INSTITUTO TECNOLOGICO DE

TEPIC

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA
QUÍMICA Y BIOQUÍMICA

Determinación de pigmentos
en bebidas
Mediante espectroscopía UV-VIS

Reporte elaborado para la materia de

Análisis Instrumental

Laboratorio de Química Analítica

Grupo 6.A

PRESENTAN

Chávez Martínez Valerie Nicole

Carrillo Ruiz Gema Estefanía

Gonzalez de la Rosa Carlos Javier

Navarrete Mariscal Amy Esther

Vázquez Zañudo Leslie Yajaira

Docente a cargo

Dra. Aguilera Aguirre Selene

Tepic, Nay. 2023

Índice de contenidos
Introducción ....................................................................................................................................... 3
Objetivos ............................................................................................................................................ 4
Metodología ....................................................................................................................................... 4
Material y Reactivos ....................................................................................................................... 4
Procedimiento ................................................................................................................................. 4
Uso del espectrofotómetro .......................................................................................................... 5
Diagrama de flujo ........................................................................................................................... 5
Resultados .......................................................................................................................................... 5
Análisis de resultados ..................................................................................................................... 8
Conclusión.......................................................................................................................................... 8
Referencias ......................................................................................................................................... 9
Anexos .............................................................................................................................................. 10

Índice de tablas
Tabla No. 1 Materiales y reactivos ................................................................................................. 4
Tabla No. 2 Referencia de cálculos ................................................................................................ 4
Tabla No. 3 Cálculos de concentración .......................................................................................... 5
Tabla No. 4 Datos de calibración .................................................................................................... 6
Tabla No. 5 Concentración de colorante en bebidas comerciales .................................................. 8

Índice de figuras
Figura No.1 Diagrama de flujo ....................................................................................................... 5
Figura No. 2 Curva de calibración para concentración de colorante (0-80 μg/L) .......................... 7
Figura No. 3 Curva de calibración para concentración de colorante (0-500 μg/L) ........................ 7
Figura No. 4 Anexo 1 Figura No. 5 Anexo 2 Figura No. 6 Anexo 3 ......... 10
Introducción
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la
concentración. (Díaz et. al, sf)

En química se denomina colorante a aquella sustancia con la capacidad de absorber

determinadas longitudes de onda del espectro de luz visible. Estos colorantes son sustancia que
tienen grupos llamados cromóforos que son los responsables de absorber luz visible. (Mazo et. al,
2022)

Debido a que la absorción de una sustancia no es la misma en todas las longitudes de onda,
y su comportamiento es característico, es posible identificar una muestra problema por medio del
espectro de absorción del colorante contenido en el producto de interés y a su vez su concentración
empleando métodos instrumentales. (Universidad de Antioquia, 2019)

Según la empresa especializada Mettler-Toledo International Inc en 2023; lgunos de los

principales problemas de la absorción espectrofotométrica son:

• Características espectrales. La caracterización espectral se realiza durante el proceso de

calibración. Los principales factores que pueden llevar a resultados erróneos son la exactitud
de la longitud de onda, el ancho de banda espectral, la luz parasitada y la linealidad.
• Características fotométricas. Las características fotométricas incluyen la sensibilidad espectral
de la fuente de luz, la sensibilidad dependiente de la temperatura de la fuente de luz y del
detector, etc.
• Interacciones ópticas. Las radiaciones de la fuente de luz pueden interactuar con el material de
la cubeta, lo que altera la intensidad de la absorbancia de la muestra. Estas interacciones ópticas
pueden evitarse si se selecciona el material adecuado para la cubeta.
• Factores diversos. Otros factores, como la temperatura, las fluctuaciones de la tensión de la
línea, las vibraciones, la contaminación o el calentamiento de la muestra por el fotómetro,
también afectan negativamente a las mediciones.
Objetivos
Determinar la concentración de colorante presente en una bebida utilizando el espectrofotómetro
de luz UV-visible.

