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Revista de la Sociedad Química de la India 98 (2021) 100172

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Revista de la Sociedad Química de la India

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Desarrollo y validación de método analítico para estimación de bilastina.

en forma de dosificación a granel y farmacéutica (tabletas)

Chinmayee Kishor Padte * , Poonam R. Batwal, Mukesh Subhash Patil, Ashish S. Jain
Facultad de Farmacia y Centro de Investigación Shri DD Vispute, New Panvel, Dist­Raigad, 410206, India

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACTO

Palabras clave: Antecedentes: El presente trabajo describe un método de HPLC simple, lineal, preciso, robusto, exacto y selectivo para
Bilastina Estimación de bilastina en forma de dosificación a granel y en tabletas. Bilastina es un medicamento antihistamínico de segunda generación.
Antihistamínico
Generalmente se utiliza para el tratamiento de la rinoconjuntivitis alérgica y la urticaria (ronchas). Metanol: Acetonitrilo:
Rinoconjuntivitis Se usó tampón de ácido fosfórico pH 2,1 en proporción de (21:33:46) como fase móvil con un caudal de 1,0 ml/min.
urticaria
La columna utilizada para el desarrollo del método tiene una dimensión de 250 4,6 mm y 5 μm.
Directrices del PCI
Resultado: En el rango de 5 a 25 μg/ml, la linealidad de Bilastina muestra un coeficiente de correlación de 0,9981.
Conclusión: El método fue validado según las pautas de la ICH en cuanto a linealidad, precisión, exactitud y robustez.

1. Introducción 2. Material y método

Bilastina es un fármaco antihistamínico de segunda generación utilizado en el 2.1. Químico y reactivo

tratamiento de la urticaria (urticaria) y la rinoconjuntivitis alérgica [1]. Es
Se utiliza para aliviar los síntomas de la fiebre del heno y otros tipos de alergia.
rinitis (estornudos, picazón, secreción, congestión nasal y enrojecimiento y agua)
ojos). Hay algunos artículos de investigación que describen la determinación de
Bilastina por estabilidad indicando el método RP­HPLC para formulación farmacéutica y
a granel [2]. Y por método espectrofotométrico UV.
utilizando un diseño experimental para la robustez [3]. Desarrollo de métodos y
Validación de bilastina por HPLC [4]. Y el nuevo método validado de cromatografía líquida
de ultra rendimiento (HPLC) [5]. RP­HPLC selectiva
Se ha desarrollado un método [6] (ver en las Tablas 1 a 11, Figs. 1 a 4)
Bilastina fue una muestra de regalo obtenida de una compañía farmacéutica local.
Bilanta Tablets (Bilastine Tablets, 20 mg) se compró en una
tienda de farmacia local. El acetonitrilo y el metanol utilizados fueron de HPLC.
grado comprado a Merck Life Science Pvt. Limitado. Ltd. Bombay, India. Todo
En el trabajo de investigación se utilizaron productos químicos de calidad analítica.
2.2. Instrumentación
Un instrumento Jasco HPLC 4000, un muestreador automático con detector PDA y
Se utilizó la columna Chromatopak Pearless. El sistema HPLC fue operado
con software chromNAV.

Nombre del pico tR(mín.) Área [μVs] Altura [μV] Área% Altura% NTP Factor de simetría

Bilastina 4.067 106855 11522 100.000 100.000 4546 1.00

* Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico: chinmayeepharma@gmail.com (CK Padté).

https://doi.org/10.1016/j.jics.2021.100172
Recibido el 26 de junio de 2021; Aceptado el 22 de septiembre de 2021
0019­4522/© 2021 Sociedad Química de la India. Publicado por Elsevier BV Todos los derechos reservados.
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tabla 1 Tabla 5
Perfil de fármaco [7,8]. Datos de precisión de Bilastina por Método UV.

