Sesión 4: Espectroscopia UV-VIS

• Jean Paul Miranda Paredes

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Durante el siglo XIX, antes que existieran las técnicas analíticas actuales, el químico orgánico podía
determinar la fórmula molecular de una sustancia pura a partir de su composición centesimal

ORIGEN DEL PROBLEMA

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Durante el siglo XX se empezaron a utilizar técnicas analíticas que se basaban en la interacción de la

luz con la materia

La comparación entre la luz incidente y la transmitida proporciona información de las

características de la muestra analizada
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Energía luz
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RADIACIÓN EFECTO
Rayos X y cósmicos Ionizaciones de las moléculas

UV-Visible Transiciones electrónicas entre los orbítales

atómicos y moleculares

Infrarrojo Deformación de los enlaces químicos

Microondas Rotaciones de los enlaces químicos

Radiofrecuencias Transiciones de spín electrónico o nuclear

en los átomos de la molécula.
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TÉCNICA
INFORMACIÓN OBTENIDA
ESPECTROSCÓPICA
Estructura total de la molécula incluida la estereoquímica de la
Rayos X misma a partir de las posiciones relativas de los átomos.

Existencia de cromóforos y/o conjugación en la molécula a partir de

Ultravioleta-Visible
las absorciones observadas.
Grupos funcionales a partir de las absorciones observadas.
Infrarrojo

Formula molecular y subestructuras a partir de los iones

Espectrometría de masas (*)
observados.
Grupos funcionales, subestructuras, conectividades,
estereoquímica, etc… a partir de datos de desplazamiento químico,
Resonancia magnética nuclear
áreas de los picos y constantes de acoplamiento observadas.
 HagaTRANSMITANCIA
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Transmitancia: fracción de radiación

incidente transmitida por la disolución.

PT
T 
PO

ABSORBANCIA

PO
A   log T  log
PT
La absorbancia de una disolución aumenta a medida que aumenta la atenuación
del haz.
PT potencia del haz de radiación transmitida.
Transmitancia: fracción de radiación que una sustancia deja pasar cuando la REM atraviesa la muestra.

T puede valer desde 0 hasta 1.

%T puede valer desde 0 hasta 100 %

Absorbancia: es la atenuación de la intensidad de la radiación cuando esta incide sobre una muestra. Es la cantidad de energía
que la sustancia toma para pasar a un estado más excitado.

A aumenta a medida que aumenta la atenuación de la radiación.

Cuando no hay absorción de radiación Po= PT y entonces A=0, mientras que si se absorbe el 99% de la radiación, solo se
transmite el 1%, la A=2
 RELACIÓN ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN: LEY DE
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BEER

Ley de Lambert-Beer: muestra cómo la absorbancia es directamente proporcional a la

longitud b de la trayectoria a través de la solución y a la concentración c del analito o especie
absorbente.

A  a·b·c A   ·b·c
a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades L·cm-1·g-1, si c=g/L)
b: longitud del camino que recorre la radiación a través del medio absorbente.
c: concentración expresada en g/L (mg/L, ...) Cuando en la ecuación la concentración viene expresada en
mol/L, la cte de proporcionalidad se denomina absortividad molar y se representa por  (unidades L·cm-
1·mol-1. )
-Disoluciones que contienen más de una clase de especies absorbentes:
A = A1 + A2 + .... + An
Como A =  · b · c

A = 1 · b · c1 + 2 · b · c2 + …. +n · b · cn
Siendo 1, 2, …, n los componentes absorbentes.
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INSTRUMENTACIÓN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN UV-VIS

FOTÓMETROS
* Instrumento sencillo utilizado para medir la absorbancia y que emplea filtros de
absorción o interferencia para seleccionar la longitud de onda.
* Suelen usarse prácticamente en la región del Visible.

* Ventajas: Son sencillos, bastante económicos, robustos y facilidad en cuanto a mantenimiento. Pueden
transportarse, lo que lo convierte en un aparato útil para realizar análisis espectroscópicos de campo.

* Inconvenientes: No puede utilizarse para obtener espectros de absorción.

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INSTRUMENTACIÓN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN UV-VIS

ESPECTROFOTÓMETROS
* Instrumento empleado para medir la absorbancia que utiliza un selector
monocromático para seleccionar la longitud de onda.
* Puede usarse en la región UV, Vis e IR.

