto en la calibración como en

La precisión describe la cercanía de un conjunto de mediciones independientes obtenidas pasos de predicción que podrían afectar el resultado final (Olivieri & Allegrini,

de un procedimiento experimental y está relacionada únicamente con 2014). Límite de detección y límite de valores de cuantificación para los 15

dispersión y no desviación de un valor correcto o de referencia. En esto Los analitos se presentan en la Tabla 1. Además, la tabla muestra los

La precisión del trabajo para la validación del método se estableció como la desviación figuras de mérito para la determinación de oligoelementos por MPAES después

estándar relativa (RSD) de las mediciones. El RSD obtenido tratamiento de muestras mediante bUAD. El procedimiento recomendado alcanza el LOD

usando las tres curvas de calibración fue entre 1,37% para Al y 8,72% entre 0,49 μg g­1 y 831,74 μg g­1 ; y LOQ entre 1,46 μg g−1

para Na, logrando una buena precisión y cumpliendo con la aceptación establecida y 2382,56 μg g−1 para Mn y K, respectivamente.

criterio (Tabla 1).

3.4.3. Linealidad
En la Tabla 3 se presentan los resultados correspondientes al estudio de linealidad.
Luego de corroborar la normalidad de los datos, se realizó la prueba de Levene en
para evaluar la homogeneidad de varianzas, indicando como resultado la
homocedasticidad de los datos. Para la evaluación de linealidad, la bondad
de ajuste se probó comparando la varianza de la falta de ajuste con la
Varianza del error puro: el ajuste de cada modelo se estimó mediante aplicación.
de una prueba F. Se obtuvieron coeficientes R2 mayores a 0,99 de cada
curva de calibración del elemento.
Se construyó un conjunto de validación de tres muestras de tres niveles de concentración.
considerando concentraciones diferentes a las utilizadas para el conjunto de calibración
(Tabla S2). Las muestras de validación se prepararon como se describió anteriormente para
las muestras de calibración, y el error cuadrático medio de
Los valores de predicción (RMSEP) estuvieron por debajo del 2% en todos los casos.
3.5. Aplicación analítica
Los productos de suplemento nutracéutico de espirulina no se presentan como un
alimentación convencional (Cencic & Chingwaru, 2010). Bajo la dieta
Suplemento de la Ley de Educación y Salud (DSHEA, 1994)), el fabricante es responsable
de garantizar que sus productos sean seguros antes de ser comercializados.
se comercializan; mientras que la FDA regula tanto los productos de suplementos dietéticos
terminados como los ingredientes dietéticos (FDA, 2017).
Por tanto, los oligoelementos son importantes por su valor nutricional y/o
propiedades toxicológicas, contribuyendo a la caracterización de la calidad y
Adecuación de la dieta (Bilandžić, Sedak, Đokić, Božić y Vrbić, 2015). Rastro
Los elementos son propensos a contaminar los productos de espirulina y algunos podrían
producir el fin del crecimiento de las algas (Arunakumara, Zhang & Song, 2008;
Siva Kiran, Madhu, Satyanarayana, Kalpana y Subba Rangaiah, 2017).
Por citar algunos casos, Ni, Cu y Zn son componentes o componentes comunes de los fertilizantes.

299
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BD Neher et al. Química de los alimentos 257 (2018) 295–301

Tabla 4

Concentraciones medias de analitos (n = 3) y desviaciones estándar encontradas en los suplementos de espirulina [μg g­1 ].

