Práctica

pH y amortiguadores
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• Sonia Uribe Luna • Sergio Sánchez Enríquez
• Patricia Heredia Chávez • Pedro Garzón de la Mora

Introducción el logaritmo negativo de la concentración de iones hi-

Agua
La molécula de agua tiene una capacidad limitada para
disociarse en un ion hidrógeno (H+), al que también se le
llama protón, y un ion hidroxilo (OH−).
H2O (l) H+ + OH−
Agua Protón Ion hidroxilo
En solución acuosa, un protón se combina de inme-
diato con una molécula de agua para formar el ion hidro-
nio o hidrogenión (H3O+).
H+ + H2O (l) H3O+
Protón Agua Hidronio
Sin embargo, por convención, en las reacciones de
ionización del agua se utiliza la representación del protón
en lugar del ion hidronio.
Las concentraciones de protones y iones hidroxilo, en
agua pura, son de 10−7 M para cada uno, como muestra
la siguiente expresión:
[H+] = [OH−] = 10−7 M
Las concentraciones de ambos iones exponen una re-
lación recíproca: cuando H+ aumenta, OH− disminuye,
y viceversa. El producto de sus concentraciones es una
constante conocida como producto iónico del agua (Kw),
que tiene un valor de 1 × 10−14 M.
Kw = [H+] × [OH−] = 1 × 10−14 M
Con el fin de facilitar los cálculos para determinar
H+, además de su interpretación, en 1909 el químico da-
nés Sørensen definió el potencial hidrógeno (pH) como
drógeno.
pH = –log10 [H+]
Más adelante, en 1923 Johannes Brønsted y Thomas
Lowry propusieron, en forma independiente, los concep-
tos de ácido, como la capacidad de las sustancias para
ceder protones en una solución acuosa, y de base, como
la de aceptar protones. En la práctica, las disoluciones
acuosas se clasifican en ácidas, si presentan un pH menor
a 7.0; básicas, si el pH es mayor a 7.0, y neutras, si el pH
es igual a 7.0.
Por otra parte, no todos los ácidos se disocian con la
misma facilidad. A los que lo hacen por completo en una
solución acuosa, se les considera ácidos fuertes; los que
se disocian en parte, son ácidos débiles. Algunos ácidos o
bases débiles tienen importancia biológica porque evitan
cambios bruscos de pH cuando se les agrega pequeñas
cantidades de ácidos o bases. A esta propiedad se le de-
nomina capacidad amortiguadora. El fin de los amorti-
guadores es mantener el pH estable en un intervalo muy
estrecho (p. ej., en la sangre va de 7.35 a 7.45).
El pK es el pH necesario para que un ácido esté 50%
no disociado y 50% disociado (es decir, la razón o propor-
ción de ácido disociado y no disociado es 1). Cuando la
solución presenta un pH cercano a su pK (± 1.0) posee
su mayor capacidad amortiguadora.
Los ácidos o las bases producidas por el catabolis-
mo de carbohidratos, lípidos y aminoácidos dan lugar
a una gran cantidad de compuestos con potencial para
modificar el pH fisiológico. Sin embargo, existen sistemas
amortiguadores que evitan cambios bruscos del pH. Un
ejemplo es el sistema bicarbonatoácido carbónico, que
mantiene el pH de los líquidos intercelulares en valores
cercanos a 7.4. En éste, la combustión completa de carbo-
hidratos y lípidos genera bióxido de carbono y agua, que
22 Manual de prácticas de laboratorio de bioquímica

pKa = 6.1
CO2 + H2O AC
H2CO3 HCO3− + H+
Bióxido Agua Ácido Bicarbonato Protón
de carbono carbónico
AC = anhidrasa carbónica

Figura 3-1. Reacción de disociación del ácido carbónico. A la izquierda del ácido carbónico se muestra la disociación media-
da por la anhidrasa carbónica y a la derecha la disociación espontánea (sin enzima).

se combinan para producir ácido carbónico en el nivel Soluciones y reactivos

tisular. El ácido carbónico en solución acuosa se disocia
para formar su base conjugada (el bicarbonato), lo que
genera un sistema amortiguador (figura 3-1). Soluciones Muestras*
Si aumenta la concentración de protones en el me- H3PO4 a 0.1 M Saliva
dio, debido a cualquier proceso químico, el equilibrio NaOH a 0.1 M Orina
se desplaza a la izquierda y el exceso de CO2 producido
se elimina a través de los pulmones. Por el contrario, si NaOH a 0.01 N Sudor
disminuye la concentración de protones, el equilibrio se HCl a 0.01 N (3.8%) Leche
desplaza a la derecha. NaHCO3 con pH 7.4 Refresco oscuro
Las proteínas (en forma específica, las enzimas) son Reactivo de Yamada Refresco claro
sensibles a los cambios bruscos de pH. Por tanto, el pH
sanguíneo debe conservarse en un intervalo de 7.35 a Solución amortiguadora Jugo de naranja
de referencia a pH 4.0
7.45, con el fin de mantener la homeostasis.
Además de los sistemas amortiguadores de pH, el Solución amortiguadora Yogurt
sistema nervioso (centro respiratorio), el aparato respi- de referencia a pH 7.0 Agua
ratorio y los riñones contribuyen a mantener en nuestros * El alumno debe proporcionar las muestras.
órganos y tejidos el pH en los rangos apropiados.

Objetivo general Desarrollo experimental

• Analizar las propiedades de soluciones ácidas y bá- Experimento 1
sicas.
Medición del pH con tiras reactivas
Una forma rápida de medir el pH consiste en utilizar tiras
Objetivos específicos reactivas diseñadas para ese fin.
• Medir el pH de diferentes sustancias.
Fundamento
• Evaluar la capacidad amortiguadora de líquidos bio-
lógicos. Las tiras reactivas contienen diferentes compuestos, a los
• Determinar los valores de pK de un ácido poliprótico. que se les denomina indicadores de pH, que cambian de
color de acuerdo con el pH en que se encuentran. A estas
Materiales y equipo mediciones se les considera semicuantitativas, porque no
• Materiales y equipo indican el valor exacto del pH. La coloración que presen-
• Bureta ta la tira se compara con la gama de colores de referencia
• Matraz Erlenmeyer de 250 ml incluida en el recipiente de las tiras.
• Probeta de 100 ml
• Pipetas de 1, 5 y 10 ml Procedimiento
• Vasos de precipitado de 100 y 250 ml
• Tubos de ensayo 13 × 100 1. Sumergir la tira reactiva en el líquido problema y
• Soporte universal mantenerla por 10 segundos.
• Pinzas en mariposa para bureta 2. Retirar la tira y quitar el exceso de líquido.
• Gradilla 3. Comparar los cambios de color obtenidos con la
• Potenciómetro gama de colores existentes en el contenedor de las
• Tiras reactivas para pH tiras.
• Agitador magnético 4. Registrar los valores de pH obtenidos de las solucio-
• Pipetores nes incluidas en el cuadro 3-1.
 Práctica 3. pH y amortiguadores 23

Cuadro 3-1. Resultados de la medición

de pH de distintas soluciones.

