Universidad Central de Venezuela

Facultad de Ciencias Veterinarias

Asignatura Manejo de animales de
Laboratorio

ANIMALES DE
LABORATORIO:
RATON
Mus musculus
Yuraima Reyes M.V. MSc
Jefe de Bioterio
La investigación biológica
y biomédica, el
desarrollo, producción y
control de
medicamentos, alimentos
y otros insumos
importantes para la salud
humana y animal,
al igual que la docencia,
requiere del uso de
los animales de
laboratorio.
 ¿ANIMAL DE LABORATORIO?

En los animales de laboratorio se debería incluir

cualquier tipo de ser vivo con independencia de su
categoría filogenético o taxonómica y tanto
vertebrados como invertebrados, utilizados en
experimentación animal o con otros fines científicos.
Es aquel animal que se le conoce las
características de su constitución genética
(antecedentes genéticos) y del ambiente
(microbiológicos, nutricionales y factores ambientales)
en el cual se ha producido y se mantienen durante el
tiempo de experimentación.
Reactivo Biológico: animal de experiencia, en función
del tema en estudio, capaz de dar una respuesta fiables
y reproducible.
 USOS DE LOS ANIMALES DE
LABORATORIO?

Estudios biológicos (incluidos los médicos

fundamentales)
Desarrollo y control de calidad de productos y
aplicaciones para medicina humana y veterinaria,
fabricación de productos farmacéuticos o alimenticios
y pruebas de eficacia y seguridad.
Diagnostico y prevención de enfermedades o
alteraciones de la salud, prevención de anomalías o
sus efectos, diagnósticos y tratamientos de las
mismas.
 Valoración, detección, normalización o modificación
de las condiciones fisiológicas del hombre, animales y
plantas.

Protección del hombre, animales y el ambiente por

toxicología u otras evaluaciones de seguridad.

Educación y formación.

Otros, por ejemplo estudios ecológicos, investigación

medicolegal y forense.
 IMPORTANCIA DEL RATÓN COMO
ANIMAL DE LABORATORIO:

Los ratones empezaron a utilizarse en biomedicina a

partir del siglo XIX por su pequeño tamaño, su fácil
manejo, variabilidad genética, su alta tasa de
reproducción, son animales que por su talla pequeña
necesitan menos espacio y alimento que otras
especies.
 Muchos investigadores consideran al ratón como un
modelo animal casi perfecto porque además de las
características expuestas anteriormente posee otras
que cuando se consideran en conjunto lo hacen un
modelo único para la genética experimental como son:
Debido a que soportan bien la consanguinidad, es
posible obtener líneas de individuos genéticamente
idénticos, virtualmente homocigotas para todos sus loci.
Es posible criar híbridos viables y fértiles acoplando
líneas de laboratorio con varias especies derivadas de
animales salvajes.
Se ha conseguido el desarrollo de técnicas de
mutagénesis dirigidas que producen alteraciones
heredables del genoma casi “a pedido”.
 APORTES DEL RATÓN

Después del hombre, el ratón es sin duda el mamífero mas

conocido, debido a que sobre esta especie se han realizado
la mayor parte de las experiencias in vivo de la biología y la
medicina. En la historia del ratón como animal de
laboratorio se conocen los siguientes acontecimientos:

Formalmente el primer usos del ratón como animal de

experimentación data de 1664, cuando Robert Hooke lo uso
para estudiar las propiedades del aire.

A principios del siglo XX los genetistas Lucien Cuénot y

William E. Castle lo utilizaron para estudiar la herencia del
color del pelaje, y sirvió para confirmar que las leyes de
Mendel podían ser aplicadas a mamíferos.
 Después de la segunda guerra mundial, en los años
de 1950, cuando fue necesario evaluar el riesgo que
generaba la utilización de energía nuclear para el
patrimonio genético humano, el ratón fue, una vez
mas, el animal de elección

Mas recientemente el ratón ha sido el animal de

experimentación por excelencia para dilucidar
diversos procesos biológicos como la patogénesis del
cáncer, nuevos fármacos y toxicidad de productos, en
la preparación de vacunas y en la producción de
anticuerpos poli y mononucleares, estudio de
trangenización
 ORIGEN FILOGENÉTICO DEL RATÓN:
Orden
Rodentia