Suplemento Alabama Licenciado en Letras California Cd cr

A < LOD < LOQ 60,01 ± 1,09 < LOQ < LOD
B 1270,02 ± 13,79 < LOD 41,35 ± 1,4 2.01 ± 0,05 < LOD
C < LOQ 36,22 ± 0,95 277,35 ± 5,33 < LOQ 3,32 ± 0,07
D < LOQ < LOD 34,94 ± 1,6 2.14 ± 0,08 < LOD
mi < LOD 3,79 ± 0,16 39,94 ± 1,19 1,82 ± 0,01 < LOD
F < LOD 5,09 ± 0,06 60,24 ± 0,27 1,85 ± 0,01 < LOD
GRAMO
< LOQ 28,84 ± 0,36 454,05 ± 9,52 2.02 ± 0,05 3,74 ± 0,06
h < LOD 23,94 ± 0,2 195,79 ± 3,32 1,86 ± 0,08 < LOQ
I < LOD 4,61 ± 0,13 82,59 ± 6,49 1.74 ± 0,03 < LOD
j < LOQ 16,94 ± 0,78 103,28 ± 8,79 1,88 ± 0,03 2,98 ± 0,06
k < LOD 17,71 ± 0,26 285,03 ± 6,64 2.00 ± 0,03 0,95 ± 0,04

Suplemento Cu fe k magnesio
Minnesota

A 832,26 ± 115,6 < LOD 6414 ± 130 880 ± 31.3 6,34 ± 0,56
B < LOD < LOD < LOD 1062 ± 32,9 < LOD
C 2,72 ± 0,1 889,7 ± 15,4 11670 ± 141 2271 ± 30,6 75,8 ± 2,51
D < LOD < LOD < LOD 11 ± 0,22 < LOD
mi < LOQ < LOD < 9420,5 ± 54,8 1501 ± 105 20,9 ± 0,95
F 2,45 ± 0,19 LOQ 10644 ± 64,2 1745 ± 20 35,1 ± 0,86
GRAMO 7,94 ± 0,06 11,98 905,8 ± 14,3 14058 ± 119 16610 2086 ± 32,7 91,2 ± 1,3
h ± 0,44 < LOQ ± 256 2118 ± 41,3 119 ± 2,97
I < LOQ < LOQ 18756 ± 376 1947 ± 43 47,6 ± 1,4
j 3,8 ± 0,22 < LOQ 18314 ± 413 2311 ± 115 109 ± 2,63
k 7,8 ± 0,16 < LOD 12950 ± 73,6 1264 ± 47,9 46 ± 1,05

Suplemento N/A Ni PAG V zinc

A 154,9 ± 7,99 5 ± 0,04 2740,4 ± 38,5 < LOQ 8928 ± 399

B 31,73 ± 2,15 7,72 ± 0,28 < LOD < LOQ < LOQ
C 187,07 ± 4,05 3,47 ± 0,07 7391,7 ± 106 < LOQ 13,8 ± 0,77
D 5,25 ± 0,07 8,91 ± 0,15 < LOQ < LOD < LOQ
mi 418,69 ± 31,07 2,03 ± 0,03 4279,7 ± 56,3 < LOQ 4,9 ± 0,58
F 335,11 ± 5,49 3,71 ± 0,03 5153,1 ± 102 < LOQ 6,82 ± 1,68
GRAMO 96,46 ± 1,66 2,75 ± 0,02 9887,1 ± 163 < LOQ 20,7 ± 0,24
h 553,49 ± 26,09 5,13 ± 0,32 7379,2 ± 138 2.14 ± 0,02 20,1 ± 0,23
I 798,06 ± 66,48 < LOQ 8422,8 ± 205 < LOQ 5,66 ± 0,33
j 590,48 ± 20,25 3,1 ± 0,06 11539 ± 337 < LOQ 11,7 ± 0,18
k 137,64 ± 2,53 3,91 ± 0,04 2590,8 ± 130 < LOQ 17 ± 0,15

<Valores LOD encontrados por debajo del límite de detección.

<Valores LOQ encontrados por debajo del límite de cuantificación.

Valores expresados como media ± IC.
Ag, Be, Co y Pb tuvieron un LOD más bajo.

