G2.Ochoa - Cromatrografia en Columna

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO
Práctica No.: 14 Manual de Prácticas de QUÍMICA

Laboratorio de:
Semana: 14 Ciclo - Paralelo: I “A”
Docente: Dr. Luis A. Morocho Yaguana
Estudiante(s): Bryan Fabian Castillo Vega
Susana María Ochoa Calva
Katiuska Yaritza Rentería Valdivieso.
INFORME/REPORTE DE PRÁCTICA DE LABORATORIO
1. Tema
Cromatografía en columna
2. Introducción:
Cromatografía en columna es una de las técnicas más útiles para purificar compuestos.
Esta técnica utiliza una fase estacionaria, que se embala en una columna, y una fase móvil
que pasa a través de la columna. Esta técnica aprovecha las diferencias de polaridad entre
compuestos, permitiendo que las moléculas suelen estar separado. Las dos fases
estacionarias más comunes para cromatografía en columna son gel de sílice (SiO2) y
alúmina (Al2O3), con más común utiliza fases móviles siendo solventes orgánicos. El
solvente para la fase móvil depende de la polaridad de las moléculas de ser purificada.
Más compuestos polares requieren típicamente más disolventes polares con el fin de
facilitar el paso de las moléculas a través de la fase estacionaria. Una vez finalizado el
proceso de purificación del solvente puede eliminarse de las fracciones recogidas
utilizando un evaporador rotatorio para producir el material aislado. (JoVE Science
Education,2023).
3. Desarrollo
• Empacamos la columna
• Colocamos un algodón en la bureta, luego añadimos el eluyente (35 de hexano y 15
acetato de etilo), posteriormente colocamos la arena de mar
1
• Luego lavamos los lados de bureta que se haya quedado la arena de mar con cuidado
usando una pipeta Pasteur con eluyente.
• Agregamos el silicagel, de igual manera lavamos con eluyente las paredes de la
bureta, después añadimos otra capa de arena de mar.
• Con ayuda de una pipeta Pasteur, deposite la muestra en la columna y abra la llave
de paso y eluya una pequeña cantidad de eluyente hasta que la muestra quede
ligeramente por sobre la capa de arena y agregar con mucho cuidado una pequeña
cantidad de eluyente. Abra la llave de paso y extraiga una nueva porción de eluyente
y agregue más eluyente. Repita el procedimiento hasta que el eluyente sobre la
muestra no cambie de color y agregue suficiente eluyente para empezar a eluir.
• Enumere los viales del 1 al 20 y empiece obtener porciones de unos 4 mL.
• Agregar suficiente cantidad de eluyente a la columna de tal manera que nunca
quede el nivel de eluyente bajo la capa de arena de la columna.
• El proceso de fraccionamiento se da por terminado cuando la columna quede
completamente blanca (Mezclas coloreadas, y si no se controla con TLC).
• Si en la parte superior de la columna se observa que una parte de la mezcla no
eluye, se debe aumentar la polaridad del eluyente agregando porciones de acetato
de etilo a la mezcla.
• Con ayuda de un a micropipeta tomar muestras y elaborar una TLC con cada una
de las fracciones y realizar la corrida. Usar el mismo eluyente.
• Observe la placa bajo luz UV.
• Revelar la placa de TLC con óleo.
2
4. Observaciones
5. Conclusiones
• La cromatografía en columna es un método muy útil para la separación de
porciones considerables de compuestos de una mezcla que tengamos, y es
importante tomar en cuenta todas las precauciones para asegurarnos que se ha
obteniendo el resultado esperado.
• Este tipo de cromatografía se emplea para la separación de mezclas o para la

