Manual de prácticas de

Laboratorio de Bioquímica Médica

Universidad Autónoma de Sinaloa
Facultad de Medicina
Licenciatura en Médico General

DIRECTORIO

Dr. Jesús Madueña Molina

Rector

Dr. Gerardo Alapizco Castro

Secretario General

Dr. Luis Alberto González García

Director

Dr. Josúe Camberos Barraza

Secretario Académico

Dr. Jorge Adalberto Velázquez Román

Secretaría Administrativa

Dr. Alejandro Camacho Zamora

Coordinador de Ciencias Básicas

Autores
MDCS. Luis Monroy Higuera
MDCS. Cynthia Isabel Rocha López
QFB. Mabel Nayeli Tracy Gastelum

Revisores de manual
Dra. Liliana Salazar
Dra. Adriana Lopez Castro
Dr. Josue Camberos Barraza.

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 Enero 2023

Introducción

El presente manual de prácticas de laboratorio de bioquímica médica, es una herramienta

para los alumnos de la Facultad de Medicina que cursan la licenciatura en médico general con
el cual pueden hacer un anclaje entre la información estudiada con la práctica que se lleva a
cabo en el mundo laboral, así desarrollando competencias en los alumnos para la resolución
de problemas. También obtienen habilidades, destrezas para la resolución de problemas,
teniendo un pensamiento crítico y sobre todo una competencia muy importante que es el uso
de este conocimiento con las pruebas diagnósticas de enfermedades llegando así a una mejor
conclusión, resolviendo con una mejor calidad de vida del paciente.

Misión de la Facultad de Medicina

Somos una Unidad Académica de la Universidad Autónoma de Sinaloa destinada a formar

profesionales de la salud mediante programas de Técnico Superior Universitario, Licenciaturas
y posgrados; capaces de actuar con humanismo, sentido social, principios éticos y capacidad
científica.

Visión de la Facultad de Medicina

La Facultad de Medicina es reconocida por su calidad académica, por el alto nivel de

competencia de sus egresados a nivel nacional e internacional; está a la vanguardia en
producción de conocimiento por el aporte de su cuerpos académicos, tecnológicamente
equipada y ejemplo de eficacia y eficiencia por el uso óptimo de recursos y procesos
certificados; contando también con liderazgo en programas de bienestar laboral, académico
y personal, comprometida con la educación ambiental y la sustentabilidad.

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Índice

Introducción……………………………………………………………………………………………………………...............3

Práctica No. 1. Determinación de Bilirrubina en suero y fosfatasa alcalina…………………………….5

Práctica No. 2. Determinación de pruebas de coagulación: TP, TPT y tiempo desangrado .....10

Práctica No. 3. Determinación de PH en Orina .........................................................................13

Práctica No. 4. Determinación de Gonadotropina Coriónica humana en Sangre: Prueba de

embarazo...........................................................................................................15

Práctica No. 5. Determinación de proteínas totales en suero………………………………………………..17

Práctica No. 6. Biometría hemática y frotis de sangre periférica .............................................20

Práctica No. 7. Determinación de creatinina en suero………………………………………………………....24

Bibliografía ...............................................................................................................................27

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 Práctica No. 1.

Determinación de Bilirrubina en suero y fosfatasa alcalina

La bilirrubina es el producto catabólico del hemo de la hemoglobina de los eritrocitos.

Alrededor del 75% de toda la bilirrubina se deriva de la descomposición de la hemoglobina de
los glóbulos rojos que mueren, son fagocitados por las células mononucleares del bazo, la
médula ósea y el hígado (células retículo-endoteliales). En adultos normales la carga diaria de
bilirrubina es 250-350mg. La estructura de anillo del hemo se escinde oxidativamente a
biliverdina por la hemo oxigenasa. La Biliverdina es, a su vez, enzimáticamente reducido a la
bilirrubina. La concentración plasmática normal de bilirrubina es inferior a 21 μmol /L (1,2 mg
/ dl). El aumento de las concentraciones (más de 50 μmol/L o 3 mg/dL) es fácilmente
reconocible clínicamente, ya que a esta concentración o más de bilirrubina imparte un color
amarillo a la piel y conjuntiva en las personas el cual signo se conoce clínicamente como
ictericia. Las anomalías en el metabolismo de la bilirrubina son indicadores clínicos
importantes para la presencia de enfermedad hepática.