IUPAC 2­[4­[2­[4­[1­(2­etoxietil)bencimidazol­2­il]piperidin­1­il] No Señor Conc.(μg/ml) Entre días (1) Entre días (2) intradiario
ácido etil]fenil]­2­metilpropanoico.
absorbancia
Molecular C28H37N3O3
1 10 0,147 0,146 0.144
Fórmula
2 10 0,146 0.145 0.145
Masa molecular 463,62 g/mol
3 10 0,147 0.148 0.145
Categoría Medicamento antihistamínico de segunda generación.
4 10 0.145 0,147 0,146
Solubilidad Ligeramente soluble en metanol, etanol.
5 10 0.148 0,147 0.145
Muy ligeramente soluble en agua y acetonitrilo.
6 10 0,147 0.145 0.145
Forma física polvo de color blanco
Significar 0,147 0,146 0.145
Desviación estándar (DE) 0.001 0.001 0.001
Desviación estándar relativa (RSD) 0.007 0.008 0.004
Tabla 2 %RSD 0.704 0,828 0.436
Condición cromatográfica.

No Señor Especificación Descripción

1 Columna Chromatopak Perlado Básico C18 (250 4.6

Tabla 6
mm 5 µm) Datos de precisión de bilastina mediante el método HPLC.
2 longitud de onda 278 millas náuticas
No Señor Concentración (μg/ml) Área
3 Columna 300 cc

Temperatura Precisión del sistema Precisión del método

4 Tasa de flujo 1,0 ml/min
1 10 106855 106855
5 Volumen de inyección 10 µl
2 10 106825 106825
6 Muestra Ambiente
3 10 106853 106811
Temperatura
4 10 106855 106835
7 Tiempo de ejecución 10 minutos
5 10 106845 106834
8 Fase móvil Metanol: Acetonitrilo: pH del tampón de ácido fosfórico
6 10 106853 106811
2.1 (21:33:46)
9 Diluyente usado Metanol: Agua (90:10) Significar 106868.8 106828,5
10 Modo de elusión isocrático Dakota del Sur 11.70755 16.73021
11 Tiempo de retención 4,00 minutos RSD 0.010957 0.015661
%RSD 1.095723 1.566081

Tabla 3
completamente y completar el volumen hasta 1000 ml y ajustar el pH
Linealidad para bilastina (UV). con HCl o NaOH.
Conc.(μg/ml) absorbancia

10 0 4. Preparación de soluciones para RP­HPLC

2 10 0,146
3 20 0,296 4.1. Preparación de solución madre estándar.
4 30 0.468
5 40 0,612
6 50 0,786 Pesar correctamente 10 mg de fármaco y transferirlos en 10 ml volumétricos.
7 60 0.943 matraz y luego agregar 5 ml de solvente. Agitar bien y completar el volumen al

Coeficiente de correlación 0,999

marcar con disolvente que da la solución de 1000 μg/ml 1 ml fue

Intercepción Y Y ¼ 0,0158x ­ 0,0092 Se pipeteó de la solución anterior y se transfirió a un recipiente volumétrico de 10 ml.
matraz y se diluyó hasta una marca de solución de 100 μg/ml con el disolvente.

Tabla 4 4.2. Preparación de la solución madre de muestra.

Linealidad para bilastina (HPLC).

Pesar con precisión las 10 tabletas y pulverizarlas. El polvo
Conc.(μg/ml) Área
Se midió con precisión el equivalente a 10 mg de comprimido en polvo de Bilastina.
10 0 y se transfirió a un matraz aforado de 10 ml y luego se agregaron 5 ml de solución
2 5 45572
3 10 106855
respiradero. Agitar bien y completar el volumen de disolvente que dé la
4 15 147217 Solución de 1000 μg/ml hasta la marca. De lo anterior se pipeteó 1 ml.
5 20 204195 solución y se transfirió a un matraz volumétrico de 10 ml y se diluyó hasta una marca
6 25 257779
que es 100 µg/ml.
Coeficiente de correlación 0.9981
Intercepción Y Y ¼ 10315x – 2001,2
5. procedimiento de ensayo
Parámetro Bilastina

Rango de linealidad 5­25 µg/ml 5.1. Preparación de solución estándar.