purificación de sustancias, reteniendo en su fase estacionaria a algunos
compuestos por su propiedad de absorción, por la cual pasara una corriente de
disolvente o mezcla de disolventes que arrastrara a los compuestos que están en la
mezcla, haciéndolos avanzar a través de la columna. Este tipo de cromatografía se
utiliza para saber en qué recipientes se encuentra un componente buscado.
3
6. Recomendaciones
• Seguir detalladamente el manual de prácticas con respecto a la práctica
desarrollada para obtener los resultados esperados.
• La arena de mar a utilizar no debe reaccionar con los productos.
• Tener cuidado al empacar la columna ya que se pueda dañar y tocara repetir todo
el procedimiento nuevamente.
7. Preguntas de control
1. ¿Cuáles son los principios de la cromatografía en columna?
En la cromatografía en columna, la fase estacionaria se introduce en una columna de
vidrio o de metal.
Se aplica la mezcla de analitos y se hace pasar la fase móvil, comúnmente
denominada eluyente, a través de la columna mediante un sistema de bombeo o aplicando
presión de gas.
La fase estacionaria se recubre en pequeñas partículas discretas (la matriz) y se
introduce en la columna o se aplica como una fina película en la pared interior de la columna.
A medida que el eluyente fluye a través de la columna, los analitos se separan en
función de sus coeficientes de distribución y emergen individualmente en el eluyente al salir
de la columna.
2. ¿De qué depende el desplazamiento de las sustancias?
El desplazamiento de las sustancias en la cromatografía en columna depende de la
afinidad de cada sustancia por el adsorbente y por el disolvente o mezcla de disolventes
3. ¿El silicagel usado para TLC es el la misma para la cromatografía de columna?
El silicagel es empleados en la técnica de capa fina, son generalmente mucho más
finos (menor tamaño de partícula) que la clase de correspondientes a la cromatografía en
columna. La mayor superficie del adsorbente de la clase correspondiente en capa fina,
4
produce una separación mucho mejor que la que se puede obtener en cromatografía de
columna, este adsorbente de grado fino no se emplea en cromatografía de columna ya que la
velocidad del flujo sería demasiado lenta. Por esto mismo, el adsorbente para columna será
más grueso (mayor tamaño de partícula) esto debido a que entre más grueso sea el
adsorbente, más rápidamente pasará el disolvente a través de él.
4. ¿Qué otros compuestos se pueden usar como fase estacionaria para
cromatografía de columna?
Gel de sílice: es el absorbente mayormente utilizado para las cromatografías en
columna. A veces, en sustitución del gel de sílice, cuando éste es incompatible con la mezcla
a cromatografiar, se utilizan la alúmina o el florisil (silicato magnésico)
Alúmina: es un compuesto químico que se utiliza como absorbente en la
cromatografía de columna. Es un material poroso que se utiliza para separar los componentes
de una mezcla
Florisil: es un silicato magnésico que se utiliza como absorbente en la cromatografía
de columna. Es un material poroso que se utiliza para separar los componentes de una
mezcla
5. ¿En qué se diferencia la TLC de la cromatografía en columna?
la TLC tiene una fase estacionaria de alúmina o gel de sílice, se realiza contra la
gravedad, se usa con fines analíticos, se realiza en menos tiempo, usa una menor cantidad de
disolvente para separar los analitos, se requiera un disolvente más polar.
Por otro lado, la cromatografía en columna se empaca su fase estacionaria con un
material de matriz adecuado, tales como sílice, se realiza por gravedad, requiere de más
tiempo para separarse, mayor cantidad de disolvente para separar los analitos así mismo
necesita menos disolvente polar en comparación con la TLC.
5
6. ¿Qué criterios se observan para definir la cantidad de silicagel a usarse en la
cromatografía de columna?
Para definir la cantidad a utilizar de silacagel se debe tener en cuenta la cantidad de
muestra a separar, el tipo de analito, el solvente a utilizar en dependencia de esto se debe usar
una cantidad adecuada de silicagel para que de esta manera permita una buena separación de
los componentes.
7. ¿Cómo se elige la mezcla del eluyente?
La mezcla del eluyente se elige en función de la polaridad de los componentes de la
muestra y la polaridad de la fase estacionaria. El objetivo es elegir un eluyente que tenga una
polaridad similar a la de los componentes de la muestra para que se puedan separar
eficazmente. Si los componentes de la muestra son polares, se puede utilizar un eluyente
polar como agua o metanol. Si los componentes son no polares, se puede utilizar un eluyente
no polar como hexano o cloroformo
8. ¿Antes de desarrollar una cromatografía de columna, es necesario realizar
una TLC? ¿Por qué?
Se realiza una cromatografía TLC de la muestra que se va a purificar para determinar
el disolvente apropiado para la cromatografía.
9. ¿El diámetro de la columna incide en la realización de la cromatografía de
columna? ¿Por qué?
El diámetro de la columna es un factor importante en la cromatografía de columna,
ya que afecta directamente la eficacia y resolución de la separación. Las columnas más largas
y delgadas se utilizan para separar los componentes de una mezcla de manera más efectiva
debido a su mayor relación superficie-volumen y permiten una mayor resolución entre los
componentes de la mezcla.
6
8. Bibliografía
Franco,J.(2023). Cromatografía en columna. JoVE Science Education.
Recuperado de https://www.jove.com/es/v/10217/column-
chromatography?language=Spanish
Muñoz D, Rosell G. (2021). Operaciones Básicas en el Laboratorio de
Química. Universidad de Barcelona. Recuperado de
https://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html
Morocho Yaguana, L. A. (2023). Manual de prácticas de laboratorio Química
Inorgánica y Orgánica. 38.
Soto,F. (2020). Cromatografía en cap fina y columna. Universidad Autónoma
de México. Recuperado de
https://www.researchgate.net/publication/341718125_CROMATOGRAFIA_EN_CA
PA_FINA_Y_COLUMNA

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Práctica No.: 14 Manual de Prácticas de QUÍMICA

INFORME/REPORTE DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

proceso de purificación del solvente puede eliminarse de las fracciones recogidas

utilizando un evaporador rotatorio para producir el material aislado. (JoVE Science

• Colocamos un algodón en la bureta, luego añadimos el eluyente (35 de hexano y 15

acetato de etilo), posteriormente colocamos la arena de mar

usando una pipeta Pasteur con eluyente.