contaminantes, pero son considerablemente menos tóxicos y tienen un estrecho
rango de concentraciones óptimas para algas y cianobacterias, al menos
en el caso de Cladophora y Spirulina (Arthrospira) (Doshi, Seth, Ray, &
Kothari, 2008). Sn, Cr y Al no son un peligro común, pero sí local.
Las condiciones deben evaluarse antes de que puedan eliminarse por completo.
como un posible riesgo.
La Tabla 4 expone las concentraciones de los 15 analitos encontrados en el
11 productos de suplemento nutracéutico de Espirulina analizados. Las concentraciones de
Ni estuvieron por debajo del nivel acordado por la FDA en todas las muestras.
(Egan, Bolger y Carrington, 2007). En el caso del Cd, las concentraciones
estaban por encima de los niveles permitidos por la FDA, esto podría explicarse por
la capacidad de las algas de bioacumular este elemento (Al­Homaidan,
Alabdullatif, Al­Hazzani, Al­Ghanayem y Alabbad, 2015). Acerca de
a la concentración de Cu y Zn, estaban dentro del rango permitido por la FDA,
sólo un suplemento mostró un nivel alto debido a la adición de estos analitos
como fortificación por parte de la empresa. Sin embargo, teniendo en cuenta la
cantidad de pastillas de suplemento ingeridas por día los valores, están dentro
las recomendaciones establecidas por la Comisión del Codex Alimentarius
(CODEX, 2008) y países latinoamericanos (García­Rico, Leyva­Perez, & Jara­Marini, 2007).
En el caso del suplemento B, mostró
alto nivel de Al, mientras que las muestras restantes mostraron concentraciones
inferior a los límites de cuantificación. Nuevamente, el nivel de Al para el suplemento B no
excede el nivel de ingesta diaria recomendado. el mismo caso
para las concentraciones de V, fueron inferiores al límite de cuantificación para el
la mayoría de las muestras, excepto el suplemento H. Seis de los 11
los suplementos (A, B, D, E, F, I) mostraron niveles de Cr por debajo de los límites de detección.
Mientras tanto, los suplementos de C, G, J y H confirman concentraciones más bajas
según la FDA. En el caso de Ag, Be, Co y Pb, los analizados
Las muestras de espirulina estaban por debajo del límite de detección. Los niveles detectados en
el presente artículo encaja dentro de los rangos de concentración observados en otros
estudios (Al­Dhabi, 2013; Ortega­Calvo, Mazuelos, Hermosin y Saiz­Jiménez, 1993). Sin
embargo, hubo valores más altos para Mg que los
informado anteriormente (Al­Dhabi, 2013). Sin embargo, los valores no superan el nivel de
ingesta diaria recomendado (CODEX, 2008; Planes et al.,
2002). Respecto a Ba, Ca, Fe, K, Mn, Na y P, concentraciones de todos
las muestras se encontraron por debajo de lo recomendado por el CODEX.
Es importante mencionar que los suplementos B y D se comercializan como Espirulina,
sin embargo, observamos la presentación como un
polvo blanquecino, muy diferente al verde azulado del resto de
otras marcas probadas. Por lo tanto, no pudimos concluir que los analitos cuantificados
representen la composición de la microalga para estos
muestras.
El resultado de este estudio revela que los elementos minerales en
Las muestras de espirulina son inferiores o cumplen con la ingesta diaria recomendada
nivel (IDR­mg/diario) establecido por la Comisión del Codex Alimentarius
(CÓDICE). Todos los analitos están de acuerdo con la recomendación.
establecido por la FDA, con excepción del Cd que tiene una concentración mayor a la
sugerida.