Coeficiente de correlación (r) 0.9981
Ecuación de regresión y y¼ 10315x – 2001,2
Pesar exactamente 10 mg de Bilastina y transferirlos a ml volumétricos.
intercepto (c) 2001.24
Pendiente (m) 10315.01 matraz y diluir con disolvente hasta la marca. De la solución anterior
Se prepararon 10 µg/ml de solución de Bilastina. Esta solución fue filtrada
a través de un filtro de jeringa de 0,22 μm.
3. preparación del tampón

5.2. Preparación de la solución de muestra.

20,214 g de Na2HPO4–7H2O a la solución y agregar 3,394 g de
NaH2PO4H2O a la solución agregar 800 ml de agua destilada. Disolver
Pesar y pulverizar 5 comprimidos. Tableta en polvo pesada con precisión

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Tabla 7

Datos de precisión de bilastina mediante el método HPLC.

Nivel de concentración (%) Solución madre agregada μg/ml AUC Conc. AUC total estándar agregado Conc. % Droga Media Dakota del Sur %RSD

80% 10 106855 10.55319 8 18 42337 4.298 23.880 23.880 0.001 0.006

10 106850 10.55271 8 18 42334 4.298 23.879
10 106855 10.55319 8 18 42339 4.299 23.881
100% 10 106855 10.55319 10 20 65788 6.572 32.860 32.859 0.002 0.005
10 106855 10.55319 10 20 65790 6.572 32.860
10 106855 10.55319 10 20 65783 6.571 32.857
120% 10 106855 10.55319 12 22 86196 8.550 38.865 38.865 0.002 0.004
10 106855 10.55319 12 22 86192 8.550 38.864
10 106855 10.55319 12 22 86199 8.551 38.867

6.2. Precisión
Tabla 8

Datos de idoneidad del sistema para bilastina mediante el método HPLC.

La precisión fue determinada por la precisión y el método del sistema.
Inyección Tiempo de retención (min) Área pico

1 4.00 106855
2 4.00 106650 Tabla 10

3 4.00 106855 Resultados del ensayo de bilastina por HPLC.

4 4.00 106770
No Señor. Conc.(μg/ml) Área estándar Área de muestra
5 4.00 106855
6 4.00 106650 1 10 104198 103999
2 10 103894 103898
Significar 106772,5
3 10 104486 103997
Dakota del Sur 100.4365471
4 10 103989 103899
%RSD 0.094
5 10 104196 103999
Parámetro Bilastina Criterios de aceptación 6 10 103695 103999

Tiempo de retención 4,00 minutos – 104076 103965

Pestaña
Recuento de placas 4546 Mayor que 2000 promedio. Peso 246 mg
% RSD del área del pico 0,094% No más del 2% promedio estándar peso 10 mg
Peso de la muestra. 123 mg
Cantidad de etiqueta 20 mg
equivalente a 10 mg y se transfirió a un matraz aforado de 10 ml y se diluyó estándar Pureza (%) 100%

Ensayo (%) 99,89%

con disolvente hasta la marca. De la solución anterior se toman 10 μg/ml de
Se preparó una solución de bilastina. Esta solución se filtró a través
Filtro de jeringa de 0,22 μm.
Tabla 11

6. Parámetros de validación[9] Resultados del ensayo de bilastina por HPLC.

% ensayo
6.1. Linealidad EN 103965 99,89
COMO 104076
La linealidad se llevó a cabo preparando soluciones estándar de bilastina. WS 10
DS 100
a diferentes niveles de concentración (5­25 μg/ml). El análisis de regresión fue
DT 100
Se utiliza para generar la curva de calibración estándar.
peso 123
PAG 100
AV 246
LC 20

Tabla 9

Datos de robustez de Bilastina mediante el método HPLC.

