TRABAJO EXPERIMENTAL

DETERMINACIÓN DE PARACETAMOL Y ÁCIDO ACETILSALICÍLICO EN UNA

FORMULACIÓN FARMACÉUTICA MEDIANTE HPLC

La cromatografía líquida de alta eficacia ha adquirido en los últimos años un gran

desarrollo como técnica de separación y análisis, de aplicación prácticamente universal y muy
reproducible. Entre sus objetivos el análisis farmacéutico ocupa un importante papel. El uso de
cromatografía en fase inversa junto con la elución isocrática, frecuentemente con fases móviles
agua/metanol o agua/acetonitrilo y ácido acético o fosfórico para ajustar convenientemente el pH,
es una de las modalidades que resuelve un mayor número de problemas en lo referente al análisis
de muestras conteniendo muchos tipos diferentes de ingredientes activos. La utilización de un
detector UV de longitud de onda programable o, más recientemente, de un detector de serie de
diodos, permite también aumentar la versatilidad del sistema. En el caso que nos ocupa se efectúa
el análisis de un preparado farmacéutico conteniendo dos analgésicos, paracetamol y ácido
acetilsalicílico.

Sistema cromatográfico

Se utilizará un cromatógrafo Agilent 1100, equipado con una bomba cuaternaria, válvula
de inyección de seis vías de Rheodyne, que incorpora un bucle de 20 μL, y detector fotométrico
uv-visible de serie de diodos. La columna analítica es en ambos casos una columna Eclipse XDB-
C18 (150 x 4.6 mm, 5 μm). El control del instrumento, la adquisición y el tratamiento de datos se
efectúa mediante el paquete de software Chem Station de Agilent. La fase móvil es una mezcla
metanol/disolución acuosa de ácido fosfórico al 0.1% en proporción 40:60 (V/V), el caudal es de
1.5 mL.min-1 y la detección se efectúa a unas longitudes de onda de absorción de 244 nm y 228
nm en el caso del paracetamol y ácido acetilsalicílico, respectivamente.
Procedimiento para la construcción de las rectas de calibrado

Preparar disoluciones madre conteniendo 250 ppm de paracetamol y 250 ppm de ácido
acetilsalicílico, respectivamente, en un volumen final de 100.0 mL, pesando para ello las
cantidades necesarias y disolviéndolas en metanol hasta completar el volumen final.
A partir de ellas se preparan patrones conteniendo las ppm de cada producto que se indican
a continuación y enrasando con la fase móvil en un matraz de 10.00 mL:

Patrón nº ppm paracetamol ppm ácido acetilsalicílico volumen pipeteado

1 10 10

2 20 20

3 30 30

4 40 40

5 50 50
Procedimiento para el análisis del material de referencia

Se pesa una cantidad exactamente conocida del material (aproximadamente 0.1500 g) y se disuelve
en 50 mL de metanol en un matraz aforado. Se realizan las diluciones necesarias y finalmente se preparan
las muestras en un volumen de 10.0 mL enrasando con la fase móvil. Se calcula el contenido de cada
producto activo en el material mediante las correspondientes rectas de calibrado construidas previamente
entre 10 y 50 ppm para paracetamol y ácido acetilsalicílico, usando como señal analítica las áreas de
pico. Expresar el resultado en % de paracetamol y % de ácido acetilsalicílico del material de referencia.

Entrega de resultados para el análisis estadístico ANOVA

Este ejercicio se realizará tanto para los resultados encontrados en la determinación de paracetamol como
para los encontrados para el ácido acetil salicílico.

Los resultados de la práctica se entregarán usando DOCTUS [1-4]. Para el correcto funcionamiento de
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situado en la siguiente dirección:

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Se entregarán los 30 valores experimentales (yij), correspondientes a las respuestas encontradas (10 laboratorios
(grupos) con 3 réplicas cada laboratorio. Asimismo, se deben subir a DOCTUS los siguientes resultados
encontrados mediante ANOVA por cada grupo: las desviaciones entre observaciones dentro de cada laboratorio
(SSo), las desviaciones entre laboratorios (SSlab), F calculada (Fcal), F tabulada (Ftab) y si hay diferencias
estadísticamente significativas entre los diferentes laboratorios o no (res). El parámetro res debe valer 0 si no hay
diferencias, y 1 si hay diferencias.

El formato de la entrega es el siguiente:

Resultados = [y11 y12 y13;
y21 y22 y23;
y31 y32 y33;
y41 y42 y43;
y51 y52 y53;
y61 y62 y63;
y71 y72 y73;
y81 y82 y83;
y91 y92 y93;
y101 y102 y103;
y111 y112 y113];
Grupo = ID;
Parametros_test = [SSo SSlab Fcal Ftab];
Resultado = res;
Los términos y11, y12, y13 hacen referencia a los valores encontrados para la concentración de la muestra
problema (paracetamol o ácido acetil salicílico) por el laboratorio 1 (grupo 1). El término ID hace referencia al
número de grupo de prácticas al que pertenece el alumno. Para rellenar la respuesta hay que sustituir cada variable
por el valor obtenido durante el experimento respetando la sintaxis de la respuesta (es decir, los punto y coma,
corchetes y el nombre de las respuestas). DOCTUS proporciona una plantilla en el que todas las respuestas toman
valor cero. Esta plantilla puede usarse para rellenar la respuesta. Usar punto y no coma para los decimales.

Ejemplo de plantilla rellena:

Resultados = [0.16 0.17 0.16;
0.15 0.17 0.18;
0.14 0.14 0.15;
0.15 0.18 0.17;
0.16 0.17 0.19;
0.14 0.17 0.19;
0.13 0.17 0.15;
0.12 0.15 0.16;
0.13 0.14 0.13;
0.14 0.15 0.17;
0.14 0.15 0.17];
Grupo = 1;
Parametros_test = [0.0028 0.0016 1.3714 3.382];
Resultado = 0;
Bibliografía

[1] D. Muñoz de la Peña, F. Gómez-Estern, S. Dormido, A new Internet tool for automatic evaluation in control
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[2] A. Muñoz de la Peña, D. González-Gómez, M. Sánchez Sequedo, D. Muñoz de la Peña, F. Gómez-Estern,

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[3] M. I. Rodríguez-Cáceres, N. Mora-Diez, M.P. Godoy-Caballero, D. Muñoz de la Peña, D. González Gómez,

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Teaching ANOVA in a laboratory class: Emulating an inter-laboratory exercise using a simple liquid
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