UT Nº 9:

Bioinformática y “ómicas”.
Aplicaciones en Biotecnología.

 Análisis de la expresión diferencial de genes

mediante microarreglos (“microarrays”)

Ingeniería Genética

Instituto de Química Biológica “Dr. Bernabé Bloj”

Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia-UNT
Dra. Mónica A. Delgado

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Sistema de alta capacidad para monitorear la
expresión de muchos genes

Micromatrices preparadas en un soporte físico o

chips donde están localizadas biomoléculas
conocidas a escala microscópica

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con biomoléculas
Tipos según la biomoléculas: ADN, ARN, proteínas, químicos,
anticuerpos, tejidos, entre otras.

Micromatrices preparadas con ADN

Evaluar la expresión de un gran número de genes,
en un reducido espacio.
Se basan en que el estado funcional de un organismo está
principalmente determinado por los genes que expresa.

El estudio de expresión génica se realizan de modo comparativo: la

inducción y/o represión de la síntesis de los ARNm y de otros ARNs
no traducidos en diferentes condiciones fisiológicas

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con ADN

Se basa en la hibridación de
ácidos nucleicos y su detección
por fluorescencia mediante
análisis de imagen, por lo que se
obtendrá señal fluorescente en
los puntos donde haya habido
hibridación; la intensidad de
fluorescencia será directamente
proporcional al nivel de expresión
del gen.

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con ADN: uso

-Expresión: Cuantificar un conjunto de mRNAs de una muestra.

-ChIP (Inmuno precipitación de cromatina): Identificar sitios de

unión de proteínas.

-Análisis de SNPs: Análisis de marcadores genéticos a gran escala.

-Tilling arrays: Localización de secuencias en el genoma.

-CGH (comparative genome hibridization): Localización de

reordenaciones cromosómicas.

-Secuenciación: Identificación de la secuencia nucleotídica.

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con ADN:
El proceso implica:

1- Preparar el soporte/material genético.

2- Incubar e hibridar con sondas fluorescentes

3- Detectar hibridación con tecnología láser:

4- Almacenar y analizar los datos

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con ADN:
Organización: Meta-columna

Bloques: con sondas están organizadas

Meta-fila

en filas y columnas.
columna
Las diferentes sondas del mismo gen
están repartidas por diferentes bloques
fila

Ficheros indican la posición y naturaleza

de las sondas.
Ficheros de anotación funcional del gen.

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 Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con ADN:

Diseño experimental:
Fuentes de variación y error
Técnica
Biológica

Cuantificación de la variación
Réplicas biológicas

Réplicas técnicas

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con ADN:
Resultados:
- 2 o más muestras marcadas con ≠ fluoróforo:
color “A”: ADN control
color “B” ADN muestra
color “C” doble hibridación
negro, o sin color: no hibridación
- Fichero de texto: coordenadas de la posición
del punto y su intensidad
- Normalización

-Análisis de expresión
diferencial

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Análisis de la expresión diferencial de
genes mediante microarreglos
Micromatrices preparadas con ADN:

Resultados:

- Análisis Funcional

- Minería de datos (data mining) - Conclusiones/nuevas hipótesis

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 Meta-columna
Meta-fila

columna
fila

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