Suborden Myomorpha

Familia Muridae Cricetidae Platacantomidae

Genero Mus Peromyscus Reithrodontomys Apodemus Onychomys

Mus musculus Peromyscus Apodemus Mycromys

gossypinus (Ratón sivaticus (Ratón minutus (Ratón
(Ratón Cacero) de campo espíguero)
Especie del algodón)
Mus musculus europeo)
Peromyscus
domesticus Apodemus
maniculatus (Ratón
(Ratón casero flavicollis (Ratón
ciervo)
occidental) leonado)
Mus musculus
musculus (Ratón
casero oriental)
 REQUERIMIENTOS AMBIENTALES Y PARÁMETROS
FISIOLÓGICOS DEL RATÓN:

Parámetros fisiológicos:
 Pubertad: 35 días
 Edad mínima reproductiva: 60 días con un peso de 20 a
35 grs. el macho y de 20 a 30 grs. la hembra.
 Apareamiento: monogámico y poligámico
 Ciclo estral: polièstrica.
 Duración del ciclo estral: 4 a 5 días.
 Duración del estro: 12 a 13 horas.
Gestación: 19 a 21 días.

Tamaño de la camada: 1 a 23 crías (promedio de 10 a 12

en categoría genética no consanguínea y de 4 a 6 en las
consanguíneas

Estro post-parto:12 a 24 horas después del parto

Nº de cromosomas diploides: 40
Mecanismo de ovulación: espontáneo.
Numero medio de óvulos: 10
Tipo de placenta: Discoidal- Hemoendotelial coroidea-
Decidual.
Tiempo de implantación: 5 días
Duración de la pseudogestación: 12 días
Peso al nacer: 1,5 gramos

Destete: 18 a 21 días con un peso de 10 a 12 gramos

Peso a la edad adulta: 20 a 40 grs. el macho y 25 a 30 grs.

la hembra

Frecuencia cardíaca: 300-800 lpm

Frecuencia respiratoria: 100 a 200 rpm

Temperatura corporal: 36.5 ºC a 38 ºC

Vida útil reproductiva: 10 a 12 meses (6 a 10 camadas)

Esperanza de vida: 2 años

Mantenimiento de la colonia: parejas (monogámicos) o 1

macho/ 2 a 6 hembras (poligámico)

Glándulas mamarias: 5 pares: 3 torácicas y 2 abdominales.

Dieta: alimento comercial peletizado para ratones y ratas
presentan un consumo aproximado de 5 grs./día 12 g día

Requerimientos nutritivos: 20 a 25 % de proteína, 10 a

12% de grasa, de 45 a 50 % de hidratos de carbono.
Suministrado ad libitum.

Crías comienzan a comer sólidos: 10 días.

Consumo de agua (mL/ 100 grs./día): 15.

Requisitos del macro y micro ambiente
Requerimiento de espacio: alojamiento (medida de las
jaulas)

Altura Superficie
Pareja monogámica 12 cm . 30 cm2.
con cría
Hasta 20 grs. 12 cm. 39 cm2/ratón
Mas de 29 grs. 12 cm. 65 cm2/ratón

BTU (caloría /animal / hora): 0,6

Luz / oscuridad (horas): 12-14/1210
Ventilación (cambios / horas): 15
Humedad relativa: 50 % a 60 %
Temperatura: 20 ºC a 24 ºC
 ASPECTOS ANATÓMICOS
Los roedores tienen un único par de incisivos en cada
mandíbula; éstos son anchos, curvados o
semicirculares, tienen el extremo terminado en un
borde afilado, a modo de cincel y el animal los utiliza
para roer. Este hecho se relaciona con la presencia de
cavidades abiertas de la pulpa del diente, lo cual
produce el crecimiento continuo de los incisivos y por
tanto, la necesidad de un desgaste también continuo
del extremo de éstos.
Los roedores no tienen caninos y hay un espacio (el
diastema) entre los incisivos y los molares. La
articulación mandibular está dispuesta de tal manera
que los incisivos pueden situarse hacia delante, en
disposición de roer, o hacia atrás, para que los molares
puedan masticar. Tanto los labios como los incisivos
forman un mecanismo de utilidad muy diversa; no sólo
se emplean para recoger el alimento, sino también para
construir nidos o excavar madrigueras.
Otra de las características de estos animales es el
hígado pentalobulado y posee vesícula biliar, el bazo en
los machos es de menor tamaño que en las hembras. Se
evidencia dimorfismo sexual en las glándulas salivales y
en los glomérulos renales. Presentan hematopoyesis
extramedular.
El canal inguinal permanece abierto después de la
pubertad, pudiéndose encontrar los testículos en el
escroto o en la cavidad abdominal.
Los roedores también se caracteriza por poseer
extremidades anteriores cortas para manipular sus
alimentos y abazones (mejillas abolsadas) para
almacenarlos.
El estómago dos partes uno glandular y otra parte
muscular
Un ciego bastante grande
Una característica de la reproducción importante es que
la esperma se coagula y forma lo que se llama “tapón
vaginal”.
La ratona es madre excepcional.
Sexado
1. Hígado
2. Estomago
3. Páncreas 1
2
4. Duodeno 10
8
5. Intestino delgado 3
4 9
6. Ciego 5