La fosfatasa alcalina es una enzima que se encarga de eliminar grupos fosfatos de diferentes
moléculas, pero en la clínica se utiliza como enzima de escape. La Fosfatasa alcalina es
sintetizada tanto por el tracto biliar como por el hueso, y en el embarazo por la placenta, pero
estos tejidos contienen diferentes isoenzimas de ALP. El origen de la ALP puede determinarse
a partir del patrón de isoenzimas. Los laboratorios clínicos ofrecen un panel de medidas sobre
plasma o muestras de suero. Este grupo de pruebas suele describirse, de manera incorrecta,
como pruebas de función del hígado. Mientras que las actividades plasmáticas de las enzimas
hepáticas son marcadores de la enfermedad hepática, no reflejan exactamente la función del
hígado.

Competencias que debe adquirir el alumno:

 Conoce las diferentes pruebas hepáticas que se utilizan en clínica.

 Analiza las causas de aumento y disminución de Fosfatasa Alcalina y las bilirrubinas en
suero.

Condiciones de la práctica

Dos alumnos donarán sangre en ayunas antes de la práctica.

Fundamento del método

La fosfatasa alcalina hidroliza el 4-nitrofenilfosfato para formar 4-nitrofenol y fosfatos. El 4-

nitrofenol es amarillo a un pH de 10.4 con una absorbancia máxima de 405 nm. El rango en el
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que se forma el p-nitrofenol es directamente proporcional a la actividad de la fosfatasa
alcalina.

Técnica.
Determinación de fosfatasa alcalina

El reactivo de trabajo debe estar a 37 grados centígrados

Coloque en una cubeta:

Reactivo de trabajo--------------------1000 microlitros

Suero--------------------------------------- 20 microlitros

1. Mezclar

2. Calibrar el espectrofotómetro con agua destilada.

3. Colocar la celdilla al espectrofotómetro y poner en marcha el

cronometro.

4. Leer al minuto la absorvancia inicial (A1), leer de nuevo al siguiente minuto y

una tercera lectura al tercer minuto a 405 nm.

5. Determine el incremento de absorbancia por minuto (A/min).

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Cálculos
Fosfatasa alcalina (UI/L) = ( A/min) X 2 764

Valores normales
37 grados centígrados hombres 115 U/L
Mujeres 105 U/L

Fundamento del método de bilirrubina

La bilirrubina presente en la muestra reacciona con el ácido sulfanilico diazoado originando

un complejo coloreado que puede determinarse espectrofotométricamente. La cetrimida
solubiliza la bilirrubina indirecta permitiendo su reacción junto con la fracción directa. Los
términos “directa” y “total” se refieren a las características de reacción en presencia o
ausencia de solubilizantes (aceleradores). La bilirrubina “directa” e “indirecta” equivale
solo de forma aproximada a las fracciones conjugada y no conjugada.

Determinación de bilirrubina total

Blanco reactivo Blanco muestra Tubo problema Tubo patrón

Agua destilada 1000 microlitros ----------------------- ---------------------- -----------------------
--
Suero ---------------------- 1000 microlitros 1000 microlitros -----------------------
Solución patrón ---------------------- ----------------------- ----------------------- 100 microlitros
- -
Reactivo (AT) ---------------------- 1000 microlitros ----------------------- ----------------------
Reactivo de 1000 microlitros ----------------------- 1000 microlitros 1000 microlitros
trabajo -

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1.- Mezclar y dejar reposar durante 2 minutos a temperatura ambiente.
2.- Leer absorbancia del “blanco muestra” a 540 nanómetros frente a agua destilada
3.- Leer absorbancia del tubo problema y del tubo patrón a 540 nanómetros f rente al
“blanco reactivo”

Determinación de bilirrubina directa

Blanco reactivo Blanco muestra Tubo problema

Agua destilada 0.1ml - -

Suero - 0.1ml 0.1ml

Reactivo (AD) - 1.0ml -

Reactivo de trabajo 1.0ml - 1.0ml

1.- Mezclar y dejar reaccionar durante exactamente 5 minutos a 37 grados centígrados

2.- Leer absorbancia del “blanco muestra” a 540 nanómetros frente a agua destilada
3.- Leer absorbancia del tubo problema a 540 nanómetros frente a blanco reactivo
4.- Utilizar la absorbancia del tubo patrón obtenido en la determinación de bilirrubina total.

