Guía de Recursos y Aplicaciones de Lectinas)

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Guía de recursos y
aplicación de lectinas
Sección de amígdala (FFPE): teñida con lectina SNA conjugada CY®3 (rojonaranja). Montado en
VECTASHIELD HardSet Antifade Mounting Medium con DAPI (azul).
Tabla de contenido
Guía de recursos y aplicación de lectinas Vector Laboratories se fundó sobre una cartera
creciente de lectinas purificadas y conjugados de lectinas
que ayudaron a ser pioneros en la histoquímica de lectinas.
Estos productos siguen siendo un componente
2. Introducción clave de nuestro negocio en la actualidad. A
principios de la década de 1980, aprovechamos
nuestra experiencia en histoquímica para
2 Introducción y descripción general de las lectinas revolucionar el campo de la IHC con la
comercialización de reactivos de avidina biotina
basados en anticuerpos y la introducción del sistema
3 Lectinas – Historia VECTASTAIN® ABC. Este sistema permitió la
inmunohistoquímica de rutina con cualquier
microscopio de campo claro estándar. Tras el éxito de
4 aplicaciones que utilizan lectinas los kits ABC, Vector Laboratories continuó introduciendo
productos novedosos e innovadores para apoyar la visualización de antígenos de
Estos incluyen los reactivos de micropolímero
4 Histología – Inmunohistoquímica (IHC)
ImmPRESS®, los sistemas de detección MOM® (Mouse
on Mouse), sustratos enzimáticos únicos ImmPACT®,
6 Histología Inmunofluorescencia (IF) medios de montaje antidecoloración VECTASHIELD®
y kits de extinción de autofluorescencia TrueVIEW®
para aplicaciones de inmunofluorescencia. A principios
8 Citometría de flujo (FC): análisis y clasificación de 2020, ampliamos nuestra cartera de bioconjugación
con la adición de productos y servicios SoluLINK®
que incluyen una gama de kits de conjugación,
10 Cromatografía de afinidad
enlazadores de conjugación, perlas magnéticas y
agarosa, y reactivos de etiquetado de biotina y digoxigenina.
12 ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas)
14 Transferencia de Western
16 Ensayos enzimáticos – Glicosiltransferasas/Glicosidasas
18 Resonancia de plasmón superficial (SPR)
20 Cultivo Celular – Proliferación/Activación/Citotoxicidad
22 Seguimiento neuronal
24 Perfusión Vascular
26 Datos de validación de lectinas del NCFG
28 lectinas utilizadas para la investigación de Cornonavirus
30 Tabla de especificidad de lectinas y estructuras de glicanos
Portada: Riñón de ratón fijado en formalina, incluido

32 Propiedades de las lectinas con estructuras en parafina: lectina de Lycopersicon esculentum conjugada
DyLight® 488 (verde) montada en VECTASHIELD HardSet™
Antifade Mounting Medium con DAPI.
36 Productos de lectina/Tabla SKU
39 Kits de detección de lectinas y productos auxiliares

Agradecimiento especial y reconocimiento
40 soluciones de elución de glicoproteínas a Mark B. Jones, PhD por su trabajo y
colaboración en esta Guía de recursos y
41 Lista de referencias aplicación de lectinas.
Introducción y descripción general de las lectinas
Lectinas: historia Las lectinas,

primero en cristalizar una enzima en 1926, esfuerzo por el cual recibió un premio Nobel
llamadas así por el latín legere (elegir), ahora se entienden como una amplia clase de
en 1946. Años después de su aislamiento de Con A, descubrió que era posible
proteínas de unión a glicanos que tienen su origen en proteínas vegetales conocidas
aglutinar eritrocitos en un proceso inhibido por la sacarosa, lo que provocó la hipótesis
por aglutinar glóbulos rojos. Por lo general, las lectinas reciben el nombre del
de que este la lectina interactuaba con los carbohidratos de la superficie celular.
organismo del que se purifican, y muchas conservan y usan indistintamente el apodo
y el acrónimo de "aglutinina". En general, una lectina se denomina 'lectina/
aglutinina de especie de género', por ejemplo, lectina de Erythrina cristagalli /
Otro paso importante de las lectinas en inmunología fue en 1960 cuando Peter C.
aglutinina de Erythrina cristagalli (ECL/ECA) o aglutinina de Sambucus nigra
Nowell demostró que la fitohemaglutinina (PHA) era capaz de inducir la mitosis en
(SNA). Consulte también la Tabla de especificidad de lectinas y estructuras de
los linfocitos. Este descubrimiento hizo posible por primera vez la expansión y el
glicanos que comienza en la página 30 para conocer los nombres y acrónimos de las
cultivo de linfocitos in vitro . Un hallazgo de 1963 realizado por Joseph C. Aub mostró
lectinas.
que la aglutinina de germen de trigo (WGA) aglutinaba preferentemente las células
cancerosas malignas, proporcionando una evidencia temprana de glicosilación
Estas hemaglutininas, o fitoaglutininas debido a su origen vegetal, fueron descritas por
alterada presente en el cáncer (Ref. 59).
primera vez en 1888 por Peter Stillmark (Ref. 52). Aisló una potente toxina y
hemaglutinina de semillas de ricino (Ricinus com munis agglutinin, RCA). Paul
Al introducir el concepto de cromatografía de afinidad para lectinas mediante la
Ehrlich también utilizó RCA para realizar importantes descubrimientos inmunológicos
purificación de Con A sobre dextrano en 1967, se atribuye a Goldstein y Agrawal
tempranos. Al inyectar a los ratones pequeñas dosis repetidas de RCA, mostró una
la expansión de la disponibilidad de lectinas purificadas.
inactivación específica de la toxina RCA y que se puede conferir resistencia a la
descendencia de una madre tratada.
Hasta 1974, solo se había demostrado que las lectinas estaban presentes en
plantas, invertebrados y vertebrados inferiores. Durante 1974, Ashwell y Morell
Estos experimentos fueron las primeras bases para la especificidad de la
demostraron la presencia de la primera lectina de mamífero, el Receptor Ashwell
respuesta de anticuerpos, la memoria inmunológica y la transferencia de inmunidad madrehijo.
Morell (AMR), que está presente en el hígado e influye en la vida media de las
James B. Sumner, un experto en el aislamiento de proteínas, aisló una lectina de los
glicoproteínas y las células en circulación (Ref. 60). Al año siguiente, Vivian Teichberg
frijoles jack, a la que llamó Concanavalin A (Con A) en 1919. Fue el
aisló la primera lectina de βgalactosa de la anguila eléctrica y descubrió la familia
de proteínas galectina. Estas moléculas altamente inmunomoduladoras todavía se
investigan activamente en la actualidad (Ref. 57).
Cronología de las lectinas

1967
1888 1919 1960 Goldstein y su estudiante
Peter Hermann Stillmark Premio Nobel, Peter C. Nowell demuestra (Agrawal) introducen la
describe las lectinas. james b sumner, que la PHA es un mitógeno que cromatografía de afinidad para
aísla Con A permite la expansión de los linfocitos. lectinas, aumentando su
de frijol jack. pureza, número y disponibilidad.
1936
Sumner y Howell muestran: 196365
• Con A aglutina glóbulos Joseph C. Aub descubre que la
rojos, • Con A tiene especificidad WGA aglutina preferentemente

Década de las células malignas. Descubre
de azúcar e hipotetiza
1890 Paul Ehrlich muestra evidencia temprana de
que se debe a la unión
la neutralización inmunológica glicosilación alterada en el cáncer.
de carbohidratos.
de las lectinas tóxicas.
2| vectorlabs.com
La primera evidencia de la función fisiológica de las lectinas vegetales provino de Irvin E Liener
suprimiendo el crecimiento y previniendo la unión de viriones de coronavirus y VIH (Ref.
en 1976, cuando informó que alimentar a los escarabajos con una lectina de frijol negro
65).
provocó la muerte de las larvas de escarabajo. Este insecticida
La acción de una lectina fue cierta para otras lectinas como WGA, Galanthus nivalis
La unión de las lectinas al VIH y sus efectos inhibidores se han explorado cada vez más,
lectin (GNL) y Jacalin. En palabras de Sharon y Lis “. . Las lectinas han recorrido un largo camino
con muchos informes que muestran que las interacciones lectinagp120 glicano dieron como
desde su primera detección en plantas como hemaglutininas hasta su estado actual como
resultado la inhibición de la fusión viral (revisado por Lam y Ng, Ref. 64). También se ha
moléculas de reconocimiento ubicuas con innumerables funciones y aplicaciones
demostrado que las lectinas derivadas de los plátanos (BanLec) son potentes inhibidores de la
emocionantes” (Ref. 52).
replicación del VIH (Ref. 66).
Otro uso informado de una lectina vegetal utiliza GNL para purificar glicopéptidos
Lectinas: aplicaciones Las lectinas de
personalizados que imitan a gp120 para inmunizar y provocar anticuerpos neutralizantes del
plantas y hongos son un mecanismo defensivo de estas especies para evitar la invasión
VIH (Ref. 10).
de proteínas, células y organismos. Estas proteínas han evolucionado para reconocer
preferentemente estructuras de carbohidratos, incluidas las que se encuentran en

En esta guía, revisamos ejemplos de técnicas que utilizan lectinas en inmunohistoquímica
células y tejidos de mamíferos. Una vez purificada, la especificidad de cada lectina se puede
(IHC), inmunofluorescencia (IF), citometría de flujo y clasificación de células (FACS), cromatografía
aprovechar como una herramienta utilizada para afectar y sondear los glucanos complejos de los
de afinidad, ELISA, transferencia Western, resonancia de plasmones superficiales (SPR),
sistemas biológicos.
proliferación celular, rastreo neuronal y
perfusión in vivo . Éstas son sólo una muestra de las posibles formas en que
Multitud de aplicaciones Se ha
las lectinas se utilizan en aplicaciones de investigación; como herramientas basadas en proteínas para
sugerido que ciertas lectinas son eficaces como agentes prometedores para el control de plagas de
sonda de glicanos, mientras que otras aplicaciones simplemente esperan innovación, y
insectos. Su incorporación a los cultivos puede disminuir la cantidad de agentes químicos
desarrollo de investigadores imaginativos.
necesarios para la agricultura (Ref. 62). Se ha demostrado que otros tienen propiedades
antifúngicas (Ref. 63).

The Essentials of Glycobiology (Ref. 67), que incluye un capítulo sobre "Sondas de
reconocimiento de glicanos como herramientas", es una excelente fuente de información general

La glicosilación alterada es una propiedad de las células cancerosas, y muchas lectinas vegetales
han mostrado efectos anticancerígenos prometedores en las células cancerosas in vitro (Ref. 64). sobre la glucociencia. También recomendamos una revisión de las aplicaciones
de lectinas de Dan et. Alabama. (Referencia 68).

También se ha demostrado que las lectinas vegetales tienen propiedades antivirales,
1975
Vivian Teichberg aísla la 1976
primera proteína de la Vector Laboratories, Inc. se funda sobre una
creciente cartera de lectinas purificadas y Referencias de la línea de tiempo:
familia de galectinas.
conjugados de lectinas que ayudaron a ser
pioneros en la histoquímica de lectinas.
Sumner y Howell (Ref. 58); Aub (Ref. 59); Morell (ref.

60); Adaptado de Sharon y Lis (Ref. 52). Información
adicional: (Ref. 61).
2004
"...las lectinas han recorrido un largo camino
desde su primera detección en
plantas como hemaglutininas hasta su estado
actual como moléculas de reconocimiento
omnipresentes con innumerables
funciones y aplicaciones emocionantes".
—Nathan Sharon y Halina Lis
1976
1974 Irvin E. Liener describe el papel
Ashwell y Morell aíslan la primera de las lectinas vegetales como
lectina de mamíferos (ahora llamada protección contra los
Receptor AshwellMorell AMR). depredadores de semillas de insectos.
vectorlabs.com |3
Histología (IHC)
Histología: inmunohistoquímica Cuando se busca Descripción general del procedimiento
observar las estructuras de las células y los tejidos, la microscopía combinada Ver ref. 42 para un método altamente detallado de Lectin IHC.
con una miríada de tinciones y tintes han sido las técnicas preferidas de los científicos
Preparar el portaobjetos para la tinción
durante cientos de años. Cuando se introdujeron anticuerpos ligados a enzimas en este
• Use la pluma de barrera hidrofóbica ImmEdge® para aislar la muestra
sistema, la ubicación de proteínas específicas podría superponerse sobre la histología
y limitar el uso de reactivos.
macroscópica. Ahora, para aquellos interesados en estructuras de carbohidratos, Vector
Recuperación de antígenos si se usa
Laboratories ofrece una biblioteca de lectinas y conjugados de lectinas compatibles con
FFPE • Variedad de técnicas que usan pH o basadas en enzimas
IHC. Estas lectinas han permitido estudios de la unión del virus de la influenza a
soluciones de recuperación.
tejidos humanos y animales (Refs. 12 y 31), el uso de lectinas como pronóstico y
diagnóstico del cáncer (Ref. 42) y como marcador de infección patógena (Refs. 26 y Bloquear
43). ), como solo algunos ejemplos. • Incube los portaobjetos durante 30 minutos a temperatura ambiente en
Solución de bloqueo CarboFree® (CFB).
Detección
Las lectinas son compatibles con cortes congelados e incluidos en parafina fijados con
• Incube el portaobjetos con lectina biotinilada durante 1 hora en la habitación
formalina (FFPE); sin embargo, hay una pérdida de algunos epítopos (mucinas, glicolípidos)
temperatura, en solución CFB.
durante la preparación de FFPE, por lo que es posible que los dos sistemas no
El rango de trabajo inicial sugerido es de 0,5 a 10 µg/mL, se requiere
produzcan resultados equivalentes (Ref. 69).
optimización por parte del usuario.
» Alternativamente, sondee durante la noche a 4°C
• Lave el portaobjetos con TBS con agitación suave durante 5 minutos; realice
tres veces (x3).

