UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIA EXACTAS E INGENIERÍAS

PRÁCTICA 1
MANEJO DE MICROPIPETAS

Nombre:Aguilar Hernandez Jose Bladimir ___Equipo: 3 Grupo: Cal:____

OBJETIVO.
Conocer las partes y el funcionamiento de las micropipetas; adquirir destreza en la
utilización de pipetas para la medición de volúmenes entre 1 y 1000 µL.
Familiarizar al alumno con la utilización de las micropipetas para trabajar en laboratorio de
Biología Molecular con seguridad y con el control de calidad que se exige.

INTRODUCCIÓN.
Exactitud: Representa la concordancia entre el valor promedio aritmético de varios
resultados y el valor real.

Precisión: Es inversamente proporcional a la dispersión de los resultados obtenidos de

ensayos repetitivos sobre la misma muestra, en condiciones constantes y determinadas.
Para evitar confusiones, es preferible sustituir la palabra precisión por Repetibilidad, es
decir, cuando el operador aplica la misma técnica sobre la misma muestra, en el mismo
laboratorio con los mismos aparatos y los mismos reactivos en la misma serie de
experimentos (precisión Intra-serie).

Reproducibilidad: Cuando la técnica está realizada en diversas condiciones que deben ser
aclaradas (precisión Inter-serie).

Descripción de la micropipeta
Las partes principales de una Micropipeta se muestran en la siguiente figura.

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¿Cómo escoger la pipeta adecuada?

Todas las micropipetas tienen un rango de volumen máximo y mínimo para trabajar. Es
indispensable no tratar de rebasar el rango indicado, porque esto descalibrará la
micropipeta y ocasionará que no se obtengan los volúmenes indicados. Por ejemplo: con
una Micropipeta de 1000 a 100 µL no se puede tomar un volumen de 1005 µL.

Procedimiento para el buen uso de la micropipeta:

1. Sujetar la pipeta con los tres dedos internos de la mano y con el índice y el pulgar
ajustar el volumen que se desea medir utilizando el micrómetro. Asegurarse que el
volumen mostrado en el indicador sea el volumen deseado (Figura 2a).
2. Colocar la puntilla en la parte inferior de la pipeta. Antes de tomar el volumen
asegúrese de sujetar la micropipeta firmemente en posición vertical (Figura 2b).
3. Presionar con el pulgar el émbolo hasta el primer tope, sumergir la puntilla en el
líquido deseado y dejar regresar suavemente el émbolo a la posición original.
Recuerde soltar lentamente el botón, ya que una manipulación rápida puede causar
errores en la medición (Figura 2c y 2d).
4. Para descargar el líquido, aplicar la puntilla contra la pared del tubo y
oprimir el botón hasta el segundo tope (Figura 2e).
5. Para retirar la puntilla usada, presionar el botón expulsor (Figura 2f).

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ORIGEN DE LOS ERRORES EN UNA TÉCNICA.

1. Errores debidos a los reactantes.

1.1. Las muestras: De la calidad de las muestras depende en gran parte la calidad
del resultado que se va a lograr, las condiciones de obtención de preparación,
de identificación y conservación, así como la representatividad de ésta, son

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puntos cruciales que no se pueden descuidar.

1.2. Los reactivos y estándares: La conservación de los reactivos van a repercutir
directamente sobre el resultado de la técnica (pérdida de la actividad
enzimática, hidrólisis de los dNTPs, etc.). De la misma manera, la solución
control requiere ser conservada en perfecto estado, sin degradación ni
modificación de su concentración que pueden interferir directamente en el
resultado. Por ejemplo, para realizar una PCR, es necesario que el DNA sea de
buena calidad, no debe estar degradado, contaminado, etc.

2. Errores al nivel de las diferentes etapas de la técnica.

Para evitar este tipo de errores, es necesario calibrar los equipos, utilizar controles
internos, testigos positivos, testigos negativos, etc. Por ejemplo, para una reacción de
PCR, es importante incluir en cada experimento un control negativo para verificar la
ausencia de contaminación. El control negativo no lleva DNA y por lo tanto, no debe
amplificar el producto de PCR. La presencia de una o más bandas en el gel de
electroforesis indica contaminación y por lo tanto, el experimento se debe descartar.

3. Evaluación del rango de medición de la técnica.

Para lograr la calidad en cualquier técnica que sea cualitativa o cuantitativa, se debe
conocer:
▪ Su límite de detección: concentración mínima que se puede medir y que sea
significativamente distinta del ruido de fondo. Por ejemplo, ¿cuál es la cantidad
mínima de DNA que se requiere para obtener siempre la amplificación del gen de
interés?
▪ Su límite de linealidad (en caso de cuantificación): rango de concentración en el
cual la concentración medida es proporcional al valor real.

La calidad de un análisis o experimento depende del buen conocimiento de los

instrumentos de trabajo, uno de los más importantes en esta rama de la investigación
es la Micropipeta.

