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INTRODUCCIN

La cromatografa en columna se caracteriza porque la fase estacionaria se coloca


en una columna vertical; generalmente es un material inerte finamente dividido y
hmedo. La muestra es separada cuando s llevada hacia debajo de la columna
por un eluente, o sea la fase mvil. El coeficiente de distribucin, con respecto a
las dos fases es diferente para cada componente de la muestra, por lo tanto, cada
una viaja independientemente a travs de la columna, separndose en tiempos
relativamente cortos.
Si la mezcla contiene sustancias coloreadas, los compuestos aparecen en el
empacado de la columna, con bandas de diferentes colores. La adicin continua
del eluente, finalmente fluye cada uno de los componentes, quedando como
soluciones coloreadas, la recuperacin de los componentes puros solo es posible,
por simple evaporacin del solvente. Este tipo de cromatografa se cataloga dentro
de la cromatografa de particin.
Cuando la columna se empaca con el material de soporte humedecido con el
mismo eluente, se incluye en el tipo de cromatografa de adsorcin. La velocidad
de separacin en este caso depende del grado de adsorcin que tengan los
compuestos en el soporte.
En ambos casos, las propiedades de solubilidad de adsorcin estn en funcin de
la estructura molecular de los diferentes compuestos por separados.

OBJETIVOS.
Separar el ion dicromato y el ion permanganato de una mezcla usando la
cromatografa de columna.

Conocer la tcnica de cromatografa en columna, sus caractersticas y los
factores que en ella intervienen.




MARCO TERICO

La cromatografa liquida en columna (CLC) es una variedad de la cromatografa en
la que la fase mvil es lquida y pasa a travs de la fase estacionaria, solida o
liquida, que esta retenida en un recinto cilndrico. Con frecuencia es llamada
cromatografa en columna (CC) o cromatografa liquida (CL) de forma
incorrecta ya que estas denominaciones tambin abarcan otras alternativas (gases
y plana, respectivamente).
La modalidad clsica de la cromatografa liquida en columna consiste en hacer
pasar mediante gravedad la fase liquida sobre el slido soporte o activo retenido
en una columna recta, generalmente de vidrio, de dimensiones consideradas, y
recogida del eluido en fracciones.
Tal como ya fue descrito, en la cromatografa de columna la mezcla de
compuestos que se van a separar se colocan en la parte superior de un tubo
cilndrico de vidrio relleno con partculas finas de un material solido absorbente,
tpicamente slice o almina; este material solido constituye la fase estacionaria. El
adsorbente (con la mezcla de compuestos que se desea separar absorbidos) se
lava continuamente con un flujo de solvente (fase mvil) que va pasando a travs
de la columna. Los solutos que conforman la mezcla (llamados eluatos) se
absorben en las partculas de la slice en el extremo superior de la columna; el
flujo continuo del solvente a travs de la columna eluye o (lava) los solutos
adsorbidos a la slice y los arrastra hacia abajo; por lo tanto el solvente tambin
llamado eluyente. Los diferentes componentes de las mezcla se mueven a travs
de la columna se eluyen a velocidades diferentes que dependen de su afinidad
relativa por el adsorbente y por el eluyente. De esta manera los componentes de
la mezcla se van separando, de tal manera que en la parte inferior de la columna
se pueden ir recolectando pequeos volmenes de solvente o (fracciones)
conteniendo individualmente los compuestos que van a ser separados.




Parmetros que afectan la separacin. La cromatografa es ciertamente un
mtodo sofisticado de separacin de mezclas, su versatilidad depende de muchos
factores que deben ajustarse, los cuales incluyen:
El absorbente escogido.
La polaridad del solvente o de los solventes que se escojan
El tamao de la columna (longitud y dimetro) en relacin con la cantidad
de material que se va a someter a cromatografa.
La velocidad de elucin (o flujo).
En condiciones normales, usando adsorbentes polares como slice, almina o
celulosa, los solutos no polares atraviesan la columna ms rpidamente que los
solutos polares, ya que los primeros tienen menor afinidad por el adsorbente. Si el
adsorbente enlaza los solutos muy fuertemente, ellos no descienden en la
columna. De otra parte si se escoge un solvente demasiado polar, todos los
solutos (polares y no polares) son lavados de la columna sin alcanzarse a separar.
Debe entonces escogerse un adsorbente y un solvente que no favorezca
excesivamente ninguno de los dos extremos acabados de describir.
Tamao de la columna y cantidad de adsorbente.
Como norma general de aproximacin, la cantidad de adsorbente a utilizarse
debe ser 25 a 30 veces en peso con respecto a la cantidad de la mezcla que se va
a separar. Adicionalmente, la columna debe tener una relacin altura/dimetro de
aproximadamente 8/1. La tabla siguiente resume algunas condiciones tpicas.




Relaciones aproximadas entre la cantidad de la muestra, cantidad de
adsorbente y dimensiones de la columna.