Consulte nuestra Guía de inmunohistoquímica para obtener detalles • Aplique el conjugado de enzima estreptavidina o VECTASTAIN ABC
adicionales. reactivo enzimático durante 30 minutos a temperatura ambiente. • Lave
el portaobjetos con TBS (5 minutos): realice tres veces (x3).
Seleccionar aplicaciones publicadas • Visualización

Diagnóstico y/o pronóstico del cáncer (Ref. 42) • Detección de • Aplique el sustrato enzimático apropiado siguiendo las pautas de procedimiento
patógenos (Ref. 43) • Mapeo de epítopos
para el desarrollo del color y la visualización del objetivo. • Muestra de
tisulares para estudios de interacción (Ref. 31) • Alteraciones de glicanos en
cubreobjetos y vista.
procesos patológicos (Ref. 36)
Tinción con lectina de pulmón bovino durante la infección bacteriana. DBA biotinilado Tinción de ligadura de proximidad in situ utilizando una lectina para la detección de carcinoma endometrial.
(Fig. 2 Ref. 43). UEA I biotinilado (Fig. 3 Ref. 98).
4| vectorlabs.com
Flujo de trabajo general de inmunohistoquímica En función de la

metodología de detección y visualización prevista, hay varias opciones de reactivos disponibles a lo largo del flujo de trabajo.
Tejido Primario
Antígeno Aplacar/ Secundario Terciario Sustrato/ contratinción cubreobjetos/ Visualizar
Recuperación Bloquear
Anticuerpo/ Montar
Preparación Anticuerpo Reactivo cromógeno
Lectinas*
• VECTABOND® • Desenmascaramiento de antígenos • BLOXALL® • Biotinilado • Polímero ImmPRESS® • VECTASTAIN® ABC • Sustratos HRP • Hematoxilina • VectaMount®
Sección de tejido Soluciones, a base Bloqueo endógeno lectinas Reactivos (HRP o AP) Reactivos (HRP) Montaje
Adhesivo de citrato o tris de HRP y AP • Sustratos AP/ • Verde de metilo Medio
Solución • Sin conjugar • Polímero ImmPRESS PLUS • VECTASTAIN Elite® Levamisol
• ImmPrint® lectinas Reactivos (HRP) Reactivos ABC (HRP) Solución • Rojo rápido nuclear • VectaMount AQ
Pluma de histología • Avidina/biotina Montaje
• Polímero ImmPRESS Duet • VECTASTAIN ABCAP Medio
Kit de bloqueo
• ImmEdge® Reactivos (HRP/AP) Reactivos (AP)
Hidrofóbico • Estreptavidina/biotina
• MAMÁ (Ratón sobre Ratón) • VECTASTAIN Elite
Bolígrafo de barrera Kit de bloqueo
Kit de polímero ImmPRESS Kit ABC PLUS (HRP)
• Sueros normales
• MAMÁ (Ratón sobre Ratón) • IMPRESIÓN
• AnimalFree Blocker® Equipo Básico Excel amplificado
y diluyente Kits de tinción (HRP)
• Secundario Biotinilado
• BSA anticuerpos • MOM (Mouse on Mouse)
Elite Kit (HRP)
• Solución de caseína • Secundaria no conjugada
anticuerpos
• MOM® (Ratón • Avidina/estreptavidina
en el ratón) Bloqueo • Conjugado enzimático conjugada con enzimas
Reactivo Anticuerpos secundarios (HRP o PA)
(HRP o PA)
• Bloque CarboFree®
• Antilectinas biotiniladas
* Para obtener más información, visite: vectorlabs.com/browse/lectins
MAL II SCN
A
Colon normal DSS DSS + GlcNAc Tx
PHA
L
CD3
capa de moco superficial
Monitoreo del estado de glicosilación tisular durante un modelo inflamatorio de colitis y tratamiento.
(Fig. 5A Ref. 99).
Tinción con lectina de tejidos humanos para ácidos siálicos. SNA

biotinilado; MAL II biotinilado (Fig. 2 Ref. 31).
vectorlabs.com |5
Histología (IF)
Histología: inmunofluorescencia En lugar de usar Descripción general del procedimiento
un cromógeno para impartir color a una sección de tejido o célula, la Preparar el portaobjetos para la tinción
inmunofluorescencia generalmente utiliza diferentes fluoróforos para visualizar • Use la pluma de barrera hidrofóbica ImmEdge para aislar la muestra
objetivos específicos. Seleccionando cuidadosamente las longitudes de onda de y limitar el uso de reactivos.
excitación y emisión para cada reactivo para evitar la superposición espectral, es
Recuperación de antígenos si se usa
posible aplicar múltiples sondas a una sección de tejido. Vector Laboratories ofrece
FFPE • Variedad de técnicas que usan pH o basadas en enzimas
lectinas conjugadas con tintes tradicionales y contemporáneos para opciones de soluciones de recuperación.
colores espectrales en aplicaciones simples y multiplexadas. Cuando se combina Bloquear
con la detección de anticuerpos, dicha microscopía multiplexada permite la visualización

• Incube los portaobjetos durante 30 minutos a temperatura ambiente en
de elementos superpuestos, como una proteína de interés y un glicano específico. Solución CFB.
Una característica adicional de la microscopía IF es la capacidad de evaluar Detección
cantidades relativas de fluorescencia de cada canal, lo que permite la comparación
• Incube el portaobjetos con lectina conjugada con fluoróforo para
entre muestras con configuraciones de adquisición idénticas.
1 hora a temperatura ambiente, en solución CFB. El rango de trabajo
inicial sugerido es de 0,5 a 10 µg/mL, se requiere optimización por
parte del usuario. Para una amplificación adicional, se puede
Para identificar mejor los diferentes tipos de células que resultan de la aplicar una lectina biotinilada seguida de un fluoróforo de estreptavidina.
diferenciación de células madre embrionarias humanas, Dodla et.al. empleó conjugado.
un panel de 8 lectinas. Mediante el uso de IF, pudieron demostrar que la » Alternativamente, sondear durante la noche a 4°C
lectina de Vicia villosa (VVL/VVA) podía diferenciar los progenitores neurales humanos
• Lave el portaobjetos con TBS con agitación suave durante 5 minutos; realice tres
de los progenitores mesenquimales y las células madre embrionarias, evidencia
veces (x3).
de que las lectinas pueden ser herramientas para el aislamiento de distintas
Visualización
poblaciones celulares a lo largo de las vías de diferenciación (Ref. 45 ).
• Si usa una lectina biotinilada, el fluoróforo de estreptavidina
conjugado se aplicaría en este punto.

• Lave el portaobjetos con TBS con agitación suave durante 5 minutos; realice tres
veces (x3).
• Seque suavemente el portaobjetos.
Consulte nuestra Guía de inmunofluorescencia Apagar la autofluorescencia

para detalles adicionales. • Aplicar TrueVIEW® Autofluorescence Quenching Kit si la autofluorescencia
oscurece la señal específica.
Seleccionar aplicaciones publicadas • Montaje/cubreobjetos

Visualizar la compartimentación anormal de la glicosilación en el cáncer • Aplique el cubreobjetos con VECTASHIELD Antifade Mounting Media.
(Ref. 11) • Caracterizar
Adquisición de señal
las subpoblaciones celulares por patrones únicos de unión de lectina (Ref.
• Captura de imágenes mediante microscopía de fluorescencia.
45)
• Cuantificar el cambio en la estructura de los glicanos debido a la pérdida/mutación de
enzimas (Ref. 39) •
Diferenciar los parásitos intracelulares de las células huésped (Ref. 19)
6| vectorlabs.com
Flujo de trabajo general de inmunofluorescencia
Dependiendo de la metodología de detección y visualización prevista, hay varias opciones de reactivos disponibles a lo largo del flujo de trabajo.
Tejido Primario
Antígeno Aplacar/ Secundario Terciario contratinción/ Visualizar
Recuperación
Anticuerpo/ Montar
Preparación Bloquear Anticuerpo Reactivo
Lectinas*
• VECTABOND® • Desenmascaramiento de antígenos • Autofluorescencia TrueVIEW • Lectinas biotiniladas • Anticuerpos secundarios • Excel VectaFluor • Montaje antidecoloración VECTASHIELDR
Sección de tejido Soluciones, Citrato o Kit de extinción** VectaFluor™ DyLight DyLight amplificado Medio
Adhesivo basado en Tris • Fluorocromo RTU tinción fluorescente
• Autofluorescencia TrueVIEW Lectinas conjugadas • Montaje antidecoloración VECTASHIELD
Sistemas
• ImmPrint® Kit de enfriamiento con DAPI** • Dúo VectaFluor Medio con DAPI
Pluma de histología • Lectinas no conjugadas Kits de etiquetado doble IF • Fluorocromo
• Avidina/biotina • Montaje antidecoloración VECTASHIELD
Avidina conjugada o
Kit de bloqueo
• ImmEdge® • MAMÁ (Ratón sobre Ratón) estreptavidina Medio con yoduro de propidio
Hidrofóbico Kits de inmunodetección (PI)
• Estreptavidina/biotina
Bolígrafo de barrera • Antiavidina biotinilada
Kit de bloqueo
• Secundario Biotinilado • Antidesvanecimiento VECTASHIELD HardSet
reactivo amplificador
• Sueros normales anticuerpos Medio de montaje
• Biotinilado
• AnimalFree Blocker® y • Fluorocromo • Antidesvanecimiento VECTASHIELD HardSet
Antiestreptavidina
Diluente Secundario Conjugado reactivo amplificador Medio de montaje con DAPI
anticuerpos
• BSA • Antidesvanecimiento VECTASHIELD HardSet
• Sin conjugar Medio de montaje con TRITC

• Solución de caseína faloidina
Anticuerpos secundarios
• MAMÁ (Ratón sobre Ratón) • Antidesvanecimiento VECTASHIELD Vibrance™

reactivo de bloqueo
Medio de montaje
• Bloque libre de carbohidratos

• VECTASHIELD Vibrance Antifade
• BLOXALL® Endógeno Medio de montaje con DAPI
Solución de bloqueo HRP/AP
* Para obtener más información, visite: vectorlabs.com/browse/lectins

**
TrueVIEW Autofluorescence Quenching se aplica justo antes de cubrir
B TCE DAPI DAPI RCA DAPI ANP DAPI MAL II SNA DAPI
peso
St3gal64/4
Glicosilación del intestino delgado murino. ECL/ECA biotinilados; RCA biotinilado; PNA biotinilado; MAL II biotinilado; SNA biotinilado (Fig.
S5 Ref. 39).
A
A
Células cancerosas MDA M5231 Células normales MCF10A
Formaldehído
Formaldehído
D
metanol
Tinción con lectina de células progenitoras

Compartimentación de estructuras glicosiladas. FITC MAL I (Fig. 1 Tinción de lectina de Vicia Villosa en Toxoplasma.
mesenquimales humanas. Con A
Ref. 11). FITC VVL (Fig. 1 Ref. 19).
biotinilada; PHAL biotinilado; MAL I
biotinilado; VVL biotinilado; DBA biotinilado;
PHAE biotinilado; LTL biotinilado; PNA
biotinilado (Fig. 6 Ref. 45)
vectorlabs.com |7
Citometría de flujo (FC)
Citometría de flujo: análisis celular Cuando se Descripción general del procedimiento (adaptado de la Ref. 4).
busca identificar y comparar objetivos celulares entre poblaciones de células, la

Preparación de la muestra
citometría de flujo es una plataforma versátil capaz de realizar análisis de objetivos
• Prepare la suspensión de células individuales, incluidos los pasos de
simples o múltiples. En esta técnica, se controlan las propiedades fluorescentes de las
fijación y permeabilización, y la lisis de glóbulos rojos.
células marcadas individuales. Cuando las células se incuban con anticuerpos y lectinas
Bloquear
conjugadas con fluoróforos únicos, se hace posible la diferenciación de subtipos celulares.
• La solución CFB se puede usar como bloque y diluyente si
requerido.
Detección
Los paneles de lectina son una forma excelente de controlar el estado de la glicosilación
• Incube las células con lectina conjugada con fluoróforo para
celular, que es una importante modificación postraduccional en las proteínas de la
1 hora a 4°C, en tampón. El rango de trabajo inicial sugerido es de 0,5 a
superficie celular. El uso de lectinas para detectar estados de glicosilación
10 µg/mL, se requiere optimización por parte del usuario. Las lectinas
diferenciales entre poblaciones celulares es una estrategia eficaz.
biotiniladas también se utilizan ampliamente para aplicaciones de citometría de flujo.
Se ha utilizado para demostrar que la glicosilación alterada es típica en el cáncer
Consulte las referencias adjuntas y las imágenes de las figuras.
(Ref. 70) y puede ser útil en el diagnóstico oncológico (Refs. 71 y 72). La glicosilación de la
• Lave las células con PBS frío: realice dos veces (x2).
superficie celular también puede ser indicativa del fenotipo celular, como la vida media
Visualización
circulatoria de las plaquetas (Ref. 73).
• Si usa una lectina biotinilada, incube las células con fluoróforo conjugado con
estreptavidina en este paso durante 1 hora a 4 °C en CFB

Solución.
• Lave las células con PBS frío: realice dos veces (x2). • Resuspender
Seleccionar aplicaciones publicadas para análisis celular en PBS a la concentración deseada.
• Diferenciación de tallo hematopoyético y progenitor • Adquirir eventos de cada muestra.
Etapas celulares (Ref.
45) • Interrogación de la glicosilación del receptor de la superficie celular (Ref.
A
17) • Fenotipado de la superficie celular inmunitaria (Ref.
37) • Cribado de líneas celulares mutantes (Ref. 54)
100
90
80
70
Caracterización de la glicosilación de la superficie celular plaquetaria. SNA
60 biotinilado; FITC Con A; RCA biotinilado; MAL II biotinilado (Ref. 38).
50
hESC
Porcentaje
positivas
Lectina
células
para
de
40 hNP hNP
30 PSA AAL SSEA1 CSLEX1
20
10 CHO
0
ConA PHAL MAA VVA DBA PHAE LTL PNA
Caracterización de la unión de lectina en células madre y progenitoras humanas. LEC11

