CUESTIONARIO TINCION DE GRAM

1.- ¿Qué es un colorante? ¿Cómo está constituido? ¿Qué factores intervienen

para que los colorantes se combinen con los componentes celulares?
Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras,
etcétera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes naturales, los
cuales son extraídos de plantas o animales, y colorantes artificiales, que son aquellos
de minerales procesados y manipulados en el laboratorio.
Químicamente, el colorante está constituido de un componente cromóforo y un
auxócromo.
combinan con los componentes celulares en función de sus respectivas cargas; por lo
tanto, los factores como fuerza iónica, composición del medio, temperatura y pH afectan
las tinciones.

2.- ¿Para qué se emplean los mordientes? Describe algunos ejemplos.

El mordiente es una sustancia empleada en tintorería que sirve para fijar los colores en
los productos textiles. La función del mordiente es favorecer la fijación del colorante
en las fibras.
También existen mordientes que sirven para fijar colorantes en tinciones biológicas de
células animales o vegetales.
Los reactivos fijadores pueden servir, a la vez, de mordientes: el Alcohol Etílico, por
ejemplo, fija, deshidrata, y, si su acción no se prolonga, viabiliza la coloración. Del
mismo modo, el ácido crómico actúa como mordiente y fijador. Otros fijadores, en
cambio, modifican las características colorantes del tejido: los ácidos pícrico y óstnico,
por ejemplo, perjudican la tonalidad de la hematoxilina.
Muchos colorantes se aplican en unión de sustancias que actúan como mordientes,
tales como el alumbre, el bicromato potásico, el tanino, y el acetato de cobre.
3.- ¿Qué es una tinción? ¿Cuántos tipos existen?
Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie.
El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y
poder realizar la observación en microscopio óptico.
Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del
mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción
diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante
(Gram o Ziehl-Neelsen); tinción específica, cuando se utilizan anticuerpos marcados
con una molécula fluorescente para identificar una estructura celular en particular
(inmunocitoquímico).
4.- ¿Cuáles son los reactivos y tiempos empleados para la coloración Gram?
Para la realización de una tinción de gram se utilizan dos colorantes. Uno de carácter
primario, como es el cristal violeta, y otro de contraste, como la safranina.
También se utiliza un mordiente para la safranina, como es el lugol, y un decolorante
como el alcohol/acetona.
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en
bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Se utiliza
tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una
primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias Gram
positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias Gram negativas a las que se
visualizan de color rosa, rojo o grosella.

Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces
aproximadamente). Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar
un minuto. Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente. Enjuagar con agua.
5.- ¿Porqué la Escherichia coli que es un Bacilo Gram Negativo puede adquirir el
color de la Fucsina?¿De qué está compuesta su pared celular?. Explique
brevemente.
la capa de peptidoglucano de las bacterias gram negativas es delgada, y se encuentra
unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la
interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a
una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha
de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.
6.- ¿Porqué el Staphylococcus aureus que es un Coco Gram Positivo adquiere el
color del cristal violeta y no el de la fucsina? ¿De qué está compuesta su pared
celular? Explique brevemente.
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto gram
positivas como gram negativas) a través de la pared bacteriana.

Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram
positivas permanecen violetas.

La pared celular del estafilococo está formada por un 50% de mureína de su peso

seco. La mureína es un péptidoglucano compuesto de subunidades alternas de los
polisacáridos ácido N-acetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico con enlaces ß1,4.