No Señor. 1. 2. 3. Significar Dakota del Sur %RSD

Tasa de flujo 0,8 ml/minuto Área 182940 182734 182297 182657 328,34 0.180
RT 5.29 5.28 5.21 5.26 0,04 0,829
NTP 4278 4298 4389 4321.67 59.16 1.369
1,2 ml/min Área 119967 121886 118776 120209.67 1569.14 1.305
RT 3.477 3.45 3.49 3.47 0,02 0,588
NTP 4032 3935 4028 3998.33 54,88 1.373

Temperatura 25ºC Área 147540 146371 147893 147268 796,62 0.541

RT 4.203 4.233 4.208 4.215 0,02 0.381
NTP 4143 4214 4156 4171 37,80 0.906
35ºC Área 148302 147709 148597 148202.67 452.26 0.305
RT 4.187 4.14 4.129 4.152 0,03 0,742
NTP 4014 4089 4107 4070 49.33 1.212

Longitud de onda 275 nanómetros Área 81466 81596 81398 81486.67 100.60 0.123
RT 4.35 4.39 4.31 4.35 0,04 0.920
NTP 5175 5180 5160 5171.67 10.41 0.201
281 millas náuticas Área 48915 49001 47989 48635 561.10 1.154
RT 4.333 4.31 4.3 4.31 0,02 0,392
NTP 5115 5135 5109 5119.67 13.61 0.266

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Fig. 1. Estructura química de Bilastina.

Fig. 2. Cromatograma estándar – Bilastina.

Fig. 3. Curva de calibración por UV – bilastina. Fig. 4. Curva de calibración por HPLC – bilastina.

precisión. En el sistema, se prepararon e inyectaron muestras de precisión de 10 µg/ml en seis
momentos diferentes, mientras que en el método de precisión se prepararon e inyectaron seis
réplicas de solución estándar de 10 µg/ml en seis momentos diferentes y se calculó el % de RSD.
Criterios de aceptación: se encontró que el % de RSD para todos los estudios de precisión
era <2%.
6.3. Exactitud
Criterios de aceptación: el porcentaje de recuperación debe estar entre el 98 % y el 102 %.
(Según las Directrices de la ICH).
6.4. Idoneidad del systema
Se administraron seis inyecciones de 10 µg/ml de soluciones estándar y se registraron los
cromatogramas. Se calcularon parámetros como el número de placa (N), el tiempo de retención y
el área del pico.

La precisión también se denomina estudio de recuperación. Se lleva a cabo para los

parámetros de precisión en tres niveles de concentración diferentes. Se añadió una cantidad
conocida de bilastina a la muestra preanalizada.

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6.5. Límite de detección (LOD) guía y puede usarse para la determinación de bilastina en formas farmacéuticas y a granel.
Se encontró que el método era especificidad, precisión, recuperación, robustez, linealidad,
Se encontró que el LOD era de 0,005 µg/ml. robustez, idoneidad del sistema y límite de detección y límite de cuantificación.

6.6. Límite de cuantificación (LOQ)

Aprobación ética y consentimiento para participar.
Se encontró que el LOQ era 0,016 µg/ml.
En este estudio no se utilizaron sujetos animales ni humanos.
6.7. Especificidad

Consentimiento para publicación

Los cromatogramas del blanco no mostraron ningún pico en el tiempo de retención de
bilastina.
No aplica.

6.8. Robustez
Disponibilidad de datos y materiales.

Es un procedimiento analítico es una medida de su capacidad para no verse afectado Todos los datos y materiales deben estar disponibles previa solicitud.
por variaciones pequeñas pero deliberadas en los parámetros del procedimiento analítico.
Los parámetros incluyen caudal de 0,2 ml/min, temperatura de 50 °C y longitud de onda de
Fondos
2 nm.
Criterios de aceptación: el % RSD debe ser inferior al 2,0%.
Es autofinanciado: ninguna organización patrocinó fondos,
Conclusión: Se encontró que los parámetros de idoneidad del sistema estaban dentro
agencia de financiación y organismos de investigación sin fines de lucro.
del límite en todas las condiciones variables para el estudio de robustez realizado con un %
de RSD no superior al 2,0 %.
Contribuciones de los autores