Con A biotinilada; PHAL biotinilado; MAL I/MAA biotinilado; VVL/VVA biotinilado; DBA
biotinilado; PHAE biotinilado; LTL biotinilado; PNA biotinilado (Fig. 3 Ref. 45).
Caracterización de la glicosilación de la superficie celular de CHO. PSA

biotinilado; AAL biotinilado (Ref. 54).
8| vectorlabs.com
Citometría de flujo: clasificación de células El Descripción general del procedimiento (adaptado de la Ref. 4).
aislamiento de poblaciones de células o incluso de células individuales definidas por

marcadores de superficie celular es posible gracias a la clasificación de células activada
• Preparar suspensión de células individuales.
por fluorescencia. Al teñir poblaciones celulares con diferentes fluoróforos, se pueden
Bloquear
identificar y separar subpoblaciones celulares únicas.
• La solución CFB se puede utilizar como bloque y diluyente si es necesario.
Esto ocurre cuando se detecta una célula deseada y posteriormente se desvía a
su propio contenedor, ya sea sola o con un dispositivo similar. Detección y Visualización
población. Por ejemplo, los linfocitos sanguíneos pueden separarse claramente en • Incube las células con lectina conjugada con fluoróforo para
poblaciones FITCCD4+ y PECD8+. La inclusión de lectinas en los paneles de flujo 3060 minutos a 4°C, en solución CFB. El rango de trabajo inicial sugerido
ha llevado a una mayor delimitación de las poblaciones celulares, lo que ha dado es de 0,5 a 10 mg/ml. Puede ser necesaria la optimización del usuario.
como resultado nuevos conjuntos de marcadores mediante los cuales identificar las células
• Lave las células con PBS frío: realice dos veces (x2). • Incube las
progenitoras neurales humanas (Ref. 45). El uso de lectinas en una estrategia de
células con diferentes anticuerpos primarios conjugados con fluoróforo para una
clasificación también puede conducir a un mayor enriquecimiento de poblaciones raras (Ref. 15).
clasificación adicional durante 3060 min a 4 °C en solución CFB (si es
También se pueden emplear para diferenciar subpoblaciones de células, una estrategia útil
necesario). • Lave las
para la selección clonal (Ref. 8).
células con PBS frío: realice dos veces (x2).
Adquisición de señales
• Ordenar eventos de cada muestra.
Seleccionar aplicaciones publicadas para la clasificación de celdas
• Identificación y caracterización de nuevos tipos de células (Ref. 8) • Enriquecimiento

B
de tipos de células raras (Ref. 15) • Selección clonal peso
de la población (Ref. 49)
células
[O]
COSMC
KO
celdas
[N]
MGAT1
KO
A 1.0K
800
células
[G]
UGCG
KO
600
SSC
A
400 100
75
200 MGAT1/
COSMC
KO
celdas
[ON]
50
25
0
0 200 400 600 800 1.0K 0 100
FSCA células vivas 75
B 104
COSMC/
UGCG
KO células
[OG]
50
25
0 100
103
75
MGAT1/
UGCG
KO células
[NG] 50
102
25
0
rodamina
LCA
100
101
75
MGAT1/ COSMC/
UGCG
KO 50
100
células
[NOG]
25
100 101 102 103 104
0
DSLfluoresceína
100
75
Identificación de nuevas poblaciones celulares basadas en la unión Clasificación clonal basada en la
UGCG/
COSMC/ Células
ONM
50
GAT1
KO
de lectinas. rodamina LCA; FITC DSL (Fig. 6 Ref. 49). 25 glicosilación de la superficie celular. FITC
0 VVA; FITCPHAL (Fig. 2 Ref. 8).
100 101 102 103 104 100 101 103 102 104
VVA LPHA
vectorlabs.com |9
Cromatografía de afinidad
Cromatografía de afinidad: la cromatografía de afinidad en columna o Descripción general del procedimiento (adaptado de la Ref. 4).
por lotes es una técnica de separación en la que las moléculas se seleccionan a través de
interacciones específicas con un sustrato de fase sólida. Para la selección positiva,
• Pipetee la suspensión de lectina de agarosa en una columna (es decir,
las moléculas de interés se unen a la columna mientras que todas las demás se eliminan. Las
pipeta Pasteur o alternativa comercial) o formato de plato para la aplicación
moléculas unidas luego se recuperan después de ser eluidas de la columna. En la selección
prevista.
negativa, las moléculas de interés fluyen a través de la columna, mientras que otras se retienen.
• Antes de usar, lave bien la resina de lectina de agarosa con tampón antes de
Esto se puede usar para enriquecer o purificar glicoproteínas específicas, por ejemplo,
usarla para eliminar los conservantes y estabilizadores.
aislando una variante de glicosilación específica de IgG, o separando las proteínas glicosiladas
• Tampones de lavado fortificados con 0,1 mM Ca2+ y 0,01 mM Mn2+
de las no glicosiladas en una muestra.
puede mejorar el rendimiento de algunas lectinas.
Incubar con lectina unida a agarosa

Varias lectinas tienen propiedades antivirales o de unión viral conocidas; Pauthner et
al. han aprovechado la capacidad de unión al VIH de GNL para purificar glicopéptidos por lote
personalizados que imitan a gp120 con el fin de inmunizar y provocar anticuerpos • Agitar suavemente la muestra con resina de lectina de agarosa durante 24 horas
neutralizantes del VIH (Ref. 10). Otras familias virales son posibles objetivos, ya que se ha a temperatura ambiente.
demostrado que Con A, LCA y PNA afectan la replicación del virus de la influenza (Ref. » Alternativamente, incubar durante la noche a 4°C
74). Para una revisión exhaustiva de las propiedades antivirales de las lectinas, consulte
• Centrifugue suavemente las perlas (<1000 g) y elimine el sobrenadante
Mitchell et.al. (Referencia 75).
• Lavar 3 veces con tampón de lavado
• Incubar con 2x volumen de perlas de solución de elución adecuada
a tu columna de lectina
• Centrifugue suavemente las perlas (<1000 g) y elimine el sobrenadante
para columna
• Use la gravedad para jalar lentamente la muestra de glicoproteína a través
la columna. El uso de presión comprimirá las perlas y

Seleccionar aplicaciones publicadas reducir la unión. Dependiendo de los requisitos de la muestra, la habitación
Se pueden aplicar condiciones de temperatura o cámara frigorífica.

• Purificación de glicopéptidos para el desarrollo de vacunas (Ref. 10) • Enriquecimiento
• Lavar la resina con 23 volúmenes de columna de tampón para eliminar
de proteínas con patrones específicos de glicosilación
material no ligado.
después de la suplementación con medios o tratamiento de eliminación (Refs. 11
y 17) • Es posible que se requieran varios volúmenes de columna de solución de elución
• Enriquecimiento de IgG para la fracción proteica que contiene ácido siálico para lograr una recuperación suficiente.
(Referencia 51) • Columna de lavado y regeneración.

• Identificación de proteínas que transportan glicanos de interés (Ref. 20)
10 | vectorlabs.com
C A
70
EV KD 104
0.02
55 Precipitación: SNA
WB: TNFR1 103
70
TNFR1
BG505
neutro
Título
de
55
102
55
βtubulina 101
35
SubQ SOY
Determinación de la glicosilación del receptor. Agarosa SNA (Ref. 17). Respuesta inmune a un glicopéptido del VIH purificado por cromatografía de lectina. Agarosa GNL (Fig. 2 Ref.
10).
B Lectina (MALI) purificada MUC1 y EGFR

Células normales Células cancerígenas
MCF10A HB4A T47D MCF7 MDA MB231
Neu5Ac (10 nM)

kDa () (+) () (+) () (+) () (+) () (+)
MALIppted MUC1
tratar
sin enriquecido
SNA
con enriquecido
SNA
+ neuraminidasa
200→
MUC1 tratado con sialidasa
200→ con MALIppted
MALIppted EGFR
SCN 185→
EGFR tratado con sialidasa
185→ tratada con MALI
coomassie
Examen de sialilación de MUC1 y EGFR en células normales y malignas después del tratamiento con ácido
siálico bajo privación de nutrientes. FITC MAL 1 (Ref. 11).
Enriquecimiento de IgG para glucanos específicos mediante cromatografía de lectina. Agarosa SNA
(Sup Fig. 3 Ref. 51).
Células Ramos B
Mancha: ANP CD45
250kDa
150kDa
100kDa
75kDa
50kDa
37kDa
25kDa
15kDa
Aporte lago
+ Aporte lago
+
APN
IP: APN
IP: APN
IP: APN
IP:
Perfilado de glicanos de proteínas específicas mediante cromatografía de afinidad con lectina. Agarosa
PNA (Fig. 3E Ref. 20).
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ELISA
ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) Descripción general del procedimiento (ELISA directo adaptado de las Refs. 3 y 34)
ELISA es una técnica robusta que normalmente se realiza en una placa de plástico de
varios pocillos y se puede utilizar para detectar cuantitativamente moléculas objetivo.
• Incube la muestra en placas ELISA de alta unión a 4 °C durante la noche
La técnica es adecuada para sistemas de alto rendimiento que utilizan placas de 384 pozos y
en el tampón de unión recomendado.
dispositivos de manejo de líquidos. La especificidad de un ELISA directo se puede mejorar
aún más utilizando una técnica de ELISA tipo sándwich, donde una molécula de captura • Lave la placa con PBS más Tween® 20 (PBST): realice cuatro
se adsorbe a la placa en lugar de una muestra. Al diseñar adecuadamente tanto los veces (x4).
agentes de captura como los de detección para que no se unan a la misma región del Bloquear
objetivo, la sensibilidad y las relaciones señalruido pueden mejorarse con respecto a las
• Incubar la placa durante 60 minutos a temperatura ambiente en
técnicas ELISA estándar a costa de reactivos y pasos adicionales. Al cambiar los agentes de Solución CFB.
captura o detección, los objetivos y las lecturas se pueden cambiar rápidamente en este
• Lave la placa con PBST – realice dos veces (x2).
sistema adaptable.
Detección
Dusowa et al. utilizó un enfoque ELISA directo para caracterizar el perfil de glucano de
• Incube la placa con lectina biotinilada durante 60 minutos a
4 °C a temperatura ambiente (optimizado por el usuario), en solución CFB.

vesículas extracelulares derivadas de líneas celulares de glioblastoma. Demostraron que la
El rango de trabajo inicial sugerido es de 0,5 a 10 mg/mL, se requiere
modulación de los glucanos de la superficie de las vesículas extracelulares resultó en una
mayor absorción por parte de las células dendríticas, un primer paso importante en la
presentación de antígenos cancerosos al sistema inmunitario (Ref. 18). • Lave la placa con PBST – realice cuatro veces (x4).
Visualización
Para el análisis de glicanos de muestras, recomendamos comenzar con un panel • Incube la placa con estreptavidina ligada a enzimas o avidina
de lectinas como agentes de detección. según las instrucciones del fabricante.
• Lave las células con PBST: realice cuatro veces (x4). •
Aplique la solución de sustrato enzimático adecuada.
Seleccionar aplicaciones publicadas • Lea la placa a la longitud de onda apropiada para el sistema de detección
elegido.
• Detección del estado de glicosilación de proteínas (p. ej., IVIG) (Ref.

3) • Determinación de los glucanos presentes en las vesículas extracelulares
(Referencia 18)
• Utilizado como diagnóstico o pronóstico de enfermedades (Ref. 32)
HPA MAL I MAL II SCN Con A LTA GNA ANP

negativo Control.
1.5 (Tn Ag) (a2,3Sia) (Oa2,3Sia) (a2, 6Sia) (Hombre alto/Biant) (fuck) (a13 Hombre) (a16 Polímero)
1.0
450
nm
DE
0.5
0.0
104 103 102 101 104 103 102 101 104 103 102 101 104 103 102 101 104 103 102 101 104 103 102 101 104 103 102 101 104 103 102 101 104 103 102 101
Dilución EV (Log2) >>
Glicosilación superficial de vesículas extracelulares de glioblastoma mediante lectina ELISA. Con A biotinilada; MAL I biotinilado; MAL II biotinilado; SNA
biotinilado; LTA biotinilado, GNA biotinilado, NPA biotinilado (Fig. 2 Ref. 18).
12 | vectorlabs.com
A SCN ECL RCA AAL MAL

100
80
60
glicoilación
relativa
%
40
20
0
Gammagard IVIG S1 IVIG S2 IVIG Gamagard + Gamagard + Gamagard + S1 IVIG +
S1 IVIG S2 IVIG S1 IVIG S2 IVIG S2 IVIG
Cribado de la glicosilación del fragmento IVIG Fc mediante ELISA de lectina. SNA biotinilado; ECL biotinilado; RCA biotinilado; AAL biotinilado; MAL II biotinilado; (Fig. 4
Ref. 3).
Caracterización de la glicosilación de glicodelina

recombinante mediante inmunoensayo ELISA de lectina
tipo sándwich modificado. Kit I de Lectina Biotinilada, Kit II
de Lectina Biotinilada, Kit III de Lectina Biotinilada (Tabla 1 Ref. 98).
vectorlabs.com | 13
Transferencia occidental
Transferencia Western: quimioluminiscencia Al aislar, Descripción general del procedimiento
identificar o buscar glicoproteínas, la transferencia Western es una técnica analítica de