Metodología

Material y Reactivos

Tabla No. 1 Materiales y reactivos

Material Reactivo
• 1 pizeta
• 2 matraces aforados de 100 ml • Colorante violeta en polvo
• Agua de garrafón
• 1 pipeta de 5ml
• 2 muestras de bebida violeta
• 1 pipeta de 1ml
• 1 vaso de precipitado

Procedimiento

1. Preparar 1L de solución stock de 1mg/L

2. Preparar 100 ml de cada concentración estándar empleando la siguiente tabla:

Tabla No. 2 Referencia de cálculos

Concentración (μg/L) Volumen stock (100 μg/L) Volumen en agua Concentración %
0
10
20
30
40
50
60
70
80

3. Realizar las lecturas de los estándares y muestras en el espectrofotómetro a una λ de 565 nm.
Uso del espectrofotómetro

1. Encender el espectrofotómetro. Seleccionar el programa para la lectura de Absorbancia.

Ajustar la ʎ a 565 nm.
2. En una celda colocar 1 mL el blanco. Limpiar la celda con un papel suave. Colocar la celda en
el espectrofotómetro. Cuidar que el lado de la celda liso quede en dirección del haz de luz.
Presionar Set cero.
3. En una celda colocar 1 mL del estándar de menor concentración. Colocar la celda en el
espectrofotómetro. Cuidar que el lado de la celda liso quede en dirección del haz de luz.
Presionar Read. Anotar la lectura de la absorbancia una vez que se estabilice. Hacer esto por
duplicado o triplicado.
4. Desechar el líquido, enjuagar la celda con agua, escurrir. Realizar lo anterior para cada una de
las concentraciones de manera creciente.

Diagrama de flujo

Figura No.1 Diagrama de flujo

Resultados
𝐶1 .𝑉1
Utilizando la formula 𝐶1 . 𝑉1 = 𝐶2 . 𝑉2 despejando y remplazando los valores obtenemos = 𝑉2
𝐶2

Tabla No. 3 Cálculos de concentración

Concentración (μg/L) Volumen stock (500 μg/L) Volumen en agua Concentración %
𝜇𝑔
(0 )(100 𝑚𝑙)
0 𝐿 = 0 𝑚𝑙 100 ml 0%
𝜇𝑔
500
𝐿
 𝜇𝑔
(10 )(100 𝑚𝑙)
10 𝐿 = 2 𝑚𝑙 98 ml 2%
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(20 )(100 𝑚𝑙)
20 𝐿 = 4 𝑚𝑙 96 ml 4%
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(30 )(100 𝑚𝑙)
30 𝐿 = 6 𝑚𝑙 94 ml 6%
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(40 )(100 𝑚𝑙)
40 𝐿 = 8 𝑚𝑙 92 ml 8%
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(50 )(100 𝑚𝑙)
50 𝐿 = 10 𝑚𝑙 90 ml 10 %
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(60 )(100 𝑚𝑙)
60 𝐿 = 12 𝑚𝑙 88 ml 12 %
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(70 )(100 𝑚𝑙)
70 𝐿 = 14 𝑚𝑙 86 ml 14 %
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(80 )(100 𝑚𝑙)
80 𝐿 = 16 𝑚𝑙 84 ml 16 %
𝜇𝑔
500
𝐿
𝜇𝑔
(500 )(100 𝑚𝑙)
500 𝐿 = 100 𝑚𝑙 0 ml 100 %
𝜇𝑔
500
𝐿

Una vez realizadas las lecturas de absorbancia por triplicado en el espectrofotómetro; se realizó
un promedio entre cada muestra y se colocaron en la siguiente tabla:

Tabla No. 4 Datos de calibración

Concentración (μg/L) Absorbancia (nm)
0 0
10 0.017
20 0.025
30 0.030
40 0.062
50 0.051
60 0.051
70 0.036
80 0.058
500 0.272
Utilizando el programa de estadística (Excel) se realizo la curva de calibración mediante el
método de mínimos cuadrados y regresión lineal.

