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Universidad Interamericana de Puerto Rico

Recinto de Barranquitas
Departamento de Ciencias y Tecnologa
Laboratorio Destrezas II

Uso Y Calibracin De Micropipetas

Marie C. Torres Sez


Fabiola S. Pagn Snchez
BIOL 2013; Secc.4024
Prof. Miranda

Introduccin
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir
pequeos volmenes de lquidos y permitir su manejo en las distintas tcnicas cientficas. Los
volmenes aceptables por estos instrumentos varan segn el modelo. Los modelos ms usuales
se reconocen como p20, p200 y p1000, admiten un mximo de 20, 200 y 1000 l,
pertinentemente.
Es importante mencionar que el uso de micropipetas permite emplear distintos lquidos
sin tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables (de plstico), que, por lo
general, son estriles. Hay varios tipos de puntas: para pipetear volmenes pequeos (por
ejemplo, 5 l) y para pipetear volmenes grandes (por ejemplo, 800 l).
Existen micropipetas manuales, en las que el volumen a absorber se fija girando un botn
en su parte superior que est conectado a un sistema analgico de confirmacin de volumen, y
automticas, en las cuales dicho sistema es digital. Tambin hay micropipetas simples, que slo
acogen una punta cada vez, y multicanales, que permiten incorporar mltiples puntas (por
ejemplo, ocho), absorbiendo el mismo volumen en todas ellas.
Para realizar un uso correcto de estas micropipetas es importante corroborar que las
mismas estn calibradas. De no ser as, existe una gran posibilidad de que la experimentacin
tenga un gran margen de error. Para la calibracin se compara el volumen real, con el terico y el
volumen real se determina realizando la medicin con la micropipeta, a esto se le conoce como
gravimetra. Despus de realizado este proceso y tener la micropipeta calibrada, se procede a su
utilizacin en el experimento. La calibracin permite tener resultados mucho ms exactos y
precisos.
La exactitud y precisin de un instrumento de medida es sumamente importante debido a
que permite que haya menos errores sistemticos. Se conoce como exactitud a lo cerca est un
resultado de una medicin del valor verdadero o terico; y como precisin, a lo cerca que estn
los valores medidos, es decir, lo cerca que estn unos de los otros. Cuando un instrumento de
medida (en este caso la micropipeta) est calibrado se obtienen resultados confiables. La
confiabilidad es una medida de determinacin de la estabilidad y la consistencia interna del
instrumento. Un instrumento es estable y confiable si, aplicado repetidas veces a los mismos
fenmenos, bajo las mismas condiciones, arroja resultados consistentes. Eso lo hace preciso y si
se acerca al valor terico se volvera exacto.

Objetivos
1. Utilizar y manejar adecuadamente las micropipetas transfiriendo eficientemente volmenes
diversos con precisin y exactitud.
2. Determinar la precisin y exactitud de un equipo de transferencia de volumen utilizando
conceptos estadsticos.
3. Inferir cuando existe un error sistemtico o aleatorio y como puede ser corregido el mismo.

Procedimiento
Para la parte A se rotul cinco microtubulos con las letras A, B, C, D y E. En los
microtubulos A, B y C se aadi 4 l de la solucin I. Utilizando un nuevo tip, se aadi 5 l de
la solucin II a los mismos microtubulos. Luego se aadi 1 l la solucin III a los microtubulos
A y C y finalmente 1 l de la solucin IV a los microtubulos B y C. Se cerraron los tubos y se
mezclaron por inversin 6 veces. Luego se colocaron en la centrifuga en una posicin que no
causara desbalance por 1 minuto a 2,000 rpm. Previamente, se corrobor que hubiese un total de
10 l en el tubo. Para esto se coloc la micropipeta en 10 l y se absorbi la mezcla de reactivos.
Finalmente se contest una serie de preguntas. Se repiti este procedimiento con los microtubos
D y E. Colocando 100 l de la solucin I, 200 l dela solucin II 150 l de la solucin III y 550
l de la solucin IV para el D. Para el E 150 l de la solucin I, 250 de la solucin II, 350 de la
solucin III y 250 de la solucin IV para un total de 1000 l.
En la parte B se calibr la micropipeta. Se seleccion un grupo de micropipetas junto con
sus puntas. En un vaso precipitado se aadi 50 ml de agua destilada y se procedi a evaluar la
calibracin con los siguientes volmenes. Para la de 1000 l, 500 l; para la de 100 l, 50 l y
para la de 10 l, 1 l.
Se calcul el peso terico utilizando la densidad del agua y el volumen en microlitros de
agua que se tom con la micropipeta, se ajust la misma con el volumen que se evalu y se
procedi a pesar en la balanza analtica. Los datos fueron anotados en tablas. Esto se repiti 10
veces con cada una de los volmenes a evaluar.
Se sum los pesos obtenidos para as poder calcular promedio, desviacin estndar,
coeficiente de variacin e inexactitud.

