NTC 5084 2002 Estimación Concentración Desinfectante Kelsey Sykes

NORMA TÉCNICA NTC
COLOMBIANA 5084
2002-09-18
ESTIMACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UN
DESINFECTANTE USADO BAJO CONDICIONES
DE SUCIEDAD EN HOSPITALES MEDIANTE LA
PRUEBA MODIFICADA DEL KELSEY-SYKES
E: ESTIMATION OF CONCENTRATION OF DISINFECTANTS

USED IN "DIRTY" CONDITIONS IN HOSPITALS BY THE
MODIFIED KELSEY-SYKES TEST
CORRESPONDENCIA: esta norma es modificada (MOD) con

relación a la BS 6905: 1987, las
desviaciones técnicas se indican en la
introducción de la norma.
DESCRIPTORES: desinfectante; desinfectante

hospitalario; método de ensayo.
I.C.S.: 11.080.20
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435
Prohibida su reproducción Editada 2002-10-07

PRÓLOGO
El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.
La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.
La NTC 5084 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2002-09-18.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

través de su participación en el Comité Técnico 352303 Desinfectantes y productos afines para
uso hospitalario.
B. BRAUN MEDICAL SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD DE

HOSPITAL LA VICTORIA BOGOTA
INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA SURGICON & CÍA.
DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS SUPERINTENDENCIA NACIONAL DE
JOHNSON & JOHNSON MEDICAL SALUD
PROASEPSIS LTDA. 3M DE COLOMBIA S.A.
QUIRUMÉDICAS UNIVERSIDAD NACIONAL
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las

siguientes empresas:
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

HOSPITALES Y CLÍNICAS AUDITEMOS EU
ASOCIACIÓN NACIONAL DE LABORATORIOS FARPAG
INFECTOLOGÍA MACECOFAR
CIBA ESPECIALIDADES QUÍMICAS MINISTERIO DE DESARROLLO
FULLER ASEO Y MANTENIMIENTO LTDA. MINISTERIO DE SALUD
FUNDACIÓN CARDIO INFANTIL NULAD
FUNDACIÓN CLÍNICA SHAIO UNIVERSIDAD DE LA SABANA
HOSPITAL SANTA CLARA
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.
DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5084
ESTIMACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UN DESINFECTANTE

USADO BAJO CONDICIONES DE SUCIEDAD EN HOSPITALES
MEDIANTE LA PRUEBA MODIFICADA DE KELSEY - SYKES
INTRODUCCIÓN
En esta norma se han hecho algunas modificaciones con respecto a marcas comerciales de
algunos de los reactivos contemplados en el numeral 4. Adicionalmente, fue incluido el texto
referente al tipo de agua (contemplado en la norma BS 3978) que debe usarse, indicado en el
numeral 4.1 de la presente norma.
BS 6905:1987 NTC Explicación
- Oxoid Nutrient No. 2 - Caldo nutritivo No. 2 Se reemplazaron las marcas

comerciales por los nombres
- Tween 80 - Polisorbato 80 químicos comunes
- Oxoid Nutrient Agar - Agar Nutritivo
Debe cumplir con el Grado 3 de la El agua usada debe ser Grado 3 Se introdujo para proporcionar la
norma BS 3978 (según la norma BS 3978): debe información, inmediatamente.
producirse por destilación sencilla,
desionización o mediante ósmosis
inversa. A menos que se especifique
otra cosa, se debe usar para el trabajo
analítico rutinario.
Se realizaron también los siguientes cambios editoriales:
a) La Nota 2 del numeral 1 "Objeto", se modificó. En lugar de informar que los títulos
de las publicaciones se enuncian en la parte interior de la carátula, se deja que se
enuncian en el Anexo B.
1
1. OBJETO
La presente norma describe un método de cálculo de la concentración de desinfectante que

