Banco de sangre y Hemoterapia

Guía de Práctica N°5

Preparación de Suspensiones celulares y Tipificación ABO-RH. Prueba
Globular y Sérica.

Apellidos: ………………………..……………….
Sección : ……………………….………………... Nombres: …………………………………………….
Fecha : .….. /……/2019 Duración: 4 horas
Docente: Lic. TM Angel Rodriguez Quispe Tipo de práctica: Individual ( x ) Grupal ( )

Instrucciones: El alumno prepara diferentes concentraciones de suspensiones celulares para la tipificación

ABO-Rh Prueba Globular y Sérica

Marco teórico

Introducción
La realización de las pruebas inmunohematológicas, independientemente de las tecnologías
utilizadas están diseñadas in Vitro para demostrar la reacción antígeno – anticuerpo,
principalmente aunque no de exclusividad de aglutinación.- Por lo tanto es menester se cumplan
los principios de la formación del complejo antígeno-anticuerpo, siendo la proporción de los
reactantes una de las variables a tomar en cuenta, su importancia es capital pues si la
concentración es mayor o menor de la establecida se producirá fenómeno de zona.
Las diferentes metodologías han establecido a que concentración de los reactantes se producirá
el punto de equilibrio de la reacción, manifestándose en la mayor y estable formación de
complejos Ag-Ac, cuya expresión física será la mayor constante dieléctrica de la reacción
dependiente del anticuerpo y antígeno respectivamente.
Las determinaciones de las estructuras químicas o antígenos de los grupos sanguíneos requieren
pues considerar las suspensiones globulares que permitan su demostración in Vitro, sea por
medio directo de los antígenos en la membrana celular del hematíe o por medio de anticuerpos
esperados en el suero o plasma, enfrentándolos a sus correspondientes antisueros o
suspensiones hemáticas conocidas respectivamente.

1.1.2 Base Teórica

SUSPENSIONES CELULARES
Las concentraciones celulares expresan la relación directamente proporcional a la concentración
de antígenos presentes en su membrana, aunque esto dependerá aun de otros factores más
como el número de proteínas y su densidad o configuración química de estas sustancias,
mayormente proteínas o compuestos de ellas, también está relacionado con la metodología que
se utiliza, así para la determinación de tipificación en placa se utiliza concentraciones del 40 a
45%, siendo del solo 5% en caso de la metodología en tubo.
La preparación de las suspensiones globulares se establece cumpliendo la relación
Volumen/Volumen, expresadas en porcentaje y referidas solo a hematíes.
LECTURA E INTERPRETACION DE LA REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO
La mayoría de pruebas de rutina que se realizan en los Bancos de Sangre, se evalúan los
resultados de acuerdo a la presencia de aglutinación o hemólisis de los hematíes. Una reacción
negativa expresa tanto la falta de aglutinación y/o hemólisis. Es importante que los resultados
sean evaluados tan pronto como se concluye con la prueba.

Es importante observar el sobrenadante para detectar la posible hemólisis Si la hubiera, esta

puede ser completa o parcial. Algún modo conveniente de designar estos grados de hemólisis
puede ser de: completa, moderada y leve.

Una aglutinación, un resultado más común de una reacción positiva, pudiendo tener varios grados
de interpretación, los cuales deberán de ser anotados. Una valoración de los grados de
aglutinación, debe de ser estandarizada entre todos los miembros del Banco de Sangre. La
aglutinación debe de ser valorada microscópicamente, lo que significa visualización, que puede
ser de utilidad con un espejo cóncavo. Si el resultado es aparentemente negativo o dudoso, la
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suspensión de células deberá de ser observada microscópicamente.

Race y Sanger, propusieron un sistema de score numérico, que fue ligeramente modificado por
Marsh.

Una escala recomendada para la lectura de aglutinación, es el sistema que utiliza una
interpretación de 0 a 4 cruces (0 a 4+).

Score Interpretación
4+ Un botón sólido de glóbulos rojos, fondo o sobrenadante transparente.
3+ Uno o dos grumos grande, o varios grumos grandes, fondo transparente
2+ Varios grumos de tamaño mediano, fondo ligeramente turbio.
1+ Grumos pequeños y muchos glóbulos rojos libres, fondo turbio
1/2+Escasos grumos muy pequeños, como arenilla, fondo turbio.
0 Negativo
HP Hemólisis parcial.
HT Hemólisis total.