• Agregamos el silicagel, de igual manera lavamos con eluyente las paredes de la

bureta, después añadimos otra capa de arena de mar.

y agregue más eluyente. Repita el procedimiento hasta que el eluyente sobre la

muestra no cambie de color y agregue suficiente eluyente para empezar a eluir.

• Enumere los viales del 1 al 20 y empiece obtener porciones de unos 4 mL.

• Agregar suficiente cantidad de eluyente a la columna de tal manera que nunca

quede el nivel de eluyente bajo la capa de arena de la columna.

• El proceso de fraccionamiento se da por terminado cuando la columna quede

completamente blanca (Mezclas coloreadas, y si no se controla con TLC).

• Si en la parte superior de la columna se observa que una parte de la mezcla no

eluye, se debe aumentar la polaridad del eluyente agregando porciones de acetato

de las fracciones y realizar la corrida. Usar el mismo eluyente.

• Observe la placa bajo luz UV.

• Revelar la placa de TLC con óleo.

• La cromatografía en columna es un método muy útil para la separación de

porciones considerables de compuestos de una mezcla que tengamos, y es

importante tomar en cuenta todas las precauciones para asegurarnos que se ha

obteniendo el resultado esperado.

• Este tipo de cromatografía se emplea para la separación de mezclas o para la

compuestos por su propiedad de absorción, por la cual pasara una corriente de

disolvente o mezcla de disolventes que arrastrara a los compuestos que están en la

mezcla, haciéndolos avanzar a través de la columna. Este tipo de cromatografía se

utiliza para saber en qué recipientes se encuentra un componente buscado.

• Seguir detalladamente el manual de prácticas con respecto a la práctica

desarrollada para obtener los resultados esperados.

• La arena de mar a utilizar no debe reaccionar con los productos.

1. ¿Cuáles son los principios de la cromatografía en columna?

En la cromatografía en columna, la fase estacionaria se introduce en una columna de

Se aplica la mezcla de analitos y se hace pasar la fase móvil, comúnmente

denominada eluyente, a través de la columna mediante un sistema de bombeo o aplicando

La fase estacionaria se recubre en pequeñas partículas discretas (la matriz) y se

A medida que el eluyente fluye a través de la columna, los analitos se separan en

función de sus coeficientes de distribución y emergen individualmente en el eluyente al salir

2. ¿De qué depende el desplazamiento de las sustancias?

El desplazamiento de las sustancias en la cromatografía en columna depende de la

afinidad de cada sustancia por el adsorbente y por el disolvente o mezcla de disolventes

3. ¿El silicagel usado para TLC es el la misma para la cromatografía de columna?

El silicagel es empleados en la técnica de capa fina, son generalmente mucho más

finos (menor tamaño de partícula) que la clase de correspondientes a la cromatografía en

columna. La mayor superficie del adsorbente de la clase correspondiente en capa fina,

columna, este adsorbente de grado fino no se emplea en cromatografía de columna ya que la

adsorbente, más rápidamente pasará el disolvente a través de él.

4. ¿Qué otros compuestos se pueden usar como fase estacionaria para

Gel de sílice: es el absorbente mayormente utilizado para las cromatografías en

a cromatografiar, se utilizan la alúmina o el florisil (silicato magnésico)

Alúmina: es un compuesto químico que se utiliza como absorbente en la

Florisil: es un silicato magnésico que se utiliza como absorbente en la cromatografía

5. ¿En qué se diferencia la TLC de la cromatografía en columna?

disolvente para separar los analitos, se requiera un disolvente más polar.

Por otro lado, la cromatografía en columna se empaca su fase estacionaria con un

necesita menos disolvente polar en comparación con la TLC.

6. ¿Qué criterios se observan para definir la cantidad de silicagel a usarse en la

Para definir la cantidad a utilizar de silacagel se debe tener en cuenta la cantidad de

7. ¿Cómo se elige la mezcla del eluyente?

La mezcla del eluyente se elige en función de la polaridad de los componentes de la