puede recomendarse para desinfección ambiental en hospitales bajo condiciones de "suciedad".
NOTA 1 El resultado general se determina empleando la información obtenida para tiempos de contacto de 8 min y 18 min
solamente. El método descrito en esta norma hace referencia también a un tiempo de contacto de 28 min y el procedimiento
relacionado con este tiempo de contacto, puede omitirse. Sin embargo, el analista a menudo encuentra útil aplicar el método
hasta 28 min como se describe, si se desconoce la concentración recomendada del desinfectante.
NOTA 2 Los títulos de las publicaciones a las que se hace referencia en esta norma se enuncian en el Anexo B.
2. PRINCIPIO
Se mezcla un cultivo de desafío del microorganismo más resistente (seleccionado mediante un pre-
ensayo de cuatro posibles microorganismos) con una cantidad fija de suspensión de levadura. La
mezcla constituye el medio de desafío que posteriormente se agrega en cantidades especificadas a
una serie de tres diluciones del desinfectante bajo ensayo de diferente concentración en una
proporción 0.5:1:1.5. Después de los tiempos de contacto de 8 min, 18 min y 28 min (véase la Nota 1,
numeral 1), se toman alícuotas y se colocan en cinco tubos de réplica con caldo que contengan
inactivador y se incuban a 37 °C durante 48 h y luego se examina su crecimiento.
Si se obtiene un patrón de crecimiento aceptable, se repite el procedimiento de ensayo empleando

la misma serie de diluciones en dos días subsiguientes para verificar que se obtengan resultados
similares. Si se obtiene un patrón de crecimiento inaceptable, se ajusta la serie de diluciones hasta
que se obtenga un patrón de crecimiento aceptable, y se repite el procedimiento de ensayo en dos
días subsiguientes.
NOTA 3 Se hacen diluciones seriadas en placas para el medio de desafío antes de iniciar la prueba y se registra el
número de microorganismos viables, el cual es un número definido necesario para que la prueba sea valida.
3. ESTERILIZACIÓN
Siempre que se haga referencia a reactivos, medios, materiales o aparatos estériles, o aparezca
una instrucción para esterilizarlos, la esterilidad debe lograrse y mantenerse a:
a) 170 °C a 175 °C durante mínimo 1 h en un horno (esterilización seca*); ó
b) 121 °C ± 1 °C durante mínimo 15 min en un autoclave (esterilización húmeda).
La manipulación de material estéril y de cultivos bacteriales debe realizarse asépticamente.
4. REACTIVOS Y MATERIALES
4.1 GENERALIDADES
Todos los reactivos deben ser de grado biológico o analítico reconocido.
*
Este método sólo es adecuado para cristalería seca
2
El agua usada debe ser Grado 3 (según la norma BS 3978): debe producirse por destilación
sencilla, desionización o mediante ósmosis inversa. A menos que se especifique otra cosa, se
debe usar para el trabajo analítico rutinario.
Todas las soluciones y medios deben tener una preparación fresca.
4.2 AGUA DURA
Se disuelven 0,305 g de cloruro de calcio anhidro y 0,139 g de cloruro de magnesio

hexahidratado en agua y se diluye hasta completar 1 000 mL con agua. Se esteriliza de acuerdo
con el numeral 3.
NOTA 4 El agua tiene un valor de 342 mg/L de dureza.
4.3 MEDIO DE RECUPERACIÓN
Empleando una pipeta o un dispensador automático (véase el numeral 5.2.2), se dispensa caldo
nutritivo No. 2 de concentración estándar, con contenido de 30 g/L de polisorbato 80, en los tubos
de ensayo en alícuotas de 10 ml y se esteriliza de acuerdo con el numeral 3 (b). Cada ensayo
requiere 45 tubos.
4.4 MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO
Se prepara Agar nutritivo de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se esteriliza de
acuerdo con el numeral 3 (b).
4.5 MEDIO LÍQUIDO DE CRECIMIENTO
Se prepara caldo sintético oxoide (AOAC) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se
esteriliza de acuerdo con el numeral 3 (b).
4.6 MICROORGANISMOS DE ENSAYO
4.6.1 Escherichia coli (NCTC 8196)
4.6.2 Pseudomonas aeruginosa (NCTC 6749)
4.6.3 Proteus vulgaris (NCTC 4635)
4.6.4 Staphylococcus aureus (NCTC 4163).
NOTA 5 Se selecciona uno de estos microorganismos como el microorganismo de prueba para la determinación
(véase el Apéndice A).
4.7 SUSPENSIÓN DE LEVADURA
Se prepara una suspensión de levadura que contenga 50 mg/L de levadura calculada sobre una
base de masa seca como se describe en el numeral 5.5 de la norma BS 808, pero empleando el
agua dura (véase el numeral 4.2) en lugar del agua que cumpla con el Grado 3 de la norma BS 3978.
4.8 SOLUCIÓN DE RINGER, CONCENTRACIÓN DE CUARTA PARTE
Se emplea solución de preparación fresca. Se disuelven 9,00 g de cloruro de sodio, 0,42 g de

