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Estrategia y metodologia para la validación de la limpieza e higienización de

áreas limpias en plantas de producciones biotecnológicas.

Article · January 2009

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10 authors, including:

Biunayki Reyes Denis Alvarez

Center for Genetic Engineering and Biotechnology Center for Genetic Engineering and Biotechnology
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Luciano Hernández
Center for Genetic Engineering and Biotechnology
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Portada29:Portada 12/6/09 11:08 Página 1

VALIDACIÓN DE
PROCESOS

SALAS BLANCAS

FORMACIÓN

NORMATIVA DE
REGISTROS Y
LEGISLACIÓN

ESPECIAL
MONOGRÁFICO:

ENVASE Y EMBALAJE

ETIQUETADO
Y CODIFICACIÓN

LOGÍSTICA Y
DISTRIBUCIÓN

BIOTECNOLOGÍA
Salas Blancas
Estrategia y metodología para la validación de
limpieza e higienización de áreas limpias en
plantas de producciones
biotecnológicas
En las instituciones donde se manipulan y/o preparan
medicamentos, productos biofarmacéuticos o
ingredientes farmacéuticos activos; se deben aplicar
procedimientos que permitan controlar el ambiente,
equipos y materiales, con el propósito de evitar la
transmisión y la contaminación de los productos por
microorganismos.
Autores: *Lic. Biunayki Reyes Díaz1;
Ing. Caridad A Gasmuri1, Msc Denis Alvarez2;

Estos productos también pueden ser contaminados

Lic. Lázaro Estenoz2; Lic. Yenay Díaz4;

por otros productos similares, por los agentes de

Msc Kenia Vazquez3; Dra. Marisel Quintana4;
Ing. Caridad Suárez Martínez, Ing. Grisel

limpieza, u otros materiales como lubricantes,

Tamayo y Lic. Luciano Hernandez2.

partículas de aire, materias primas, sustancias

intermediarias y auxiliares. El Programa de Limpieza e
Coautores: Suanai Brown Valdés, Caridad
Elena Isla Quevedo, Dorelis Ortiz Carmona,

Higienización debe lograr estándares de limpieza

Noelia Baltrell Mena, Amaury Hierrezuelo

especificados y el nivel de contaminación

Malberty, Dayanna Ramos, Frank García
Llanes, Yohima Valdés Núñez,

Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología. microbiológica aceptado para los productos.

Introducción: superficie de los equipos, paredes, techos y
La validación de limpieza es parte integral mesas luego de aplicar la limpieza estable-
de las buenas prácticas de fabricación en cida en los procedimientos normalizados de
cualquier industria farmacéutica. Constituye operación, se encuentre dentro de los nive-
un elemento de suma importancia, siendo les microbiológicos permisibles predetermi-
parte esencial de la garantía y calidad de nados.
manufactura del producto farmacéutico. El Objetivo principal de este trabajo es el
Asegura que las trazas que permanece en la establecimiento de la estrategia para la rea-
lización de la Validación de la limpieza e
Higienización de las áreas limpias de pro-
ducción con el fin de demostrar:
ACTUALMENTE SON La eficacia de los procedimientos de lim-
CRECIENTES LAS pieza e higienización de las superficies de las
EXIGENCIAS DE LOS áreas limpias de las Plantas de producción
ORGANISMOS del CIGB; con el uso de higienizantes apli-
cados a cada uno de los materiales de cons-
REGULADORES,DONDE
trucción que se utilizan en ellas.
LAS AUTORIDADES Que según los procedimientos de limpieza
REALIZAN MÁS ÉNFASIS e higienización establecidos, se reduce con-
ES EN EL PROGRAMA DE sistentemente la carga microbiana sobre las
superficies de las áreas y del equipamiento
VALIDACIÓN DE LIMPIEZA
y comprobar que después de este proceso,
estas superficies presentan una carga micro-
biana inferior a lo establecido para el área
clasificada, de forma que las mismas pueden
ser utilizadas sin perjudicar la calidad del
producto a ser procesado en este local.
Actualmente son crecientes las exigencias
de los organismos reguladores de las Bue-
nas Prácticas de Producción para asegurar la
calidad y consistencia de los productos far-
macéuticos. En uno de los aspectos básicos
donde las autoridades realizan mucho más
énfasis es en el programa de validación de
limpieza, especialmente con la validación
de los procedimientos de limpieza e higieni-
zación para las áreas, superficies y los equi-
pos de producción.
Estrategia y metodología
Para la metodología de este trabajo se tomo
en cuenta el uso de las herramientas de cali-
dad como es el flujograma donde se expo-
nen los principales pasos seguidos para el
desarrollo del proceso de validación y el
cumplimiento de este trabajo.