300
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BD Neher et al.
4. Conclusiones
Se utilizó por primera vez la espectrometría de emisión atómica de plasma inducida por
microondas (MPAES) para la determinación multielemental de suplementos nutracéuticos de
espirulina con el fin de evaluar su garantía de calidad.
Las muestras de suplementos de espirulina fueron mineralizadas adecuadamente por la
UAD, lo que permitió su introducción en el MPAES. Se desarrolló un diseño experimental
para mejorar y optimizar el proceso de digestión. El UAD que utiliza el sistema de baño es
rápido, sencillo, preciso y menos costoso que el MW. Las concentraciones de Al, Ba, Ca, Cr,
Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na, Ni, P, V, Zn en el suplemento dietético de Espirulina se encuentran
de acuerdo con la recomendación establecida por la FDA, a excepción del Cd. . En cuanto
al monitoreo de la seguridad alimentaria, el método propuesto es una alternativa atractiva
que podría implementarse fácilmente en laboratorios para análisis rutinarios de suplementos
nutracéuticos, considerando principalmente las capacidades de análisis multielementos del
MPAES, con la ventaja de ser sencillo y concordante. con química verde.
Expresiones de gratitud
Nos gustaría agradecer las becas de investigación del Consejo Nacional de
Investigaciones Cientifícas y Tećnicas (CONICET), Agencia Nacional de Promoción Cientifíca
y Tecnológica (ANPCYT) que apoyaron esta investigación. Proyecto de investigación
impulsado por la Universidad Nacional de La Pampa: Proyecto No. 99, 2016 (Investigadora
Principal: Dra. Marianela Savio).
Subsidios especiales para jóvenes investigadores R.3646/14, 2015, asignados a Marianela
Savio por el CONICET. Proyecto de investigación impulsado por CONICET­Argentina: PIO
UNLPam 15420150100002CO, 2015 (Investigador Principal: Dra. Camiña Jose M.). Proyecto
de investigación impulsado por la Universidad Nacional de La Pampa: Proyecto No. 96, 2015
(Investigador Principal: Dr.
Camiña, José M.).
Conflictos de interés
Los autores declaran que no tienen intereses en competencia.
Apéndice A. Datos complementarios
Los datos complementarios asociados con este artículo se pueden encontrar, en la versión en línea, en
http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2018.03.011.
Referencias
Akbarnezhad, M., Mehdi, SM, Abolghasem, K. y Mehran, JB (2016). Bioacumulación de Fe+2 y sus efectos sobre
el crecimiento y contenido de pigmento de la espirulina (Arthrospira platensis). AACL Bioflux, 9, 227–
238.
Al­Dhabi, NA (2013). Análisis de metales pesados en productos comerciales de Espirulina para consumo humano.
Revista Saudita de Ciencias Biológicas, 20, 383–388.
Al­Homaidan, AA, Alabdullatif, JA, Al­Hazzani, AA, Al­Ghanayem, AA y Alabbad, AF (2015). Eliminación por
adsorción de iones de cadmio mediante biomasa seca de Spirulina platensis.
Revista Saudita de Ciencias Biológicas, 22, 795–800.
Arunakumara, KKIU, Zhang, X. y Song, X. (2008). Bioacumulación de Pb2+ y sus efectos sobre el crecimiento,
morfología y contenido de pigmentos de Spirulina (Arthrospira) platensis . Revista de la Universidad
Oceánica de China, 7, 397–403.
Bilandžić, N., Sedak, M., Đokić, M., Božić, Đ. y Vrbić, A. (2015). Contenido de macro y microelementos y
evaluación de la ingesta de diferentes productos lácteos consumidos en Croacia. Revista de análisis y
composición de alimentos, 40, 143­147.
Cámara, AS, Passos Arcênio, P., Pacheco Filho, WO, Maranhão, TA, Santos de
Oliveira, FJ y Azzolin Frescura, VL (2017). Desarrollo y validación de métodos para la determinación de
azufre mediante molécula CS en coque verde de petróleo mediante espectrometría de absorción molecular
de fuente continua de alta resolución. Revista microquímica, 134, 301–308.
Cencic, A. y Chingwaru, W. (2010). El papel de los alimentos funcionales, nutracéuticos y complementos