Resultados
Parte A.
Conteste:
Muestras A, B y C
a. El tip, est completamente lleno? Si se hace referencia de, si al tomar la muestra para
corroborar si hay 10 l en total, la respuesta es s, en todos los casos.
b. Se qued un volumen pequeo en el tubo? No, en ninguno de los casos
c. Luego de la extraccin de todo el fluido, Se qued in espacio con aire al final del tip? Qu
volumen est en el microtubo? (El volumen debe ser dispensado nuevamente en el
microtubo. Luego ajuste el volumen de la micropipeta a uno menor y verifique el volumen
que est en el microtubo). No qued ningn vaco en el tip. Al realizar la absorcin no qued
ningn volumen en el microtubo. Al ajustar la micropipeta a un volumen menor (8 l), por
teora, en el microtubo deberan quedar 2 l.

Muestras D y E
a. El tip, est completamente lleno? Si se hace referencia de, si al tomar la muestra para
corroborar si hay 1000 l en total, la respuesta es s, en todos los casos.
b. Se qued un volumen pequeo en el tubo? No, en ninguno de los casos
c. Luego de la extraccin de todo el fluido, Se qued in espacio con aire al final del tip? Qu
volumen est en el microtubo? (El volumen debe ser dispensado nuevamente en el
microtubo. Luego ajuste el volumen de la micropipeta a uno menor y verifique el volumen
que est en el microtubo). No qued ningn vaco en el tip. Al realizar la absorcin no qued
ningn volumen en el microtubo. Al ajustar la micropipeta a un volumen menor (900 l), por
teora, en el microtubo deberan quedar 100 l.

Parte B.

TABLA No 1
Pipeta (0.5-10l)
Peso terico (g): 0.001g

Peso (g)

Peso (g)

Peso (g)

0.0019
0.0008
0.001
0.0009
0.001
0.0009
0.0008
0.0008
0.001
0.0008

0.0009
0.0011
0.0008
0.0012
0.0006
0.0007
0.001
0.0005
0.0007
0.0007

0.0006
0.001
0.001
0.0006
0.001
0.0007
0.0009
0.0008
0.0001
0.0008

(volumen de 1l):

Repeticiones
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

x=
0.0256
Tabla No. 1: Esta tabla presenta el peso en gramos del agua el cual fue tomado en una balanza analtica.

Promedio:

x =

x
n

0.0256
= 30 =0.000853333

Desviacin estndar:

S=

( x 1x )2
n1

(2.43467E-06)2 =
29

*Nota: La desviacin estndar fue calculada en excel

Coeficiente de Variacin (%) =

CV (%)=

d[100%] =

0.000289748
0.000853333
x x terico
x terico

S
100
x

= 33.9 %
0.0008533330.001
=
= -0.146666667
0.001

Rango: R= Xmax-Xmin
R= 0.0019-0.00010= 0.0018

0.000289748

TABLA No. 2
Pipeta (10-100l)

Peso terico (g): 0.05g


(volumen de 50l):

Repeticiones
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Peso (g)

Peso (g)

0.0494
0.0489
0.0485
0.0469
0.0478
0.0486
0.0481
0.0493
0.0486
0.0496

0.0501
0.0497
0.0502
0.0499
0.047
0.0505
0.049
0.0491
0.049
0.0497

Peso (g)
0.0491
0.0492
0.0489
0.0491
0.0499
0.049
0.049
0.0491
0.0498
0.0501

x=
1.4731
Tabla No, 2: Esta tabla presenta el peso en gramos del agua el cual fue tomado en una balanza analtica.

Promedio: x = n

Desviacin estndar:

1.4731
= 0.049103333
30

S=

( x 1x )2
n1

(2.09697E-05)2
29

= 0.000850348

*Nota: La desviacin estndar fue calculada en excel

Coeficiente de Variacin (%) =


0.000850348

CV (%)= 0.049103333
d[100%] =

x x terico
x terico

S
100
x

100 = 1.73%

Rango: R= Xmax-Xmin

0.0491033330.05
= -0.017933333
0.05

R= 0.0505-0.0469= 0.0036

TABLA No. 3
Pipeta (100-1000l)
Peso terico (g): 0.5g

(volumen de 500l):

Repeticiones
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Peso (g)

Peso (g)

0.4922
0.4958
0.4971
0.4974
0.4959
0.4965
0.4977
0.4967
0.4977
0.4969

0.495
0.4967
0.4966
0.4968
0.4977
0.4965
0.4974
0.4969
0.4977
0.4978

Peso (g)
0.4966
0.4967
0.4968
0.4977
0.4966
0.4968
0.4967
0.4971
0.4977
0.4961

x=
14.9018
Tabla No. 3: Esta tabla presenta el peso en gramos del agua el cual fue tomado en una balanza analtica.