cloruro de potasio, 0,24 g de cloruro de calcio anhidro y 0,20 g de bicarbonato en agua y se
diluye hasta completar 1 000 mL con agua. Se adiciona un volumen de esta solución a tres
3
volúmenes de agua para dar una solución de concentración de cuarta parte. Se dispensan
alícuotas de 9 mL de partes alícuotas en botellas universales de cultivo estériles (véase el
numeral 5.2.3) y se esteriliza de acuerdo con el numeral 3.
5. APARATOS
5.1 GENERALIDADES
El aparato debe ser estéril (véase el numeral 3) y debe limpiarse escrupulosamente antes de usarse.
5.2 APARATOS MICROBIOLÓGICOS COMUNES
5.2.1 Micropipeta, de alta precisión, ajustada para dispensar 20 µL exactos, y puntas estériles
adecuadas para uso con esta micropipeta.
5.2.2 Pipetas, de capacidad de 1 mL, 5 mL y 10 mL, que cumplan con la Clase B de la

norma BS 1583, ó un dispensador automático capaz de dispensar 1 mL, 5 mL y 10 mL al mismo
grado de exactitud.
5.2.3 Botellas de cultivo de contenedor universal, de 28 mL de capacidad.
NOTA Los contenedores deben estar elaborados de vidrio con tapas metálicas roscadas con revestimientos de
caucho.
5.2.4 Cajas de Petri, que cumplan con la norma BS 611.
5.2.5 Incubador, capaz de mantener 37 °C ± 1 °C.
5.2.6 Papeles de filtro, de 10 cm de diámetro aproximadamente.
NOTA Son adecuados los papeles de filtro Whatman No. 4
6. PREPARACIÓN DE CULTIVOS DE ENSAYO
6.1 CULTIVOS INICIALES
Se distribuyen los microorganismos de ensayo (véase el numeral 4.6) en tubos liofilizados y se

reconstituyen de acuerdo con las instrucciones del proveedor.
6.2 CULTIVOS INICIALES
A partir del cultivo inicial se toma con un asa redonda, una fracción sobre la superficie del medio de
cultivo sólido esterilizado (véase el numeral 4.4). Se incuba durante 24 h (véase el numeral 5.2.5) a
37° C ± 1°C, y luego se almacena a una temperatura inferior a 22 °C y preferiblemente entre 4 °C y
10 °C, hasta cuando se requiera. Se prepara un cultivo de reserva de cada microorganismo de
ensayo (véase el numeral 4.6).
6.3 CALDOS DE CULTIVO
Se inocula un tubo que contenga 10 mL del medio de crecimiento líquido (véase el numeral 4.5) del
cultivo de reserva que se está empleando para la determinación y se incuba durante 24 h, (véase el
numeral 5.2.5) a 37 °C ± 1 °C. Se sub-cultiva progresivamente en medio de crecimiento líquido fresco
cada 24 h. Después de 10 d se reinicia el proceso empleando un cultivo de reserva fresco.
4
NOTA Al realizar el procedimiento de selección descrito en el apéndice A, se inoculan tubos separados de sub-
cultivos de los cuatro microorganismos de ensayo.
7. PREPARACIÓN DEL MEDIO DE DESAFÍO
7.1 Se subcultiva el microorganismo de ensayo seleccionado para la determinación (véase el