alimenticios en la salud intestinal. Nutrientes, 2, 611–625.
Ciferri, O. (1983). Espirulina, el microorganismo comestible. Reseñas microbiológicas, 47,
551–578.
Código Alimentario Argentino – CODEX 2008 < https://www.biol.unlp.edu.ar/ alimentosysalud/
CAPITULO­XVIICAA.pdf >,< http://www.anmat.gov.ar/ alimentos/codigoa/CAPITULO_XVIII.pdf >
.
Dejaegher, B. y Vander Heyden, Y. (2011). Diseños experimentales y sus avances recientes
en configuración, interpretación de datos y aplicaciones analíticas. Revista de
análisis farmacéutico y biomédico, 56, 141­158.
Dey, S. y Rathod, VK (2013). Extracción asistida por ultrasonido de β­caroteno de
Spirulina platensis. Sonoquímica ultrasónica, 20, 271–276.
301
Química de los alimentos 257 (2018) 295–301
Ley de educación y salud sobre suplementos dietéticos de 1994, ley pública 103–417, < https://ods.
od.nih.gov/About/DSHEA_Wording.aspx > .
Suplementos dietéticos: Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU., < https://www.fda.gov/Food/
DietarySupplements/default.htm > 2017 < http://www.fda.gov/downloads/food/ingredientespackaginglabeling/
gras/noticeinventory/ucm269772.pdf > 2011 Doshi, H., Seth, C., Ray, A. y Kothari, IL (2008).
Bioacumulación de metales pesados por
alga verde. Microbiología actual, 56, 246–255.
Egan, SK, Bolger, PM y Carrington, CD (2007). Actualización de la lista de alimentos y dietas del Estudio de Dieta
Total de la FDA de EE. UU. Revista de ciencia de la exposición y epidemiología ambiental, 17, 573–
582.
García­Rico, L., Leyva­Pérez, J. y Jara­Marini, ME (2007). Contenido e ingesta diaria de cobre, zinc, plomo,
cadmio y mercurio provenientes de suplementos dietéticos en México. Toxicología química y alimentaria ,
45, 1599­1605.
Ilander, A. y Väisänen, A. (2007). Un método de digestión asistida por ultrasonido para la determinación de
concentraciones de elementos tóxicos en muestras de cenizas mediante espectrometría de emisión óptica
de plasma acoplado inductivamente. Analytica Chimica Acta, 602, 195­201.
Jankowski, KJ y Reszke, E. (2010). Espectrometría analítica de plasma inducido por microondas.
Real Sociedad de Química.
Kepekçi, RA, Polat, S., Çelik, A., Bayat, N. y Saygideger, SD (2013). Efecto protector de la Spirulina platensis
enriquecida en compuestos fenólicos frente a la hepatotoxicidad inducida por CCl4. Química de los
alimentos, 141, 1972–1979.
Krug, FJ y Piovezani Rocha, FR (2016). Métodos de preparación de demostraciones para análisis.
elemental. Brasil: Sociedade Brasileira de Química.
Leardi, R. (2009). Diseño experimental en química: un tutorial. Analytica Química Acta,
652, 161–172.
Lima, AF, Da Costa, MC, Ferreira, DC, Richter, EM y Muñoz, RAA (2014). Tratamiento rápido asistido por
ultrasonidos de fertilizantes inorgánicos para la determinación de mercurio mediante espectrometría de
absorción atómica y espectrometría de plasma inducida por microondas con ayuda de la técnica de vapor
frío. Revista microquímica, 118, 40–44.
Lima, AF, Lima, FF, Richter, EM y Muñoz, RAA (2016). Combinación de sonicación y calentamiento para la
extracción de metales de fertilizantes inorgánicos antes de determinaciones por espectrometría de plasma
inducida por microondas. Acústica aplicada, 103, 124­128.
Long, A., Zhang, H. y Lei, Y. (2013). Remediación por lavado con surfactante de contaminantes de tolueno.
Suelo contaminado: Optimización con metodología de superficie de respuesta y recuperación de
surfactante mediante oxidación selectiva con radicales sulfato. Tecnología de separación y
purificación , 118, 612–619.
Machado, I., Bergmann, G., & Pistón, M. (2016). Un sencillo y rápido método asistido por ultrasonido.
Procedimiento de extracción para la determinación de Fe y Zn en fórmulas infantiles a base de leche
mediante espectrometría de absorción atómica de llama (FAAS). Química de los alimentos, 194, 373–376.