Las relaciones acabadas de explicitar deben cambiarse segn el grado de
dificultad de separacin de los componentes de la mezcla; as, pueden usarse
menores cantidades de adsorbente o menores dimensiones de la columna cuando
los componentes de la mezcla se separan con mucha facilidad, pero deben
aumentarse si los componentes de la mezcla son ms difciles de separar.
Monitoreo de la separacin en la columna. La elucin de materiales coloreados
se visualiza muy fcilmente a medida que descienden por la columna, por lo cual
el experimentador sabe a ciencia cierta en que momento cambia la recoleccin de
cada fraccin. Si los materiales no son coloreados puede conectarse a la parte
inferior de la columna un dispositivo detector que produce seale elctricas que se
registran en forma de picos a medida que los compuestos van emergiendo de la
columna y del detector; cada componente que sale de la columna produce un pico,
as que se cambia de fraccin cuando termina un pico y empieza la formacin de
uno nuevo. Si no se dispone de un detector, deben recogerse fracciones de
tamao proporcional a la cantidad total de solvente utilizado y de material
adsorbente; a continuacin se lleva a cabo una cromatografa de capa fina de
cada una de las fracciones recogidas; a continuacin se combinan las fracciones
con idntico patrn en la placa de TLC.




Recuperacin de los componentes separados. Una vez combinados las
fracciones idnticas, el solvente se evapora y el compuesto resultante se termina
de purificar de la manera tradicional (mtodos de destilacin si el compuesto es
lquido o mtodos de cristalizacin si el compuesto es slido). La secuencia
cromatografa-destilacin (para lquidos) o cromatografa-cristalizacin (para
solidos) por lo general da lugar a compuestos muy puros.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparacin de la columna.
Colocamos una bolita de algodn en el fondo de la columna con ayuda de una
varilla para evitar que se desprenda el gel de slice cuando abramos la llave.

Sujetamos la columna con dos pinzas y nos aseguramos de que este recta.


Mezclamos, en la campana, gel de slice y cido ntrico para formar una pasta
fluida.



Con ayuda de un embudo, vertemos la pasta en la columna asegurndonos de
que la llave est cerrada. Si quedan partculas de slice en las paredes de la
columna, se pueden arrastrar con cido ntrico con ayuda de una pipeta de
Pasteur y un hbil movimiento de mueca.

Se debe compactar la slice que quedara en el fondo de la columna, para ello
podemos utilizar una goma dando unos golpes ligeros sujetando la columna con la
otra mano. Una vez bien compactada, procedemos a abrir la llave para que caiga
el disolvente caiga hasta que queden unos 5mm por encima de la slice. (La slice
no debe secarse nunca).


Procedemos aadir la muestra (mezcla del ion dicromato y el ion permanganato).
Con ayuda de un embudo adicionamos la muestra a la columna.


Una vez adicionada la mezcla, procedemos abrir la llave de la bureta y los
compuestos empezaran a avanzar por la columna. El primero en eluir ser el ion
permanganato, este es recogido en fracciones de 2ml en unos viales.

Una vez el ion permanganato haiga sido separado se procede a cambiar de
solvente por cido sulfrico para separar el ion dicromato, de igual forma se
procede a recoger en fracciones de volmenes de 2ml en viales.


Una vez terminado el proceso se procede envolver los viales con papel aluminio
ya que estos iones son fuertes agentes oxidantes. Posteriormente se lleva las
muestras recogidas al colormetro para examinar su absorbancia.



RESULTADOS
# compuesto Absorbancia
(A)
Longitud de
onda (nm)
1 1,031 530
2 2,493 530
3 1,837 530
4 2,230 530
5 2,641 530
6 0,222 470
7 0,056 470
8 0,024 470
9 0,026 470
10 0,034 470

ANALISIS DE RESULTADOS
En el procedimiento para la separacin del ion dicromato y el ion permanganato de
una mezcla usando la cromatografa en columna se pudo observar que al utilizar
primero HNO
3
como eluyente emergi primero el ion permanganato de la columna,
lo que se not a simple vista, por su color caracterstico (morado). La justificacin
de esto es que el HNO
3
hace que el dicromato se adsorba ms fuertemente que el
ion permanganato en las partculas slidas de la fase estacionaria (slica gel),
entonces el primero est libre en disolucin una fraccin menor de tiempo. El ion
dicromato desciende por la columna ms lentamente que el ion permanganato y
emerge por la salida despus del ion permanganato.
Luego, cuando eluy todo el ion permanganato y comenz a emerger de la
columna una mezcla de los dos iones (color vino tinto), cambiamos el eluyente por
H
2
SO
4
; este hace que el ion dicromato no tenga mucha afinidad con las partculas
slidas de la fase estacionaria y eluya de la columna, lo que obtuvimos es que,
luego de salir la mezcla de iones de la columna eluy el ion dicromato (Color
amarillo un poco intenso). Observamos que el proceso de separacin finalizo
cuando de la columna emerga un compuesto transparente, que en este caso era
simplemente el H
2
SO
4.