36 MAYO/JUNIO09 FARMESPAÑA INDUSTRIAL

Salas Blancas
Figura 1A. Esquema de grupos de trabajos y
Documentos necesarios para la validación.
Figura 1B. Flujograma de trabajo en el proceso de
la Validación de la Limpieza e Higienización para las
áreas limpias de producción.
Áreas a validar: Para esto se tuvieron en
cuenta las clasificaciones de cada área y si
las mismas eran dedicadas o áreas multipro-
pósito.
Criterios de aceptación:
Para el Reto: Una reducción de al menos 3
logaritmos de la concentración inicial de
bacterias y hongos, inoculada en un cua-
drante.
Para el Holding Time: Los resultados obteni-
dos al muestrear horas cero equivalente a 24
horas de haber realizado la limpieza el día
anterior, debe cumplir según el criterio de
aceptación definido en el Programa de
Monitoreo Ambiental en el caso que esto no
suceda se debe aumentar la frecuencia de la
limpieza e higienización de las áreas o pun-
tos donde haya incidido la no conformidad
y a su vez emitir nuevas ediciones de los
Procedimientos Patrones de Operación de
la limpieza del área en cuestión.
Control microbiológico de superficies
38 MAYO/JUNIO09
por el método de placas de contacto
El método consiste en la determinación del
conteo total de viables en superficies lisas
con la utilización de placas de contacto con-
teniendo la misma un medio nutriente ade-
cuado más un inhibidor de los higienizantes,
en caso de realizar el control en superficies
Figura 3. Representación del área limpia clase ISO
7 para el muestreo de las superficies y los puntos a
muestrear.
que han sido previamente higienizadas.
Para el control de superficies se aplicará la
placa de contacto (RODAC):
• Para superficies higienizadas con Etanol al
70% se usan las placas de contacto con
Agar triptona soya.
• Para el análisis de las superficies que se
limpian con higienizantes se utilizan placas
de contacto con Agar Triptona Soya, Leci-
tina y Polisorbato 80.
Esto se realiza en las zonas accesibles en los
puntos descritos en los listados de puntos
de muestreo (PM) de la Validación de la
Planta en cuestión. Antes de comenzar el
muestreo debe prepararse la cantidad de
placas necesarias para cada área a mues-
trear, en un flujo laminar unidireccional, e
identificarlas con: local, tipo de ensayo,
fecha y punto muestreado.
Las placas son colocadas sobre la superficie
a muestrear en los puntos previamente
seleccionados (según diagrama específico,
presente en cada área, que ha sido realizado
por el especialista en microbiología, revi-
sado por su supervisor y aprobado por Con-
trol de Calidad).
Técnica a seguir:
1. Retire la tapa de la placa y presione sobre
la superficie a muestrear.
2. Colóquele la tapa cuidadosamente de
forma rápida.
3. Pase un paño con Etanol al 70 % para lim-
piar los residuos de medio de cultivo que
pudieron quedar durante el contacto del
medio de cultivo con la superficie.
4. Envuélvalas en el papel crepé y en la
bolsa de doble capa asegurando el cierre
con cinta autoadhesiva. Proceda a realizar
el traslado para entregar al personal del
Grupo de Control Microbiológico, donde
se transportan las placas de forma inverti-
das, en una cesta metálica, hacia el cuarto
de incubación (30 a 35 °C). Incube las pla-
cas en posición invertida (no más de 6
placas de altura), durante 5 días a la tem-
peratura entre 30 y 35 °C.
Concluido el período de incubación de las
placas, se retiran cuidadosamente del cuarto
de incubación y se proceda a realizar el con-
teo de las UFC presentes en las placas con
ayuda del contador de colonias.
Personal:
Todo el personal que realice los procedi-
mientos descritos en el Protocolo de Valida-
ción de la Limpieza e Higienización de las
áreas de producción, tiene que estar acredi-
tado para este trabajo. Por lo que el perso-
nal tiene que estar debidamente entrenado
en cada una de las funciones que debe des-
empeñar y debe ser efectivamente supervi-
sado. Cada persona debe tener un expe-
diente donde se refleje la trayectoria
técnica; así como un registro de los che-
queos médicos a que es sometido periódi-
camente. El personal de Mantenimiento,
Aseguramiento de la Calidad u otra entidad
que por motivos del proceso de producción
necesite entrar a las áreas de producción,
debe cumplir con las mismas exigencias que
tiene el personal de producción, siguiendo
todas las normas establecidas dentro del
Figura 4. Resultado obtenido del muestreo
utilizando placas de contacto, de las superficies de
previo a la aplicación del procedimiento de limpieza
(0 Horas) para los locales ISO 7
Figura 5. Resultado obtenido del muestreo
utilizando placas de contacto, de las superficies de
la planta de producción una hora después de la
realización del procedimiento de limpieza (1 Hora)
para los locales ISO 7
FARMESPAÑA INDUSTRIAL