Apéndice A) diariamente en cantidades de 10 mL de medio de crecimiento líquido (véase el
numeral 4.5) durante mínimo 5 d y máximo 10 d. Se incuban los sub-cultivos durante 24 h a
37 °C ± 1 °C.
7.2 Se toma una alícuota de 6 mL de sub-cultivo del microorganismo de ensayo seleccionado

para la determinación a una botella de cultivo universal (véase el numeral 5.2.3) que contenga 4 mL
de suspensión de levadura (véase el numeral 4.7) y se mezcla.
NOTA Esta suspensión de 10 mL de levadura/microorganismo se emplea como el medio de desafío para el ensayo
bajo condiciones de "suciedad".
Si el microorganismo de ensayo seleccionado es Pseudomonas aeruginosa, se filtra el caldo de

cultivo como se describe en el literal A.2.2.
7.3 Inmediatamente antes del ensayo, se cuenta el número de microorganismos viables en el

medio de desafío mediante diluciones decimales en la solución de Ringer de concentración de
cuarta parte (véase el numeral 4.8). Se preparan placas por duplicado de 1 mL de cada una de
las diluciones de 10-4 a 10-7 y 10 mL del medio de cultivo sólido esterilizado (véase el numeral 4.4)
previamente fundidos y enfriados a aproximadamente 45 °C. Se incuban las placas del conjunto
durante 48 h (véase el numeral 5.2.5) a 37 °C ± 1 °C. Si el número de microorganismos viables es
inferior a 108 por mL o mayor que 1010 por mL, se prepara un medio de desafío fresco.
8. PREPARACIÓN DE LAS DILUCIONES
8.1 Se preparan tres diluciones del desinfectante en agua dura para ensayo al mismo tiempo,
bajo condiciones de "suciedad", en proporción masa a masa (véase el numeral 4.2). Se rotulan
las diluciones A, B y C, donde B es la dilución esperada para aprobar el ensayo, A es B menos el
50 % y C es B más el 50 % (véase el Apéndice A), por ejemplo, si B es 1 % (m/m) entonces A es
0,5 % (m/m) y C es 1,5 % (m/m).
8.2 Se coloca una alícuota de 3 mL de cada dilución de desinfectante en botellas de cultivo

universal separadas y rotuladas como se describe en el numeral 8.1.
8.3 Se preparan y ensayan todas las diluciones de desinfectante en el mismo día.
9. SELECCIÓN DEL MICROORGANISMO DE ENSAYO PARA LA DETERMINACIÓN
Empleando el ensayo de concentración mínima inhibitoria descrito en el Apéndice A, se

determina cual de los cuatro microorganismos de ensayo (véase el numeral 4.6) es el más
resistente, y se emplea como el microorganismo de ensayo para la determinación.
5
10. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
10.1 GENERALIDADES
Se realiza el ensayo a una temperatura de 20 °C a 22 °C. Se adicionan volúmenes de 1 mL

empleando las pipetas o el dispensador automático (véase el numeral 5.2.2) y volúmenes de 20 µL
empleando la micropipeta (véase el numeral 5.2.1) y se esterilizan las puntas. Se rotulan los 45 tubos
de ensayo que contienen medio de recuperación (véase el numeral 4.3) de la siguiente manera:
Cinco tubos rotulados A1, A2, A3, B1, B2, B3, C1, C2 y C3 para cada prueba
NOTA 1 Véase la Nota 1 del numeral 1 en cuanto a los tiempos de contacto de ensayo.
NOTA 2 Véase la Tabla 1 y la Figura 1 para tener un resumen de la tabla de tiempo de ensayo y una ilustración de
parte del procedimiento de ensayo.
Tabla 1. Cronograma de ensayo Kelsey-Sykes modificado
Concentración de desinfectante A Concentración de desinfectante B Concentración de desinfectante C
Tiempo Acción Tiempo Acción Tiempo Acción