Experimento 4
Curva de titulación
del ácido fosfórico (H3PO4)
Fundamento
El ácido fosfórico, H3PO4, es un ácido poliprótico (tiene
tres protones, que pueden disociarse). Mediante titula-
ción, es posible determinar los tres valores de pKa de este
compuesto.
Para titular un ácido débil se agregan cantidades pe-
queñas de una base fuerte que permite desplazar el equi-
librio hacia la formación de su base conjugada. Después
de cada adición de la base, se determina el pH, mediante
24 Manual de prácticas de laboratorio de bioquímica
potenciometría, y su valor se registra en una gráfica para
determinar el comportamiento del ácido débil. De la mis-
ma forma, se puede titular una base débil empleando un
ácido fuerte.
En el proceso de titulación se modifica el pH (en este
caso, de valores ácidos a otros cada vez más básicos).
Esto se puede determinar a partir de cambios de color, si
se agrega a la reacción una mezcla de indicadores de pH,
como el reactivo de Yamada.
Potenciómetro
Se trata de un aparato que mide el pH y que funciona por
medio de electrodos. El electrodo es un dispositivo que
contiene una solución amortiguadora; al ponerse en con-
tacto con la solución problema, mide la concentración de
los hidrogeniones.
El uso del potenciómetro depende del modelo. Sin
embargo, en forma general se deben tener los siguientes
cuidados:
• Antes de medir el pH, debe mezclarse la solución que
se desea analizar empleando el agitador magnético.
Se recomienda evitar el uso de varillas de vidrio como
agitadores, porque se corre el riesgo de romper los
electrodos, que son frágiles.
Figura 3-2. Potenciómetro portátil con electrodo de vidrio.
• Los electrodos deben enjuagarse con agua destilada
antes y después de utilizarse, y no se deben tocar con
la mano.
• Antes de utilizar el potenciómetro, debe calibrarse
con una solución de referencia (pH 4, pH 7 o pH 10).
• Los electrodos deben mantenerse en agua destilada
cuando no estén en uso, evitando que se sequen. Si
esto ocurre, deben sumergirse en agua y calibrarse
varias veces antes de hacer las mediciones.
En la figura 3-2 se muestra una fotografía de un
modelo de potenciómetro portátil, junto con sus adi-
tamentos.
Procedimiento
1. En un vaso de precipitado de 250 ml, depositar 25 ml
de una solución de H3PO4 a 0.1 M.
2. Agregar 4 gotas del reactivo de Yamada (mezcla de
indicadores de pH).
3. Medir el pH con un potenciómetro. El potencióme-
tro debe calibrarse de antemano con amortiguadores
de referencia, a pH 4.0 y pH 7.0.
4. Preparar una bureta con 50 ml de una solución de
NaOH a 0.1 M.
5. Agregar al H3PO4 alícuotas de 3.0 ml de NaOH a 0.1
M. Mezclar con el agitador magnético y medir el pH
después de cada adición, hasta completar 75 ml de la
base NaOH.
6. Graficar en papel milimétrico el volumen de NaOH
gastado contra el pH.
7. Determinar los valores de pKa1, pKa2 y pKa3 para el
H3PO4.
Actividades de aprendizaje
1. Investigar la composición promedio de las siguientes
soluciones y cuál de esos compuestos contribuye más
al pH de la solución.
Práctica 3. pH y amortiguadores 25
26 Manual de prácticas de laboratorio de bioquímica

3. Investigar la utilidad práctica de los siguientes com-

puestos y marcarlos en el siguiente cuadro:

Efecto
Antiácido Amortiguador sistémico

Bicarbonato
de sodio

Hidróxido
de mag-
nesio

Hidróxido
de aluminio

Subsalici-
lato de
bismuto

4. Explicar la diferencia entre un sistema amortiguador

y el de una sustancia con propiedad antiácida.

Discusión

Conclusiones

2. Completar la información del siguiente cuadro:

Indicadores del
reactivo de Yamada

Intervalos de pH Color

Azul de timol

Rojo de metilo

Azul de bromotimol

Fenolftaleína
 Práctica 3. pH y amortiguadores 27

Preparación de reactivos
H3PO4 0.1 M Bibliografía
NaOH 0.1 M
Garzón de la Mora P. Manual de prácticas de bioquímica. Pro-
HCl 0.01 N
yecto IV de pH y Buffers, 2002:85-93.
NaOH 0.01 N
McKee T. Bioquímica, 3a ed. Cap 3. El agua: el medio de la vida.
Solución NaHCO3 a 0.1N: ajustar el pH a 7.0 McGraw-Hill, 2003:65-91.
Roskoski R Jr. Bioquímica. Cap 3. Aminoácidos y proteínas.
Reactivo de Yamada: McGraw-Hill, 1998:65-91.
Azul de timol 5.0 mg http:www.uclm.es. Equilibrio ácido-base. [Revisado el 16 de
Rojo de metilo 12.5 mg septiembre de 2013.]
Azul de bromotimol 50.0 mg
Fenolftaleína 100.0 mg
Disolver en 200 ml de alcohol etílico a 50%