Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas

Programa de Qumica
Fitoqumica II
Profesor Fernando Agudelo Aguirre
Tatiana del Pilar Pichin Aguirre (1083901031)
CROMATOGRAFA EN COLUMNA FLASH (CC)

1. RESUMEN
Se realiz una separacin de una mezcla de cristal violeta y naranja de
metilo por medio de cromatografa en columna, empleando una fase mvil o
eluyente (etanol) y una estacionaria o adsorbente (gel de slice), finalmente
se obtuvieron cada uno de los dos colorantes por separado.
2. INTRODUCCIN
La cromatografa en columna es quizs el mtodo ms general, utilizado
para la separacin, a la vez que para la purificacin, de diferentes
compuestos orgnicos que se encuentren en estado slido o lquido. En este
tipo de cromatografa, la fase estacionaria utilizada, es decir, el adsorbente,
se coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una
llave para controlar el paso de sustancias al exterior de la columna. La fase
estacionaria se impregna con el eluyente o fase mvil. Seguidamente la
mezcla orgnica que es de inters para separar se deposita por la parte
superior de la fase estacionaria, y as la fase mvil podr ir atravesando el
sistema.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase mvil, poco a poco
saldrn de la columna cromatogrfica, y se recogen en fracciones. Las
fracciones menos polares, que son por lo general las que se retienen poco o
nada en el absorbente, sern las primeras en salir de la columna. En
cambio, las sustancias ms polares, quedan retenidas por ms tiempo en el
absorbente, y a menudo es necesario el uso de diferentes disolventes con la
finalidad de incrementar su polaridad para que sean arrastradas por estos.
El tiempo que se necesita para hacer fluir un compuesto por la columna, se
conoce con el nombre de tiempo de retencin. Este tiempo vara, siendo
caracterstico de cada compuesto en una condiciones cromatogrficas
determinadas, que varan segn el absorbente usado, el disolvente, la
presin, el dimetro que tenga la columna utilizada, etc.
El absorbente mayormente utilizado para las cromatografas en columna, es
el gel de slice. A veces, en sustitucin del gel de slice, cuando ste es
incompatible con la mezcla a cromatografiar, se utilizan la almina o el
florisil (silicato magnsico). La cromatografa en columna puede realizarse
por gravedad o a media presin. Cuando se realiza a media presin, se
conecta la cabeza de la columna a un compresor o a una lnea de aire
comprimido. La medida de las partculas de gel de slice para realizar las
cromatografas a media presin debe ser ms pequeas que en el caso de la
cromatografa por gravedad. Si en la cromatografa por gravedad se utilizara
un gel de slice con un tamao de partculas ms pequeas, no se producira
elucin, pues se impedira el flujo del disolvente. Pero en cambio, se aplica
presin, entonces debido a la fuerza si se producira la elucin por el
disolvente.

A causa de la disminucin del tamao de las partculas del absorbente, se

produce una separacin ms eficaz. Generalmente la cromatografa a media
presin, produce mejores resultados que la cromatografa por gravedad, y
adems, al ser ms rpida, es la ms utilizada.
Cuando se va a realizar una cromatografa en columna, lo primero que debe
hacer es elegir un disolvente apto, para as optimizar la separacin de los
componentes de la mezcla. Dicha operacin se produce a travs de
cromatografa analtica en capa fina. La variante ms influyente en la
eficacia de la separacin de la cromatografa a media presin usando gel de
slice es el dimetro de la columna, as como la cantidad de gel utilizado.
Para elegir el disolvente, primero se lleva a cabo una cromatografa en capa
fina de la muestra a analizar. El disolvente debe producir una buena
separacin de los componentes de la mezcla en la placa, colocando el
componente menos polar a un Rf cercano a 0.3. En el caso de columnas
pequeas, lo ideal es usar un eluyente menos polar que el conseguido en el
resultado de la cromatografa en placa.
A veces se utilizan mezclas de disolventes y se hace una elucin en
gradiente. Para esto, la cromatografa se inicia con una mezcla de
disolventes de polaridad adecuada para poder separar el componente que
posea mayor Rf, y as, una vez recogido, se aumentar poco a poco la
polaridad para poder ir separando los componentes ms polares. Si cuando
se empieza la cromatografa se usa un disolvente excesivamente polar, los
componentes de la mezcla eluirn conjuntamente, lo que llevara a que la
separacin no tenga lugar. Una de las mezclas de disolventes ms utilizadas
es hexano/acetato de etilo. (Mndez A, 2011)

