PREPARACIÓN DE SOLUCIONES DE REACTIVOS (NO SUMINISTRADOS):

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES DE REACTIVOS (NO SUMINISTRADOS): 1. Reactivo de color: Solución A. Ácido ascórbico
(10% p/v)/Ácido sulfúrico (1 M): 100 mL - Agregar 10 g de ácido ascórbico (Sigma cat. no. 95210) a 90 mL de agua destilada. -
Agregar 5,35 mL de ácido sulfúrico concentrado (Sigma cat. no. 258105 o equivalente) y disolver el ácido ascórbico. Llevar a volumen
(100 mL) con agua destilada. Estable durante 1 semana a 4°C.

Solución B. Molibdato de amonio (5% p/v): 25 mL Agregue 1,25 g de molibdato de amonio (n.º de catálogo Sigma 277908
o equivalente) a 20 ml de agua destilada y disuelva. Llevar a volumen (25 mL) con agua destilada. Estable durante 1 mes a 4°C. La
solución B debe agregarse a la solución A.Mezcle 1 parte de Solución B con 5 partes de Solución A (p. ej., agregue 1 ml de Solución
B a 5 ml de Solución A). Preparar 0,6 mL por muestra a analizar (incluyendo blancos y estándares).Preparar fresco el día de uso.

Cantidades requeridas: - Solución A (mL) = No. de muestras x 0.5 mL - Solución B (mL) = No. de muestras x 0.1 mL

2. Ácido tricloroacético (50 % p/v): 100 ml Agregar 50 g de ácido tricloroacético (Sigma cat. no. T6399) a 60 mL de agua
destilada y disolver. Llevar a volumen (100 mL) con agua destilada. Estable durante > 6 meses a 4°C. 5

3. Ácido clorhídrico (0,66 M): 1 L Agregar 54,5 mL de ácido clorhídrico (Nº de catálogo Sigma 258148 o equivalente) a 945,5 mL de agua
destilada y mezclar. Almacenar a temperatura ambiente.

4. Hidróxido de sodio (0,75 M): 200 mL Agregue 6 g de gránulos de hidróxido de sodio (n.º de catálogo Sigma 795429 o
equivalente) a 180 ml de agua destilada y disuelva. Llevar a volumen (200 mL) con agua destilada. Almacenar a temperatura ambiente.

5. Ácido fítico Cuando se requiera una muestra de control de ácido fítico puro, se recomienda el uso del siguiente producto: sal
dipotásica del ácido fítico (n.º de cat. Sigma P5681).

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO ESTÁNDAR:

A. EXTRACCIÓN DE LA MUESTRA:

1.Pesar con precisión aprox.1 gramode material de muestra en un Vaso de precipitados de vidrio de 75 ml. Agregar20mlde ácido clorhídrico (0,66 M), cubra
el vaso de precipitados con papel de aluminio y revuelva vigorosamente duranteun mínimo de 3 h a temperatura ambiente (preferiblemente durante la noche por
conveniencia). 2.Transferir 1 mL de extracto a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mL y centrifugar a 13.000 rpm durante 10 min.

Transfiera inmediatamente 0,5 ml del sobrenadante del extracto resultante a un tubo de microcentrífuga nuevo de 1,5 ml y neutralice mediante la
adición de 0,5 ml de solución de hidróxido de sodio (0,75 M). Utilice el extracto de muestra neutralizado en el procedimiento de reacción de
desfosforilación enzimática que se describe a continuación.