SISTEMA ABO

Los eritrocitos poseen en su membrana sustancias antigénicas determinadas genéticamente, las

cuales pueden identificarse mediante anticuerpos específicos. El primer grupo de estas sustancias
fue identificado por Landsteiner en 1901, y le llamó sistema ABO, el cual consiste en que un
individuo tiene en sus glóbulos rojos uno, dos o ninguno de los dos antígenos (A y/o B)
pertenecientes a este sistema. Así, los individuos pueden ser del tipo A, si solamente poseen el
antígeno A; del tipo B, si únicamente tienen el antígeno B; del tipo AB si poseen ambas, o del tipo
0 si no tienen ninguno de los dos. La naturaleza química de los determinantes antigénicos es
polisacarídica.- Aproximadamente el 85% de la población también posee estas sustancias con las
mismas características antigénicas y estructurales en las secreciones corporales, estos individuos
se les denomina secretores.- Adicionalmente los carbohidratos que forman la estructura
antigénica A y B en la membrana de los glóbulos rojos, también están presentes en otros
materiales biológicos como bacterias ,alimentos y otros agentes ampliamente distribuidos en la
naturaleza, que constituyen un persistente estímulo. Los humanos reaccionan a este estímulo
produciendo anticuerpos contra aquellos antígenos que no forman parte de su propia estructura
celular.

SISTEMA RHESUS

En 1939. Levine y Stetson reportaron el caso de una mujer con severa reacción hemolítica
después de la transfusión sanguínea proveniente de su esposo. El antígeno responsable fue
diferente de los ya conocidos en la época. En 1940, Landsteiner y Wiener inmunizaron conejos y
cobayos con eritrocitos de monos Macacus Rhesus, basándose en la suposición de que en los
eritrocitos de estos monos podrían existir antígenos similares a los de los humanos. El suero
obtenido aglutinaba los glóbulos rojos de los monos Rhesus y del 85% de la población humana
caucásica.
Hasta entonces todo sugería que el supuesto antígeno hallado por Landsteiner y Wiener en
monos, y el supuesto antígeno descrito por Levine y Stetson en humanos, era el mismo.
Posteriores investigaciones demostraron que los supuestos antígenos eran diferentes; se
determinó que la mayoría de los humanos tienen en comuna un antígeno con el mono macacus
Rhesus y además otro diferente, pero relacionado. A sugerencia de Levine, se conservó la
demostración del factor Rh para el antígeno humano, y se le asignó el nombre de LW al antígeno
común al hombre y al mono.
A mediados de la década de los 40, se habían identificado cinco antígenos como pertenecientes al
actualmente denominado sistema RH. Estos cinco antígenos (C, c, D, E, e) se combinan entre sí,
dando lugar a diversos patrones antigénicos. El D tiene dominancia antigénica. Los individuos que
presentan el antígeno D en sus eritrocitos se denominan Rh(+), y aquellos que no tienen el
antígeno D se denominan Rh(-).
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1. Propósito/objetivo/logro/hipótesis:

Analizará y comprende las interacciones de las reacciones Antígeno anticuerpo de aglutinación

Reconoce y determina los grupos sanguíneos humanos principales ABO y Rhesus
2. Materiales y equipos:

• Anti-A monoclonal o policlonal

• Anti-B monoclonal o policlonal
• Anti-AB (opcional)
• Anti-D monoclonal
• Suero control RH
• Eritrocitos A1, B y O en concentración al 2%, 5% y 40%
• Solución Salina 0.85% o suero fisiológico
• Tubos de 12 x 75
• Pipetas Pasteur
• gotero dispensador
• Plumón indeleble o lápiz marcador
• Gradillas para tubos
• Baño María
• Centrifuga de Inmunohematología (Serofuge)

3. Notas de bioseguridad:
Se usarán en todo momento el guardapolvo, uniformes para el trabajo en el laboratorio.
 Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan entrar en
contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y otros materiales potencialmente
infecciosos.
 Una vez utilizados los guantes se retirarán y serán desechados en forma correcta a continuación se
lavarán las manos con solución antiséptica.
 Se usarán gafas de seguridad, u otros dispositivos de protección cuando sea necesario proteger los
ojos y el rostro de salpicaduras de líquidos biológicos.
 En las zonas de trabajo estará prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosméticos o manipular
lentes de contacto.