Figura 6. Resultado obtenido del muestreo
utilizando placas de contacto, de las superficies de
la planta de producción ocho horas después de la
realización del procedimiento de limpieza para los
locales ISO 7
área.
Análisis estadístico de los datos: Se utilizó el
análisis de los resultados por métodos No
paramétricos con comparación de variables
múltiples, empleando la prueba de Fried-
man, usando el programa estadístico Stat-
graphic Centurion versión 15.
Resultados y discusión
Limpieza e higienización “en proceso” utili-
zando Bactylisine al 0,25 % y Etanol al 70 %
Al momento de realizar la validación el área
se encontraba en campaña productiva. La
higienización y el muestreo se realizaron tal
como se establece en el protocolo de vali-
dación de la limpieza Los resultados obteni-
dos por local de cada uno de los puntos
cuando se utilizó el Etanol al 70 % y el Bacty-
lisine al 0,25 % se reflejan en las Figuras 4, 5
y 6 que se muestra para los tres días de
muestreo.
Para los locales clasificados como ISO 7,
solo uno de los puntos no cumplió con el
criterio de aceptación a la hora inicial y a las
ocho horas. Se consideró que la limpieza y
desinfección realizada con Bactylisine 0,25 %
y Etanol 70 %, fue efectiva en los locales ISO
7 ya que todos los puntos cumplieron el cri-
terio de aceptación establecido a la hora de
realizada la limpieza e higienización. Por
tanto como conclusión parcial se puede
considerar que el procedimiento y los higie-
nizantes utilizados fueron adecuadamente
validados. Al analizar la conservación de la
limpieza ocho horas después, se observa 1
solo punto que no cumple el criterio de
aceptación de 25 ufc/cm2, para profundizar
en los criterios, se realizó el análisis de los
puntos específicos que no cumplieron con el
criterio de aceptación en los tres días de rea-
lizado el muestreo, valorando el tipo de
punto y la actividad que alrededor de ellos
se realiza cuando el área se encuentra en
operación.
Los microorganismos aislados durante el
muestreo fueron bacilos grampositivos
FARMESPAÑA INDUSTRIAL
View publication stats
esporulados, del género Bacillus y cocos
grampositivos. Estos microorganismos son
aerobios y distribuidos ampliamente en el
ambiente. A la hora de realizada la limpieza
y desinfección, todos los puntos cumplieron
con el criterio de aceptación, esto se
observa en el siguiente gráfico correspon-
diente a las áreas clase ISO 7
Se realizó el análisis de los tipos de puntos
(PC, S, Sp) utilizando estadística no paramé-
trica considerando el carácter discreto y no
asociado de los resultados obtenidos. Se le
realizó el Test de Friedman utilizando el pro-
grama STATGRAPHICS CENTURIÓN XV. La
prueba de Friedman evalúa la hipótesis nula
de que las medianas dentro de cada una de
las 3 columnas (Correspondientes a los días
de muestreo) es la misma. Los datos en cada
fila son ordenados de menor a mayor. Se
calcula entonces el rango promedio para
cada columna. Puesto que el valor-P es
menor que 0.05, existe una diferencia esta-
dísticamente significativa entre las medianas
con un nivel del 95.0 % de confianza. Para
determinar cuáles medianas son significati-
vamente diferentes de otras, se seleccionó
el Grafico de Caja y Bigotes.
Para todos los tipos de puntos Sp y PC no
existen diferencias significativas ya que el
valor-P es mayor o igual que 0.05, esto sig-
nifica que el nivel de limpieza del área se
mantiene durante todo el tiempo para estos
tipos de superficie. Se nota una reducción