7. Apéndice 11
12 6
8. Intestino grueso 7
ascendente
9. Mesenterio
10.Riñón
11.Vesículas seminales
12.Recto
CEPAS DE RATONES EMPLEADAS EN
LABORATORIOS

Grupos no consanguíneas: son aquellos animales que dentro

de una colonia tiene una única, particular e individual
constitución genética, es decir, ni aun entre hermanos la
constitución genética es totalmente igual. Los animales no
consanguíneos son resistentes y prolìferos.

Estos animales son usados para ensayos de productos

biológicos, ensayos de potencia de preparados
farmacéuticos, algunas pruebas de toxicidad y docencia,
entre otros.
 Las líneas no consanguíneas mas usadas son:
Ratones Swiss, NMRI y OF-1: cepas no consanguíneas
utilizadas en farmacología y toxicología.

Animales NMRI

Existen otras líneas menos utilizadas como:

SENCAR, Crl:(LE)BR, N:NIH(S), Crl:(WI)BR
Cepas consanguíneas: son aquellos animales que tiene
su constitución genética bastante semejante o idéntica al
resto de los animales que forman una colonia de animales,
es decir, que dentro de una colonia de animales
consanguíneos, todos los individuos que la forman son
genéticamente semejantes. Las colonias de producción es
el resultado de 20 o mas generaciones consecutivas de
apareamiento de hermanos con hermanas.
Entre las cepas mas utilizadas tenemos:

Ratones C57BL/6, C3H: cepas consanguíneas

empleadas como base en líneas modificadas
genéticamente.

Línea C57BL/6 Línea C3H

Ratones BALB/c: cepas consanguíneas usadas en la

producción de anticuerpos.

Línea BALB/c Línea BALB/c

Ratones inmunosuprimidos (Swiss +/un y Balb/c A-nube): se
utilizan en inmunología en estudio de regulación de la
respuesta inmunitaria.

Ratones con mutaciones inducidas, animales trangénicos:

se utilizan como modelo para el estudio de las enfermedades
humanas y de los animales domésticos (C57BL/10)

Línea C57BL/10
Color en el pelaje de las líneas consanguíneas:

Color Linea
Agutí C3H y CBA
Negro C57BL
Marrón C57BR
Marrón diluido DBA
Canela NC
Albino BALB/c
Albino ARK
Las características comunes entre las líneas
consanguíneas, los híbridos F1 y los grupos de roedores
no consanguíneos son las siguientes:

Líneas Animales no
características consanguíneas Hibridos F1 consanguínea
Homocigosis Muy alta Baja Baja (variable)

Isogenesidad Alta Alta Baja (variable)

Estabilidad a Alta Muy alta Baja

largo plazo
Uniformidad Alta Alta Intermedia

Individualidad Alta Alta Intermedia

Vigor hibrido Bajo Alto Variable.

 EFECTOS FISIOLÒGICOS
RELACIONADOS A LA REPRODUCCIÒN

Efecto Lee-Boot: las ratonas alojadas individualmente,

en ausencia de machos, presentan ciclos mas largos (5 a
7 días) e irregulares, y tienen tendencia a
pseudogestaciones espontáneas.
Efecto Whitten: las feromonas androgènicas presentes en la
orina de los ratones machos son capaces de interferir con el
ciclo estral de las hembras. Se ha observado que la
introducción de un macho o el tratamiento de la cama con
orina de macho, en los grupos anteriormente descritos,
produce el inicio de un nuevo ciclo estral y una
sincronización de sus ciclos.