Cálculos

Bilirrubina total = A del problema - A del blanco muestra

X C patrón
A patrón
A=absorbancia
C= concentración

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Bilirrubina directa = A del problema - A del blanco muestra
X C patrón
A patrón

A=absorbancia
C= concentración

Valores normales

Bilirrubina total hasta 1.0 mg/dl

Bilirrubina directa hasta 0.25 mg/dl

Resultados

Conclusiones

Observaciones

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 Práctica No. 2.

Determinación de pruebas de coagulación: Tiempo de Protrombina (TP), TPT y tiempo de

sangrado.

El TP es una prueba de laboratorio que evalúa la fase extrínseca y la TPT la vía intrínseca de la
coagulación sanguínea y también cuando en alguna enfermedad hepática, es probable que
las funciones sintéticas de los hepatocitos sean afectadas, por lo que se espera que el paciente
tenga un tiempo prolongado de protrombina y una concentración baja de albúmina en suero.

Competencias que recibirá el alumno al realizar la práctica:

 Conoce las pruebas de coagulación más utilizadas

 Analiza y explica que factores se detectan en las tres pruebas utilizadas en el
laboratorio
 Identifica las causas de aumento y disminución de cada una de las pruebas
anteriores
 Analiza cuando las manda pedir el médico

Condiciones de la práctica
Un alumno del equipo expositor donará sangre en ayunas o tres horas antes sin haber
ingerido alimento, quince minutos antes de la práctica deberá presentarse al laboratorio.

Técnica

Tiempo de sangrado
1- limpiar con alcohol la yema del dedo
2- Picar profundamente con una lanceta y empezar a contar el tiempo en segundos
a partir de que empiece el sangrado
3- secar la sangre, sin tocar la herida, hasta que cese la hemorragia
4- anotar en tiempo en que dejo de sangrar la herida

- 10 -
 Valores normales: 1 – 3 minutos

Tiempo de protrombina (PT) y tromboplastina parcial activada TTP (la técnica es la misma,
solo el reactivo es diferente)

Fundamento del método de TP

Es un ensayo de escrutinio que permite valorar la vía extrínseca del sistema de coagulación.
El método mide el tiempo que tarda en coagular el plasma citratado in vitro, después de
agregar el extracto de tromboplastina (factor tisular) y calcio en condiciones de temperatura
de 37 grados centígrados

Fundamento del método de TTP

Es una prueba que se basa en la recalcificación del plasma in vitro en presencia de
fosfolípidos como sustituto de plaquetas y de una sustancia activadora. Valora la vía
intrínseca.

Los reactivos y plasma deben estar incubados a 37 grados centígrados para poder realizar la
práctica
Colocar en un tubo:

1- 0.1ml de plasma, mezclar.

2- Incubar 3 minutos a 37 grados centígrados.
3- Agregar 20 microlitros de PT (tiempo de protrombina) y empezar a contar el
tiempo en segundos hasta la aparición de un coágulo.
4- La aparición del coágulo se observa a contra luz e inclinando levemente el tubo.

- 11 -
Valores normales:
Tiempo de protrombina 10 – 15 segundos
Tiempo de tromboplastina parcial activada 30 – 40 segundos

Resultados

Conclusiones

Observaciones

12
 Práctica No. 3.

Determinación de PH en Orina

El pH es una escala con los que se mide la acidez y alcalinidad de algún sistema, este puede
ser el cuerpo humano, el cual esta variable puede jugar un papel muy importante en la
homeostasia del organismo.

Tanto los pulmones como el riñón contribuyen al mantenimiento del pH de la sangre. Se

llaman los componentes respiratorios y metabólicos del equilibrio ácido-base,
respectivamente. Los dos componentes están estrechamente interrelacionados. Cuando el
trastorno primario es respiratorio y causa acumulación de CO2, se produce un aumento
compensatorio en la reabsorción de bicarbonato por el riñón. Por el contrario, una
disminución en pCO2 disminuye la reabsorción de bicarbonato.

