CROMATOGRAFIA

LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA I : PRACTICA N’ 11

1. COMPETENCIAS

Conocer la técnica de cromatografía en capa fina mediante la separación

de mezclas con compuestos conocidos.

2. FUNDAMENTO TEORICO.

La cromatografía es una de Ias técnicas de separación de sustancias que

involucran una fase móvil pasando per una fase estacionaria. La capacidad
de separar los diferentes componentes de una mezcla de compuestos
orgánicos esté basado en adsorción selectiva y preferencial de estos
componentes de la fase móvil por la fase estacionarla.

Existen una variedad de tipos de cromatografía (en columna, en placa

fina, en gases, de alta, media y baja presión, etc.) Ia separación de
mezclas (algunas veces mezclas muy complejas de multicomponentes) se
logra por la exposición de Ias mezcla al sistema básico que se deja
Llegar al equilibrio. Las dos fases que intervienen en la separación
pueden ser dos líquidos inmiscibles, un gas solido o un líquido y una
fase sólida.

Aunque a veces es difícil establecer el papel de cada fase (estacionaria

o móvil) podemos decir que la cromatografía liquido-líquido corresponde
aproximadamente a múltiples extracciones, mientras que Ias cromatografías
gas sólido y liquido -solido implican la adsorción de la muestra en una
superficie.

Por otro lado, la cromatografía sobre papel es prioritariamente un

fenómeno de extracción líquido. La cromatografía en capa fina y la de
columna son esencialmente similar y utilizan la adsorción como medio
principal de purificación, pero tiene algo de extracción líquido líquido.
La extensión en que esta última caracterl’stica tiene lugar, depende de
la extensión en que el agua este presente sobre la superficie de
absorbente. Cuanto menos agua haya, mas activado se considera el
adsorbente. En Ias cromatografías gas líquido (CGL) o en fase vapor (CFV)
el fraccionamiento se debe a la extracción, destilación y en pequeño
grade a la adsorción.

La cromatografía en columna y en capa fina solo difiere en el medio de

soportar el adsorbente. En ambas técnicas se emplea alamina o gel de
sílice como fase estacionaria y una fase móvil orgánica. Los principales
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que se aplican a una variante de la técnica cromatografía, se aplican
también a las demás variantes. La principal diferencia entre la
cromatografía en columna y en capa fina es que en la cromatografía en
columna el adsorbente se introduce en un tubo o columna (generalmente de
vidrio), mientras que la cromatografía en capa fina, el adsorbente es
depositado en forma de capa delgada sobre una placa de vidrio 0 de
plástico.

La fase móvil en la cromatografía en columna se hace caer a través de la

columna, es decir la fuerza matriz es la gravedad, mientras que en la
cromatografía en capa fina, la acción capilar del adsorbente hace subir
el disolvente desde un depósito situado en la parte inferior de la placa.
No obstante este diferencia, el proceso fundamental de separación
permanece el mismo en ambos cases: Ia distribución de un compuesto
desconocido entre la fase liquida móvil y una fase inmiscible.
Cromatografía en capa fina CCF.

Existen ventajas que recomiendan la cromatografía en capa fina en vez de

papel y columna para d uso de rutina. Puede emplearse analítica mente
para determinar las características de separación de una mezcla antes de
intentar una separación cromatografía a gran escala. Otra ventaja es el
tiempo que se requiere para desarrollar el cromatogréma, 10 a 20 minutes.

Una vez elegido el adsorbente, gel de sílice o alamina, el método normal

de aplicación de la muestra sobre la placa consiste en el empleo de un
tubo capilar de pequeñito calibre. Un capilar muy bueno puede hacerse de
un tubo de punto de fusión o de una pipeta desechable. Se calienta el
tuba con un mechero y se estira firmemente de cada extrema de tubo. Se
formara un capilar fino que puede partirse por la mitad y usarse
directamente. Se debe tener, más de uno de estos tubos preparados. El
paso siguiente consiste en preparar una serie de disoluciones de la
muestra y de patrón. El procedimiento usual consiste en disolver unos
miligramos (usualmente no más de 10 mg) en un vial de vidrio con adición
de varias gotas de disolvente.

Debe emplearse la misma relación de peso a disolvente, tanto para la

muestra como para el patrón. La disolución de la muestro del patrón pueda
aplicarse a la placa tocando ligera mente el adsorbentes can el capilar,
dejando secar tal mancha y luego tocando de nuevo la placa. Luego se
coloca con mucho cuidado la placa en la cubeta ya prepa rada con el
fluyente o fase móvil se coloca el fluyente en cantidad necesaria de
acuerdo al tamaño de (a cubeta, se tapa herméticamente y se agita para
asegurarse que el fluyente satura la atmosfera que cubre el líquido). Se
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debe asegurar que la muestra sembrada queda encima del nivel del
efluente. Se tapa la cubeta y se deja desarrollar cl cromatogréma. Cuando
el frente del disolvente haya alcanzado una posición aproximada de 0.5 cm
del borde superior de la placa debe retirarse esta de la cubeta. Se marca
el frente con un lápiz y se deja evaporar el efluente. Luego se debe
determinar la localización de la muestra en la placa. Este proceso se
llama revelado. Se revela normalmente por exposición de placa a vapores
de [0:10 o a una fuente de luz ultravioleta.

Cromatografía en capa fina CCF.