Efecto Bruce: tras un apareamiento fértil si las hembras se

alojan con otro macho durante las 24 horas siguientes al
coito, no se produce la implantación de los óvulos fertilizados
y se reabsorben los embriones. Este efecto es mas frecuente
en hembras de cepas consanguíneas
En el caso de machos transgènicos (o mutantes) donde se
requiere propagar el genotipo, o durante el desarrollo de líneas
congenicas, se suele rotar al macho una vez por semana
(mínimo 4 días) con distintas hembras (generalmente en tríos)
para optimizar la reproducción. Se aconseja dejar el macho en
la jaula y rotar a las hembras. Como regla general no se
aconseja colocar mas de un macho en la misma jaula con fines
reproductivos, ya que normalmente se pelean por razones de
dominio territorial.
Factores ambientales para le reproducción en cautiverio:

Temperatura 18 a 22 ºC

Humedad relativa 40 a 60 %

Luz 10 a 12 horas/ día

 MÈTODOS DE APAREAMIENTO

Sistema de exocría: (línea no consanguínea), a través de cruces en

rotación, copiando los apareamientos al azar que se presentan en
poblaciones naturales, y de esta manera evitar los niveles de
consanguinidad en el grupo. Sistema Poyle yyyyy

Sistema de endocría: (línea consanguínea), a través de

cruces hermano con hermana durante más de 19 generaciones, y
de esta manera aumentamos el grado de homocigosis, y
por ende generar animales genéticamente idénticos
(isogénicos), para obtener mejores efectos en este sistema se
debe utilizar sistemas monogámicos de líneas consanguíneas, es
decir un sistema basado en un núcleo reproductor y una
colonia de multiplicación o expansión.
 Sistemas de reproducción asistida:

Inseminación artificial
Transplante de ovarios
Fertilización in-vitro
Criopreservacion de embriones y Gametos

“Estos métodos son poco utilizados, a pesar de su

efectividad”.
 VÍAS DE ADMINISTRACIÓN DE FÁRMACOS
EN LOS ROEDORES

INOCULACIÓN INTRAMUSCULAR:
1. Llenar la jeringa con la sustancia a inyectar y eliminar las
burbujas de aire
2. Retener el animal a inyectar
3. Introducir la aguja (medidas 20 a 30 G)
4. Aspirar suavemente con la guja introducida en el lugar a
inyectar para prevenir la punción intravenosa o intra-
arterial.
5. Inyectar con presión moderada y rápidamente para evitar
daños a el tejido.
 INOCULACIÓN INTRADÉRMICA:
1. Inmovilizar y anestesiar al animal.
2. Llenar la jeringa con sustancia a inyectar y remover
las burbujas de aire
3. Hacer tensión a la piel del lomo con una mano e
insertar la aguja (formando un ángulo), bajo la capa
superficial de la epidermis con la otra mano.
4. Inyectar , si aparece una ampolla en el sitio de la
inoculación indica que la aguja fue insertada en el
lugar correcto
5. Cuando se desea inocular intradermicamente varios
sitios, debe existir una adecuada separación para
prevenir la unión de las lesiones, especialmente
cuando se usa adyuvante.
 INOCULACIÓN INTRAVENOSA:
La inoculación intravenosa en el ratón es un procedimiento
difícil que requiere practica y paciencia.
La inyección se realiza por la vena lateral de la cola (vena
marginal de la cola), por lo que se debe dilatar por medio de
calor colocando la cola en agua tibia.
Se siguen los pasos 1, 2 y 3 de las técnicas anteriores, la
inyección se aplica lentamente. Una vez que se introduce la
aguja se aspira, si aparecen burbujas de aire indica que la
canulación en la vena ha fallado. La aspiración debe
realizarse suavemente para que no ocurra colapso de la
vena.
 INOCULACIÓN INTRAPERITONIAL:
Esta técnica se aplica a nivel del abdomen con aguja de
medida 22 a 25 G. para el caso del ratón es posible que la
misma persona que retiene al animal aplique la inyección.
 INOCULACIÓN SUBCUTÁNEA:
1. Paso 1 y 2 de inyección intramuscular
2. Sujetar la piel con los dedos índice y pulgar
3. Introducir la aguja en la piel sujeta, justamente bajo la
capa de epidermis, presionar suavemente el embolo
para introducir el liquido.
Guía para el volumen máximo de inyección (en mililitros)

