Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de

servicios 34

3D2 BVL Identifica Microorganismos con base en

técnicas Bacteriológicas.

Practica N°1 Estafilococo y Estreptococo

Q.F.B. Lidia Paola Méndez Jiménez

Fecha: 13 de noviembre del 2023

Equipo 3:
- Luis Enrique Serrano Aguilar.
Introducción
Los Staphylococcus sp son cocos Gram positivos de 0.5-1 μm de
diámetro, inmóviles, aerobios y anaerobios facultativos, caracterizados
en que se agrupan de forma irregular en racimos, producen catalasa,
lo que los diferencia de los Streptococcus sp. Son bacterias poco
exigentes. Se encuentran presentes en la mucosa y en la piel de los
humanos, crecen fácilmente en casi todos los medios bacteriológicos,
y descomponen los azúcares por fermentación, pero su crecimiento es
mejor en agar manitol salado y agar sangre. Tiene importancia médica
principalmente el S. aureus, y en humanos además de éste, el S.
saprophyticus y el S. epidermidis. Se pueden distinguir las siguientes
especies: S. aureus: Estafilococo patógeno. Es el agente causal de la
mayoría de las infecciones; se caracteriza por producir coagulasa o
fermentar el manitol, elaborar diversas toxinas, en especial la toxina α,
y sintetizar en su mayoría un pigmento amarillo dorado, no difusible,
que colorea a las colonias. S. epidermidis y S. saprophyticus:
estafilococos oportunistas. Son gérmenes comensales de la piel o
libres en el medio ambiente, que en ocasiones pueden intervenir en
procesos patógenos. Se caracterizan por no producir coagulasa ni
toxina α, no fermentan el manitol y elaboran en su mayoría un
pigmento blanco aporcelanado.

Objetivo
Aislamiento e identificación de las especies que comprende el género
Staphyloccus sp. utilizando los medios adecuados. Identificación del
género Staphylococcus con el uso de pruebas bioquímicas, prueba de
la Coagulasa y prueba de catalasa.
Materiales y reactivos

Materiales para obtención de plasma sanguíneo y

muestra de sangre venosa:
- Vacutainer o jeringa.
- Tubo con anticoagulante (color azul turquesa) y balance.
- Torundas de algodón.
- Alcohol al 70% o 96%.
- Cubrebocas.
- Torniquete.
- Guantes de látex.
- Centrífuga.
- Gradilla.
- Pipeta.

Materiales y reactivos para análisis de la prueba:

- Asa bacteriológica
-Mechero
-Portaobjetos
-Agar Sal y manitol
-Agar Sangre
-Secreción nasal o secreción purulenta
-Agua destilada
Reactivos
-Cristal violeta
-Lugol
-Alcohol acetona
-Safranina
-Agua oxigenada

Adquirir las habilidades y

conocimientos
necesarios para determinar si una
persona
tiene anticuerpos anti-Brucella
Adquirir las habilidades y
conocimientos
necesarios para determinar si una
persona
tiene anticuerpos anti-Brucella
Adquirir las habilidades y
conocimientos
necesarios para determinar si una
persona
tiene anticuerpos anti-Brucella
Adquirir las habilidades y
conocimientos
necesarios para determinar si una
persona
tiene anticuerpos anti-Brucella
Adquirir las habilidades y
conocimientos
necesarios para determinar si una
persona
tiene anticuerpos anti-Brucella
Adquirir las habilidades y
conocimientos
necesarios para determinar si una
persona
tiene anticuerpos anti-BrucellaA
Método
1.-En dos matraces Erlenmeyer con 50 ml de agua destilada (cada
uno), verter la porción ya pesada previamente del soluto (agar) en
cada uno, en el primero agar Sal y manitol, y en el segundo agar
sangre, además de un tubo de muestra de sangre venosa.
2.-Vertir cada solución en las cajas Petri, previamente esterilizadas.
3.-Hacer dos cultivos de una muestra de exudado faríngeo en cada
una de las cajas Petri.
4.-Incubar las colonias a temperatura de 35°-37° durante 48 horas.
Después del tiempo realizar un conteo de colonias.
5.-Realizar frotis fijando la colonia en el portaobjetos para cada de las
colonias sospechosas de Staphylococcus.
6.-Realizar tinción de Gram. Colocar los portaobjetos en varilla de
tinción, gotear con cristal violeta, dejar reposar 1 min, enjuagar con
agua corriente, gotear con Lugol, dejar reposar 1 min, enjuagar con
agua corriente, gotear con alcohol cetona, dejar reposar 30 segundos,
enjuagar con agua corriente, gotear con safranina 1 min, enjuagar, y
dejar secar
7.-Observar en el microscopio con objetivos 4x, 10x, 40x, 100x.

Agares a utilizar
MANITOL SALADO AGAR. Medio de cultivo selectivo y
diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de
estafilococos patogénicos a partir de muestras clínica

El agar sangre. Medio de cultivo que es una combinación de

un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina

CARACTERISTICAS DE COLONIAS
Es una bacteria Gram positiva, catalasa positiva, inmóvil, de forma
esférica, diámetro inferior a 2 micras (ug). Se agrupa en en cadenas
de dos (diplococos), la colonia que se formo es blanca rodeada de una
hemolisis completa (Beta), producida por la acción de hemolisinas.

TINCION DE GRAM
1.-Colocar los portaobjetos en varilla de tinción
2.-Gotear con cristal violeta, dejar reposar 1 min,
3.-Enjuagar con agua corriente,
4.-Gotear con Lugol, dejar reposar 1 min,
5.-Enjuagar con agua corriente,
6.-Gotear con alcohol cetona, dejar reposar 30 segundos,
7.-Enjuagar con agua corriente,
8.-Gotear con safranina 1 min, enjuagar,
9.-dejar secar
10.-Obserbar en el microscopio

El resultado arrojo que son Gram positivo.

Prueba de catalasa
-En una lámina portaobjetos colocar una gota de peróxido de
hidrógeno (agua oxigenada)
-Con un aplicador de madera o asa de siembra coger una porción del
centro de la colonia sospechosa y realizar una emulsión
-Observar la presencia o no de burbujas

El resultado arrojo positivo.

Prueba de coagulasa
-En un tubo colocar 05 ml de caldo nutritivo estéril + 0.5 de plasma
citratado, colocar una porción de la colonia sospechosa (catalasa
positiva) y realizar una emulsión
-Incubar a 37ºC por 2 a 4 hrs.
-Realizar la observación: formación de coágulo.

El resultado arrojo negativo.

Antibiograma

Nombre del paciente: Salvador guerrero Gálvez

Edad: 16 años
Sexo: Masculino

Se observan en el exudado faríngeo, escasas colonias de estafilococo

la cual presenta la siguiente sensibilidad a antibióticos:
- Penicilina 4.7%
 - Cefoxitina 65.1%
- Imipenem 100%
- Oxacilina 9.3%
- Vancomycin 100%
- Sulfamethoxazole & trimethoprim 18.6%

Evidencia

Conclusiones
En resumen, se logró con lo planteado por el docente, se realizo en
tiempo y forma ambas pruebas, se logro detectar la bacteria, además
de poder comprender el método y/o técnica de catalasa y coagulasa.

Bibliografía

-Mendez,P.(s.f) Identifica microorganismos con base en técnicas

Bacteriológicas. Pp102.