minutos 1 mL de medio de desafío a minutos 1 mL de medio de desafío a minutos 1 mL de medio de desafío a
0 la dilución desinfectante A 1 la dilución desinfectante B 5 la dilución desinfectante C
8 alícuota de 20 µL al medio 9 alícuota de 20 µL al medio 13 alícuota de 20 µL al medio
de recuperación A1 de recuperación B1 de recuperación C1
10 1 mL de medio de desafío a 11 1 mL de medio de desafío a 15 1 mL de medio de desafío a
la mezcla de dilución la mezcla de dilución la mezcla de dilución
desinfectante A desinfectante B desinfectante C
18 alícuota de 20 µL al medio 19 alícuota de 20 µL al medio 23 alícuota de 20 µL al medio
de recuperación A2 de recuperación B2 de recuperación C2
20 1 mL de medio de desafío a 21 1 mL de medio de desafío a 25 1 mL de medio de desafío a
la mezcla de dilución la mezcla de dilución la mezcla de dilución
desinfectante A desinfectante B desinfectante C
28 alícuota de 20 µL para el 29 alícuota de 20 µL para el 33 alícuota de 20 µL para el
medio de recuperación A3 medio de recuperación B3 medio de recuperación C3
Alícuota de 20 L µ
para cada tubo en 8 minutos
para cada tubo en 8 minutos
A1
1 ml de medio para cada tubo en 8 minutos
de desafio
0 minutos 10 ml de medio
A2 de recuperación
en cada tubo
10 ml de medio
A de recuperación
A3
en cada tubo
Alícuota de 3 ml
de la dilusión desinfectante 10 ml de medio
bajo ensayo de recuperación
en cada tubo
Figura 1. Ilustración de parte del procedimiento de ensayo

6
10.2 SECUENCIA DE ENSAYO
10.2.1 En el tiempo 0, se adiciona 1 mL de medio de desafío a la dilución desinfectante A (véase

el numeral 8), y se agita la mezcla de dilución A con suavidad. En el tiempo 0 min+ 1 min se
adiciona 1 mL del medio de desafío a la dilución desinfectante B, y se agita la mezcla de dilución B
con suavidad. En el tiempo 0 min + 5 min, se adiciona 1 mL de medio de desafío al tubo que
contiene dilución desinfectante C y se agita la mezcla de dilución C con suavidad.
10.2.2 En el tiempo 0 minutos + 8 minutos, se toman cinco alícuotas de 20 µL de mezcla de

dilución desinfectante A y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos A1, y se agitan
las mezclas con suavidad. En el tiempo 0 min + 9 min, se toman cinco alícuotas de 20 mL de
mezcla de dilución desinfectante B y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos B1,
y se agitan las mezclas con suavidad.
NOTA Un operador diestro debe poder transferir en 20 s todas las cinco alícuotas a los tubos que contienen el medio
de recuperación.
10.2.3 En el tiempo 0 min +10 min, se adiciona una segunda cantidad de 1 mL de medio de desafío
a la mezcla de dilución desinfectante A, y se agita la mezcla con suavidad. En el tiempo 0 min + 11 min,
se adiciona una segunda cantidad de 1 mL de medio de desafío a la mezcla de dilución
desinfectante B, y se agita la mezcla con suavidad.
10.2.4 En el tiempo 0 min + 13 min, se toman cinco alícuotas de 20 µL de mezcla de dilución

desinfectante C y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos C1, y se agitan las
mezclas con suavidad.
10.2.5 En el tiempo 0 min + 15 min, se adiciona una segunda cantidad de 1 mL de medio de

desafío a la mezcla de dilución desinfectante C y se agita la mezcla con suavidad.

desinfectante A y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos A 2, y se agitan las
mezclas con suavidad. En el tiempo 0 minutos + 19 minutos, se toman cinco alícuotas de 20 µL
de la mezcla de dilución desinfectante B, se transfiere a cinco tubos B2, y se agitan las mezclas
con suavidad.
10.2.7 En el tiempo 0 min + 20 min, se adiciona una tercera cantidad de 1 mL de medio de desafío a
la mezcla de dilución desinfectante A, y se agita la mezcla con suavidad. En el tiempo 0 min + 21 min,
se adiciona una tercera cantidad de 1 mL de medio de desafío a la mezcla de dilución
desinfectante B, y se agita la mezcla suavemente.

desinfectante C y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos C2, y se agitan las
mezclas suavemente.
10.2.9 En el tiempo de 0 min + 25 min, se adiciona una tercera cantidad de 1 mL de medio de

desafío a la mezcla de dilución desinfectante C, y se agita la mezcla con suavidad.

desinfectante A y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos A3, y se agitan las
mezclas suavemente.