Subcutáneas Intramuscular Intraperitoneal Intravenosa Intradérmica

Ratón 0.05 2-3 2-3 0.2 0.05 con

adyuvante
.
Rata 8 0.3 10 0.5

Cobayo 0.2 0.3 10-15 0.5 0.2

 Inoculación
Formas de
intravenosa
inmovilización

Inoculación en el pene
de la rata
 Métodos de administración de
sustancias “fluidos ò drogas” en ratones

A. Aplicación
subcutánea A B

B. Ampliación
intramuscular
C. Aplicación
intraperitonial C D

D. Aplicación
intravenosa
E. Aplicación
oral TGI: E
alimento ò por
sonda
F. Intrapodal
TÉCNICAS DE COLECCIÓN DE SANGRE EN EL RATÓN:

COLECCIÓN DE SANGRE DEL SENO

ORBITAL O PLEXOS DEL RATÓN:
1. Retención manual del animal.
2. Utilizar tubo de microhematocrito
3. Introducir la parte terminal del tubo de
microhematocrito en el canto medio de la
orbita.
4. Ligeramente y con rotación axial, avanzar el
extremo del tubo suavemente hasta que se
observe el flujo de sangre dentro del tubo.
5. Remover el tubo de la orbita y frotar
suavemente el exceso de sangre del sitio con
una gasa humedecida con solución salina o
PSF (buffer fosfato salino)
6. Si el animal ha sido anestesiado, se debe
observar el reestablecimiento del mismo.
 COLECCIÓN DE SANGRE DE LA VENA DE LA COLA DEL
RATÓN:
1. Retención del animal
2. Dilatación de los vasos de la cola por calor con una
lámpara o por inmersión en agua tibia.
3. Visualización del sitio de la vena lateral de la cola
aproximadamente en la mitad de lo largo de la cola.
4. Extender la cola sobre una mano y con la otra insertar la
aguja 3 o 4 mm dentro de la vena.
5. Colectar la sangre desde el centro de la aguja con un tubo
de hematocrito .
6. Remover la aguja y aplicar una presión suave sobre el sitio
de la extracción con una gasa.
 COLECCIÓN DE SANGRE DESDE EL PLEXOS AXILAR:
1. Se anestesia al ratón y se coloca sobre el dorso fijando
las extremidades anteriores.
2. Se visualiza la vena mayor axilar, realizando una incisión
de la piel y tejido muscular de la región axilar.
3. Se corta la vena con una tijera o un bisturí
4. Se colecta sangre usando una pipeta pasteur y su bulbo.
5. Se sacrifica el animal por dislocación cervical cuando la
colección de sangre ha finalizado.
 COLECCIÓN DE SANGRE POR PUNCIÓN CARDIACA:
1. Se usa jeringa de 1 a 3 ml con aguja 20 a 22 G de grosor.
2. Se anestesia al animal y se coloca en posición dorsal
3. Se inserta la aguja suavemente por debajo del cartílago
xifoides en la base del esternón hacia en lado izquierdo con
un ángulo de 15º a 20º.
4. Introducir la aguja ligeramente aplicando una ligera presión
negativa sobre el embolo de la jeringa.
5. La sangre comienza a fluir cuando la aguja ha entrado en una
de las cámaras del corazón, aspirar suavemente hasta que el
flujo de la sangre cesa.
6. Se debe avanzar u retraer la aguja para la obtención de un
volumen máximo.
7. Sacrificar al animal por dislocación cervical cuando la
colección es completa.
Volumen de sangre que puede ser obtenido:

Volumen Volumen de Promedio del

máximo exanguinación volumen del
de una muestra (ml.) animal (ml.)
(ml.)
Ratón 0.3 1.2 2.5
 Colección de sangre del Colección de sangre del
seno orbital plexo axilar.

Colección de sangre del la Colección de sangre

vena de la cola mediante punción cardíaca
Anestesia del Ratón
Producto Dosis Duración de la cirugía
Pentobarbital 50 mg/kg IP 20-40 min.
Tribromoethanol (avertin) 240 mg/kg IP30 15-45 min
Metomidate/fentanyl 60 mg/kg + 0.06 mg/kg SQ29 20-30 min
Ketamine/xylazine80-100 mg/kg + 10 mg/kg IP29 20-30 minutes

Analgesia del Ratón.

Producto Dosis
Buprenorphine 0.05-0.1 mg/kg SQ BID31
Butorphanol 1-5 mg/kg SQ QID31
Flunixin Meglumine 2.5 mg/kg SQ SID to BID36