3. Procedimiento:
Preparación de Suspensiones

 Tomar una alícuota de sangre total o de paquete globular en tubo 12 x 75 mm y adicionar

solución salina hasta llenar hasta 1cm de la boca del tubo
 Cada lavado debe realizarse mezclando las células en la solución salina por inversión y
centrifugar a 3400 rpm por 2 minutos o 1000 rpm por 5 minutos.
 Decantar la solución salina, retirando todo el sobrenadante y la capa leucoplaquetaria
 Debe lavarse los hematíes 3 o 4 veces
 Tomar 5 partes de hematíes concentrados y lavados con 95 partes de solución salina en otro
tubo.-Esta concentración corresponde al 5%.

Prueba Celular

 Colocar 1 gota de Anti-A en un tubo de ensayo rotulado y limpio

 Colocar 1 gota de Anti-B en un tubo de ensayo rotulado y limpio
 Colocar 1 gota de Anti-D en un tubo de ensayo rotulado y limpio
 Colocar 1 gota de Anti-AB en un tubo de ensayo rotulado y limpio y
 Agregar a cada tubo una gota de suspensión al 2%-5% (en solución salina, suero o plasma) de los
glóbulos rojos a evaluar, esto se realiza con la pipeta Pasteur
 Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugar durante 15 segundos
 Resuspender suavemente los botones celulares, y examinar para detectar aglutinación.
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 Leer, interpretar y registrar los resultados de la prueba. Comparar los resultados de la Prueba
Celular con los obtenidos en la Prueba Sérica

Prueba Sérica

 Rotular tres tubos de ensayo limpios como A1, B y O

 Agregar 2 gotas de suero a cada tubo
 Agregar 1 gota de células del reactivo A1 al tubo marcado A1
 Agregar 1 gota de células del reactivo B al tubo marcado B
 Agregar 1 gota de células del reactivo O al tubo marcado O
 Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugar los tubos durante 15 segundos
 Resuspender suavemente los botones celulares y examinar para detectar aglutinación
 Leer, interpretar y registrar los resultados de las pruebas. Comparar los resultados de la Prueba
Sérica con los obtenidos en la Prueba Celular

INTERPRETACIÓN

 La aglutinación de los glóbulos rojos en estudio y la aglutinación en las pruebas del suero
constituyen resultados Positivos de las pruebas.
 Una suspensión celular homogénea después de la resuspensión del botón celulares un resultado
negativo de la prueba.
 Cualquier discrepancia entre los resultados de las Pruebas Celulares y las Pruebas Séricas debe
resolverse antes de registrar un resultado y debe investigarse a fin de llegar a una aecuada
interpretación del Grupo ABO del Paciente o del Donante

Resultados

Grupo Grupo
Anti-A Anti-B Anti-AB AntiA1 Anti-D1 Anti-D2 Ctrl RH
Globular
Cel A1 Cel B Cel O Ac
Sérico

0 0 0 / 4+ 4+ 0 0+ 4+ 4+ 0 0 O
4+ 0 4+ 4+ 4+ 4+ 0 A1+ 0 4+ 0 0 A
0 4+ 4+ / 4+ 4+ 0 B+ 4+ 0 0 0 B
4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 0 AB+ 0 0 0 0 AB
0 0 0 / 0 0 0 0- 4+ 4+ 0 0 0
4+ 0 4+ 4+ 0 0 0 A1 - 0 4+ 0 0 A
0 4+ 4+ / 0 0 0 B- 4+ 0 0 0 B

4. Conclusiones:

 La aglutinación de los glóbulos rojos en estudio y la aglutinación en las pruebas del suero
constituyen resultados Positivos de las pruebas.
 Una suspensión celular homogénea después de la resuspensión del botón celulares un resultado
negativo de la prueba.
 Cualquier discrepancia entre los resultados de las Pruebas Celulares y las Pruebas Séricas debe
resolverse antes de registrar un resultado y debe investigarse a fin de llegar a una adecuada
interpretación del Grupo ABO del Paciente o del Donante
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5. Cuestionario a resolver:

PRUEBA GLOBULAR
Es donde se busca los antígenos.

Procedimientos:
Agregar 50ml de células en todos los tubos.

Colocar una gota de reactivos Anti-A, Anti-B, Anti-AB, Anti-D en los cuatro tubos
de ensayo rotulado y limpio para evitar confusiones.

Luego llevar a centrifugar por 15 segundos, después interpretar los resultados

que se obtuvo de los 4 pacientes.