desinfectante B y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos B3, y se agitan las
mezclas suavemente. En el tiempo 0 min + 33 min, se toman cinco alícuotas de 20 µL de mezcla
7
de dilución desinfectante C y se transfiere una alícuota a cada uno de los cinco tubos C3, y se
agitan las mezclas con suavidad.
10.2.12 Se incuban los 45 tubos A1, A2, A3, B1, B2, B3, C1, C2 y C3 durante 48 h en el
incubador, controlado a 37 °C ± 1 °C y luego se examina el crecimiento en los tubos.
10.2.13 Se registra el patrón de crecimiento en forma tabular como se ilustra en la Tabla 2, si el

patrón de crecimiento es aceptable (véase el numeral 11), se repite el ensayo en dos días
posteriores o hasta que se obtengan tres patrones de crecimiento similar. Cada vez que se
realizan los ensayos de repetición se emplean diluciones de desinfectante frescas y el medio de
desafío. Si el patrón de crecimiento no es aceptable, se ajusta la serie de diluciones hasta que se
obtenga un patrón de crecimiento aceptable, y el procedimiento de ensayo se repite en dos días
posteriores.
11. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
NOTA Véase también la Tabla 2.
11.1 Se registra como aprobada una concentración inicial de desinfectante que no muestre
ningún crecimiento en mínimo dos de los cinco tubos de medio de recuperación después de
tiempos de contacto de 8 min (véase la columna 5 de la Tabla 2) y de 18 min (véase la columna 6
de la Tabla 2). Si sólo un tubo del medio de recuperación de la columna 5 no muestra
crecimiento, pero dos tubos de la columna 6 no muestran ningún crecimiento, se registra el
ensayo como no aprobado.
11.2 Es la concentración inicial de desinfectante la que se registra como "aprobó" o "no

aprobó" el ensayo. Durante el desarrollo del ensayo, la concentración desinfectante se reduce
ininterrumpidamente mediante la adición del medio de desafío pero no existe un cálculo de la
reducción real de la concentración. La diferencia entre la concentración inicial y la concentración
real en cualquier etapa del ensayo ofrece un margen de seguridad valioso.
11.3 El criterio de ensayo exige que una concentración de desinfectante se apruebe en tres
ocasiones empleando las diluciones frescas de desinfectante y el medio de desafío cada vez.
11.4 El resultado general debe ser la concentración de la dilución B, expresada como un

porcentaje (m/m), siempre y cuando la dilución A no apruebe y las diluciones B y C aprueben.
12. REPORTE DE ENSAYO
El reporte de ensayo debe incluir los siguientes elementos:
(a) referencia a la presente norma
(b) una identificación de la muestra de laboratorio;
(c) el resultado general determinado como se describe en el numeral 11;
(d) la fecha del ensayo.
8
Tabla 2. Ejemplo de los resultados para un desinfectante ensayado

contra Pseudomonas aeruginosa (NCTC 6749)
1 2 3 4 5 6 7 8
Concentra Número de Crecimiento de microorganismos en
Ensayo Fecha ción de unidades medio de recuperación después de Resultados
No. desinfec- formadoras un tiempo especificado
tante de colonia 8 min 18 min 28 min
por mL
% (m/m)
8
1 mayo 1 0,5 4,8x10 +++++ +++++ +++++ no aprobado
8
2 mayo 1 0,5 4,8x10 ----- +++++ +++++ no aprobado
8
3 mayo 1 0,5 4,8x10 ----- ----- - - ++ - aprobado
8
4 mayo 3 0,6 3,6x10 +++++ +++++ +++++ no aprobado
8
5 mayo 3 1,2 3,6x10 ----- - -+ -+ +++++ aprobado
8
6 mayo 3 1,8 3,6x10 ----- ----- ----- aprobado
8
7 mayo 7 0,6 7,2x10 ++ - ++ + - -++ +++++ no aprobado
8
8 mayo 7 1,2 7,2x10 ----- - -+ + + +++++ aprobado
8
9 mayo 7 1,8 7,2x10 ----- ----- ----+ aprobado
8
10 mayo 9 0,6 5,5x10 - -+++ + + +++ +++++ no aprobado
8
11 mayo 9 1,2 5,5x10 ----- ----- +++++ aprobado
8
12 mayo 9 1,8 5,5x10 ----- ----- ----- aprobado
NOTA La columna 7 está incluida sólo si se emplea un tiempo de contacto de 28 minutos en el ensayo (véase la Nota 1
al numeral 1)
9
APÉNDICE
ANEXO A
SELECCIÓN DEL MICROORGANISMO DE ENSAYO PARA LA DETERMINACIÓN
A.1 GENERALIDADES
Se selecciona el microorganismo de ensayo más resistente mediante el siguiente procedimiento.
A.2 PREPARACIÓN DE DILUCIONES DE CULTIVO
A.2.1 Se preparan los cuatro microorganismos de ensayo (véase el numeral 4.6) para el
procedimiento de selección como se describe en los numerales 6.1 y 6.2.
A.2.2 Se inoculan tubos separados que contengan 10 mL del medio de crecimiento líquido (véase
el numeral 4.5) con los cuatro microorganismos de ensayo de los cultivos iniciales (véase
el literal A.2.1) y se incuba durante 24 h (véase el numeral 5.2.5) a 37 °C ± 1 °C; se sub-cultiva a
diario. Se puede emplear cualquier sub-cultivo tomado después de mínimo 5 d y máximo 10 d.
Después de 10 d se reinicia el proceso empleando cultivo de reserva fresco (véase el literal A.2.1).
Antes de emplearse se filtra Pseudomonas aeruginosa a través del papel de filtro (véase
el numeral 5.2.6) antes de emplearse.
A.2.3 Se toma con una pipeta 1 mL de un caldo de cultivo de 24 h de los microorganismos de