Figura 1. Montaje de cromatografa en columna

3. MATERIALES Y REACTIVOS
1 columna para cromatografa
1 Beaker 600 mL
1 Erlenmeyer 150 mL
1 Probeta 100 mL
10 tubos de ensayo
1 Embudo de gravedad
1 Frasco lavador

1 Pipeta de 5 mL graduada
Gel de slice
Etanol
Agua destilada
Trietilamina
Solucin de cristal violeta
naranja de metilo 1:1

4. METODOLOGA
Se realiz el montaje de cromatografa en columna, sujetando la columna en
posicin vertical, a un soporte utilizando una pinza en la parte superior. Se
coloc un erlenmeyer debajo de la columna y un embudo en la parte
superior. En un vaso de precipitados se prepar una suspensin con 5 g de
gel de slice (adsorbente) y 50 mL de etanol (eluyente). Se aadi un poco
de etanol a la columna y luego se verti la suspensin previamente
preparada en su interior. Se abri la llave, se golpearon suavemente las
paredes de la columna mientras duraba la sedimentacin del adsorbente
para que este se compactara adecuadamente procurando que no se
formaran burbujas y evitando que se secara el gel de slice.
El etanol que se iba recogiendo de la columna se incorporaba al vaso donde
se prepar la suspensin adsorbente-eluyente para as recuperar el gel de
slice que hubiera podido quedar y se trasvas todo de nuevo a la columna.
Se dej que el eluyente bajara hasta una altura sobre el adsorbente de 1-2
mm, se cerr la llave de la columna se quit el embudo y con una pipeta se
aadi cuidadosamente 1 mL de una solucin preparada de cristal violeta y
naranja de metilo. Se abri la llave de la columna para que esta disolucin
quedara inmersa en el gel de slice y se volvi a cerrar cuando la disolucin
de colorantes alcanz una altura de 1 mm sobre el adsorbente. Se
aadieron con una pipeta 5 mL de etanol con mucho cuidado y muy
lentamente para no distorsionar el frente de la columna. A continuacin, se
abri la llave y se continu aadiendo etanol para desarrollar la columna
hasta que se recogi el primer colorante. Despus se utiliz una mezcla de
disolventes: etanol/trietilamina en proporcin 7:3 como eluyente para el
segundo colorante.
DIAGRAMA DE FLUJO

5 g gel slice + 50 mL de
etanol
En columna
que

1 mL de una
solucin
preparada
de
cristal violeta y

VERTIR
RECOLECTAR
AADIR

5 mL de
RECOLECTAR

Etanol/trietilamina
7:3
Segundo

Con la llave de la
columna abierta el
etanol hasta
una
altura
sobre
el

RECOLECTAR

Primer

5. RESULTADOS
Se obtuvieron los dos colorantes por separados; donde el primero en salir de
la columna fue el naranja de metilo y posteriormente en cristal violeta:

Figura 2. Extraccin del naranja de metilo

Extraccin del cristal violeta

Figura 3.

Figura 4. Colorantes separados

6. DISCUSIN
La cromatografa en columna es una tcnica empleada para la separacin
de componentes de una muestra de inters, en este caso fue empleada una
mezcla de naranja de metilo el cual es un colorante azoico (los azoderivados contienen el agrupamiento N=N-, son compuestos intensamente
coloreados y muchos se emplean como colorantes) que se utiliza como
indicador cido-base y es amarillo en medio bsico y rojo en medio cido. El
cristal violeta es un colorante derivado del trifenilmetano y tambin se
emplea como indicador de pH y colorante. Ambos compuestos son muy
polares y sus estructuras son:

En la separacin de componentes por cromatografa, se emplea un

adsorbente o fase estacionaria, el gel de slice o cido silcico es uno de los
ms utilizados, es dbilmente cido, su pH oscila entre 4-5. Con lo cual no
se deber utilizar con sustancias que se corrompan con los cidos. Los geles
de slice normales suelen contener impurezas de hierro y/o aluminio, este
factor tambin se debe tener en cuentas respecto al uso de componentes.
El tamao del grano suele ser de 10 a 40 micras () y el tamao de poro
vara de 20 a 150, esto se debe tener en cuenta dado a que partculas muy

grandes podran tapar los poros de la columna y no permitir el flujo del

eluyente.
Tambin fue empleada una fase mvil o eluyente, con el fin de que
atravesara la fase estacionaria, arrastrando los diferentes compuestos, para
este caso se emple un disolvente polar; el etanol, este tiene la capacidad
de formar puentes de hidrogeno y de ceder pares de electrones o poseen un
grupo funcional OH capaz de ceder protones, este tipo de disolventes son
llamados prticos.
Ambos colorantes son polares, pero el naranja de metilo es menos polar,
estas fracciones son por lo general las que se retienen poco en el
absorbente, y por tanto fue la primera en salir de la columna, como se
observa en la figura 2. En cambio, las sustancias ms polares, quedan
retenidas por ms tiempo en el absorbente, y a menudo es necesario el uso
de diferentes disolventes con la finalidad de incrementar su polaridad para
que sean arrastradas, por esta razn, fue necesario el uso de una mezcla de
disolventes (etanol/trietilamina, 7:3) para obtener el segundo colorante con
mayor facilidad, pues este haba quedado retenido en la parte superior
como se observa en la figura 3. Finalmente se obtuvieron ambos colorantes
como se observa en la figura 4, gracias a las diversas polaridades tanto de
los componentes de la muestra como de los disolventes empleados a
diferentes tiempos y a la afinidad de cada uno de estos.
7. CUESTIONARIO

El valor del Rf depende del adsorbente utilizado? Y del eluyente?

La retencin se puede explicar en base a la competencia que se establece

entre el soluto a separar y la fase mvil por adsorberse a los centros activos
polares de la fase estacionaria, por tanto depende tanto del eluyente como
del adsorbente. As, las molculas de soluto se encuentran adsorbidas en la
fase estacionaria y a medida que se produce la elucin van siendo
desplazadas por la fase mvil. La retencin y la selectividad en la
separacin dependen de los valores respectivos de las constantes de los
diferentes equilibrios qumicos que tienen lugar, que estn en funcin de; la
polaridad del compuesto, determinada por el nmero y naturaleza de los
grupos funcionales presentes. Los solutos ms polares quedarn ms
retenidos puesto que se adsorben ms firmemente a los centros activos de
la fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirn con mayor
facilidad y la naturaleza del disolvente. As, para un mismo compuesto, un
aumento en la polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en la
placa. La relacin entre las distancias recorridas por el soluto y por el
eluyente desde el origen de la placa se conoce como el Rf, y tiene un valor
constante para cada compuesto en unas condiciones cromatogrficas
determinadas (adsorbente, disolvente, tamao de la cubeta, temperatura,
etc.).
Para calcular el Rf se aplica la siguiente expresin:

Rf =

Distancia recorrida por el compuesto

Distancia recorrida por el eluyente

Sugerir un ensayo para determinar la pureza de un compuesto por CCF

Empleando distintos eluyentes se debe probar que solo aparezca una

mancha esto determina la pureza del compuesto.

8. CONCLUSIN
Por medio de la cromatografa en columna fue posible separar una mezcla
de cristal violeta y naranja de metilo, empleando etanol como eluyente y gel
slice como adsorbente; el etanol extrajo el compuesto menos polar (naranja
de metilo) y finalmente una mezcla de etanol/trietilamina fue empleada
para extraer el cristal violeta.
9. BIBLIOGRAFA
Gua prctica cromatografa en columna flash, Profesor Fernando Agudelo
Aguirre.
Cromatografa en columna, Mndez A, 2011, citado el 26 de abril de 2015,
disponible
en:
http://quimica.laguia2000.com/general/cromatografia-encolumna
Retencin en cromatografa, citado el 27 de abril de 2015, disponible en:
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guionp6.pdf