AOAC Official Method 972.

18
glicirricinato de amonio en extractos de sabores
Mtodo de cromatografa de gases.

A. Principio
glicirricinato de amonio se hidroliza con cido glicirrtico, el ingrediente activo
en el regaliz, y este compuesto es sililado para la determinacin GC, con el
colesterol como patrn interno. El mtodo es aplicable a glicirricinato de
amonio 30-400 ppm.
B. Material
Cromatgrafo de gas: Con dos columnas, detector de ionizacin de llama, y
columnas (1,2 m x 4 mm) de vidrio o de acero inoxidable para Identificacin,
llenas de 1,5% OV-1 en la malla 60-80 Cromatgrafo de gas.
Condiciones de funcionamiento: temperatura () -detector 300, columna 200260, abertura de inyeccin 280; velocidades de flujo (ml / min) de gas portador
-N2 y H2 75, Aire 300; sensibilidad 1000; o condiciones equivalentes, de
manera que 3-5 ml de cido sililado glicirrtico (6-9 mg) y 3 ml colesterol
interno patrn (1,5 mg) dar a 1/2 de la escala completa. Los tiempos de
retencin son ca 7 y 4 min, respectivamente.
C. Los reactivos
(A) mezcla de sililacin.-Mix, en orden, los reactivos siguientes: 5 volmenes
de piridina anhidra, 2 volmenes de trimetilclorosilano, y 3 volmenes de N, Obis (trimetilsilil) acetamida. (Precaucin:. Esta mezcla es txico; evitar el
contacto con la piel o los ojos Utilice dispositivo eficaz de eliminacin de humos
al preparar, usar o mezcla de calefaccin.) Mezcla bajo N tienda de botella y
refrigerar cuando no se utiliza bien cerrada. mezcla refrigerada es estable
indefinidamente. Reactivo es satisfactoria si el color de los granos de
desecante de gel de slice que indica el tipo activado aadido a la mezcla
permanece azul profundo. Almacenar piridina anhidra sobre tamiz molecular
13'.
(B) glicirricinato de amonio estndar solution.-1,0 mg / ml de H2O. Disolver
100 mg de glicirricinato de amonio purificado (MacAndrews y Forbes Co., 3rd St
y Jefferson Ave., Camden, NJ 08104) en H2O en 100 ml matraz volumtrico y
diluir a volumen con H2O.
(C) estndar interno colesterol solution.-0.5 mg / mL. Pesar 5 mg de colesterol
USP en 100 ml matraz aforado y disolver y diluir a volumen con alcohol
metlico.
D. Determinacin

(Precaucin:. Vase el Apndice B, instrucciones de seguridad en la destilacin,

disolventes inflamables, y ter dietlico).
Pipetear 25 ml de la muestra, descarbonatada si es necesario, en 300 ml de la
forma cnica estndar 24/40 matraz de fondo redondo de ebullicin, aadir 25
ml de dioxano, y agitar para mezclar. Aadir lentamente 25 ml de H2SO4 (1 +
3) y 2-3 astillas SiC. Conectar matraz al condensador refrigerado con H2O y el
reflujo vigorosamente 1 h. Aadir, a travs de la parte superior del
condensador, 75 ml de H2O seguido inmediatamente por 100 ml de CHCl3 y el
reflujo 15-20 minutos ms. Deje que la mezcla se enfre a temperatura
ambiente y traslado al separador de 500 ml. Aadir 100 ml de hielo-H2O y
agitar vigorosamente ca 1 min. Deje que las fases se separan por completo.
Escurrir capa de CHCl3 en 250 ml separador que contena solucin de NaHCO3
100 ml 2%. Agitar y dejar capas separadas. Filtro capa de CHCl3 en 200 ml
matraz volumtrico a travs del tubo cromatogrfico 100 'de 20 mm o embudo
de vidrio adecuado con tapn de lana de vidrio y ca 25 g de Na2SO4 anhidro.
Repita extracciones con 50 y 25 ml de CHCl3, girando para evitar emulsiones.
Filtra como antes y diluir a volumen con CHCl3 misma pasa a travs de
Na2SO4.
Transferir todo de 200 ml de extracto (o parte alcuota de si la concentracin de
ingrediente activo es 400 ppm) a 250 ml vaso de precipitados, aadir 2-3
astillas SiC, y se evapora a 10-15 ml en un bao de vapor bajo flujo de N2
suave. Transferir cuantitativamente a 30 ml botella con tapn de rosca con
revestimiento de tefln. Aadir solucin de patrn interno 2 ml de colesterol,
(c). Se evapora a sequedad en bao de vapor con flujo de N2 suave. ras botella
hasta que se enfre con N2 o enfriar en el desecador. Aadir 1 ml de mezcla de
sililacin, (a), y el tapn de la botella hermticamente. Girar la botella de
manera que el reactivo entra en contacto con todas las superficies de vidrio.
Dejar reposar ca 4 horas a 50 o durante la noche a temperatura ambiente.
Inyectar 2-5 ml en cromatgrafo de gases operado como en 972.18B. Atenuar
o inyectar cantidades ms grandes para alturas de los picos deseados.
E. Clculos
Determinar el actor respuesta relativa (RF) de cromatograma de 6 ml de
amonio glicirricinato solucin estndar, (b), y 19 ml de H2O pipete en 300 ml
de la forma cnica estndar 24/40 matraz de fondo redondo de ebullicin,
hidrolizados y sililados como en 972.18D. Utilice reas de los picos obtenidos
por triangulacin.
RF = [(PAAG x SAG)/(PAC x SC)] x (WC/WAG)

Donde los subndices AG y C se refieren a glicirricinato hidrolizado estndar de

amonio (cido glicirrtico) y el patrn interno colesterol, respectivamente; =
rea de pico PA; S = atenuacin; y W = mg estndar pesa.
ppm AG (mg/mL) = [(PAsample x Ssample)/(PAC x SC)]
x (WC x 103/RF) x (1/V)

donde V muestra = mL.

Referencia: JAOAC 55, 570 (1972).

CAS-53956-04-0 (glicirricinato de amonio)