ensayo (véase el numeral 4.6) en cantidades separadas de 9 mL de la solución de Ringer de la
concentración de cuarto (véase el numeral 4.8).
A.3 PREPARACIÓN DE DILUCIONES DESINFECTANTES
A.3.1 Se preparan cuatro grupos de 10 diluciones dobles de desinfectante bajo ensayo

mediante la esterilización de 40 botellas de cultivo de contenedor universal (véase el numeral 5.2.3)
que contengan 5 mL del medio de crecimiento líquido (véase el numeral 4.5) de acuerdo con el
numeral 3, y organizándolos en cuatro filas de 10 botellas.
A.3.2 Se dispensan 5 mL del desinfectante bajo ensayo en la primera botella de cada fila y se
mezcla bien. Se transfiere una alícuota de 5 mL de la mezcla en la primera botella a la segunda
botella de cada fila y se mezcla bien. Se transfiere una alícuota de 5 mL de la mezcla en la segunda
botella a la tercera botella de cada fila y se mezcla bien. Se repite este procedimiento hasta que se
llegue a la décima botella de cada fila. En este punto la décima botella contendrá 10 mL; se retiran y
desechan 5 mL.
A.4 INCORPORACIÓN DE LA DILUCIÓN DEL CULTIVO A LA DILUCIÓN DESINFECTANTE
Se transfieren 20 µL del cultivo diluido en cada una de las 10 botellas de dilución doble de
desinfectante, empleando un microorganismo para cada fila. Se incuban todos los cuatro
conjuntos de botellas durante 72 h (véase el numeral 5.2.5) a 37 °C ± 1 °C.
A.5 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Se examina el crecimiento en los cuatro conjuntos de botellas. La concentración mínima

inhibitoria es la más alta dilución que no muestre crecimiento. El microorganismo que muestre
mayor resistencia al desinfectante en su mínima concentración inhibitoria es el microorganismo
para emplear en el ensayo.
10
ANEXO B
(Normativo)
Los siguientes documentos referenciados son indispensables para la aplicación de esta norma.
Para referencias fechadas se aplica únicamente la edición citada. PAra referencias no fechadas
se aplica la última edición del documento referenciado (incluida cualquier corrección).
BS 611:1990, Petri Dishes Part 2: Plastics Petri Dishes for Single Use
BS 808:1986, Assessing the Efficacy of Disinfectants by the Modified Chick-Martin Test
BS 1583:1986, One-Mark Pipettes
BS 3978:1987, Water for Laboratory Use Renumbered as BS EN ISO 3696: 1995
11
DOCUMENTO DE REFERENCIA
BRITISH STANDARDS INSTITUTION. British Standard Method for Estimation of Concentration

of Disinfectants Used In "Dirty" Conditions In Hospitals By The Modified Kelsey-Sykes Test. 7 p.
(BS 6905:1987).
12