Preparación de muestras
elección. Las proteínas se separan por tamaño mediante electroforesis y se transfieren
• Prepare las muestras según su propio procedimiento. •
a una membrana para su análisis.
Realizar electroforesis en gel y transferencia de membrana.
Este procedimiento retiene la glicosilación de proteínas, que puede ser detectada por
Bloquear
lectinas. Las metodologías de detección varían para las aplicaciones de transferencia.
• Incube la membrana durante 3060 minutos en la habitación
Aquí presentamos la detección y visualización utilizando un enfoque de
quimioluminiscencia con reactivos basados en enzimas. temperatura en solución CFB.
Detección
Si bien los ensayos de desplazamiento electroforético suelen ser la primera indicación
• Sonda de membrana con lectina biotinilada durante 1 hora a temperatura
de un objetivo glicosilado, el sondeo con lectinas puede generar un perfil de glucano
ambiente, en Solución CFB. El rango de trabajo inicial sugerido es de 0,5 a
más preciso. Hay disponible una variedad de kits de detección de lectinas para la
10 mg/mL, se requiere optimización por parte del usuario.
investigación de glicoproteínas (consulte la página 39).
• Lavar la membrana con TBST de 5 a 10 minutos a temperatura ambiente
temperatura – realizar cuatro veces (x4).
Visualización
• Incubar la membrana con enzima conjugada de estreptavidina
o reactivo VECTASTAIN ABC durante 1 hora a temperatura ambiente,

Seleccionar aplicaciones publicadas
en solución CFB. Vector Laboratories ofrece una amplia variedad de
Reactivos HRP y AP para satisfacer sus necesidades.
• Análisis de glicosilación de proteínas de muestra completa (Ref. 47) • Lavar la membrana con TBST de 5 a 10 minutos a temperatura ambiente
• Determinación de la glicosilación de proteínas específicas (Ref. 30) •
Seguimiento de los cambios de glicosilación a través de eventos fisiológicos (Ref. 28)
• Aplicar sustrato enzimático quimioluminiscente o colorimétrico
siguiendo los plazos procesales. • Utilice un
generador de imágenes o una película para capturar la imagen de la membrana.
CBB ACV
β1,4GT iFc
α2,6ST iFc KDa fut8+/+ Fut8/ fut8+/+ Fut8/
iFc
260
ECL 140
100
SCN 70
50
FC de IgG 40
35
coomassie
25
Detección del estado de sialilación de EGFR. SNA biotinilado; MAL II

Transferencias de lectina de fragmentos IVIG Fc modificados. SNA La pérdida de glicosilación conduce a la pérdida de la función de
biotinilado (Fig. S2, Ref. 100).
biotinilado; ECL biotinilado (Fig. 4 Ref. 30). las células T (lisado esplénico de ratón). LCA biotinilado (Fig. 2 Ref. 28).
14 |
vectorlabs.com
Transferencia Western: multiplexación fluorescente Al aislar, Procedimiento
identificar o buscar glicoproteínas, la transferencia Western es una técnica analítica de

Preparación de muestras •
elección. Las proteínas se separan por tamaño mediante electroforesis y se transfieren
Prepare las muestras según su propio procedimiento. • Realice
a una membrana para su análisis.
electroforesis en gel y transferencia de membrana (se recomienda una membrana de PVDF
Este procedimiento retiene la glicosilación de proteínas, que puede ser detectada por lectinas.
para menos fondo).
Bloquear
Mediante el uso de métodos de detección fluorescentes, se pueden usar múltiples sondas (cuidadosamente
• Incube la membrana durante 3060 minutos a temperatura ambiente
seleccionadas) simultáneamente en la misma membrana, lo que brinda la oportunidad de
en solución CFB.
cuantificar y comparar con precisión todas las señales de cada banda de interés. El estado de
» Alternativamente, bloquee durante la noche en 4°C.
glicosilación de una proteína se puede determinar si cierta lectina se une dentro de la banda de proteína
(colocaliza). Un buen ejemplo de esta técnica que usa fluorescencia se proporciona en la figura Detección
de la referencia 14 que distingue la glicosilación del fragmento Fc de IgG del fragmento Fab. El • Membrana de sonda con lectina conjugada con fluoróforo durante 1
procedimiento adyacente proporciona una breve descripción general de esta metodología. hora a temperatura ambiente en solución CFB. Un enfoque alternativo sería utilizar una
lectina biotinilada. El rango de trabajo inicial sugerido es de 0,5 a 10 mg/mL, se requiere
» Alternativamente, sondee durante la noche en 4°C.
• Lavar la membrana con TBST de 5 a 10 minutos a temperatura ambiente
• Sonda de membrana con anticuerpo primario conjugado con fluoróforo
contra la proteína de interés durante 1 hora a temperatura ambiente
Seleccionar aplicaciones publicadas en solución CFB.
• Análisis general de glicanos de lisados de tejidos o células (Ref. 4) • Visualización

Determinación de la glicosilación de IgG (Ref. 14) •
• Si se usó una lectina biotinilada, incube durante 1 hora con avidina o
Supervisión de la glicosilación de proteínas específicas en todos los procesos celulares
estreptavidina conjugada con fluoróforo.
(Referencia 20)
• Lave la membrana con TBST de 5 a 10 minutos, agitando, a temperatura
ambiente; realice 2 veces (x2).
• Membrana seca.
• Imagen y análisis de datos.
PNA CD45 Unir

(800nm) (700nm)
250kDa
34 SCN
150kDa
100 kDa Raji
FC
Colon Pulmón Riñón Calor Hígado Bazo
75 kDa
26
50kDa fabuloso
37kDa
25kDa 34 ECL
15kDa
Control
ST30E
Control
ST30E
Control
ST30E
SCN FC
26
fabuloso
Detección de glicosilación diferencial de proteínas durante Detección amplia de glicosilación tisular de Detección de la glicosilación de IgG Fc y Fab murina durante la inflamación.
la maduración celular. PNA biotinilado (Fig. 3E Ref. 20). varios órganos de ratón de tipo salvaje. SNA biotinilado; ECL biotinilado (Ref. 14).
FITC SCN (Ref. 4).
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Ensayos enzimáticos—Glicosiltransferasas/Glicosidasas
Ensayos enzimáticos: glicosiltransferasas/glucosidasas Las glicosiltransferasas Descripción general del procedimiento
y las glucosidasas a menudo existen en concentraciones bajas que

Preparación de la muestra •
son difíciles de detectar directamente. A menudo es más práctico determinar la
Prepare la fuente de la enzima en cuestión. • Preparar el sustrato para la
presencia de una glicosiltranferasa (una enzima que agrega un azúcar) o una
reacción enzimática. Esto es comúnmente células vivas o fijadas, una glicoproteína en
glucosidasa (una enzima que elimina un azúcar) midiendo el cambio en el sustrato o
solución, una glicoproteína en una superficie fija o carbohidratos complejos
el producto de la enzima. Para las glicosiltransferasas, una disminución en la
purificados en solución o fijados a un sustrato sólido.
cantidad de aceptor y un aumento en la cantidad de producto enzimático es
evidencia de la presencia y actividad de la enzima. Por el contrario, la pérdida
Bloquear
de sustrato implica la presencia de una glucosidasa. Mediante el empleo de
• Para disminuir las interacciones no específicas con su sustrato,
lectinas para rastrear la cantidad relativa de sustrato y producto, se pueden construir
considere un agente bloqueador en su sistema. Incubar el sustrato
una variedad de ensayos para monitorear la actividad enzimática.
durante 3060 minutos a temperatura ambiente
en solución CFB.
Para provocar una respuesta antiinflamatoria específica del sitio in vivo, Pagan et.al. (Ref.
• Lave con dos cambios de un tampón de lavado compatible en
9) generaron IgG recombinantes con una galactosiltransferasa y una sialiltransferasa
temperatura ambiente – realizar dos veces (x2).
unidas como una sola macromolécula. Luego probaron si la proteína expresada conservaba la
actividad enzimática, incubándola con azúcares de nucleótidos donantes y un aceptor de fetuina y Reacción
producto enzimático monitoreado a través de transferencia de lectina. • Añadir tampón de reacción con fuente de enzimas. La glicosiltransferasa
requerirá un donante de nucleótidos de azúcar, las glucosidasas no.
Ambos son muy sensibles al pH ya la concentración de cationes; optimice su tampón
de reacción en consecuencia.
• Incube la muestra de enzima y el sustrato mezclando suavemente.

El usuario final debe optimizar el tiempo y la temperatura.
Recomendamos una duración de 24 horas a una temperatura entre temperatura
ambiente y 37°C como punto de partida.
• Si es posible, separe el reactivo del material de origen, lavando dos veces

con un tampón de lavado compatible a temperatura ambiente.
Detección
• Determinar la actividad de proteínas expresadas de forma recombinante • Sondee el reactivo con una lectina marcada con fluoróforo durante 1 hora
(Referencia 9) a temperatura ambiente en solución CFB. Un enfoque alternativo sería
• Demostrar la actividad y especificidad de las enzimas bacterianas utilizar una lectina biotinilada.
(Referencia 24)
• Verificar y validar sistemas genéticos de sobreexpresión o subexpresión
• Lave con un tampón de lavado compatible a temperatura ambiente;
(Referencia 20)
realice tres veces (x3).
• Discernir la presencia enzimática en nuevos sistemas (Ref. 44) •
Supervisar la producción de glicosilación después de la manipulación
Visualización
de la glicosiltransferasa (Ref. 101)
• Si se utilizó una lectina biotinilada, en este punto se aplicaría
estreptavidina conjugada con fluoróforo. • Lave con
un tampón de lavado compatible a temperatura ambiente; realice dos

veces (x2).
• Señal de imagen y cuantificación.
16 | vectorlabs.com
Control vectorial
A
ST3GAL1 ST3GaI1OE
200 100
80
150
Cambio
pliegue
de
máx.
de
%
60
40
100
20
1
0 0
Control
0 102 103 104 105
ST3OE
Pérdida del aceptor resultante de la sobreexpresión de una glicosiltransferasa activa. PNA biotinilado (Fig. 2 Ref. 20).
A B
Medición de la glicosilación de la superficie celular resultante de la

Pérdida de los ácidos siálicos de la superficie celular por la actividad de la neuraminidasa. MAL II no eliminación y sobreexpresión de la glicosiltransferasa.
conjugado (Fig. 1 Ref. 24). (Referencia 101).
SCN
9000
8000
7000
SCN
IMF
6000
3000
2000
1000
sialidasa +++++++
CM de células B
CMPSia +++
rST6G +
Determinación de la actividad enzimática por ganancia de

glicosilación de la superficie celular. FITC SNA (Fig. 2 Ref. 44).
vectorlabs.com | 17
Resonancia de plasmón superficial (SPR)
Resonancia de plasmón superficial (SPR) Descripción general del procedimiento (adaptado de la Ref. 13)
Al investigar las interacciones moleculares, es de interés conocer la cinética de unión y

la constante de afinidad para un conjunto dado de socios de unión. Cuando también es • Inmovilizar objetivos para chip con la química apropiada
importante realizar tales experimentos con componentes no marcados, por ejemplo, si un
para tu propósito •
fluoróforo es demasiado voluminoso para adherirse o se sospecha que cambia la
Lave la celda de flujo con un tampón de funcionamiento, por ejemplo, PBS que
cinética de unión, la resonancia de plasmones superficiales puede ser la técnica preferida.
contenga polisorbato 20 al 0,005 %.
En resumen, un ligando sospechoso se fija a una película delgada de oro montada en un
Bloquear
portaobjetos que está respaldado por un prisma. Al dirigir la luz polarizada al prisma y
• Bloquee la cámara de flujo activo con etanolamina/HCl 1,0 M,
la superficie de oro en un ángulo fijo, cualquier interacción molecular con el ligando que
pH 8,5 durante 10 minutos.
aumente la masa del complejo molecular se detectará mediante un cambio en el ángulo
entre los fotones incidente y reflejado. • Lavar con tampón corriente.
Reacción y Detección
Esto normalmente se lleva a cabo en condiciones de flujo, lo que permite el seguimiento en • Procese lectinas no conjugadas a través de la cámara de flujo a 10 µL por minuto
tiempo real de la interacción entre pares no etiquetados. Para obtener información adicional durante 3 minutos a temperatura ambiente (2124°C). Sugerimos utilizar la
sobre glicobiología y SPR, consulte la revisión de Duverger et.al. (Referencia 76). solución CFB como tampón de muestra.
• Regenere la superficie del chip con glicina 10 mM pH 2.0 y
NaOH 10 mM durante 1 minuto entre cada concentración de lectina
para eliminar cualquier enlace de la ejecución anterior.
• Discernir los glicanos en una molécula objetivo (como los anticuerpos)
(Referencias 12 y 13)
• Sondear la especificidad de unión o el comportamiento de una lectina (Refs. 25
y 26)
• Pruebas bioanalíticas y de biomarcadores específicos de la enfermedad (Ref. 50)
18 |
vectorlabs.com
Caracterización de la composición superficial de galactosa por Jacalin. Jacalin no

conjugado (Fig. 8 Ref. 26).
Caracterización de la unión de SNA a un sustrato sintético. SNA no conjugado
(Fig. 4 Ref. 25).
Caracterización de glicanos de anticuerpos recombinantes. Con A no conjugada (Ref. 102).
vectorlabs.com | 19
Cultivo celular: proliferación/activación/citotoxicidad
Cultivo celular: proliferación/activación/citotoxicidad Las proteínas de la Descripción general del procedimiento
superficie celular suelen estar glicosiladas, lo que facilita la estructura molecular, la Proliferación de células T (linfocitos)
solubilidad y puede modular la función. Para las proteínas con dominios de señalización
Ensayo:
intracelular, los eventos de participación directa o agrupación pueden desencadenar una
a una población de células T humanas cultivadas, incube con un rango (p.
cascada de señalización. Estos eventos también pueden ser iniciados por la participación
ej., 550 μg/mL) de PHAL o Con A en medios de crecimiento completos para
de los carbohidratos de la molécula, y se ha demostrado que la exposición a lectinas de
promover actividades como la proliferación y la activación.
plantas y hongos tiene efectos dramáticos en el comportamiento celular. El descubrimiento,
Las concentraciones óptimas deben ser definidas por el usuario final.
por Peter Nowell en 1960, de que la lectina PHA podía provocar la proliferación de
leucocitos permitió la primera expansión in vitro de este tipo celular. Otras lectinas, como
Tenga en cuenta que Con A y PHAL son mitógenos selectivos y no promueven
Con A, pueden provocar la activación de las células T y la sensibilidad a otras
el crecimiento ni la proliferación. La descripción general del ensayo que se
señales de crecimiento (Refs. 7779). En un estudio de la respuesta de las células T a G
proporciona aquí es un modelo establecido de proliferación mitogénica que utiliza
CSF, Nawa et.al. usó células CD3+ estimuladas con Con A para medir
estas lectinas definidas. El uso de un sistema modelo conocido como control
proporciona pautas al establecer conocimientos sobre la actividad mitogénica