Machado, I., Dol, I., Rodríguez­Arce, E., Cesio, MV y Pistón, M. (2016). Comparación de diferentes tratamientos
de muestra para la determinación de As, Cd, Cu, Ni, Pb y Zn en alcachofa (Cynara cardunculus L. subsp.
Cardunculus). Revista microquímica, 128, 128­133.
Mason, TJ y Lorimer, JP (2002). Sonoquímica aplicada: Los usos del ultrasonido de potencia en
química y procesamiento. Wiley­VCH 314p.
Muñoz, RAA, Oliveira, PV y Angnes, L. (2006). Combinación de extracción ultrasónica y análisis de decapado:
una forma efectiva y confiable para la determinación de Cu y Pb en aceites lubricantes. Talanta, 68(850).
Nascentes, CC, Korn, M., Sousa, CS y Arruda, MAZ (2001). Uso de baños ultrasónicos para aplicaciones
analíticas: un nuevo enfoque para las condiciones de optimización. Revista de la Sociedad Química
Brasileña, 12, 57–63.
Ngo­Matip, M.­E., Pieme, CA, Azabji­Kenfack, M., Biapa, PCN, Germaine, N., Heike, E., ... Ngogang, JY (2014).
Efectos de la suplementación con Spirulina platensis sobre el perfil lipídico en pacientes infectados por el
VIH sin tratamiento antirretroviral en Yaundé ­ Camerún: un estudio de ensayo aleatorio. Lípidos en la
salud y la enfermedad, 13, 191.
Olivieri, AC (2015). Directrices prácticas para informar resultados en sistemas simples y múltiples.
Calibración analítica de componentes: un tutorial. Analytica Chimica Acta, 868, 10­22.
Olivieri, AC y Allegrini, F. (2014). Enfoque consistente con la IUPAC para el límite de detección en
la calibración de mínimos cuadrados parciales. Química analítica, 86(15), 7858–7866.
Ortega­Calvo, JJ, Mazuelos, C., Hermosin, B. y Saiz­Jiménez, C. (1993). Composición química de los
productos alimenticios de Espirulina y algas eucariotas comercializados en España.
Revista de fisiología aplicada, 5, 425–435.
Planes, P., Rouanet, JM, Laurent, C., Baccou, JC, Besançon, P. y Caporiccio, B.
(2002). Biodisponibilidad de magnesio a partir de espirulina fortificada con magnesio en células Caco­2
intestinales humanas cultivadas. Química de los alimentos, 77, 213–218.
Priego­Capote, F. y Luque de Castro, MD (2004a). Usos analíticos del ultrasonido I.
Preparación de la muestra. Tendencias TrAC en química analítica, 23, 644–653.
Priego­Capote, F. y Luque de Castro, MD (2004b). Usos analíticos de la ecografía: II.
Detectores y técnicas de detección. Tendencias TrAC en química analítica, 23, 829–838.
Ruiz Díaz, JD, Savio, M., Moyano, MF, Verni, EE, Martínez, LD, & Gil, RA (2015).
Disolución asistida por ultrasonidos de aceites vegetales con hidróxido de tetrabutilamonio para análisis
multielemental mediante espectrometría de masas con plasma acoplado inductivamente.
Espectroscopia atómica . PerkinElmer Inc.
Siva Kiran, RR, Madhu, GM, Satyanarayana, SV, Kalpana, P. y Subba Rangaiah, G.
(2017). Aplicaciones del diseño experimental de Box­Behnken junto con redes neuronales artificiales
para la biosorción de bajas concentraciones de cadmio utilizando Spirulina (Arthrospira) spp. Tecnologías
que utilizan eficientemente los recursos, 3, 113–123.
Vudagandla, S., Kumar, NS, Dharmendra, V., Asif, M., Balaram, V., Zhengxu, H. y
Zhen, Z. (2017). Determinación del contenido de Boro, Fósforo y Molibdeno en muestras de biolodos
mediante Espectrometría de Emisión Atómica de Plasma por Microondas (MP­AES).
Ciencias Aplicadas, 7, 264–274.
Witek­Krowiak, A., Chojnacka, K., Podstawczyk, D., Dawiec, A. y Pokomeda, K. (2014).
Aplicación de la metodología de superficies de respuesta y métodos de redes neuronales artificiales en el
modelado y optimización del proceso de biosorción. Tecnología de recursos biológicos, 160, 150–160.
Zaldarriaga Heredia, J., Cina, M., Savio, M., Gil, RA, & Camiña, JM (2016).
Pretratamiento asistido por ultrasonido para la determinación de multielementos en muestras de
semillas de maíz mediante espectrometría de emisión atómica de plasma de microondas (MPAES). Revista
microquímica , 129, 78–82.