Cuando el problema primario es metabólico, una disminución en la concentración de

bicarbonato (y la disminución resultante en el pH) estimulan el centro respiratorio para
aumentar la velocidad de ventilación. El CO2 es expulsado y el pCO2 plasmático disminuye.
Esta es la razón por la cual los pacientes con acidosis metabólica hiperventilan.

Por otro lado, un aumento en el bicarbonato plasmático (causando un aumento en el pH)

conduce a una disminución en la tasa de ventilación, y la retención de CO2. El cambio
compensatorio siempre ayuda a devolver el pH a la normalidad.

Competencias que recibirá el alumno al realizar la práctica:

 Comprende el significado bioquímico de pH

 Explica la acidosis y alcalosis metabólica y respiratoria
 Analiza y explica como el riñón y pulmón compensan le pH corporal.
 Reconoce las causas clínicas de una acidosis y alcalosis.
 Conoce la utilidad de esta prueba diagnóstica en clínica.

Condiciones de la práctica

Un alumno donará orina antes de la hora de la práctica.

Fundamento del método

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El pH es la concentración de iones hidrogeno. El símbolo pH indica potencial de iones
Hidrogeno o exponente de hidrogeno. A medida que aumentan los hidrógenos hay
disminución del pH (acidez), por otro lado si existe disminución de hidrógenos y el pH
aumenta el medio se vuelve alcalino.

Método

La tira reactiva se introducirá en el frasco donde está la orina y se determina el pH

comparándolo con la escala.

Resultado:

Conclusiones:

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 Práctica No. 4.

Determinación de Gonadotropina Coriónica humana en Sangre/Orina: Prueba de

embarazo

La gonadotropina coriónica humana (hCG) es una hormona glicoproteica producida en el

embarazo, fabricada por el embrión en desarrollo poco después de la concepción y más
tarde por el sincitiotrofoblasto.

Tiene dos subunidades polipeptídicas: alfa y beta. La subunidad alfa es esencialmente

idéntica a la cadena alfa de otras hormonas hipofisiarias (TSH, LH y FSH).

La hCG puede tener funciones adicionales; por ejemplo, se cree que afecta a la tolerancia
inmunológica del embarazo. Las primeras pruebas de embarazo, en general se basan en la
detección o medición de la hCG.

Debido a que la hCG es producida también por algunos tipos de tumores, es un importante
marcador tumoral, pero no se sabe si esta producción es una causa o un efecto de la
tumorigénesis, al igual que para el diagnóstico de embarazos anormales como los ectópicos,
molares y abortos espontáneos potenciales, también se utiliza como parte de una prueba
de detección para síndrome de Down.

Los niveles de hCG en sangre y orina aumentan con el embarazo, alcanzando su máximo a
la séptima semana, persistiendo hasta la duodécima y luego decayendo gradualmente a
partir del tercer mes de embarazo, alrededor de los 40 a 90 días del embarazo los valores
plasmáticos de hCG varían entre 70,000 y 200,000 UI/ML
Semanas de embarazo Rango
Mujeres no embarazadas <5.0 mUI/ml
-3 semanas DUP: 5-50 mUI/ml
-4 semanas Dup 5-426 mUI/ml
-5 semanas DUP 18-7340 mUI/ml
-6 semanas DUP 1080-56500 mUI/ml
-7-8 semanas DUP: 7650-229000 mUI/ml
-9-12 semanas D1dc 25700-288000 mUI/ml
-13-16 semanas D1dc: 13300-254000 mUI/ml
-17-24 semanas D1dc: 4060-165400 mUI/ml
-25-40 semanas D1dc: 3640-117000 mUI/ml
-Mujeres posmenopáusicas <9.5 mUI/ml

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Competencias que recibirá el alumno al realizar la práctica:

 Identifica el lugar de formación de la Gonadotropina Coriónica Humana

 Conoce y analiza las causas de aumento y disminución de la GCH
 Interpreta valores normales de GCH
 Conoce la utilidad diagnóstica

Condiciones de la práctica:

Los equipos serán responsables de conseguir una muestra de Orina/Sangre de mujer

embarazada y no embarazada.

Fundamento del método:

Inmunoensayo cromatográfico con partículas con partículas de oro coloidal, prueba

cualitativa que detecta rápidamente la Hormona Gonadotrofina Coriónica Humana
(fracción B-GCH) presente en suero y orina.

Técnica:

1.- Abrir el sobre.