proliferación y producción de citoquinas (Ref. 6).
para diferentes lectinas y compuestos en tipos de células de mamíferos distintos de
Las lectinas no son universalmente mitogénicas; las mismas lectinas que provocan el los mencionados anteriormente.
crecimiento de los leucocitos pueden provocar la muerte celular en otras células, como
Evaluación:
las células CHO. Esta observación de Stanley et.al. los llevó a desarrollar líneas celulares
La estimulación mitogénica se puede evaluar a través de varios medios,
mutantes adicionales y a proponer un nuevo método funcional para determinar la glicosilación
dependiendo de los requisitos cuantitativos del estudio.
de la superficie celular a través de la citotoxicidad de la lectina (Ref.
El examen microscópico de los cambios fenotípicos de las células y los
46). La glicosilación aberrante de la superficie celular de las células cancerosas ha llevado
ensayos colorimétricos que evalúan la actividad enzimática celular se han
a los investigadores a considerar si las lectinas vegetales citotóxicas podrían usarse
utilizado tradicionalmente para el análisis semicuantitativo. Se logran medios
como moléculas antitumorales (Refs. 53 y 80). Hassan et.al. proporcionan una breve revisión
más cuantitativos que utilizan citometría de flujo, por ejemplo, mediante la
de la actividad antitumoral y mitogénica de las lectinas derivadas de hongos. (Referencia
evaluación de la síntesis de proteínas y/o ADN.
81).
y mitosis.
citotoxicidad
Seleccionar aplicaciones publicadas Ensayo:
para una aplicación de cultivo celular, la metodología es bastante
sencilla, mediante la cual se agrega una lectina específica al medio de cultivo en

• Proliferación de linfocitos y respuesta a la estimulación
concentraciones variables y se evalúa en múltiples puntos de tiempo. Establecer
(Refs. 6, 7 y 109) •
un sistema modelo conocido de toxicidad de lectina contra una línea celular dada será
Citotoxicidad celular (Ref. 46) •
Modula el crecimiento celular y la apoptosis in vivo con modelos animales útil para optimizar los parámetros del flujo de trabajo para interacciones desconocidas
(Ref. 48) • Agente de lectina/célula. El documento de Stanley (Ref. 46) proporciona un protocolo paso
antitumoral durante modelos in vitro e in vivo (Ref. 53) • Soporte crecimiento de a paso para configurar dicho ensayo. Los autores utilizaron lectinas Con A y PHAL
células madre pluripotentes humanas sin diferenciación (Ref. 56) • Sondeo del en su estudio debido a la toxicidad conocida de estas lectinas hacia CHO
comportamiento de los
linfocitos en modelos animales células.
(Referencia 103)
Evaluación:
Para los ensayos del tipo de resistencia a lectina, tal como lo describe Stanley (Ref.
46), la toxicidad se midió mediante la tinción de las poblaciones de células vivas
restantes o mediante la determinación de la actividad enzimática celular. Dependiendo
de los parámetros del ensayo, se podrían utilizar procedimientos alternativos, como
el uso de marcadores específicos combinados con plataformas, para detectar la
muerte celular o la apoptosis.
20 | vectorlabs.com
La toxicidad de la lectina revela glicosilación alterada de la superficie celular. PHAL Caracterización de la activación celular mediante la estimulación de esplenocitos en ratones
no conjugado; WGA no conjugado; Con A no conjugada; RCA II no conjugado; LCA no Fng triple KO con lectinas (se muestra DE) y otros agentes (no se muestra AC). PHAL no
conjugado (Fig. 2 Ref. 46 Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Inc.). conjugado; Con A no conjugada (Fig. 11DE, Ref. 109). Publicado originalmente en The
Journal of Immunology. Song, Y. et al., 2016. Fringe lunático, maníaco y radical cada
uno promueve el desarrollo de células T y B. 196:232243. Copyright © (2015) La Asociación
Estadounidense de Inmunólogos, Inc.
A WGA (mg/mL) SBA (mg/mL) PNA (mg/mL)
0 5 10 20 50 100 0 0,3 0,6 0,9 1,2 1,5 01 2 5 8 10

Bcl2
PBadSer1362
Malo
βtubulina
Las lectinas vegetales modulan los marcadores de proliferación celular y apoptosis en el pez cebra. (Fig. 2 Ref. 48).
vectorlabs.com | 21
Seguimiento neuronal
Rastreo neuronal Al
Descripción general del procedimiento (consulte la Ref. 106)
explorar las redes neuronales en el sistema nervioso central, el uso de lectinas
como rastreadores neuronales es una práctica común. Para PHAL, consulte "Método PHAL para rastrear proyecciones
neuronales eferentes".
La direccionalidad del transporte de axones puede aprovecharse seleccionando
la molécula trazadora apropiada; del soma a la sinapsis (anterógrado) o de
la sinapsis al soma (transporte retrógrado).
Seguimiento retrógrado: se descubrió que la enzima HRP era una molécula

eficaz como trazador retrógrado en 1971 (Ref. 82). Atraviesa las
membranas neuronales de forma no selectiva por endocitosis pasiva (Ref.
83). Posteriormente se descubrió que la conjugación de HRP aumentaba la
tasa de captación y transporte celular (Ref. 84).
Trazado anterógrado + retrógrado: cuando WGA se une a los glicanos

presentes en la membrana plasmática neuronal; se internaliza por
endocitosis pasiva y se transporta tanto en dirección anterógrada como
retrógrada, proporcionando una amplia cobertura de la neurona (Ref. 85).
WGA también se puede transportar transsinápticamente a otras neuronas
en una red (Ref. 86).
Trazado anterógrado: entre los trazadores anterógrados, el PHAL es uno

de los primeros y más utilizados (Ref. 84). Al igual que WGA, PHAL
también se une a los carbohidratos de la membrana plasmática antes
de la internalización celular.
Para una revisión más completa de las técnicas de rastreo neuronal, consulte
Vercelli et.al. (Referencia 88).
• Visualización del transporte neuronal anterógrado (Ref. 1 y 2) • Determinación de la

interacción neuronacélula (Ref. 16) • Seguimiento del transporte Imágenes EM de formación de sinapsis en la región CA1 de ratones
transneuronal de partículas virales (Ref. 55) • Observación de las interacciones infundidos con PHAL. Uniones sinápticas indicadas por flechas. PHAL no
conjugado; antiPHA(E+L) de conejo; AntiPHA(E+L) caprino (Fig. 7 Ref. 104)
neuronaneurona (Ref. 34 y 111) • Demostrar la expresión de proteínas
específicas de las neuronas (Ref. 35)
22 | vectorlabs.com
Etiquetado con PHAL de neurona ganglionar del techo óptico de rana. PHAL no conjugado
(Fig. 3G. Ref. 1)
Etiquetado neuronal de un sitio de inyección en la columna dorsolateral de la

sustancia gris periacueductal. PHAL no conjugado (Fig. 6 Ref.106).
Marcaje PHAL del vórtice infralímbico. PHAL no conjugado; antiPHAL (Fig. 6 Ref. 2).
Imagen EM del ara tegmental ventral (VTA) de la rata, donde un terminal axónico
marcado con PHAL (AT1) forma sinapsis asimétricas (A) o simétricas (B) con una
dendrita. PHAL no conjugado (Fig. 2 Ref. 111)
Coetiquetado de PHAL (rojo) y BDA (verde) de la sustancia innominada.

PHAL no conjugado; AntiPHAL de cabra, (Fig. 1 Ref. 105).
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Perfusión Vascular
Perfusión Vascular Descripción general del procedimiento
Ciertas lectinas se usan comúnmente en la visualización e identificación de vasos

Preparar solución de lectina
sanguíneos, ya que se unen a los carbohidratos del revestimiento de las células endoteliales.
• Disuelva/diluya la lectina en PBS estéril a 0,52 mg/mL. • Llevar la
Si bien es útil para teñir secciones de tejido, es posible inyectar por vía intravenosa
solución a temperatura ambiente antes de la inyección.
lectinas marcadas para teñir preferentemente las células endoteliales y observar cualquier
Inyección •
fuga vascular de la lectina. Esto se puede realizar en animales vivos o en tejidos
Prepare al animal para la inyección utilizando las restricciones adecuadas.
extirpados. Para un excelente ejemplo de tinción con lectina (LEL) de Lycopersicon esculentum
• Visualice y prepare el lugar de la inyección, es decir, la vena lateral de la cola.
(tomate) de diversos tejidos de ratón, véase Robertson et.al. (Referencia 89). Debido a
las diferencias en los glicanos presentes en las células endoteliales entre diferentes especies, • Inyectar solución de lectina intravenosa (100200 uL).
se recomienda seleccionar la lectina apropiada para su especie de interés para obtener • Aplique una presión suave para cerrar el lugar de la inyección.
una señal óptima. Para obtener más información sobre diferentes agentes para obtener
Sacrificio*
imágenes de la vasculatura, consulte Lokmic y Mitchell (Ref. 90).
• Sacrificar animales 1530 minutos después de la inyección.
Preparación de tejidos e imágenes • Recopile
los tejidos deseados para analizarlos y procesarlos para obtener una

La morfología vascular aberrante es una característica de los tumores y representa una
lectura adecuada.
barrera para la administración de terapias, tanto moleculares como celulares, a toda la masa
• Captura de imágenes por la técnica deseada.
(Ref. 91). Park et al. ideó una estrategia terapéutica para normalizar la vasculatura a través de la
entrega de anticuerpos. Demostraron el efecto regulador del compuesto sobre la
angiogénesis tumoral mediante la tinción de vasos mediante perfusión LEL en un modelo murino *Todas las técnicas y manejo de animales con debe ser promulgada en cumplimiento
de glioma (Ref. 29). lineamientos de IACUC y con un animalario. protocolo aprobado por un institucional
• Obtención de imágenes de la vascularización del huésped de los tejidos
injertados (Ref. 5) • Análisis de la permeabilidad vascular y visualización de
microvasos (Ref. 23)
• Cuantificación de la vascularización tisular para la ingeniería de tejidos (Ref. 33) • Detección
y cuantificación de la angiogénesis tumoral (Ref. 21) • Determinación de la administración
de fármacos en la organización vascular (Ref. 29) • Tinción endotelial vascular estándar para
la metodología
comparación (Ref. 27)
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Supervisión de la vascularización de las células de los islotes implantadas incrustadas en módulos endotelizados. GSL no conjugado I.
(Fig. 3 Ref. 107).
Comparación de métodos de limpieza óptica en cerebro de ratón. DyLight

649 LEL (Fig. 2F Ref. 27).
La microscopía revela la incorporación de células progenitoras endoteliales humanas expandidas ex vivo en sitios de neovascularización
en tejido muscular de ratón isquémico (verde UEA I, rojo Dil). FITC UEA I. (Fig. 4 Ref. 108 Copyright (2000) Academia Nacional de
Ciencias, EE. UU.).
Vascularización del injerto de corazón de rata infartado. Texas Red LEL (Fig. 2 Ref. 21). Vascularización del injerto de corazón de rata infartado. Texas Red LEL (Fig. 7 Ref. 33).
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Datos de validación de lectinas del NCFG
Datos de validación de lectinas del NCFG
El National Center for Functional Glycomics (NCFG), con el apoyo del NIH Common
Fund for Glycosciences, está examinando una selección de lectinas de Vector
Laboratories. Con Consortium for Functional Glycomics (CFG) y las matrices de glicanos
del NCFG, el NCFG analiza la especificidad de los glicanos de cada uno de nuestros
lotes de lectina y proporciona estos datos detallados de unión de lectina y glicanos para cada
lote en el sitio web del NCFG.
El objetivo de este proyecto NCFG es apoyar experimentos glicobiológicos rigurosos y
reproducibles.
Estos datos brindan información valiosa y única sobre las estructuras de glucano
en las glicoproteínas que está estudiando:
» Especificidad de unión de cada lectina, para cada uno de los

Retina de ratones, perfundida con DyLight 594LEL. La retina se seccionó y montó en
cientos de estructuras de glicanos en la matriz
VECTASHIELD HardSet con DAPI. Imagen cortesía de George W. Smith, Florida Atlantic
» Datos tabulados y convenientemente resumidos como un University.
matriz de unión, con altura de pico que indica el grado de
unión para cada glicano
» Datos específicos y detallados sobre la estructura de carbohidratos complejos
» Datos específicos de lote—para confianza en la reproducibilidad
de sus datos vinculantes
Para una revisión más completa de la aplicación de glicano
micromatrices, véase McQuillan et.al. (Referencia 92)
Intestino delgado: Jacalin (marrón, Vector DAB), contratinción de Vector Hematoxilina.
Resumen de los servicios de NCFG
• Análisis de estructuras de carbohidratos a partir de glicoproteínas mediante

espectrometría de masas
• Determinación de la especificidad de unión de lectina glicano de una muestra frente a:
» Microarreglos de glicanos definidos