6.9. Ensayo de tabletas de bilastina.

CKP diseñó todos los experimentos y escribió el manuscrito. MSP ha revisado y editado
el manuscrito. Todos los autores han leido y aprobado el manuscrito.
Pesar y pulverizar 5 comprimidos. Se pesó con precisión la tableta en polvo equivalente
a 10 mg y se transfirió a un matraz aforado de 10 ml y se diluyó con solvente hasta la marca.
A partir de la solución anterior se prepararon 10 µg/ml de solución de Bilastina. Esta solución
se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,22 µm. Declaración de intereses contrapuestos

Inyecte un volumen igual de blanco, estándar (6 repeticiones) y muestra. Los autores declaran que no existe ningún conflicto de intereses.
soluciones (6 réplicas).
La cantidad de bilastina presente en la formulación se calculó mediante Agradecimientos
utilizando las fórmulas que se indican a continuación,

EN WS DT PAG AW Los autores agradecen a la dirección y al director de Shri D.

% Ensayo ¼ 100 D. Vispute College of Pharmacy and Research Center Panvel District ­ Raigad por proporcionar
COMO DS peso 100 LC
todas las instalaciones necesarias para llevar a cabo el trabajo de investigación.
Dónde.

AT ¼ Área de pico promedio debido a la preparación del ensayo lista de abreviaciones

AS ¼ Área de pico promedio debido a la preparación estándar
WS ¼ Peso del estándar en mg PDA Detección de matriz de fotodiodos
DS ¼ Factor de dilución de la preparación estándar Cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa RP­HPLC
DT ¼ Factor de dilución del ensayo Preparación Área AUC bajo la curva

WT ¼ Peso de la muestra en la preparación del ensayo Dakota del Sur Desviación Estándar
P ¼ Potencia del estándar LOD Límite de detección
AW ¼ Peso promedio Límite LOQ de cuantificación
LC ¼ Reclamación etiquetada RT Tiempo de retención
RSD Desviación estándar relativa
PCI Consejo Internacional para la Armonización de las Normas Técnicas
6.9.1. Observación Requisitos para productos farmacéuticos de uso humano
Se encontró que la cantidad de bilastina presente en la forma farmacéutica tomada era
del 99,89%. Referencias

6.9.2. Criterios de aceptación % [1] Bilastina ­ Wikipedia, (sin fecha). https://en.wikipedia.org/wiki/Bilastine (consultado el 10
de noviembre de 2020).
El ensayo debe estar en el rango de 98 a 102 %.
[2] Prathyusha P, Sundararajan R, Bhanu P, Mukthinutalapati MA. Un nuevo método RP­
HPLC que indica estabilidad para la determinación de bilastina a granel y en
7. Conclusión formulación farmacéutica. Res. J. Farmacéutica. Tecnología. 2020;13:2849–53. https://
doi.org/10.5958/0974­360X.2020.00507.7 .
[3] Tassinari A, Rossi G, Dias I, Bajerski L. Método espectrofotométrico UV para
Bilastina es un fármaco antihistamínico de segunda generación. El procedimiento RP­ Determinación cuantitativa de bilastina mediante diseño experimental de robustez.
HPLC sugerido ha sido validado de acuerdo con la ICH Anal de drogas. Res. 2017;1:38–43.

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CK Padte et al.
[4] Sharma P, Gupta DSK, Kumar MN, Dahiya DM, Nagar MP. Desarrollo de método y validación de
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[5] Firdous S, Rizwan SH. Desarrollo y validación de métodos analíticos para la
Estimación de bilastina a granel y en forma farmacéutica por parte de la UPLC. Mundo J.
Farmacéutica. Ciencias de la vida. 2020;6:138–43. https://doi.org/10.26452/ijrps.v11i4.3114.
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[6] Pardeshi PJ, Gaware VM, Dhamak KB. Desarrollo y validación de RP­HPLC.
Método para la estimación de bilastina a partir de granel y formulación. Asiático J. Pharm.
Anal. 2020;10:111. https://doi.org/10.5958/2231­5675.2020.00019.8.
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el 15 de noviembre de 2020).