2.- Tomar la tira por el extremo morado y sumergirlo en la muestra de orina hasta la línea
de ‘’MARK’’.
3.-Interpretar resultados transcurridos 40 segundos.
4.-No interpretar resultados después de 10 minutos.

Resultado Negativo: Aparece únicamente una línea de color rosa en la zona de control (C)
Resultado Positivo: Aparecen dos líneas de color rosa, una en la zona de control (C) y la otra
en la zona de muestra (T)

Resultados:

Conclusiones:

Observaciones:

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 Práctica No. 5

Determinación de Proteínas Totales en Suero

La sangre es el medio de transporte y distribución del cuerpo. Proporciona nutrientes

esenciales a los tejidos y elimina los productos de desecho. Es una solución acuosa que
contiene moléculas de diferentes tamaños, y una serie de elementos celulares. Algunos de
los componentes de la sangre desempeñan papeles importantes en la defensa del cuerpo
contra insulto externo y en la reparación de tejidos dañados. Para un clínico, el plasma es
también una "ventana" importante en el metabolismo. Debido a que es fácil de recoger, la
mayoría de las pruebas de laboratorio de diagnóstico en bioquímica, hematología e
inmunología se realizan en muestras de plasma.

Las proteínas plasmáticas pueden clasificarse ampliamente en dos grupos: los que incluyen
la albúmina, que son sintetizados por el hígado, y las inmunoglobulinas, que son producidas
por las células plasmáticas de la médula ósea, usualmente como parte de la respuesta
inmune.

Varias proteínas plasmáticas tienen la capacidad de unir ciertas moléculas (sus ligandos)
con una alta afinidad y especificidad. Estas proteínas pueden actuar entonces como un
reservorio para el ligando y ayudar a controlar su distribución y disponibilidad
transportándolo a los tejidos. La unión a una proteína también puede hacer que una
sustancia tóxica sea menos dañina para los tejidos.
La albúmina es la proteína plasmática predominante. Juega un papel crítico en el
mantenimiento de la presión osmótica coloide del plasma; puede unirse (y así solubilizar)
una gama de sustancias que incluyen los ácidos grasos de cadena larga, esteroles y varios
compuestos sintéticos.

Las inmunoglobulinas (anticuerpos) son secretadas por los linfocitos B. Han definido la
especificidad de las sustancias extrañas que estimulan su síntesis. No todas las sustancias
extrañas que entran en el cuerpo pueden provocar esta respuesta, sin embargo; Los que lo
hacen se llaman inmunógenos, mientras que cualquier agente que puede estar unido por
un anticuerpo se denomina antígeno.

El fibrinógeno es una proteína que se encuentra fuertemente relacionada con la

hemostasia, por lo tanto es importante para una buena coagulación sanguínea.

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Competencias que recibirá el alumno al realizar la práctica:

 Conoce el lugar del cuerpo humano donde se sintetizan las proteínas totales:
Albúmina, Fibrinógeno e Inmunoglobulinas.
 Reconoce y fundamenta la función de cada una de las proteínas totales
 Explica cuando estas proteínas se encuentran en aumento o en disminución.
 Comprende el uso de estas pruebas en clínica.

Condiciones de la práctica

Un alumno del equipo responsable de la exposición donara sangre en ayuno antes de la

práctica.

Fundamento del método

La proteína presente en la muestra reacciona con los iones cobre en medio alcalino,
originando un complejo coloreado que se cuantifica en el espectrofotómetro.

Tubo blanco Tubo patrón Tubo problema

Agua destilada 20 microlitros ---------------------------- -----------------------------
Solución patrón ----------------------------- 20 microlitros -----------------------------
--
Suero ----------------------------- ----------------------------- 20 microlitros
-
Reactivo A 10 microlitros 10 microlitros 10 microlitros

Mezclar, reposar 10 minutos, leer en el espectrofotómetro la absorbancia del problema y

la del patrón, calibrando con el tubo blanco a una longitud de onda de 545 nm. El color
es estable durante al menos 2 horas.