MATERIAL Y REACTIVOS

Material:
▪ Micropipetas de 10, 100 y 1000 µL.

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▪ Puntas de 10, 100 y 1000 µL.

Equipo:
▪ Balanza analítica.
Reactivos:
▪ Agua bidestilada.

▪ Glicerol.

EVALUACIÓN DE LA REPETIBILIDAD DE LOS PIPETEOS.

Para verificar la exactitud y la repetibilidad de los pipeteos, se van a realizar 5 pipeteos de

100 µL y 5 de 1000 µL de agua, verificando por el peso y el volumen pipeteado.

PROCEDIMIENTO. (NOTA, MIGRAR A LA MEDICIÓN CON DOS MICROPIPETAS 100 Y 1000

UL)

1. Colocar el vaso de precipitado en la balanza analítica.

2. Tarar la balanza.
3. Pipetear 100 µL de agua en este mismo vaso.
4. Determinar el peso.
5. Repetir los pasos del 1 al 4, 5 veces.
6. Cambiar a la micropipeta de 1000 µL y repetir el procedimiento.
7. Anotar en la tabla los valores determinados.

10 µL 100 µL 1000 µL

Ensayo Nº Peso g Ensayo Nº Peso g Ensayo Nº Peso g

1 0.0076 1 0.09 1 1

2 0.0084 2 0.10 2 1

3 0.0089 3 0.10 3 0.97

4 0.0093 4 0.10 4 1

5 0.0100 5 0.09 5 1

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DIAGRAMA DE FLUJO

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A partir de los valores obtenidos calcular, peso promedio, desviación estándar y

coeficiente de variación.

RESULTADOS

MICROPIPETA VOL. 10 µL 100 µL 1000 µL

Desviación estándar 8.1141 x10-4 4.8989x10-3 0.012

Peso Promedio (g) 0.00884 0.096 0.994

Volumen Promedio (ml) 0.00884 0.096 0.994

Coeficiente de Variación 0.09178 0.05103 0.012072

CONCLUSIONES:

El uso de la micropipeta es sencillo pero se pueden cometer muchos errores que son
comunes y solo podremos mejorar nuestro uso de este equipo con la práctica. Además de
que los resultados obtenidos varían dependiendo el volumen y nuestra experiencia al
usarlas.

CUESTIONARIO

1. Menciona cuáles son los orígenes de los errores de una técnica:

Debido al instrumento
Debido al operador
Debido al ambiente

2. ¿Para qué se debe conocer el límite de detección y linealidad de una técnica?

Para poder así obtener resultados confiables y entendibles ( que ayuden a sacar una
conclusión) de las diferentes determinaciones que se hará con dicha técnica.

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3. Menciona y describe al menos dos factores en disminuyen la precisión de un

pipeteo:
a. Colocar en posición con angulo la micropipeta ya que al absorber el agua si
esta no se encuentra en posición vertical puede absorber burbujas de aire
lo cual modificara el volumen recogido de líquido.
b. Colocar la punta de puntilla en el fondo ya que esto impide la correcta
recolección de la muestra lo cual nos puede causar burbujas de aire o que
falle la micropipeta

4. Para pipetear un volumen de 985 µL y uno de 12.5 µL, ¿Cuáles micropipetas y qué
color de puntas utilizarías? (Explica por qué)
La micropipeta de 1000 microlitros y de 20 microlitros con punta de color azul y amarilla
respectivamente esto debido a que el volumen a extraer con ciertas pipetas debe ser
mejor al rango que se muestra en estas sin llegar a estar muy cerca de los límites.

5. ¿En qué consiste la técnica de pipeteo inverso? Menciona en qué casos se utiliza.
En tomar la muestra hasta el segundo toque y soltarla en el primer toque de la
micropipeta se utiliza en los casos donde la muestra tenga un alto nivel de viscosidad.

6. Menciona por qué es importante que la punta quede bien sujeta a la columna de
plástico de la micropipeta y justifica por qué puede afectar la exactitud del
volumen tomado al no quedar bien sujeta.
Si la punta no esta bien sujeta no hace el vacío requerido para jalar la muestra dentro de la
puntilla o puede que haga un vacío a medias en ambos casos esto modificara el volumen
extraído de muestra

BIBLIOGRAFÍA:

­ Fuentes, A., Fernández, I., & Fuentes, C. (2020, 9 noviembre). Consideraciones en el uso y
mantenimiento de micropipetas. Universidad Politecnica de Valencia. Recuperado 17 de agosto de
2022, de https://riunet.upv.es/handle/10251/145914

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­ Salas, R., Loría, A., & Rocha, C. (1995). Evaluación de sistemas de pipeteo. III. La precisión
de una micropipeta en el trabajo rutinario. Revista de investigación clinica, 47(6), 461–465.
https://pesquisa.bvsalud.org/portal/resource/pt/lil-164618

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