INMOVILIZACIÓN Y

BIOSENSORES
ALUMNA:LESLIE RUBÍ MALVAEZ QUIRÓZ
DOCENTE:JENNY NANCY GÓMEZ SANDOVAL
ASIGNATURA:MICROBIOLOGÍA AVANZADA
PROGRAMA EDUCATIVO:INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
 DEFINICIÓN:

La inmovilización se define como la técnica de fijar las células, orgánulos o enzimas, proteínas (anticuerpos
monoclonales) en un sólido sistema de soporte, en una matriz de soporte sólida o retenido por una membrana,
para mantener estabilidad y hacer posible su uso repetido o continuado.
INMOVILIZACIÓN

La inmovilización de las células microbianas se produce como fenómeno natural o mediante

proceso artificial.
Las ventajas de los sistemas de cultivo inmovilizados viables son múltiples. Las altas densidades
celulares son esperadas a medida que las células inmovilizadas viables se multiplican durante el
proceso de metabolización del sustrato mientras permanece confinado con la matriz inmovilizada,
y por lo tanto altas velocidades de reacción volumétrica son esperadas en el cultivo celular
inmovilizado; la regeneración de cultivos inmovilizados es posible., incluso bajo condiciones de
incubación hostiles como bajas nutrientes o la presencia de compuestos tóxicos. En procesos
continuos la retención eficiente de biomasa se garantiza minimizando el lavado celular que
normalmente ocurre a altas tasas de dilución por parte de la célula completa.
MÉTODOS BÁSICOS PARA INMOVILIZACIÓN
DE MICROORGANISMOS:
FIJACION A UN
SOPORTE(UNIÓN DE ATRAPAMIENTO O
SOPORTE) AUTOAGREGACIÓN
MÉTODOS BÁSICOS PARA
INMOVILIZACIÓN DE
MICROORGANISMOS

AUTOAGREGACIÓN
ESTRATEGIAS DE INMOVILIZACIÓN:

• Adsorción
Este proceso depende de las tendencias de la célula a agregar o adherirse a superficies
particulares o asentarse en los poros de la estructura.
Ejemplo: La inmovilización celular generalmente se logra manteniendo el material de soporte y
creciendo activamente células en contacto físico durante un período específico. Uno de los
ejemplos clásicos está relacionado con el proceso de producción de vinagre utilizando astillas de
madera, como portadores de adsorción de Acetobacter. Una variedad de sustratos como zeolitas,
arcilla cocida, vidrio, perlas, caucho esponjoso, fibra de acetato de celulosa y se ha empleado
fibra de carbón activado para la inmovilización de la adhesión de las células enteras o adsorción.
UNIÓN COVALENTE:
Se comprendió que para lograr una alta eficiencia
vinculante para la ciencia, se debe mejorar la estabilidad y
esto podría lograrse mediante la creación de un enlace
covalente.
ENLACE CRUZADO DE CÉLULA A CÉLULA

La floculación es uno de los métodos más simples logrando la agregación celular en forma de mayores
partículas con alta densidad celular. Sin embargo, La capacidad de los microorganismos para flocular
naturalmente es limitada. Por lo tanto, la reticulación química es el método más apropiado para mejorar
la floculación y estabilizar los agregados celulares.
ENCAPSULACIÓN
La técnica de encapsulación generalmente emplea
el uso de perlas poliméricas para inmovilizar las
células enteras. Esto se divide ampliamente como
Macroencapsulación y microencapsulación.
Generalmente se utilizan microesferas o
microcápsulas partículas esféricas de menos de
1.000 μm en las que el líquido o la suspensión están
encerrados por la densa pero película polimérica
semipermeable. La mayor limitación de esta técnica
es el transporte de nutrientes a través de la
membrana.
ATRAPAMIENTO

• Atrapamiento físico de portadores poliméricos de la porosidad definida

es un método ampliamente utilizado para inmovilización de células.
Diferentes estrategias de atrapamiento son gelificación, precipitación,
ionotrópicos, geles y policondensación.
MÉTODO DE ALGINATO
• El alginato es un ácido carboxílico heteropolímero. acoplado con enlaces glicosídicos α 1 → 4
del ácido β-d manurónico y del ácido α-L-gulurónico. En el extranjero se puede preparar una
variedad de partículas utilizando calcio. Se prepara una solución de reticulación añadiendo
CaCl 2 0,005 M al medio de crecimiento que se enfría a 4°C. Posteriormente una levadura y la
mezcla de alginato se deja caer desde una altura de20 cm en 1 L de solución de reticulación,
utilizando una jeringa y aguja. Con este método se pueden preparar perlas de alginato de 0,5 a
2 mm de diámetro . El proceso de inmovilización celular en los geles de alginato de calcio
implican la mezcla de células viables como la levadura. Este proceso generalmente implica
disolver 9 g de alginato de sodio en300 ml de medio de crecimiento revolviendo lentamente
para evitar formación de grumos (es decir, 3 % de alginato de sodio solución en peso).
Posteriormente las células se suspenden lentamente en alginato de sodio. Solución mediante
agitación continua para lograr homogeneización, poseen una mínima resistencia a la
transferencia de masa, las perlas se endurecen en 1 a 2 h. Estos pueden entonces
conservarse entre 10 y 20 °C.
PRECIPITACIÓN DE
POLÍMEROS
La solución de polímero se utiliza
principalmente como dispersor medio
de las células. Sin embargo la
coagulación del polímero se logra
cambiando los parámetros
fisicoquímicos distintos de la
temperatura, es decir, disolvente y pH.
BIOSENSORES:

• Un biosensor es un dispositivo analítico que se compone de moléculas biológicas

como elemento de reconocimiento con transductor físico y proporciona datos
cuantitativos y semicuantitativos datos analíticos correspondientes al objetivo
concentración.
• La base de un biosensor microbiano es el estrecho contacto entre los
microorganismos y el transductor que generalmente se basa en inmovilización en el
transductor. Por lo tanto, la tecnología de inmovilización es muy crucial y la selección
del método de inmovilización apropiado es muy fundamental para el desarrollo de un
biosensor. Los biosensores se pueden clasificar como electroquímicos, ópticos y
otros.
BIOSENSORES
ELECTROQUÍMICOS
• Los biosensores electroquímicos microbianos son
de tres tipos: amperométrico, potenciométrico y
conductimétrico. Biosensores microbianos
amperométricos trabaja a un potencial fijo con
respecto al electrodo de referencia e implica la
detección de corriente generada por la oxidación
o reducción. De las especies en la superficie del
electrodo. Los biosensores microbianos
amperométricos han sido desarrollado para la
estimación de bioquímica demanda de oxígeno
(DBO) para la medición de Materia orgánica
biodegradable en muestras acuosas.
POTENCIOMETRICO
MICROBIANO
• El biosensor potenciométrico microbiano se desarrolla
utilizando un electrodo selectivo de iones
convencional.(pH, cloruro de amonio, etc.) o un sensor
de gas electrodo (p CO2 y p NH3 ) recubierto con una
capa de microbios inmovilizados. Los microorganismos
consumen el analito, provocando así un cambio en la
potencial resultante de la acumulación de iones
agotamiento. Los transductores potenciométricos
comparan el cambio entre el electrodo de trabajo y el
electrodo de referencia, y la señal es correlacionado
con la concentración del analito. El sensor microbiano
potenciométrico más simple es basado en un
electrodo selectivo de iones.
DE CONDUCTIMETRÍA
MICROBIANA
La conductometría es una técnica que mide cambios de
conductividad en la solución debido a la producción o
consumo de especies iónicas. La mayoría de las
reacciones catalizadas por microbios.
implica un cambio en las especies iónicas.
ÓPTICOS:

• Los biosensores microbianos ópticos generalmente se basan sobre los cambios en

las propiedades ópticas, a saber. Absorción (UV-Vis), bioluminiscencia,
quimioluminiscencia, reflectancia y fluorescencia, provocado por la interacción del
biocatalizador con el analito objetivo. Las ventajas de los biosensores ópticos son
compacidad, flexibilidad, resistencia a Ruido eléctrico y tamaño de sonda pequeño.
Biosensor de fluorescencia
La espectroscopia de fluorescencia es una técnica analítica sensible que puede
detectar concentraciones muy bajas del analito. Hay una correlación directa entre la
intensidad de emisión de fluorescencia y concentración a bajas concentraciones de
analito. Los biosensores microbianos fluorescentes han sido divididos en dos grandes
categorías basadas en el modo de detección: in vivo e in vitro. En el en vivo el sensor
microbiano fluorescente generalmente incorpora el uso de un microorganismo diseñado
genéticamente que es capaz de expresar un gen informador, codificando una proteína,
proteína verde fluorescente (GFP) codificada por el gen gfp es la herramienta más
popular debido a su estabilidad y sensibilidad. La fluorescencia emitida por GFP puede
ser fácil y convenientemente por instrumentos ópticos modernos con poco o ningún
daño al sistema anfitrión.
BIOLUMINISCENTE
El biosensor microbiano bioluminiscente mide los cambios de luminosidad de los seres
vivos(microorganismos). El gen lux que codifica la luciferasa se aplica ampliamente como
indicador, ya sea de manera inducible o constitutiva, para observar el cambio de luminosidad al
responder al analito de manera dosis dependiente. De manera constitutiva, el gen lux existe
constitutivamente en el microbio sensor, y la luminiscencia del sistema microbiano cambiaría
directamente en la adición/interacción del objetivo analito. Por tanto, podría darse el caso de que
la luz,la intensidad producida por un microbio disminuiría sobre la interacción con un compuesto
tóxico.
REFERENCIAS:

• Stolper P, Faber S, Weller MG, Knopp D, Niessner R(2008) Flujo a través de

luminiscencia de células completasBiodetector para pruebas de toxicidad. Anal
Bioanal Química390:1181–1187
• Tauber M, Rosen R, Belkin S (2001) Biodetección de células enteras de ácidos
orgánicos halogenados. Talanta55:959–964
• Tibazarwa C, Corbisier P, Mench M, Bossus A,
Solda P, Mergeay M, Wyns L, van der Leslie D (2001)