del valor de la mediana entre los valores
obtenidos en el muestreo inicial y a la hora
de realizada la limpieza que aumenta nueva-
mente a las ocho horas. Para el caso de las
muestras de tipo S, existe una diferencia
estadísticamente significativa ya que la P es
menor que 0.05 “creemos que esté directa-
mente relacionado con el punto S10 que fue
el único que no cumplió con el criterio de
aceptación en algunos de los muestreos rea-
lizados. La conservación de la limpieza ocho
horas después, no se observan puntos que
no cumplen el criterio de aceptación de 50
ufc/25 cm2. Para profundizar en los criterios,
se realizó el análisis de los puntos específi-
cos que no cumplieron con el criterio de
aceptación en los tres días de realizado el
muestreo, valorando el tipo de punto y la
actividad que alrededor de ellos se realiza
cuando el área se encuentra en operación.
Afortunadamente cuando comparamos
nuestros resultados con las especificaciones
emitidas por las agencias regulatorias, según
se observa en la tabla (Criterios de acepta-
ción Monitoreo Microbiológico de superfi-
cies); ejemplo la 21 CFR 211.67 (Code of
Federal Regulations) subparte C (Edificios e
Instalaciones) donde se refieren a limpieza
de equipos y la 21 CFR 211.56 subparte
sobre Saneamiento las cuales establecen
como debe procederse en la validación de
las limpieza e higienizaciones, que estable-
cen criterios del número mínimo de Micro-
organismos que deben estar presentes en
estas áreas y superficies; observamos que se
cumplió con estos requisitos es decir nues-
tras áreas en este caso la planta de área
clase ISO 7 con limites 25 ufc/25 cm2 los
puntos seleccionados muestreados.
Conclusiónes:
• Se demostró la eficacia de los procedi-
mientos de limpieza e higienización de las
áreas limpias de producción ya que no
hubo diferencias significativas al analizar el
resultado de las diferentes horas de mues-
treo.
• La Calidad de los controles microbiológi-
cos ambientales de las áreas limpias se evi-
denció, en la validación de limpieza con la
que se comprobó que los niveles de con-
taminación fueron reducidos por debajo
de los límites de aceptación establecidos.
• El éxito obtenido en este programa de
validación de limpieza fue debido a una
buena preparación y apropiada imple-
mentación de las herramientas de la vali-
dación de limpieza.
Los procedimientos de limpieza e higieniza-
ción del área son adecuados para los pro-
pósitos previstos de mantener el área den-
tro de los criterios de aceptación
establecidos para este tipo de planta. Los
higienizantes que se utilizan Surfalyse al
0.25 % (aldehídos), Bactylisine al 0.25 %
(amonio cuaternario) para pisos, paredes y
cortinas en combinación con etanol al 70 %
son efectivos. A las ocho horas de realizada
la limpieza, algunos de los puntos se van del
criterio de aceptación considerando la eje-
cución de operaciones que se realizan en la
zona adyacente a los mismos, tomándose
como recomendación proceder a una lim-
pieza más localizada en estos puntos.

Bibliografía:
1. Regulación 16-2006 Directrices sobre BPF de Pro-
ductos Farmacéuticos del CECMED
2. Final Version of Annex 15 to the EU Guide to
Good Manufacturing Practice: Qualification and vali-
dation, European Commission, Brussels, July 2001.
3. Guía de la OMS sobre los requisitos de las prácti-
cas adecuadas de fabricación (PAF) Segunda parte:
Validación, Gillian Chaloner- Larsson, Ph.D, GCL
Bioconsult, et. al, WHO/VSQ/97.02, Original: inglés,
distribución general.
MAYO/JUNIO09 39