» Microarreglos de glicanos de escopeta derivados
naturalmente • Diseño e impresión de arreglos
personalizados • ¡Y más! Comuníquese con el NCFG para satisfacer sus necesidades
de glicociencia: https://ncfg.hms.harvard.edu
Colon humano: anticitoqueratina de conejo (AE1/AE3) y antidesmina de ratón detectados

simultáneamente con el kit de doble marcaje VectaFluor™ Duet; Vasculatura detectada usando
DyLight 649 UEA I Lectin (púrpura). Montado en VECTASHIELD PLUS Antifade Mounting
Medium.
26 | vectorlabs.com
Otras aplicaciones de lectina
Otras aplicaciones de lectina
Ensayos bacterianos
Contratinción fluorescente para ensayo de crecimiento bacteriano intracelular
WGA / S. aureus USA300 colorante de proliferación Unir
replicación
Sin
infección)
hdespués
murino
BMDM
(12
de
la
Replicación
La tinción WGA muestra la localización celular para ensayos de proliferación de bacterias intracelulares. (Fig. 2 Ref. 41).
Marcadores de cáncer
Epiiluminación multiespectral para distinguir lo normal de lo canceroso
La tinción WGA marcada directamente diferencia el tejido canceroso del normal. (Fig. 2 Ref. 40).
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Lectinas utilizadas para la investigación del coronavirus
Lectinas utilizadas para la investigación del coronavirus
Se ha demostrado que las lectinas de diversas fuentes exhiben potentes propiedades coronavirus, y se ha demostrado que media la entrada viral en el caso del SARSCoV.
antivirales al inhibir la infección de patógenos virales clínicamente importantes. La La lectina de unión a manosa (MBL) puede prevenir esta interacción (y potencialmente
actividad antiviral de las lectinas se atribuye en gran medida a la unión directa a los la de otras) al bloquear la unión viral a DCSIGN, aislado en un único sitio crítico de N
glicanos de la envoltura viral y a la prevención de la entrada del virus en las células. glicosilación en el SARS CoV [CVR4]. La MBL interfiere con el proceso de entrada del
Varias lectinas, particularmente lectinas vegetales con afinidad por los restos de coronavirus al unirse a los Nglucanos de tipo alto en manosa del SARSCoV a través
azúcar manosa (Man) y Nacetilglucosamina (GlcNAc), se han identificado como agentes de la proteína S, lo que evita la unión viral a las proteínas objetivo y la célula huésped
terapéuticos potenciales en la prevención de la transmisión viral en el virus de la [CVR2, 3]. La importancia de las lectinas en la defensa viral también queda ilustrada por
inmunodeficiencia humana (VIH) y coronavirus (SARSCoV y MERSCoV) [CVR1]. la deficiencia de MBL, que se ha postulado como un factor de susceptibilidad al SARS
CoV [CVR10].
Los resultados prometedores in vitro han dado lugar a llamamientos publicados para
considerar los efectos antivirales de las lectinas en la lucha contra el SARSCoV [CVR6,7].
Como potentes inhibidores de la entrada viral a las células, la lectina de alga griffithsin ha Vector Laboratories es un fabricante establecido de muchas lectinas vegetales que las
demostrado actividad antiviral para MERSCoV [CVR8]. publicaciones describen como herramientas valiosas en la investigación en curso
para dilucidar su potencial en la supresión de la actividad viral.

La planta de unión a GlcNAc lectina Urtica dioica aglutinina (UDA) A continuación se muestra una lista de lectinas específicas de manosa y manosa/
UDA se ha administrado in vivo en un modelo murino de SARSCov glucosa, disponibles en formatos no conjugados y conjugados.
infección, lo que resulta en una "protección significativa contra la pérdida de peso" y un
"efecto terapéutico sustancial" [CVR9]. • Galanthus nivalis (GNL) •
Hippeastrum híbrido (HHL) • Narcissus

Los coronavirus son virus de ARN monocatenario envueltos que contienen al menos pseudonarcissus (NPL) • Concanavalina A (Con
cuatro proteínas estructurales: la proteína de membrana (M), envoltura (E), A) • Lens culinaris (LCA) • Musa
espiga (S) y nucleocápside (N). La proteína S fuertemente glicosilada media en la paradisiaca (MPL) • Pisum
unión y fusión viruscélula. sativum (PSA)
Hay 2030 sitios de Nglicosilación en la proteína S, dependiendo del coronavirus [CVR4].
Según estudios previos de coronavirus como el SARSCoV, el MERS CoV y el TEGV,

Los Nglucanos de la proteína S del coronavirus median la activación de la las lectinas vegetales (especialmente las lectinas que se unen a la manosa) pueden
respuesta inmune innata antiviral: el recubrimiento de las partículas del usarse para investigar las siguientes propiedades del nuevo coronavirus SARSCoV2,
coronavirus de la gastroenteritis transmisible (TEGV) con ConA antes de la que causa la COVID19: 1) propiedades de glicosilación viral, 2) inhibición de la unión
exposición celular redujo la producción de interferón α (IFNα) [CVR4,5]. basada en lectinas y entrada celular, y 3) nuevas estrategias terapéuticas basadas en
La no integrina captadora de ICAM específica de células dendríticas (DCSIGN), una glucanos y lectinas.
lectina de tipo C expresada en mamíferos, interactúa con los glicanos de
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Seleccione referencias de investigación de coronavirus:
CVR1. Mitchell, C. et al. Lectinas antivirales: inhibidores selectivos de la entrada viral. Res. antivirales. 2017 junio; 142: 37–54. (https://www.ncbi.nlm.nih.
gov/pmc/articles/PMC5414728/)
CVR2. Keyaerts, E. et al. Las lectinas vegetales son potentes inhibidores de los coronavirus al interferir con dos objetivos en el ciclo de replicación viral.
Res. antivirales. 2007 septiembre; 75 (3): 17987. (https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0166354207002380?via%3Dihub)
CVR3. Ritchie, G., et al. Identificación de carbohidratos ligados a N de la glicoproteína del pico del síndrome respiratorio agudo severo (SARS).
Virología. 10 de abril de 2010; 399 (2): 25769. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3412594/)
CVR4. Fung, S. y Liu, DX. Modificaciones postraduccionales de las proteínas del coronavirus: roles y función. Futuro Virol. 2018, 13(6), 405–430. (https://
www.futuremedicine.com/doi/full/10.2217/fvl20180008)
CVR5. Charley B, Lavenant L, Delmas B. Se requiere glicosilación para que el coronavirus TGEV induzca una producción eficiente de IFN alfa por parte de las
células mononucleares sanguíneas. Escanear. J. Immunol. 1991, 33(4), 435–440. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7169555/)
CVR6. Mazalovska M, Kouokam JC. Las lectinas como terapias prometedoras para la prevención y el tratamiento del VIH y otras posibles coinfecciones.
biomedicina Res. En t. 8 de mayo de 2018; 2018: 3750646. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5964492/)
CVR7. De Clercq E. Antivirales potenciales y estrategias antivirales contra las infecciones por coronavirus del SARS. Expert Rev Anti Infect Ther. 2006, 4(2):
291–302. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7105749/)
CVR8. JK Millet, K. Séron, RN Labitt et al., Griffithsin inhibe la infección por coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio. Antivírico
Res. 2016, 133, págs. 1 a 8. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7113895/)
CVR9. Y. Kumaki, MK Wandersee, AJ Smith et al. Inhibición de la replicación del coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo en un letal
Modelo de ratón SARSCoV BALB/c mediante lectina de ortiga, aglutinina de Urtica dioica. Res. antivirales. 2011, 90, núm. 1, págs. 22–32. (https://
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3085190/)
CVR10. IP WK, Chan KH, Tso GH et.al. Lectura de unión a manosa en la infección por coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo. J Infecciones Dis.
2005 15 de mayo; 191 (10): 1697704. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15838797)
vectorlabs.com | 29
Tabla de propiedades de las lectinas
Tabla de propiedades de las lectinas
Sangre
Común Iones de metal mitógeno Grupo Azúcar Preferido inhibidor o
lectina Nombre Fuente glicoproteína Presente Actividad especificidad especificidad Azúcar de elución
Champiñones blancos
Agaricus bisporus ABL _ No No no específico Gal(b1,3) GalNAc Fetuín
Agaricus bisporus
Hongos aleuria
aleuria aurantia AAL No
No no específico Fuca6GlcNAc Lfuc
aurantia
Bauhinia purpurea alba

Bauhinia purpúrea BPL, BPA Sí No Sí A,B,O (SA) Galb3GalNAc Lactosa
(Árbol de pie de camello) semillas
Canavalia ensiformis MeaMan+

Concanavalina A Con A No Ca++, Mn++ Sí no específico aMan, aGlc
(Haba Jack) semillas MeaGlc
Datura stramonium (Espina

Datura stramonio ADSL Sí No Sí A, B, O (GlcNAc)24
Apple, Jimson Weed) semillas hidrolizado de quitina
Dolicos biflorus Ca++, Mn++,

Dolichos biflorus Sí No aGalNAc GalNAc
A1 >>A2
administrador de bases de datos
(Gramo de caballo) semillas Mg ++, Zn++
Erythrina cristagalli Ca++, Mn++,

Erythrina cristagalli ECL, ECA Sí Sí no específico Galb4GlcNAc Lactosa
(árbol de coral) semillas Zn++
Galanthus nivalis
Galanthus nivalis GNL No No No Conejo un hombre MeaMan
(Snowdrop) bombillas
Griffonia (Bandeiraea) Semillas de Griffonia

GSL I, BSL I Sí Ca++, Mn++ No aGal, aGalNAc Gal/GalNAc
B>>A1
simplicifolia I (Bandeiraea) simplicifolia
Griffonia (Bandeiraea) Semillas de Griffonia

GSL I B4 Sí Ca++, Mn++ No B agal gal o rafinosa
simplicifolia I Isolectina B4 (Bandeiraea) simplicifolia
Griffonia (Bandeiraea) Semillas de Griffonia A (SA)>>B

GSL II, BSL II Sí Ca++, Mn++ No a o bGlcNAc Hidrolizado
simplicifolia II (Bandeiraea) simplicifolia (SA)
de quitina o GlcNAc
Híbrido de Hippeastrum
Híbrido de Hippeastrum HHL, Alabama No No No Conejo un hombre MeaMan
(Amaryllis) bulbos
Artocarpus integrifolia O (+SA), chica o

Jacalín Jacalín Sí No Sí Galb3GalNAc
(Yaca) semillas antígeno T melibiosa
Semillas de lens MeaMan+

lente culinaria ACV, LcH No Ca++, Mn++ Sí no específico aMan, aGlc
culinaris (lenteja) MeaGlc
loto tetragonolobus,
Tetragonolobus purpúrea
Loto tetragonolobus LTL Sí Ca++, Mn++ No afuc Lfuc
O<A2
(guisante alado, espárragos
guisante) semillas
Fruto de Lycopersicon
Lycopersicon esculentum LIE, TL Sí No no específico (GlcNAc)24
esculentum (tomate) hidrolizado de quitina
Maackia amurensis I MAL YO, MAL Semillas de Maackia amurensis Sí No Sí no específico Galb4GlcNAc Lactosa
Humano
Maackia amurensis II MAL II, MAH Semillas de Maackia amurensis Sí No Sí Neu5Aca3Galb3GalNAc no específico
Glicoforina
Maclura pomifera
Maclura pomifera MPL No No Sí A, B, O (SA) Galb3GalNAc Galón
(Naranja Osage) semillas
30 |
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Sangre
Común Iones de metal mitógeno Grupo Azúcar Preferido inhibidor o
lectina Nombre Fuente glicoproteína Presente Actividad especificidad especificidad Azúcar de elución
Musa paradisiaca
Musa paradisíaca BanLec _ _ Sí Conejo aMan, aGlc MeaMan
(fruto del plátano)
Narciso Narciso pseudonarciso

NPL, NPA, DL No No No Conejo un hombre MeaMan
pseudonarciso (Narciso) bombillas
antígeno T
Maní ANP maní Arachis hypogaea No Ca++, Mg++ No Galb3GalNAc Galón
(M, N)
Galb4GlcNAcb2Mana6
Faseolus vulgaris Faseolus vulgaris (GlcNAcb4)
PHAE Sí Ca++, Mn++ Sí COMO UN) tiroglobulina
Eritroaglutinina (PHAE) (frijol rojo) semillas (GlcNAcb4Mana3)
bovina, ácido acético
Manb4
Galb4GlcNAcb6
Faseolus vulgaris Faseolus vulgaris –
PHAL Sí Ca++, Mn++ Sí (GlcNAcb2Mana3) tiroglobulina
Leucoaglutinina (PHAL) (frijol rojo) semillas
maná3 bovina, ácido acético
Pisum sativum MeaMan+

Pisum sativum PSA Rastro Ca++, Mn++ Sí no específico aMan, aGlc
(guisante) semillas MeaGlc
Ricinus communis
Ricinus communis I RCA yo, RCA120
Sí No No no específico Galón galón o lactosa
(ricino) semillas
Cadena A de ricina Cadena A de ricina Sí No No – – –

RCA60
Cadena B de ricina Cadena B de ricina Sí No Sí – Galón galón o lactosa

RCA60
Lactosa en
Sambucus nigra
Sambucus nigra SNA, LBE Sí No No no específico Neu5Aca6Gal/GalNAc solución salina
(Saúco) corteza
tamponada y ácido acético
Solanum tuberosum,
Solanum tuberosum STL, ES Sí No No no específico (GlcNAc)24
(patata) tubérculos hidrolizado de quitina
Semillas de
Haba de soja SBA Sí Ca++, Mn++ Sí A>O>B a>bGalNAc GalNAc
Glycine max (soja)
Ulex europeo Ca++, Mn++,

Ulex europaeus I UEA I Sí No O>A2 afuc Lfuc
(Tojo aulaga) semillas Zn++
Vicia villosa
Vicia villosa VVL, VVA Sí Ca++, Mn++ No antígeno tn GalNAc GalNAc
(Vecha peluda) semillas
Triticum vulgaris Hidrolizado