Existen ventajas que recomiendan la cromatografía en capa fina en vez de

papel y columna para de uso de rutina. Puede emplearse analítica mente
para determinar las caracten’sticas de separación de una mezcla antes de
intentar una separación cromatografía a gran escala. Otra ventaja es el
tiempo que se requiere para desarrollar el cromatogréma, 10 a 20 minutes.

Una vez elegido el adsorbente, gel de sílice o alamina, el método normal

de aplicación de la muestra sobre la placa consiste en el empleo de un
tubo capilar de pequeñito calibre. Un capilar muy bueno puede hacerse de
un tubo de punto de fusión 0 de una pipeta desechable. Se calienta la
tuba con un mechero y se estira firmemente de cada extrema de tubo. Una
fuente de luz ultravioleta.

El método para determinar el movimiento relativo de un compuesto consiste

en comparar |a distancia recorrida por la muestra con la distancia
recorrida por el disolvente. Se denomina Rf que equivale a ”relación con
el frente" y ocasionalmente se Llama factor de retardo.

f = Distancia desde la siembra hasta donde llego Distancia total desde la siembra
hasta el frente
EL vapor de Rf que se obtiene depende del disolvente empleado, del espesor del
adsorbente, del tipo de capa, y en menor extensión la temperatura. Un Rf no puede ser
mayor a 1 m| menor que 0.

2.1. PARTE EXPERIMENTALCROMATOGRAFIA DE COLUMNA

1.Se arma el sistema como en la figure 1, se sujeta la columna de vidrio en posición

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vertical, y se introduce una pequeñita cantidad de algodón o lana de vidrio en el
extreme interior "Inferior para que no salga el gel de sílice. Colocar un matraz
Erlenmeyer en la parte de debajo de la columna y en |a parte superior colocando la
columna colocar un embudo de vástago largo, para introducir la solución de gel de
sílice.
2. En un vaso de precipitados se prepara una solución mezclando 5 g de gel de sílice
(adsorbente) y 50 a 60 ml de etanol (fluyente).

3. Se adiciona un poco de etanol (2-5 ml), Luego se adiciona Ia solución de gel que
se preparó con la ayuda del embudo analítico, se abre la Nave golpeando con una
manguerilla para evitar la formación de burbujas hasta que sedimente Ia solución de
gel, teniendo cuidado de que no se seque el gel de sílice.

4. El etanol que se va recogiendo de la columna se devuelve al vaso donde se preparó

y se vuelve a colocar a la columna para no perder el gel de sílice.

5. Se abre la Nave y se deja salir el etanol hasta 1 o 2 mm sobre la superficie del

adsorbente, se cierra la llave y se coloca 0.5 ml de la muestra. Se abre Ia llave de
la columna para que esta disolución quede inmersa en el gel de sílice y se vuelve a
cerrar cuando Ia disolución de colorantes alcanza una altura de 1 mm del interior del
adsorbente.

6. Se adiciona con una pipeta 5 ml de etanol con mucho cuidado y muy lentamente para
no distorsionar el frente de la columna. A continuación, se abre la Llave y se
continua adicionando etanol para desarrolla el proceso cromatógrafo.

7. A medida que avanza el desarrollo, empieza a adelantarse una franja de color

amarillo que es
primer componente de la mezcla.
8. Cuando la zona amarilla llega al nivel inferior donde está el algodón. Se cambian
con el matraz Erlenmeyer y se recoge esta fracción hasta que el líquido sea incoloro.

9. Posteriormente se colecta la segunda fracción que representa el segundo

componente, adicionando más cantidad de etanol para recuperarlo completamente.

10. Verificar cada fracción colectada por cromatografía en capa fina.

8. Cuando la zona amarilla llega al nivel inferior donde esta e1 algodón. Se cambian
el matraz Erlenmeyer y se recoge esta fracción hasta que el líquido sea incoloro.

9. Posteriormente se colecta la segunda fracción que representa el segundo

componente, adicionando más cantidad de etanol para recuperarlo completamente.

10. Verificar cada fracción colectada por cromatografía en capa fina.

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CROMATOGRAFIA EN PAPEL.

1. Recortar una tira de papel filtro con dimensiones que entren en el vaso dc
precipitados.

2. Realizar un trazo horizontal con Lápiz sobre el papel, sobre esta Línea colocar Ia
muestra como la figure 3 y 4.
3. Colocar al vaso el solvente a utilizar con una altura de 1 cm desde
la base de vaso.

4. Colocar al vaso ya preparado con el solvente el papel con la muestra

y sumergir un poco el papel sobre disolvente que se encuentra en el
vaso, esperar hasta que el solvente ascienda y separe los componentes
hasta que el solvente llegue hasta una altura de medio centímetro por
debajo de la parte superior del papel.
5. Sacar el papel del vaso y secarlo, Luego medir la distancia que
recorrió Ia muestra desde la base.

6. Medir Ia distancia total del papel que recorrió el solvente.

7. Determinar el Rf

CALCULOS Y RESULTADOS:
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OBSERVACIONES:

}
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CONCLUSIONES:

La cromatografía es un conjunto de técnicas basadas en el

principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los
distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes.
Con el estudio de la cromatografía de los ácidos y sus distintos
tipos de reacciones químicas se pudo determinar que las sustancias
pueden estar unidas en un factor que mediante la cromatografía de
las reacciones pueden separarse.