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 Concentración de Proteínas =Absorbancia del problema X Concentración del patrón
Totales (60)
Absorbancia del patrón

Valores normales en adultos: 64-83 g/dl

Cálculos

Resultado

Conclusiones

Observaciones

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 Práctica no. 6

Biometría Hemática y Frotis de Sangre Periférica

Generalidades

La sangre de los mamíferos, entre ellos el ser humano, contienen diferentes tipos de células
que resultan esenciales para garantizar la supervivencia en un medio adverso. Entre éstas
se incluyen los eritrocitos, que transportan oxigeno; las plaquetas, que median la
coagulación sanguínea; y los granulocitos neutrófilos, eosinófilos y basófilos, que resultan
indispensables al igual que los monocitos para establecer los mecanismos de defensa contra
bacterias, virus, hongos y parásitos.

La biometría hemática es unos de los estudios solicitados al laboratorio con más frecuencia,
tanto en los pacientes ambulatorios como en los hospitalizados. Aunque se considera un
solo examen de laboratorio, en realidad valora tres estirpes celulares, cada una con
funciones diferentes entre sí, pero que comparten un origen común en la medula ósea. La
biometría hemática consiste en la cuantificación de 20 parámetros.

Información temática

La biometría hemática es útil para el diagnóstico y vigilancia de diversos trastornos, pero se

utiliza más a menudo para el seguimiento de pacientes con quimioterapia o radioterapia y
también para establecer los diagnósticos de síndrome anémico, síndrome febril o síndrome
purpurico.

SERIE ERITROCITARIA: Consiste en la cuantificación de los índices eritrocitarios primarios y

secundarios. Los primarios se establecen a partir de una muestra de sangre total del
paciente en estudio y consta en la cuantificación de hemoglobina, el hematocrito y el
número de eritrocitos/µl. Se utiliza para diagnosticar normalidad, anemia o policitemia.

LEUCOCITOS: En lo que concierne a estas células, se efectúa un recuento total y diferencial

de glóbulos blancos. El recuento total de leucocitos se lleva a cabo mediante aparatos
automatizados con gran precisión y exactitud. Se acepta como valor normal un valor de
4000 a 11000 leucocitos/µl. El recuento diferencial de leucocitos se expresa como valores
porcentuales.

20
PLAQUETAS: Los valores normales de las plaquetas es de 150 000 a 450 000 plaquetas/µl.
Un recuento menor de 150 000 plaquetas/µl indica por definición una trombocitopenia y
uno mayor de 450 000/µl semana trombocitosis.

El frotis de sangre periférica es un examen que proporciona información acerca del número
y forma de las células sanguíneas a través de una inspección visual con la ayuda de del
microscopio. Es útil como complemento de la biometría hemática que ayuda a establecer
el diagnóstico de gran parte de las enfermedades hematológicas. La sangre se obtiene por
punción venosa, es posible obtener información sobre la morfología de todos los tipos de
células sanguíneas.

Competencias que recibirá el alumno al realizar la práctica:

 Conocer el uso diagnóstico de la BH en diferentes patologías

 Identifica y evalúa la morfología de las células sanguíneas a través del microscopio
 Realiza recuentos diferenciales de los glóbulos blancos

Fundamento del método

Para teñir los extendidos de sangre periférica se utiliza la tinción de Wright o Wright-
Giemsa. Estas coloraciones se consideran policromáticas, porque contienen eosina y azul
de metileno. El metanol presente en las coloraciones fija las células al portaobjetos. El azul
de metileno oxidado y la eosina forman un complejo tiazina-eosinato, que tiñen los
componentes neutros. El buffer que se agrega a la tinción debe ser fosfato de sodio
(pH=6.4). Las reacciones de tinción dependen del pH. El azul de metileno libre es básico y
tiñe los componentes celulares ácidos (basófilos), como el RNA. La eosina libre es ácida y
tiñe los componentes básicos (eosinofilos), como la hemoglobina o los gránulos eosinofilos.
Los neutrófilos se denominan así porque tienen gránulos citoplasmáticos con pH neutro y
toman algunas características de tinción de ambas coloraciones.

Técnica

BH
1. Obtención de muestra sanguínea con anticoagulante EDTA
2.-Homogeneizar la muestra

21
3.- Realizar biometría hemática en el equipo (citometro de flujo)
4.-Interpretar resultados

FSP
1. Obtención de muestra sanguínea con anticoagulante EDTA
2.-En un extremo del portaobjeto se coloca una gota de sangre con anticoagulante EDTA
3.-Con el empleo de otro portaobjeto realizar el extendido sanguíneo, tomando el
portaobjeto entre las yemas de los dedos a un ángulo de 45º, deslizándolo sobre toda la
superficie del primer portaobjeto de manera que se pueda obtener una fina película de
sangre.