* Pueden ser de un solo haz o de doble haz.

Diseños instrumentales para fotómetros y espectrofotómetros

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ESPECIES ABSORBENTES
A) Absorción por compuestos orgánicos

Dos tipos de e- son responsables de que las moléculas absorban radiación UV-Vis:
- e- compartidos que participan directamente en la formación de enlaces y que están asociados a
más de un átomo.
- e- externos no compartidos, localizados preferentemente entorno a átomos como O, S, N y
halógenos.(e situados en orbitales no enlazantes n)

 a la que absorbe una molécula depende de la fuerza con que retiene a sus distintos e-
.

Enlaces sencillos C-C o C-H:  de la región del UV de vacío (<180 nm)

Enlaces dobles o triples:  de la región del UV
Compuestos orgánicos que contienen S, Br y I: absorben en la región UV
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Chromophore Example Excitation max, nm  Solvent

__>
C=C Ethene p p* 171 15,000 hexane

C@C 1-Hexyne p __> p* 180 10,000 hexane

n __> p* 290 15 hexane

C=O Ethanal __> p*
p 180 10,000 hexane

n __> p* 275 17 ethanol

N=O Nitromethane __> p*
p 200 5,000 ethanol

C-X X=Br Methyl bromide n __> s* 205 200 hexane

X=I Methyl Iodide n __> s* 255 360 hexane
 ESPECIES ABSORBENTES Haga clic para modificar el estilo de título del patrón

A) Absorción por compuestos orgánicos con grupos cromóforos

n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y halógenos.

n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y halógenos.
 0.80
Etinilestradiol (26 mg/L)

Absorbancia
0.60 Gestodeno (5.4 mg/L)
Levonorgestrel (7.2 mg/L)
0.40

0.20

0.00
220.0 240.0 260.0 280.0 300.0
Longitud de onda (nm)

CH3 CH3
OH OH
OH CH2
CH3 CH2 C CH
C CH C CH

HO O
O
ETINILESTRADIOL (ETE) GESTODENO (GTD) LEVONORGESTREL (LEV)
 Tartracina (E-102)

OH

NaSO3 N=N

SO3Na

A. Anaranjado (E-110)
APLICACIONES Haga clic para modificar el estilo de título del patrón

CARACTERÍSTICAS DE LOS MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS

- Amplia aplicabilidad.
- Elevada sensibilidad: los límites detección 10-4 a 10-5 M.
- Selectividad de moderada a alta.
- Buena exactitud: errores de concentración 1-5% o incluso menores.
- Facilidad y comodidad en las medidas espectrofotométricas.
- Se prestan a una fácil automatización.

CAMPO DE APLICACIÓN
- Especies absorbentes: compuestos orgánicos que contengan grupos cromóforos y especies
inorgánicas como son los metales de transición.
- Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un reactivo para producir un compuesto
absorbente.
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• Violet: 400 - 420 nm

• Indigo: 420 - 440 nm
• Blue: 440 - 490 nm
• Green: 490 - 570 nm
• Yellow: 570 - 585 nm
• Orange: 585 - 620 nm
• Red: 620 - 780 nm
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 Reglas empíricas para calcular la longitud de onda de sistemas conjugados

Cromoforo Sustituyentes

Reglas de Woodward- R- (Grupo alquilo) ..... + 5nm

Fieser para calcular el RO- (Grupo alcoxi) …. +6
Transoid Diene X- (Cl- or Br-) .......... +10
max de los dienos y 215 nm RCO2- (Grupo acilo) .... 0
RS- (Grupo sulfuro) ... +30
polienos conjugadios. R2N- (Grupo Amino) .. +60

Further p -ConjugationC=C (Doble Enlace) ... +30

Cyclohexadiene* C6H5 (Phenyl Group) ... +60
260 nm

Cada doble enlace exociclo adiciona 5 nm. En el ejemplo del anillo de la izquierda, hay dos dos dobles
enlaces exociclos: uno en el anillo A y el otro en el anillo B.

max (calculado) = Base (215 or 260) + Contribucion del sustituyente

Con la ayuda de estas reglas, puede predecirse la absorción UV máxima, por ejemplo, en estos dos
compuestos:
LICENCIADA POR