Germen de trigo WGA No Ca++ Sí A,B,O GlcNAc
(germen de trigo) de quitina o
GlcNAc con ácido o sal
succinilado succinilado Triticum vulgaris Hidrolizado

No Ca++ No A,B,O GlcNAc
Germen de trigo WGA (germen de trigo) de quitina o
GlcNAc con ácido o sal
glicina floribunda GalNAc, ácido

glicina floribunda WFA, WFL Sí Sí no específico GalNAc
(Glicina japonesa) semillas acético
Abreviaturas de azúcar: glc DGlucosa MeaMan ametilmanósido

GlcNAc Acetilglucosamina
norte Neu5Ac Ácido acetilneuramínico(ácido siálico)
norte
Fuc Lfucosa
Hombre Manosa a SA siálico Ácido
Galón Dgalactosa
MeaGlc metilglucósido
GalNAc norte
Acetilgalactosamina
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Propiedades de las lectinas con estructuras
Adaptado de Essentials of Glycobiology 3e, con permiso de The Consortium of Glycobiology Editors, La Jolla, California; publicado por Cold Spring Harbor Laboratory Press
Para obtener más información: https://cshlpress.org/default.tpl?action=full&src=pdf&eqskudatarq=1076 y

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/ NBK453096/).
Cada lectina es una proteína única que ha evolucionado para interactuar con glicoproteína en solución, unida a una superficie sólida (arrays, perlas, placa,
epítopos de carbohidratos distintos. Derivado de muchas especies diferentes, etc.), o tienen una alta densidad de glicanos (GAG). Por lo tanto, aunque
si se agrupan por el azúcar terminal al que generalmente se une la lectina, cada mostramos el monosacárido terminal primario preferido por cada lectina en la
diferirá en la fuerza de la unión debido a la afinidad y la avidez por siguiente tabla para facilitar su uso, no incluye los determinantes más complejos
el epítopo. Esto puede deberse a que la proteína interactúa con el resto del que pueden existir para cada lectina. Es importante tener en cuenta estas
carbohidrato subyacente y/o la estructura transportadora (Nglicano, diferencias sutiles, aunque distintas, en cada lectina y la presentación de sus
Oglicanos, glicolípidos, etc.), o por la presentación y densidad sustratos al seleccionar cuál usar en su(s) aplicación(es) (Refs. 67 y 110).
del epítopo. Por ejemplo, los glicanos pueden estar: atados a la
membrana plasmática de una célula, expresada como recombinante o purificada
Socios preferidos de unión a glicanos y azúcares inhibidores
Nombre, Inhibitorio Azúcar en bruto Datos

lectina Reducido Azúcar1 Especificidad1 Motivo de encuadernación general2 Fuente Estructura superior en Array3
Gal ligada a O
Agaricus — — —
ABL Galón β1, 3
bisporus
GalNAc
β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β12
α16
β14 β14 β
Sp19
Aleuria Datos
AAL Fuc Fuc
aurantia Enlace
β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β12 α13
α16
+/ R R +/ R R
Principalmente
Bauhinia Gal β1,3 o 1,4

—
Sp0
BPL, BPA Galón pero también Datos β14 β13 β14 β

purpúrea Enlace
se unirá a β
GalNAc más débilmente
α12
manosa ramificada α13 β13 β12
α16
y terminal Sp22
β14 β14 β
Concanavalina A Con A Hombre [Hombre alto, Datos
α16
como Enlace α13 β13 β12

Maná1,6
α13
(Maná1,3)
α12
succinilado — — —
sCon A Hombre aMan, aGlc
Concanavalina A
β14
R β16
β12
α16
GlcNAc β1,4 R
β14
Sp21
β14 β14 β14

Oligómeros de R
Datura Datos
β14
GlcNAc y LacNAc β14

α16
ADSL Laca R
α13
estramonio R R
Enlace β14
β12
(Gal β 1,4 R
GlcNAc) β14 β14 β14 β14 β14 β1

Sp8
GlcNAc β1,4
Oligómeros de R
Sp0
Galón GlcNAc y LacNAc Datos α13 β13 α14 β14 β

Dolichos biflorus administrador de bases de datos
Enlace
(Gal β 1,4
GlcNAc)
Gal β1,4
Sp0
R β14 β13 β14 β

Erythrina cristagalli ECL, ECA Galón
Datos
GalNAc
Enlace
α16
Terminal a1, 3 R
Sp12
Galanthus nivalis GNL Hombre β14 β14 β

manosa Datos
Enlace α13
32 | vectorlabs.com
α13 β14 β12

α16
griffonia
GSL I, agalactosa, también
Sp24
Datos β14 β14

(Bandelraea) Galón —
BSL I se une a algo de GalNAc Enlace
simplicifolia I α13
α13 β14 β12
α13
α13 β14 β12
griffonia α16
(Bandeiraea) Datos Sp20
Galón agal — β14 β14 β

GSL I β4 R
simplicifolia I Enlace
α13
α13
β14 β12
Isolectina B4
α13
β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14
β16
griffonia
GSL II, Terminal Datos β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14
α16
(Bandeiraea) GlcNAc R R
β12
Sp24
β14 β14 β
BSL II GlcNAc Enlace
simplicifolia II α16
β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β12 α13
α16
a1,3
Híbrido de
—
Sp13
HHL, Alabama Hombre manosa y Datos β14 β14 β

Hippeastrum
Enlace
una 1,6 manosa α13
Sp9
Jacalín Gal β1,3 β13 β13 α

Jacalín Galón
R Datos
GalNAc R R α12
Enlace
+/ R β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14
β16
Complejo
(núcleo man/ +/ R Datos
α16
lente culinaria ACV, LcH Hombre
β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β12
Sp24
GlcNAc con como

Enlace
β14 β14 β
a1,6 Fuc) +/ R

β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β12 α13
α16
Sp0
Loto β14 β13 β14 β13 β14 β

Terminal aFuc, Datos
LTL Fuc —
tetragonolobus Luis x Enlace α13 α13 α13
Lycopersicon
Sp8
Oligómeros de Datos β14 β14 β14 β14 β1

R R
LIE, TL GlcNAc
esculentum
β1,4 GlcNAc Enlace
Sp8
β14 β
galactosilo
R 3S
Maackia (β1,4)
MAL YO,
Datos
Laca N
amurensis I MAL
Sp14
Enlace α23 β14 β13 β14 β13α

3
acetilglucosamina, R
ENTONCES
(a2,3) ácido siálico
Sp8
β13 α
α23 β14 3S
β16
Maackia a2,3 ácido
mal II,
Laca siálicoLacNAc R Datos Sp14
amurensis II TAC α
estructura Enlace
α23
β13
Gal β1,3
Maclura
Sp8
β13 α
MPL Galón GalNAc, — Datos
pomutera
GalNAc
3S
Enlace
musa
BanLec Hombre aMan, aGlc — — —
paradisíaca
vectorlabs.com | 33
Propiedades de las lectinas con estructuras (continuación)

α16
morosidad,
Narciso Hombre terminal e Datos Sp13
ANP, Hombre — β14 β14 β

pseudonarciso interno Enlace
DL
α13
Sp0
β13 α13 β14

Maní Gal terminal (βOR) Datos
ANP Galón R
(Arachis hypogaea) Enlace α12
β13 β14
β16
α16
β12
+/ R β13 β14 Sp24
β14 β14
tipo complejo R
α13
β13 β14 β12
Faseolus vulgaris Nglicanos con Gal
PHAE Laca +/ R Datos α23 β14
eritroaglutinina exterior y GlcNAc β16
Enlace
bisectriz α16
β12
α23 β14 Sp21
+/ R β14 β14 β14 β
α23
α13
β14 β12
+/ R
β13 β14 β13 β14
β1,6 β16
+/ R
Faseolus vulgaris Núcleo de α16
β12
PHAL Galón β13 β14 β13 β14
R Datos Sp24
leucoaglutinina trimanosilo de marca β14 β14 β

Enlace
Glicanos ligados a N +/ R α16
β13 β14 β13 β14 β12

α13
+/ R
+/ R
Hombre, (Fuc a1,6 α16 Sp19
+/ R Datos β14 β14 β

Pisum sativum PSA Hombre GlcNAc, aDGlc, aDMan)
como α13
Enlace
α16
+/ R
β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β12
α16
Ricinus Datos
Sp25
β14 β14 β
rca yo,
laca, chica Galón
communis I R
RCA120 Enlace
α13
β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β13 β14 β12
Ricina A
— — — —
Cadena A de ricina
Cadena
—
Ricina B
Cadena B de ricina Laca — —
Cadena
βGal/GalNAc —
Sp12
α26 β14 β12 α13 β14 β14
R
estructura de α26 β14 β14
Laca ácido a1,6 siálico

Datos α16
Sambucus nigra SNA, LBE
R Sp21
6 Enlace β14 β14 β

LacNAc ENTONCES
R β14
4 α26 β14
β14
α13
β12
α26 β14
34 | vectorlabs.com

Datos
Sp8
Solanum tuberosum STL, ES GlcNAc R R

β14 β14 β14 β14 β1
Enlace
Oligómeros de GlcNAc, LacNAc
a o β
Sp8
β14
Terminal vinculado Datos
Haba de soja SBA Galón — 6S
GaINAc, GalNAc Enlace
a1,3 Gal
α12
β14
β16
Sp14
Ulex europaeus I UEA I Fuc afucosa Datos

+/ R R Enlace
β13
β14
α12
Sp0
β14 β13 β14 β
Vicia villosa GaINAc a,

VVL, VVA GalNAc R Datos
antígeno Tn
Enlace
Sp15
Sp0
α13 β14 β13 β14 β
βGlcNAc, ácido Datos

Germen de trigo WGA GlcNAc R
siálico, GalNAc R Enlace
α12
succinilado — —
sWGA GlcNAc GlcNAc —
Germen de trigo
Sp8
WFA, Datos β14

wistera floribunda Galón GalNAc R R
WFL Enlace 6S
Glu Man Gal GlcNAc GalNAc Fuc Neu5Ac Sia
1. Pilobello et al. (Referencia 95)

2. Fundamentos de Glicobiología (Ref. 67)
3. Estructuras dibujadas con GLAD (Ref. 96)
4. Nomenclatura de símbolos para glicanos (Ref. 97)
vectorlabs.com
| 35
Productos de lectina/Tabla SKU
Agaricus bisporus lectina (ABL) Lectina de Galanthus Nivalis (GNL)
no conjugado L1420 2 miligramos no conjugado L1240 5 miligramos
agarosa AL1243 5ml

Aleuria Aurantia Lectina (AAL)
no conjugado L1390 2 miligramos

biotina B1245 2 miligramos
agarosa AL1393 2 ml fluoresceína FL1241 2 miligramos
biotina B1395 1 mg
Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectina I (GSL I, BSL I)
fluoresceína FL1391 1 mg no conjugado L1100 5 miligramos

Lectina de Bauhinia Purpurea (BPL)
no conjugado L1280 5 miligramos fluoresceína FL1101 2 mg, 5 mg
rodamina RL1102 2 miligramos

Concanavalina A (Con A)

GSL I isolectina B4
agarosa AL1003 10 ml, 100 ml no conjugado L1104 1 mg

biotina B1205 0,5 miligramos
CY3 CL1003 1 mg DyLight 594 DL1207 0,5 miligramos
fluoresceína FL1001 25 miligramos DyLight 649 DL1208 0,5 miligramos

fluoresceína FL1201 0,5 miligramos
Lectina de Datura Stramonium (DSL) Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectina II (GSL II, BSL II)
agarosa AL1183 2 ml agarosa AL1213 2 ml

fluoresceína FL1181 2 miligramos

Aglutinina de Dolichos Biflorus (DBA) Hippeastrum Híbrido (Amaryllis) Lectina (HHL, AL)

Jacalín
fluoresceína FL1031 2 mg, 5 mg no conjugado L1150 25 miligramos
rodamina RL1032 2 miligramos agarosa AL1153 10ml

Erythrina Cristagalli Lectina (ECL, ECA)
no conjugado L1140 10 miligramos fluoresceína FL1151 5 miligramos
agarosa AL1143 2 ml
36 | vectorlabs.com
Lens culinaris aglutinina (LCA, LcH) Aglutinina de maní (PNA)
no conjugado L1040 10 mg, 25 mg no conjugado L1070 5 mg, 25 mg
biotina B1045 5 miligramos agarosa AL1073 2 ml, 5 ml
DyLight 649 DL1048 1 mg biotina B1075 5 miligramos
fluoresceína FL1041 5 miligramos CY3 CL1073 1 mg
rodamina RL1042 5 miligramos CY5 CL1075 1 mg
fluoresceína FL1071 5 mg, 10 mg

Lectina de Lotus Tetragonolobus (LTL)


Aglutinina de Phaseolus Vulgaris (PHA)
Phaseolus vulgaris Eritroaglutinina (PHAE)
no conjugado L1120
Lycopersicon esculentum (tomate) Lectina (LEL, TL) 5 miligramos

biotina B1175 1 mg fluoresceína FL1121 2 miligramos
DyLight 488 DL1174 1 mg

Phaseolus vulgaris Leucoaglutinina (PHAL)
DyLight 594 DL1177 1 mg no conjugado L1110 5 miligramos
fluoresceína FL1171 1 mg fluoresceína FL1111 2 miligramos
rojo tejano TL1176 1 mg rodamina RL1112 2 miligramos
Lectina I de Maackia Amurensis (MAL I, MAL) Aglutinina de pisum sativum (PSA)


Ricinus communis aglutinina I (RCA I, RCA120)
no conjugado L1080
Lectina II de Maackia Amurensis (MAL II, TAC) 10 miligramos
no conjugado L1260 2 miligramos agarosa AL1083 2 ml, 10 ml
biotina B1265 1 mg biotina B1085 5 miligramos
fluoresceína FL1081
Lectina de Maclura Pomifera (MPL) 5 miligramos
no conjugado L1340 5 miligramos rodamina RL1082 5 miligramos

Cadena A de ricina
no conjugado L1190 1 mg
Musa Paradisiaca Lectina (BanLec)
no conjugado L1410 5 miligramos Cadena B de ricina
no conjugado L1290 1 mg
Narcissus Pseudonarcissus (Daffodil) Lectina (NPL, NPA, DL)
vectorlabs.com | 37
Tabla de productos/SKU de lectina (continuación)
Lectina de Sambucus Nigra (SNA, EBL) Lectina de Vicia Villosa (VVL, VVA)
agarosa AL1303 2 ml agarosa AL1233 2 ml

CY3 CL1303 1 mg fluoresceína FL1231 2 miligramos
CY5 CL1305 1 mg
Aglutinina de germen de trigo (WGA)
fluoresceína FL1301 2 miligramos no conjugado L1020 10 mg, 25 mg
agarosa AL1023 2 ml, 5 ml, 10 ml

Solanum tuberosum (patata) lectina (STL, PL)
no conjugado L1160 5 miligramos biotina B1025 5 miligramos

fluoresceína FL1021 5 mg, 10 mg
peroxidasa PL1026 2 miligramos

Aglutinina de soja (SBA)
no conjugado L1010 10 mg, 25 mg rodamina RL1022 5 mg, 10 mg
agarosa AL1013 2 ml
Aglutinina de germen de trigo succinilado
biotina B1015 5 miligramos no conjugado L1020S 10 miligramos
fluoresceína FL1011 2 miligramos agarosa AL1023S 2 ml, 5 ml
biotina B1025S 5 miligramos

Aglutinina I de Ulex Europaeus (UEA I)
no conjugado L1060 2 mg, 5 mg fluoresceína FL1021S 5 miligramos
agarosa AL1063 2 ml
Lectina de Wisteria Floribunda (WFA, WFL)
biotina B1065 2 miligramos no conjugado L1350 5 miligramos
DyLight 594 DL1067 1 mg agarosa AL1353 2 ml
fluoresceína FL1061 2 mg, 5 mg fluoresceína FL1351 2 miligramos
Lengua de ratón: células endoteliales teñidas con lectina de Griffonia simplicifolia marcada con Sección congelada de colon vista con filtro de fluoresceína: lectina de Lycopersicon esculentum
Dylight 594, isolectina B4 (fluorescencia roja). Montado con VECTASHIELD HardSet con DAPI (tinción naranja con Vector Red) y epitelio glandular (etiqueta verde de fluoresceína).
(fluorescencia azul).
38 | vectorlabs.com
Kits de lectina y productos auxiliares seleccionados
Kits de detección de lectina I > El kit I (BK1000, FLK2100, RLK2200) consta de 1 mg de las siguientes
BK1000 lectinas o conjugados de lectina: Con A, DBA, PNA, RCA I,

Kit de lectina biotinilada I 1 equipo
SBA, UEA I, WGA.

Kit de lectina de fluoresceína I FLK2100 1 equipo
Kit I de lectina de rodamina RLK2200 1 equipo

> El kit II (BK2100) consta de 1 mg de las siguientes lectinas o
Kits de detección de lectina II conjugados de lectina: GSL I, LCA, PHAE, PHAL, PSA, Succinylated
BK2100 WGA.
Kit de lectina biotinilada II 1 equipo
Kits de detección de lectina III

> El kit III (BK3000) consta de 0,5 mg de los siguientes conjugados de
Kit de lectina biotinilada III BK3000 1 equipo
lectina: DSL, ECL, GSL II, Jacalin, LEL, STL, VVL.
Azúcares inhibidores Anticuerpos contra lectinas

Catalogar Existencias
Producto Número Tamaño de la unidad Concentración* Catalogar

Producto Conjugado Tamaño de la unidad
Número
Hidrolizado de quitina SP0090 10ml N/A
Aglutinina antimaní no conjugado AS2074 1 mg

Azúcares
biotinilado BA0074 0,5 miligramos

Nacetilgalactosamina S9001 111 miligramos 100 mm
AntiGriffonia (Bandeiraea)
Nacetilglucosamina S9002 442 miligramos 400 mm no conjugado AS2104 1 mg
Lectina I de Simplicifolia
galactosa S9003 360 miligramos 400 mm Faseolus vulgaris

no conjugado AS2224 1 mg
Antiaglutinina (E+L)
lactosa S9004 721 miligramos 400 mm
Faseolus vulgaris
αmetilmanósido S9005 388 miligramos 400 mm no conjugado AS2300 1 mg
Antiaglutinina (E+L)*
αmetilglucósido S9006 388 miligramos 400 mm Ricinus communis

no conjugado AS2084 1 mg
Antiaglutinina I y II
Lfucosa S9007 82 miligramos 100 mm
Aglutinina anti germen de trigo no conjugado AS2024 1 mg

Ácido Nacetilneuramínico (ácido siálico) S9008 619 miligramos 400 mm
*
Concentración madre si se reconstituye en 5 ml.
Productos auxiliares y reactivos
Productos auxiliares y reactivos Numero de catalogo Tamaño de la unidad
Pluma de barrera hidrofóbica ImmEdge H4000 2 bolígrafos
Solución de bloqueo libre de carbohidratos (CFB) (concentración 10x) SP5040 125ml
TrueVIEW Autofluorescence Quenching Kit (sin contratinción) SP8400 1 equipo
TrueVIEW Autofluorescence Quenching Kit (con DAPI Counterstain) SP8500 1 equipo
VECTASHIELD Antifade Mounting Medium (formulación que no fragua) H1000 10ml
VECTASHIELD Antifade Mounting Medium con DAPI (formulación que no fragua) H1200 10ml
VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Medium (formulación de fraguado duro) H1700 2 ml, 10 ml
VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Medium con DAPI (formulación de fraguado duro) H1800 2 ml, 10 ml
VECTASHIELD PLUS Antifade Mounting Medium (formulación que no fragua) H1900 2 ml, 10 ml
VECTASHIELD PLUS Antifade Mounting Medium con DAPI (formulación que no fragua) H2000 2 ml, 10 ml
vectorlabs.com | 39
Soluciones de elución de glicoproteínas
Las glicoproteínas se aíslan y purifican con frecuencia a partir de mezclas de proteínas

Solución eluyente de glicoproteína para agarosa unida: usando columnas de lectinas unidas a agarosa. Después de aplicar una mezcla de
proteínas, la columna de agarosalectina se lava para eliminar las proteínas no

Lectinas de unión a manosa o glucosa ES1100 100ml
deseadas y la glicoproteína unida a la lectina se eluye con un azúcar que inhibe la
Lectinas de unión a galactosa o GalNAc ES2100 100ml unión. Desafortunadamente, lograr una elución completa con una solución de azúcar
simple puede ser difícil. Vector Laboratories ha desarrollado cinco soluciones de elución de
Lectinas de unión a fucosa o arabinosa ES3100 100ml
glicoproteínas en el rango de pH neutro que maximizan el rendimiento de las glicoproteínas
eluidas y preservan la actividad de las lectinas unidas a agarosa para un uso repetido.
Lectinas de unión a GlcNAc o quitina ES5100 100ml
Lectinas de unión al ácido siálico ES7100 100ml Todos los componentes de estas soluciones eluyentes de glicoproteína listas para usar
pueden eliminarse posteriormente mediante diálisis.
Soluciones de elución de glicoproteínas
Encuadernado en agarosa
ES1100 ES2100 ES3100 ES5100 ES7100
lectinas
AAL (AL1393) +
Con A (AL1003) +
ADSL (AL1183) +
ECA (AL1143) +
GNL (AL1243) +
GSL II (AL1213) +
Jacalín (AL1153) +
ANP (AL1073) +
RCA120 (AL1083) +
SNA (AL1303) +
SBA (AL1013) +
UEA I (AL1063) +
VVA (AL1233) +
WGA (AL1023) +
SWGA (AL1023S) +
WFL (AL1353) +
+ Indica recomendación para eluir glicoproteínas
40 | vectorlabs.com
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hora del Pacífico, de lunes a viernes (excepto feriados) generalmente se
procesan el mismo día en que se reciben. A menos que se solicite lo contrario,
todos los productos se envían 2nd Day Air.
Aunque se proporcionan en una forma altamente purificada, nuestros productos no están destinados al diagnóstico clínico ni al uso de fármacos, ni han sido envasados en condiciones estériles.
Todos los productos enumerados en este catálogo son solo para fines de investigación. La inclusión de cualquier producto en este catálogo no implica la ausencia de una patente que cubra su uso,
no constituye una licencia bajo ninguna patente existente o pendiente, ni pretende ni implica una recomendación para el uso de dichos productos en infracción de cualquier patentar. La responsabilidad de
determinar la existencia de tales patentes recae únicamente en el usuario.
Marcas comerciales de Vector Laboratories: AnimalFree Blocker, BLOXALL, DuoLuX, Elite, ImmEdge, ImmPACT, ImmPACT NovaRED, ImmPRESS, ImmPrint, MOM, NEUROBIOTIN, PHOTOPROBE,
TrueVIEW, VECTABOND, VectaFluor, VectaMount, VECTASHIELD, VECTASHIELD HardSet, VECTASHIELD Vibrance, VECTASTAIN , Vecto, Vector NovaRED
©Vector Laboratories, Inc. 2020
44 | vectorlabs.com
Colon (FFPE): Antígeno recuperado con solución de desenmascaramiento de antígeno (a base de citrato, pH
6,0) y teñido con CY5 Sambucus Nigra Lectin (SNA; fucsia). VECTASHIELD Antifade Mounting Medium con
contratinción DAPI (azul). vectorlabs.com | 45
EL ARTE DEL DESCUBRIMIENTO CIENTÍFICO

INMUNOHISTOQUÍMICA • INMUNOFLUORESCENCIA vectorlabs.com
LECTINAS Y GLUCOBIOLOGÍA • BIOCONJUGACIÓN

Guía de Recursos y Aplicaciones de Lectinas)

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16 Ensayos enzimáticos – Glicosiltransferasas/Glicosidasas

18 Resonancia de plasmón superficial (SPR)

20 Cultivo Celular – Proliferación/Activación/Citotoxicidad

26 Datos de validación de lectinas del NCFG

28 lectinas utilizadas para la investigación de Cornonavirus

30 Tabla de especificidad de lectinas y estructuras de glicanos

Portada: Riñón de ratón fijado en formalina, incluido

36 Productos de lectina/Tabla SKU

39 Kits de detección de lectinas y productos auxiliares

Introducción y descripción general de las lectinas

Lectinas: historia Las lectinas,

Cronología de las lectinas

• Con A aglutina glóbulos Joseph C. Aub descubre que la

rojos, • Con A tiene especificidad WGA aglutina preferentemente

preferentemente estructuras de carbohidratos, incluidas las que se encuentran en

antifúngicas (Ref. 63).

reconocimiento de glicanos como herramientas", es una excelente fuente de información general

de lectinas de Dan et. Alabama. (Referencia 68).

Sumner y Howell (Ref. 58); Aub (Ref. 59); Morell (ref.

Histología: inmunohistoquímica Cuando se busca Descripción general del procedimiento

Solución de bloqueo Carbo­Free® (CFB).

» Alternativamente, sondee durante la noche a 4°C

tres veces (x3).

el portaobjetos con TBS (5 minutos): realice tres veces (x3).

Seleccionar aplicaciones publicadas • Visualización

Flujo de trabajo general de inmunohistoquímica En función de la

* Para obtener más información, visite: vectorlabs.com/browse/lectins

capa de moco superficial

Tinción con lectina de tejidos humanos para ácidos siálicos. SNA

Histología: inmunofluorescencia En lugar de usar Descripción general del procedimiento

con la detección de anticuerpos, dicha microscopía multiplexada permite la visualización

conjugado se aplicaría en este punto.

• Seque suavemente el portaobjetos.

Consulte nuestra Guía de inmunofluorescencia Apagar la autofluorescencia

oscurece la señal específica.

Seleccionar aplicaciones publicadas • Montaje/cubreobjetos

enzimas (Ref. 39) •

Diferenciar los parásitos intracelulares de las células huésped (Ref. 19)

Flujo de trabajo general de inmunofluorescencia

• Sin conjugar Medio de montaje con TRITC

• MAMÁ (Ratón sobre Ratón) • Antidesvanecimiento VECTASHIELD Vibrance™

• Bloque libre de carbohidratos

• BLOXALL® Endógeno Medio de montaje con DAPI

Solución de bloqueo HRP/AP

* Para obtener más información, visite: vectorlabs.com/browse/lectins

Tinción con lectina de células progenitoras

Citometría de flujo (FC)

busca identificar y comparar objetivos celulares entre poblaciones de células, la

estreptavidina en este paso durante 1 hora a 4 °C en CFB

Seleccionar aplicaciones publicadas para análisis celular en PBS a la concentración deseada.

30 PSA AAL SSEA­1 CSLEX­1

Caracterización de la unión de lectina en células madre y progenitoras humanas. LEC11

Caracterización de la glicosilación de la superficie celular de CHO. PSA

aislamiento de poblaciones de células o incluso de células individuales definidas por

su propio contenedor, ya sea sola o con un dispositivo similar. Detección y Visualización

Seleccionar aplicaciones publicadas para la clasificación de celdas

• Identificación y caracterización de nuevos tipos de células (Ref. 8) • Enriquecimiento

de la población (Ref. 49)

Incubar con lectina unida a agarosa

• Incubar con 2x volumen de perlas de solución de elución adecuada

• Centrifugue suavemente las perlas (<1000 g) y elimine el sobrenadante

• Use la gravedad para jalar lentamente la muestra de glicoproteína a través

Solución de bloqueo CarboFree® (CFB).

30 PSA AAL SSEA1 CSLEX1

B Lectina (MALI) purificada MUC1 y EGFR

MCF10A HB4A T47D MCF7 MDA MB231

Recomendamos una duración de 24 horas a una temperatura entre temperatura