4.-Cubrir el portaobjeto con colorante de Wright y dejar reposar 10 min.

5.-Agregar buffer de fosfato de sodio y dejar reposar en 10 min
6.-Lavar el extendido con agua de la llave
7.-Dejar secar al aire
8.- Colocar aceite de inmersión y observar al microscopio con el objetivo 100X
9.-Contar 100 leucocitos y clasificar con contadores, los resultados se informan en
porcentajes

Valores normales

22
Resultados

Conclusiones

Observaciones

23
 Práctica No. 7

Determinación de creatinina en suero

Generalidades:

Los riñones filtran la sangre del aparato circulatorio y eliminan los desechos (diversos residuos
metabólicos del organismo como son la urea, ácido úrico, la creatinina, el potasio y el fósforo)
mediante la orina, a través de un complejo sistema que incluye mecanismos de filtración,
reabsorción y excreción.

La creatinina es un producto final del metabolismo muscular, se origina a partir de la creatina por
pérdida de una molécula de agua, su eliminación en el cuerpo humano tiene lugar casi
exclusivamente a través de la filtración glomerular, siendo un importante índice del funcionalismo
renal.

La eliminación de creatinina en un intervalo de 24 horas, es un valor constante, dependiente

principalmente de la masa muscular del individuo, por lo tanto el cálculo del aclaramiento de la
creatinina será un parámetro directo del funcionalismo renal.

Información temática:

Este examen puede utilizarse como prueba de detección para evaluar la función renal y
también usarse como parte del examen de la depuración de creatinina.

El médico puede solicitar que temporalmente el paciente deje de tomar algunos

medicamentos que puedan interferir con los resultados del examen, algunos de ellos son:

- Cefalosporinas (Cefoxina)
- Gentamicina
- Trimetoprima
- Cisplatino

Competencias que recibirá el alumno al realizar la práctica:

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  Conoce las diferentes pruebas para la medición de la función renal y cuales son las
más utilizadas.
 Conoce la procedencia de la creatinina
 Identifica causas de aumento o disminución de creatinina en el cuerpo humano
 Analiza la utilidad diagnostica de esta prueba.

Condiciones de la práctica:

Un integrante del equipo donará sangre 15 minutos antes de la práctica en ayunas o 4 horas
antes sin haber ingerido alimentos.

Fundamento del método:

La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en medio alcalino originando

un complejo coloreado. Se mide la velocidad de formación de dicho complejo en períodos
iniciales cortos, para evitar de esta forma la interferencia de otros compuestos.

Técnica

Precalentar el reactivo de trabajo a 37°C

Tubo problema Tubo patrón

Reactivo de trabajo 1.0 ml 1.0 ml

Suero 0.1 ml -
Solución patrón (estándar) 0.1 ml 0.1 ml

1.- Mezclar e insertar la celda en el espectrofotómetro, poner en ese momento el

cronómetro en marcha.

2.-Leer a 500 nm. Calibrar el equipo con agua destilada, a los 30 segundos es la primera
lectura (A1) y a los 90 segundos es la segunda lectura (A2).

Este procedimiento es tanto para el tubo problema como para el tubo patrón.

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 Cálculo:

(A2-A1) Mta. Problema X 2 = mg/dl de creatinina

(A2-A1) Mta. Patrón

Valores normales:

Hombres 0.9 – 1.3 mg/dl

Mujeres 0.6 – 1.1 mg/dl
Resultados:

Conclusiones:

Observaciones:

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Bibliografía

Manual de prácticas Bioquímica clínica (clave 1807), Universidad Nacional Autónoma de

México Facultad de Química , México, D.F 2009

Aspectos básicos de bioquímica clínica: Jacobo Díaz Portillo, María Teresa Fernández del
barrio, Fernando Paredes Salido. Edit. Diaz de Santos. Páginas.189-191.

Gayton, Arthur C.Tratado de Fisiología Médica. 8va. Edición. Interamericana.

McGraw-Hill.

Baynes, Bioquímica Médica, Editorial Elsevier, 5ta. Edición, 2019, México.

27