UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA

Facultad de Ciencias Biológicas

Escuela Profesional de Microbiología y Parasitología

VIROLOGÍA - HEMAGLUTINACIÓN - INFORME 13

SEMESTRE 2023-1

Integrantes:

De La Cruz Rojas Wendy Astrid (20100019)

Gomero Suni, Oscar Joel ( 18100054 )

Torres Villena Joel (14100141)

Zúñiga Huertas Kiara Naysha (20100040)

Grupo y horario:
Mesa 4 - Miércoles y Viernes de 10:00am a 12:00pm

Docente:
Egma Mayta
Lima-Perú
2023
Marco teórico
HEMAGLUTINACIÓN VIRAL

Fenómeno descrito por primera vez por Hirst en 1941, quién observó en un embrión de pollo
la aglutinación de los glóbulos rojos en un vaso sanguíneo roto mientras realizaba pases de
virus de la influenza en el líquido alantoideo. Hirst reconoció la importancia de este hallazgo
y describió la hemaglutinación como un método para el estudio de virus. Actualmente se
conoce un gran número de virus con propiedades hemaglutinantes clasificados en diferentes
familias virales.

Principio:
La hemaglutinación (HA) es la unión de los eritrocitos producida por el virus o por alguna
estructura del mismo. El resultado visible de la HA viral es un patrón formado en el fondo del
pozuelo por los eritrocitos unidos por la hemaglutinina viral. En la hemaglutinación directa el
virus actúa directamente sobre las células y esta propiedad puede ser inhibida por anticuerpos
específicos al virus. Hemaglutinación indirecta este tipo de aglutinación se lleva a cabo
utilizando eritrocitos recubiertos de antígenos, o anticuerpos acoplados de manera espontánea
(adsorción pasiva) o mediante un acoplamiento químico, utilizando diversas sustancias para
este fin, tales como Acido tánico Bencidina bisdiazoada (BDB), Cloruro crómico (CrCIs),
Glutaraldehído, clorurocianúrico entre otros.

La hemaglutinación viral puede emplearse para medir la cantidad de virus o para determinar,
por inhibición homóloga, el título de los anticuerpos dirigidos en contra de los virus
hemaglutinantes.

Para determinar el título hemaglutinante y el pH óptimo de antígeno se usa como punto final
la más alta dilución de antígeno que muestra aglutinación completa (título del antígeno). El
pH óptimo es aquel donde el título del antígeno es mayor.

Patrón de hemaglutinación:
No hemaglutinación: Los glóbulos rojos sedimentan en el fondo del pozuelo observándose
como un botón.
Hemaglutinación parcial: Se observa un anillo de células aglutinadas alrededor de un botón
en el centro. No se lee como punto final de hemaglutinación.
Hemaglutinación completa: Los glóbulos rojos dan una capa fina y bien distribuida en el
pozuelo. Se lee como punto final de la hemaglutinación.

Título viral:
El título de la muestra del virus se basa en el último pocillo de aspecto aglutinado,
inmediatamente antes de que se observe un botón. En relación con la concentración inicial de
la reserva de virus, la concentración del virus en este pocillo será cierta dilución de la reserva,
por ejemplo, 1/40. El valor del título de esta muestra es el inverso de la dilución, es decir, 40.
Introducción
Las pruebas de hemaglutinación (HA) e inhibición de la hemaglutinación (IHA) han sido
empleadas desde los comienzos de la virología moderna, en la primera se aprovecha la
propiedad de los virus de unirse a la membrana de los eritrocitos de ciertas especies mientras
que su contraparte serológica se emplea como un índice de reactividad para la evaluación de
los niveles de anticuerpos.(Dorig RE et al.1993).Estas propiedades han sido explotadas para
caracterizar e identificar receptores de la superficie celular para diferentes virus. En la
actualidad, los ensayos de HA e IHA han sido útiles en la detección de antígenos;
reemplazando las técnicas tradicionales y produciendo una mayor agilidad en la definición
del diagnóstico.
La implementación de los ensayos de HA e IHA puede ser de gran utilidad durante el
desarrollo y monitoreo de un proceso de purificación de los virus, en laboratorios que no
posean grandes recursos ni modernos equipamientos.
Por ello en este informe detallaremos cada paso de la prueba de hemaglutinación y con su
respectivo resultado.
Objetivos
Observar la evidencia de la formación de botón y aglutinación para la diferenciación del
efecto viral.
Calcular el título de virus y las unidades hemaglutinantes.
Materiales
- Micropipeta
- Tips
- Placas de 96 pocillos
- Solución salina
- Virus vacunal
- Glóbulos rojos
Procedimiento
(Previa a la clase se preparó glóbulos rojos al 0.5% a partir de sangre de pollo en solución
Alsever debe estar bien mezclado)

1)Primero inoculamos a cada pocillo 50ul tanto en las filas

marcadas para Virus Triple , NC +, NC ++.

2) Segundo , inoculamos 50ul de los virus en los primeros

pocillos de las tres filas del Virus Triple , NC +, NC++ y
suspendemos con la solución salina y extraemos 50ul y así
consecutivamente hasta la última dilución marcada.
 3) Inoculamos 50 ul de GR a cada pocillo hasta la última
dilución , con un grupo de Control GR compuesto por dos 2
pocillos de 50 ul de solución salina y GR (0.5%)

4)Pasado 1 hora de incubación

a T° ambiente ,observamos
malla en la primera dilución, y
botón en las siguientes
diluciones.

Resultados
La última dilución hemaglutinante de la cepa Newcastle (+,++ , triple);donde utilizamos
Glóbulos rojos de pollo con respecto a los tres virus fue ½ , el Título hemaglutinante =2
1 UHA=1/2
Discusiones
Según los resultados expuestos en la placa observamos que la formación de la malla significa
que el virus gracias a sus componentes de hemaglutinina pudo conectar con la NANA de los
glóbulos rojos y así infectarlos y ello se ve reflejado en aquellos pocillos que no presenta el
boton ya que ello significa que los glóbulos rojos sedimentaron pero en este caso los virus se
unió a los receptores de los glóbulos rojos y hubo la infección y se forma en el pocillo donde
se ve reflejada la malla.
Ahora, la hemaglutinación es la unión de los eritrocitos producida por el virus o por alguna
estructura del mismo. El resultado visible de la HA viral es un patrón formado en el fondo del
pozuelo por los eritrocitos unidos por la hemaglutinina viral. Preparar diluciones seriadas (al
doble) en las placas previamente rotuladas, a los diferentes pH de trabajo (el pH óptimo para
el antígeno, el valor superior de pH y el valor inferior). De no conocer el pH óptimo de cada
antígeno, debe titularse a todos los pH. Para determinar el título hemaglutinante y el pH
óptimo de antígeno se usa como punto final la más alta dilución de antígeno que muestra
aglutinación completa (título del antígeno). El pH óptimo es aquel donde el título del
antígeno es mayor.

Bibliografía

Aguilar, V. (2004). Reacciones de aglutinación. Gaceta Médica de México, 140(S3), 50–52.

León, L. (2013). Programa De Practicas De Virología I. 4–6.

http://veterinaria.uaemex.mx/_docs/58_ARCH1_PRACTICAS DE VIROLOGIA.pdf