Promedio: x = n

Desviacin estndar:

14.9018
= 0.496726667
30

S=

( x 1x )2
n1

(3.36587E-05)2
29

*Nota: La desviacin estndar fue calculada en excel


Coeficiente de Variacin (%) =

S
100
x

= 0.001077332

0.001077332

CV (%)= 0.496726667 100 = 0.21688623


d[100%] =

x x te rico
x te rico

0.4967266670.5
= -0.006546667
0.5

Rango: R= Xmax-Xmin
R=0.4978- 0.4922

Anlisis de resultados
Es muy importante que a la hora de llevar a cabo un experimento se realice un buen manejo
del equipo de laboratorio. Algn error o falla durante el uso de un instrumento puede daar
completamente los resultados.
El manejo de las micropipetas es uno delicado ya que algn paso realizado indebidamente
afecta los resultados. Algunos errores al utilizar este instrumento pueden estar en el ritmo del
pipeteo o en el ngulo de inclinacin. Adems, un factor muy importante en el uso de las
micropipetas como en el uso de otros instrumentos de laboratorios es la calibracin. La
calibracin es el proceso de comparar valores provenientes del instrumento de medicin con la
medida correspondiente o estndar. Si el equipo no se encuentra calibrado, las medidas
comienzan a perder confianza y los resultados sern falsos. Errores que pueden afectar la
calibracin de la micropipeta son forzarla al colocarla a una medida ms alta o ms baja al
establecido, el mal mantenimiento o cuando los lquidos entran en el interior pueden daar su
sistema y calibracin. Para analizar la calibracin de una micropipeta es muy importante tener en
cuenta la precisin y exactitud de la misma. La precisin es cunto se acerca el valor medido al
valor terico cuando se mide ms de una vez y la exactitud se refiere a cun cerca est la
medicin del valor real. Cuando estas dos estn presentes en el instrumento de medicin, habr
un menor margen de error.

Se necesita un conjunto de datos para cerciorarte de que la micropipeta est bien calibrada.
Una vez se obtiene ese conjunto de datos se procede a calcular el promedio, la desviacin
estndar, el coeficiente de variacin y la inexactitud, los cuales se calculan en ese mismo orden
ya que uno depende de los otros. La desviacin estndar mide el grado de dispersin o
variabilidad y el coeficiente de variacin se utiliza para comparar la dispersin de los datos.
En esta experimentacin se estuvo comprobando la calibracin de las micropipetas. Se
utilizaron tres micropipetas: una de 0.5-10l, otra de 10-100l y otra de 100-1000l. De cada
una se calcul el peso terico del volumen indicado y se realizaron 30 muestras.
Como se observa en la tabla 1, se comenz con la micropipeta de 0.5-10l. El volumen que se
evalu fue de 1l y su peso terico fue de 0.001g. La sumatoria de las 30 muestras fue de
0.0256g, el promedio: 0.000853, la desviacin estndar: 0.000289, el coeficiente de variacin:
33.9 % y la inexactitud: -0.146666.
En la tabla 2 se utiliz la micropipeta de 10-100l. El volumen evaluado fue de 50l y el
peso terico de 0.05g. La sumatoria de las muestras fue de 1.4731g, el promedio: 0.049103, la
desviacin estndar: 0.000850, el coeficiente de variacin: 1.73% y la inexactitud: -0.017933.
Por ltimo, en la tabla 3 se utiliz la micropipeta de 100-1000l. El volumen que se evalu fue
de 500l y el peso terico calculado fue de 0.5g. El total de las sumas de las 30 muestras fue de
14.9018g, el promedio: 0.496726, la desviacin estndar: 0.001077, el coeficiente de variacin:
0.21% y la inexactitud: -0.006546.

Conclusin
Luego de haber realizado la experimentacin y de analizar los datos se confirm la
calibracin de las micropipetas. Se puede comprobar con los datos obtenidos puesto que los
resultados de los clculos fueron correctos de acuerdo a lo que se esperaba.
Los objetivos establecidos fueron cumplidos. Se utilizaron y se manejaron
adecuadamente las micropipetas y se determin su precisin y exactitud. Adems, se corrobor
qu tipos de errores pudieron afectar y cmo se pudieron haber corregido.
Para una buena experimentacin con excelentes resultados, es recomendable la prctica
en el manejo del equipo de laboratorio, en este caso las micropipetas. Adems, tener en cuenta su
mantenimiento, y por su puesto la calibracin. Esto es muy importante debido a que facilita el
trabajo y podemos realizarlos con seguridad.

Referencias:
Desconocido. (2003, August 30). QuimiNET. Retrieved from
http://www.quiminet.com/articulos/que-es-la-calibracion-de-instrumentos14786.htm
Desconocido. (2013, September 29). Retrieved from
http://www.midebien.com/consejos-practicos-para-medir-bien/cual-es-ladiferencia-entre-exactitud-y-precision
Desconocido. (n.d.). EQUIPO Y LABORATORIO DE COLOMBIA. Retrieved from
http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1031
Desconocido. (n.d.). METRIX LABORATORIOS. Retrieved from
http://www.metrixlab.mx/no-cat/calibracion-ajuste-y-desempeno-demicropipetas/
InstruLAb. (2016, 06 9). Retrieved from
http://www.instrulab.com.ar/micropipeta.htm

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