Figura No. 2 Curva de calibración para concentración de colorante (0-80 μg/L)

Figura No. 3 Curva de calibración para concentración de colorante (0-500 μg/L)

 𝑦−0.016
Partiendo de la formula arrojada por la curva de calibración = 𝑥 se realizan los
0.0005
siguientes cálculos para conocer la concentración en las distintas bebidas:

Tabla No. 5 Concentración de colorante en bebidas comerciales

Bebida Absorbancia (nm) Concentración (μg/L)
0.934 − 0.016
Zuba 0.934 = 1836 μg/L
0.0005

Análisis de resultados

Considerando los resultados de los cálculos para las concentraciones 0-80 µg/L obtenidos
en la práctica (Tabla No. 3); en comparación con los datos obtenidos en el experimento (Tabla
No. 4) podemos descartar que la variación en los resultados para curva de calibración (Figura No.
2) se deba a una deficiencia en los cálculos elaborados previos a la preparación de las soluciones
estándar. En consideración con lo expuesto por la empresa Mettler-Toledo en 2023 podemos
considerar que el error en los datos pueda ser debido a las características fotométricas del analito
(fotosensibilidad) y las variaciones de ruido existentes en el medio (temperatura, mal mezclado de
la muestra y contaminantes presentes en el matraz de preparación).

Debido al valor de R2 arrojado en la Figura No. 2 (R2 = 0.6386) lo cual se encuentra fuera
del marguen según lo establecido para curvas de calibración por Díaz et. al (R2 ≥ 0.98) razón por
se decidió considerar la concentración de stock (500 µg/L) a fin de obtener un índice de
confiabilidad mayor siendo este de R2 = 0.9759, obteniendo asi un acercamiento funcional a la
fórmula para obtención de concentración en una muestra.

Según los datos obtenido para muestra comercial obtenidos en la Tabla No. 5, la
concentración de colorante presente en la muestra es coherente a al de otras bebidas carbonatadas
en la misma categoría por lo cual podemos considerar el índice de confiabilidad bajo pero acercado
al estándar; sin embargo, no existe una declaración oficial para el contenido de colorante presente
en esta muestra.

Conclusión
Considerando los datos arrojados en la practica en comparativa con el objetivo principal es
satisfactorio suponer que este fue cumplido; sin embargo, debido a los datos arrojados durante la
experimentación, es recomendable realizar un mejor control del campo y metodología de trabajo
en practicas futuras, a fin de garantizar la fiabilidad de los resultados.

Referencias
DETERMINACION DE COLORANTES EN BEBIDAS. (2019). En UNIVERSIDAD DE

ANTIOQUIA, Studocu. FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y

ALIMENTARIAS. Recuperado 24 de octubre de 2023, de

https://www.studocu.com/co/document/universidad-de-antioquia/laboratorio-de-analisis-

instrumental/practica-3-determinacion-de-colorantes-en-

bebidas/67218397?origin=organic-success-document-viewer-ta

Suarez Avila, M. S. (director). (2022). INFORME DETERMINACIÓN DE COLORES EN

BEBIDAS. En J. S. Santa Carmona, L. M. Mazo Osorio, & S. L. Lopez, Studocu.

Facultad de ciencias farmacéuticas y alimentarias de la universidad de Antioquia.

Recuperado 24 de octubre de 2023, de

https://www.studocu.com/co/document/universidad-de-antioquia/laboratorio-de-analisis-

instrumental/3-informe-determinacion-de-colorante-en-bebidas/68510490

Mettler-Toledo International Inc. all rights reserved. (2023, February 20). Espectroscopia

ultravioleta-visible: conceptos básicos. Mettler-Toledo International Inc. All Rights

Reserved.

https://www.mt.com/mx/es/home/applications/Application_Browse_Laboratory_Analytic

s/uv-vis-spectroscopy/uvvis-spectroscopy-explained.html

Díaz, N. D., Bárcena Ruiza, J. B., Fernández Reyes, E. F., Galvan Cejudo, A. G., Jorrín Novo, J.

J., Peinado Peinado, J. P., Meléndez Valdes, F. M., & Túnez Fiñana, I. T. (s. f.).

Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de

biomoléculas. En UCO. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus

 Universitario de Rabanales. Recuperado 24 de octubre de 2023, de

https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

Anexos

Figura No. 4 Anexo 1 Figura No. 5 Anexo 2 Figura No. 6 Anexo 3