NTC 5084 2002 Estimación Concentración Desinfectante Kelsey Sykes

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NTC 5084 2002 Estimación Concentración Desinfectante Kelsey Sykes

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NORMA TÉCNICA NTC

E: ESTIMATION OF CONCENTRATION OF DISINFECTANTS

CORRESPONDENCIA: esta norma es modificada (MOD) con

DESCRIPTORES: desinfectante; desinfectante

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Prohibida su reproducción Editada 2002-10-07

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

La NTC 5084 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2002-09-18.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

B. BRAUN MEDICAL SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD DE

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las

ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

ESTIMACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UN DESINFECTANTE

BS 6905:1987 NTC Explicación

- Oxoid Nutrient No. 2 - Caldo nutritivo No. 2 Se reemplazaron las marcas

- Oxoid Nutrient Agar - Agar Nutritivo

Se realizaron también los siguientes cambios editoriales:

La presente norma describe un método de cálculo de la concentración de desinfectante que

Si se obtiene un patrón de crecimiento aceptable, se repite el procedimiento de ensayo empleando

a) 170 °C a 175 °C durante mínimo 1 h en un horno (esterilización seca*); ó

b) 121 °C ± 1 °C durante mínimo 15 min en un autoclave (esterilización húmeda).

La manipulación de material estéril y de cultivos bacteriales debe realizarse asépticamente.

Todos los reactivos deben ser de grado biológico o analítico reconocido.

Todas las soluciones y medios deben tener una preparación fresca.

4.2 AGUA DURA

Se disuelven 0,305 g de cloruro de calcio anhidro y 0,139 g de cloruro de magnesio

NOTA 4 El agua tiene un valor de 342 mg/L de dureza.

4.3 MEDIO DE RECUPERACIÓN

4.4 MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO

4.5 MEDIO LÍQUIDO DE CRECIMIENTO

4.6 MICROORGANISMOS DE ENSAYO

4.6.1 Escherichia coli (NCTC 8196)

4.6.2 Pseudomonas aeruginosa (NCTC 6749)

4.6.3 Proteus vulgaris (NCTC 4635)

4.6.4 Staphylococcus aureus (NCTC 4163).

4.7 SUSPENSIÓN DE LEVADURA

4.8 SOLUCIÓN DE RINGER, CONCENTRACIÓN DE CUARTA PARTE

Se emplea solución de preparación fresca. Se disuelven 9,00 g de cloruro de sodio, 0,42 g de

5.2 APARATOS MICROBIOLÓGICOS COMUNES

5.2.2 Pipetas, de capacidad de 1 mL, 5 mL y 10 mL, que cumplan con la Clase B de la

5.2.3 Botellas de cultivo de contenedor universal, de 28 mL de capacidad.

5.2.4 Cajas de Petri, que cumplan con la norma BS 611.

5.2.5 Incubador, capaz de mantener 37 °C ± 1 °C.

5.2.6 Papeles de filtro, de 10 cm de diámetro aproximadamente.

NOTA Son adecuados los papeles de filtro Whatman No. 4

6. PREPARACIÓN DE CULTIVOS DE ENSAYO

6.1 CULTIVOS INICIALES

Se distribuyen los microorganismos de ensayo (véase el numeral 4.6) en tubos liofilizados y se

6.2 CULTIVOS INICIALES

6.3 CALDOS DE CULTIVO

7. PREPARACIÓN DEL MEDIO DE DESAFÍO

7.1 Se subcultiva el microorganismo de ensayo seleccionado para la determinación (véase el

7.2 Se toma una alícuota de 6 mL de sub-cultivo del microorganismo de ensayo seleccionado

Si el microorganismo de ensayo seleccionado es Pseudomonas aeruginosa, se filtra el caldo de

7.3 Inmediatamente antes del ensayo, se cuenta el número de microorganismos viables en el

8. PREPARACIÓN DE LAS DILUCIONES

8.2 Se coloca una alícuota de 3 mL de cada dilución de desinfectante en botellas de cultivo

8.3 Se preparan y ensayan todas las diluciones de desinfectante en el mismo día.

9. SELECCIÓN DEL MICROORGANISMO DE ENSAYO PARA LA DETERMINACIÓN

Empleando el ensayo de concentración mínima inhibitoria descrito en el Apéndice A, se

10. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO