LABORATORIO N°1: pH

1. FUNDAMENTO TEORICO
EXPERIMENTO No. 1

SISTEMAS BUFFER Y OTROS MECANISMOS DE REGULACIÓN DEL pH CORPORAL

OBJETIVOS.

1. Comprobar que el pH de una solución cambia cuando varía la concentración de

iones hidrógeno.

2. Comprobar la acción amortiguadora de los sistemas buffer.

3. Comprobar una de las formas en que el sistema renal participa en mantener el

equilibrio ácido-base del organismo eliminando el exceso de H+.

4. Valorar la importancia de los sistemas buffer en el mantenimiento del equilibrio

ácido base del organismo.

INTRODUCCIÓN

La molécula de agua tiene capacidad limitada para ionizarse en ion hidrógeno (H+),
llamado también protón y en ion hidroxilo (OH-).

H2O H+ + OH-

Agua Protón Ion hidroxilo

Las concentraciones de protones y de iones hidroxilo, en agua pura, son de 10- 7 M para
cada uno de ellos, como muestra la siguiente expresión:

[H+] = [OH-] = 10-7 M

Las concentraciones de ambos iones exponen una relación recíproca; cuando la [H+]
aumenta, la [OH-] disminuye, y viceversa. El producto de sus concentraciones es una
constante conocida como producto iónico del agua (Kw), cuyo valor es de 1 x l0-14 M
Kw = [H+] x [OH-] = 1 x l0-14 M

Con el fin de facilitar los cálculos para determinar la concentración de [H+], así como su
interpretación, en 1909 el químico danés Sörensen definió el potencial de hidrógeno
(pH) como el logaritmo negativo de la concentración de los iones hidrógeno.

pH = -log[H+]

Posteriormente, en 1923, Johannes Brönsted y Thomas Lowry, propusieron en forma

independiente, los conceptos de ácido: sustancias que ceden protones en una solución
acuosa y base como aquella sustancia que puede recibir protones en solución acuosa.
Las disoluciones acuosas se clasifican en: acidas si presentan un pH menor que
7.0; básicas si el pH es mayor que 7.0 y neutras sí el pH es igual a 7.0.

Por otro lado, no todos los ácidos o bases se disocian con la misma facilidad. Los que se
disocian por completo en una solución acuosa se consideran como ácidos o bases
fuertes, en tanto que a los que se disocian en forma parcial se les denomina ácidos o
bases débiles. Algunos ácidos o bases débiles tienen importancia biológica, ya que
evitan cambios bruscos de pH cuando se les agrega pequeñas cantidades de ácidos o
bases. A esta propiedad de ácidos o bases débiles y su sal, que permite mantener la
disolución en un intervalo de pH estrecho se le conoce como capacidad
amortiguadora.

Los líquidos biológicos de interés en clínica (suero, plasma, orina, líquido

cefalorraquídeo, etc.) son soluciones que contienen algunas sustancias en estado casi
completo de ionización. El conocimiento de la concentración de esos iones y de la
fisicoquímica que describen sus interrelaciones, es fundamental para poder entender
muchos problemas fisiológicos y patológicos en el hombre.

El pH de los líquidos corporales depende de la concentración de iones H+ y es

mantenido casi constante por medio de la operación de varios mecanismos fisiológicos.
Cada persona que trabaja en áreas relacionadas con la salud debe conocer las formas
por las cuales es mantenido el balance ácido – básico de los fluidos corporales, ya que
una desviación de éste conlleva a un desbalance que puede conducir a un estado
patológico e incluso producirá la muerte.

El ion hidrógeno o protón (H+) tiene gran importancia bioquímica, ya que altera las
cargas de las biomoléculas y, por ende, su comportamiento fisicoquímico. La
concentración de este ion se representa por medio del pH. Dado que el estricto control
del pH es vital, el organismo lo mantiene constante en los líquidos intracelulares y
extracelulares mediante amortiguadores, como el buffer bicarbonato HCO3 - /H2CO3 y el
buffer fosfato HPO4= /H2PO4 -.

El buffer bicarbonato se regula por ventilación pulmonar y a nivel renal y el buffer fosfato
exclusivamente a nivel renal, conservando el pH del líquido extracelular en 7.4. Cuando
lo anterior no se logra, se producen estados patológicos conocidos
como desequilibrios acido-base, de los que existen cuatro tipos fundamentales: 1)
acidosis respiratoria; 2) alcalosis respiratoria; 3) acidosis metabólica y 4) alcalosis
metabólica. Cada uno de ellos puede acompañarse de una respuesta compensatoria
cuyo objetivo es mantener el pH en los límites normales.

SOLUCIONES BUFFER O SOLUCIONES TAMPÓN:

ACCIÓN DE UN SISTEMA BUFFER:

Son mezclas de un ácido débil y una sal de ese ácido, o de una base débil y su sal.
Este tipo de mezclas reaccionan tanto con ácidos como con bases, por lo que la adición
de ácidos o bases fuertes a dichas mezclas casi no produce variaciones en el valor de
pH. Un ejemplo de solución buffer es la solución acuosa de fosfato monoácido y fosfato
diácido.

Esta solución contiene gran cantidad de moléculas de ácido débil (H2PO4-) y de su base
conjugada (HPO4=) que proviene de la segunda disociación del ácido fosfórico. Si se
añaden pequeñas cantidades de un ácido fuerte a esta solución buffer, su mecanismo
de acción es que los iones H+ provenientes del ácido reaccionan con la base conjugada
del sistema buffer, como se indica en la siguiente reacción:

H+ + HPO4= H2PO4–

Por lo tanto, la mayoría de protones agregados al medio no permanecen como tales,

sino que forman el ácido débil (H2PO4 -) y el pH varía ligeramente. Si se agregan iones
(OH-) al sistema buffer, su mecanismo de acción es reaccionar con moléculas de fosfato
diácido para formar iones fosfato monoácido y agua, como se indica en la siguiente
reacción:

OH- + H2PO4- HPO4= + H2O

El equilibrio estará desplazado a la derecha y en consecuencia la mayoría de iones

hidroxilo no se encuentran libres en la solución y el valor de pH casi no cambia. En
resumen, la adición de pequeñas cantidades de ácido fuerte o de base fuerte a una
solución buffer casi no ocasiona cambios en el valor del pH de la solución. Por el
contrario, las mismas adiciones hechas al agua producen una notable variación en el pH,
de modo que la adición de pequeñas cantidades de un ácido fuerte, por ejemplo, a
soluciones que no son un buffer, produce alteraciones importantes en el valor de pH de
dichas soluciones. Como tendrá la oportunidad de discutir posteriormente, la capacidad
de una solución buffer para reaccionar con ácidos o bases sin variar el pH es, sin
embargo, limitada.

2. PROCEDIMIENTO
PARTE EXPEIMENTAL:

A. CAPACIDAD AMORTIGUADORA DE LAS SOLUCIONES BUFERS. VIDEO 1 y 2

a) Iniciaremos agregando 50 microlitros de HCl 1M a ambos vasos de

precipitados:

Podemos ver que el vaso que contiene agua ha disminuido su pH en mayor medida que
el vaso que contiene buffer fosfato.

Anote el pH inicial de ambas soluciones, así como el pH obtenido después de agregar

los 50 microlitros de HCl 1M.

Repetimos este procedimiento una vez más para comprobar lo observado.

PREGUNTAS:

Escriba la reacción que ocurre en el vaso de precipitado donde se agregó HCl 1M

b) A continuación agregamos 50 microlitros de NaOH 2M:

Podemos ver que el vaso que contiene agua ha aumentado su pH notablemente

mientras que el vaso que contiene buffer fosfato se ha mantenido alrededor del mismo
valor de pH.

Anote el pH inicial de ambas soluciones, así como el pH obtenido después de agregar

los 50 microlitros de NaOH 2M.

Repetimos este procedimiento una vez más para comprobar lo observado.

PREGUNTAS:
¿Cuál es la explicación bioquímica de los resultados obtenidos al agregar a los dos vasos
de precipitados o beaker una misma cantidad de NaOH 2M?

Escriba la reacción que ocurre en el vaso de precipitado donde se agregó NaOH 2M

c) Por último agregaremos una sal neutra: cloruro de sodio (NaCl)

Como esta sal no aporta ni protones ni oxidrilos no debería modificarse el pH en ninguna

de las dos soluciones.

Agregamos 50 microlitros de sal a cada vaso y observamos:

Podemos notar que en ambos casos el valor de pH se mantiene tal como estaba.

Anote el valor de pH inicial y final en cada solución.

Escriba sus conclusiones.

Hemos observado así la capacidad buffer de una mezcla de sales de ácidos

polipróticos.

B. ACCIÓN AMORTIGUADORA EN LOS LÍQUIDOS CORPORALES

Los ácidos o las bases producto del catabolismo de carbohidratos, lípidos y aminoácidos
dan lugar a la producción de una gran cantidad de compuestos que potencialmente
podrían modificar el pH fisiológico. Sin embargo, existen sistemas amortiguadores que
evitan cambios bruscos del pH. Ejemplo de éstos es el sistema bicarbonato/ácido
carbónico, que mantiene el pH del líquido extracelular en valores próximos a 7.4.

La combustión completa de carbohidratos y lípidos genera bióxido de carbono y agua,

los cuales se combinan para producir ácido carbónico a nivel tisular. El ácido carbónico
en solución acuosa se disocia para formar su base conjugada, el bicarbonato, lo que
genera un sistema amortiguador, como se muestra en la siguiente reacción:

Anhidrasa Reacción

carbónica espontánea

CO2 + H2O H2CO3 HCO3 - + H+

bióxido de Carbono agua ácido carbónico ión bicarbonato protón

pka 6.1
Si aumenta la concentración de protones en el medio por cualquier proceso químico, el
equilibrio se desplaza a la izquierda y se elimina el exceso de CO2 producido. Por lo
contrario, si disminuye la concentración de protones del medio, el equilibrio se desplaza
a la derecha, para lo cual se utiliza CO2 del producido constantemente por el
metabolismo.

Las proteínas, y en forma específica las enzimas, son sensibles a los cambios bruscos de
pH. Así, el pH sanguíneo debe conservarse en un intervalo entre 7.35 y 7.45 con el fin de
mantener la homeostasis.

En esta parte reproduciremos una de las formas en que el sistema renal participa en
mantener el equilibrio ácido – base del organismo, analizando el papel que juega la
solución Buffer Fosfato presente en el filtrado glomerular (pH 7.4), el cual acepta los
iones hidrógeno eliminados por el riñón durante el proceso de formación de orina (pH
6).

El fosfato monosustituido (H2PO4-) y el fosfato disustituido (HPO4=) forman una solución

buffer; o sea, un par ácido débil – base conjugada que puede actuar como un
amortiguador de pH.

El riñón durante la formación de la orina elimina H+ los cuales reaccionan así:

H+ + HPO4 = H2PO4 –

En esta forma, al irse formando la orina irá variando la relación: HPO4 = / H2PO4 –

Por este mecanismo el riñón elimina H+ y reabsorbe HCO3 - hacia la sangre; por cada ion
H+ eliminado por las células tubulares hacia la luz del túbulo, un ion Na+ es liberado del
Na2HPO4, el cual acompaña al ion HCO3- que también es devuelto a la sangre como se
explicó antes.