PRUEBA GLOBULAR

GRUPO ANTI-A ANTI-B ANTI-AB LENTIN A1 LENTIN H G.S

1 4+ 0 4+ 4+ 0 A1

2 0 4+ 4+ 0 0 B

3 4+ 4+ 4+ 0 0 AB

4 0 0 0 0 4+ 0
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PRUEBA SERICA

Para la prueba inversa se requiere glóbulos rojos conocidos, en la plasma se va a

buscar anticuerpos presentes.

PROCEDIMIENTO:

 Rotular cuatro tubos de ensayo limpios como A1, B, O y AB y luego agregamos 2

gotas de suero a cada tubo, después agregar 1 gota de células del reactivo A1 al
tubo marcado A1

 Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugar los tubos durante 15

segundos, luego realizar la lectura de interpretación y por último comparar los
resultados de la Prueba Sérica con los obtenidos en la Prueba Celular.
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PRUEBA SERICA
GRUPO HEM A1 HEM-B HEM-0 HEM-AB G.S

1 0 0 0 0 AB

2 4+ 0 0 0 B

4 4+ 4+ 0 4+ 0

¿Porque las suspensiones globulares se preparan a diferentes

concentraciones?

Porque las suspensiones globulares pueden separarse en diferentes

concentraciones debido a la diferencia en la densidad de las partículas
suspendidas y el medio en el que están suspendidas. La separación ocurre
debido a la fuerza gravitatoria que actúa sobre las partículas, lo que lleva a la
sedimentación de las partículas más pesadas hacia el fondo. En concentraciones
más altas, la probabilidad de colisiones entre partículas aumenta, lo que puede
resultar en la formación de conglomerados más grandes y una mayor velocidad
de sedimentación. En concentraciones más bajas, las partículas pueden
permanecer más dispersas.

¿Qué aglutininas tienen los pacientes de grupo A1B RH positivo?

Los pacientes del grupo sanguíneo A1B RH positivo tienen aglutininas anti-B en
su plasma sanguíneo. Esto significa que tienen anticuerpos contra el antígeno B.
En este grupo sanguíneo:

 Grupo sanguíneo: A1B

 Factor RH: Positivo

Esto indica que en la superficie de sus glóbulos rojos tienen antígenos A y B, y

son Rh positivos. Las aglutininas anti-B en su plasma ayudan a determinar la
compatibilidad de transfusiones de sangre, ya que reaccionarán con sangre que
contenga el antígeno B.
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¿Porque debe trabajarse con antisueros anti-D en la rutina de tipificación

de este sistema?

Los anticuerpos anti-D son utilizados en la rutina de tipificación sanguínea para

determinar el tipo sanguíneo Rh de una persona. En el sistema de tipificación
sanguínea, el factor Rh puede ser positivo (D positivo) o negativo (D negativo).
La presencia o ausencia del antígeno D en la superficie de los glóbulos rojos es
crucial para evitar reacciones incompatibles durante transfusiones de sangre y
para prevenir problemas en el embarazo, como la enfermedad hemolítica del
recién nacido.
Trabajar con anticuerpos anti-D nos permite identificar la presencia del antígeno
D, lo que es esencial para clasificar a los individuos como Rh positivos o
negativos. Esto tiene implicaciones importantes en la práctica clínica, ya que
ayuda a garantizar la compatibilidad de la sangre durante transfusiones y a
prevenir complicaciones en situaciones como la incompatibilidad Rh entre la
madre y el feto durante el embarazo.

CONCLUCION
En conclusión, es muy importante tener un orden adecuado antes de realizar los
trabajos de esa manera evitar la discrepancia, y poder realizar la tipificación
correctamente. Además, la tipificación ABO-Rh es necesaria para determinar el
tipo de sangre de una persona. La prueba de glóbulos rojos consiste en observar
la aglutinación de los eritrocitos con sueros anti-A y anti-B y la prueba inversa es
que va confirmar si la sangre del donante el compatible con el receptor.

Referencias bibliográficas consultadas y/o enlaces recomendados

● Manual Técnico de la American Association Blood Banks (AABB). 15º edición. 2007.
● Norma Técnica Nº 11 – MINSA / DGSP – V.01. Manual de Calidad. Sistema de Gestión de la
Calidad del PRONAHEBAS. 2004.
● Norma Técnica Nº 14 – MINSA / DGSP – V.01. Guía de Procedimientos Operativos Estándar.
Sistema de Gestión de la Calidad del PRONAHEBAS. 2004.