PARTE EXPERIMENTAL. VIDEO 3

1. Utilizando una pipeta serológica de 5.0 mL mida 5.0 mL, de una solución buffer
fosfato pH 7.4 y transfiéralos a un tubo de ensayo (Este buffer fosfato en esta
práctica representa el buffer del filtrado glomerular).

2. Agregue al tubo 5 gotas de indicador azul de bromotimol, agitar.

3. Titule la solución del tubo agregando gota a gota y agitando suavemente ácido
clorhídrico (HCL) 0.1N, utilizando para ello una pipeta serológica de 5.0 mL hasta obtener
un color amarillo, esto ocurre aproximadamente a pH 6.0 (ya no seguir
agregando). Anote el volumen gastado (mL) de HCL 0.1N en la titulación.

(No contar gotas).

Los H+ que se agregan por medio del HCL 0.1N para cambiar el pH del buffer fosfato
desde 7.4 hasta 6, representan a los H+ que el riñón agrega al filtrado
glomerular para eliminarlos en la orina intercambiándolos con Na+; recuperando, en
esta forma base (HCO3-).

PREGUNTAS:

1. ¿Cuál es el papel que desempeña la solución buffer fosfato y la solución HCl 0.1N en
este experimento? _______________________________________________________________________

2. ¿Cómo son eliminados los iones H+ por las células renales a la luz del túbulo?
____________________________________________________________________________________________

3. La especie del buffer fosfato que amortigua los H+ que se eliminan en la orina es
____________________________________________________________________________________________
buffer bicarbonato HCO3- /H2CO3 y el buffer fosfato HPO4= /H2PO4-.

4. Los H+ eliminados en la orina son intercambiados por el ión _____________

Na+ y la base
restaurada es ________________
HCO3-

5. Calcule cuántos mEq de base (NaHCO3) son restaurados a la sangre (pH 7.4) por la
excreción de 1 litro de orina (pH 6.0) haciendo uso de datos obtenidos en la titulación
del buffer fosfato con la solución de HC1 0.1N, para saber los mEq de base (NaHCO3)
restaurados debe encontrar los mEq de HCl (H+) con el volumen gastado en la titulación
utilizando la fórmula siguiente:

Y tomar en cuenta que en el experimento se utilizan 5mL de Buffer fosfato pH 7.4

 2.1. VIDEO 1

https://campus.ues.edu.sv/pluginfile.php/6307148/mod_book/chapter/22693/Buffer.mp4

2.2. VIDEO 2

https://campus.ues.edu.sv/pluginfile.php/6307148/mod_book/chapter/22695/VALORACIO%CC%8
1N%20A%CC%81CIDO-BASE%20EXPERIMENTAL.mp4

2.3. VIDEO 4

https://campus.ues.edu.sv/pluginfile.php/6307148/mod_book/chapter/22696/PRACTICA1%20SOL
UCIONES%20BUFFER.mp4

2.4. VIDEO 3

https://campus.ues.edu.sv/pluginfile.php/6307148/mod_book/chapter/22698/Co%CC%81mo%20
entender%20el%20equilibrio%20a%CC%81cido-base.mp4

1. acepta los iones hidrógeno eliminados por el riñón durante el proceso de formación de orina (pH
6).
El fosfato monosustituido (H2PO4-) y el fosfato disustituido (HPO4=) forman una solución buffer; o
sea, un par ácido débil – base conjugada que puede actuar como un amortiguador de pH.

2- El riñón durante la formación de la orina elimina H+ los cuales reaccionan así:

H+ + HPO4 = H2PO4–
En esta forma, al irse formando la orina irá variando la relación: HPO4= / H2PO4–
Por este mecanismo el riñón elimina H+ y reabsorbe HCO3- hacia la sangre; por cada ion
H+ eliminado por las células tubulares hacia la luz del túbulo, un ion Na+ es liberado del
Na2HPO4, el cual acompaña al ion HCO3- que también es devuelto a la sangre como se
explicó antes.