artículo de fondo
Análisis en fresco
de camarón, un pro-
ceso rápido para el diagnósitco
presuntivo de enfermedades
Dr. Gabriel Aguirre-Guzmán1, y Dr. J. Genaro Sánchez Martínez2
Las enfermedades representan un problema tangible
dentro de la camaronicultura que generan graves pér-
didas económicas a los productores, propiciando la
disminución de inversiones en este sector y pérdidas de
empleos para las comunidades. El diagnóstico rápido
y oportuno es la mejor opción para hacer frente a esta
amenaza.
E
ntre las herramientas dispo-
nibles para la detección de
enfermedades, se encuentra
el diagnóstico en fresco, el
cual aunado al trabajo de laboratorio
puede ayudar al control y prevención
de las enfermedades. El análisis en
fresco involucra muestreos continuos
en las granjas, con lo cual los produc-
tores tienen una mejor oportunidad
para detectar a tiempo el inicio de
cualquier enfermedad.
Evaluación general de la salud
de los camarones
Los camarones pueden presen-
tar diferentes tipos de distribución
dependiendo de factores como la
edad, densidad poblacional, hora del
día, alimentación, entre otros. Estos
factores afectan significativamente el
muestreo, por lo cual es necesario
seleccionar el método mas adecuado
para obtener una representación ópti-
ma de la población.
El método de muestreo al azar
involucra la colecta de animales en
forma no selectiva, utilizando lances
con atarraya, mientras que el método
selectivo involucra la toma cuidadosa
de animales con apariencia o com-
portamiento extraño (inapetencia,
natación errática, localización en la
superficie o alrededor de los bordes
del estanque) pero teniendo cuidado
de no colectar organismos muertos.
La muestra colectada para los aná-
lisis debe permitirnos determinar la
presencia de una enfermedad y la inci-
dencia de la misma en la población,
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por tal motivo este tipo de muestreo
debe ser considerado con el mismo
rigor que el usado para determinar
el crecimiento y la sobrevivencia de
la población; de hecho, es posible
utilizar el muestreo usado para deter-
minar el crecimiento y sobrevivencia
para evaluar la presencia e incidencia
de una enfermedad; sin embargo, hay
que tomar en cuenta que los objetivos
de ambos muestreos son diferentes,
por tal motivo se debe estar conscien-
te de esto para hacer los ajustes nece-
sarios. Estos ajustes pueden ir desde
un aumento en el número de lances,
cambio en la hora, área y método de
muestreo, etc.
Cuando se use la atarraya como
método de muestreo, se debe consi-
derar la talla de los organismos, ya
que una malla demasiado grande
puede ocasionar graves errores en el
muestreo. Una buena representación
de la población puede obtenerse con
seis a diez lances de atarraya por hec-
tárea, contando y anotando el núme-
ro de camarones capturados (sanos
y enfermos), además de registrar la
ubicación del lance en el estanque
para determinar el tipo de distribu-
ción de los organismos. La tabla 1 es
una guía para determinar el tamaño
de muestra necesaria para detectar
una enfermedad conforme al error
estadístico deseado.
Análisis de los organismos en
el estanque
El muestreo de un estanque requiere
de ojos entrenados, a fin de detectar
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Tabla 1.- Tamaño de muestra requerido asumiendo un grado de infección mínima del 2%.

los problemas que pueden presen- dos. Es en este tejido en donde se

tarse. Es recomendable hacer una encuentran los principales elemen-
evaluación inicial del estanque para tos inmunes del camarón (hemo-
detectar la presencia de organismos citos, proteínas de coagulación,
moribundos o cerca de la superficie proPO). Algunos parámetros de la
y orillas, ya que esto puede ser una hemolinfa se usan para determinar
señal de algún problema. Es reco- el estado de salud de los camaro-
mendable muestrear la salida de nes cultivados a nivel comercial,
agua del estanque, ya que ahí se siendo el tiempo de coagulación
concentran los animales muertos y el parámetro más empleado por
enfermos. los acuacultores. Para este fin,
Los problemas que pueden llegar se selecciona un organismo con
a detectarse durante el muestreo son la cutícula dura y la hemolinfa
camarón acalambrado, deformación se extrae desde el seno venoso
del rostro y cuerpo, camarón de leche con la ayuda de una jeringa sin
(microsporidios), necrosis-melaniza- anticoagulante. Inmediatamente
ción branquial y cuticular, urópodos después, unas gotas de la hemo-
necrosados o dañados, antenas rotas- linfa se depositan en un porta-
deformes, coloración extraña en los objetos limpio o en una superficie
organismos. Se debe registrar cual- de vidrio. La hemolinfa en buen
quier signo anormal que se observe estado es de color azul claro, casi
en los camarones. transparente y coagula en 10-30
segundos. La ausencia de coagula-
Análisis en fresco ción puede ser signo de una baja
Este tipo de análisis lo pueden actividad del sistema inmune del
desarrollar las personas que están a organismo.
cargo de las granjas y laboratorios de • Branquias: Las branquias son
camarón. Es fácil y rápido, además el órgano en donde se lleva a
proporciona información muy valiosa cabo el intercambio gaseoso del
sobre el estado de salud de los orga- organismo (absorción de oxíge-
nismos bajo cultivo. Dependiendo del no y eliminación del dióxido de
tamaño del organismo que se está carbono). Las branquias en buen
muestreando se puede llegar a ana- estado presentan un color claro; si
lizar la hemolinfa, hepatopáncreas, el estanque de cultivo posee exce-
intestino y las branquias. so de materia orgánica, el color
• Hemolinfa: La hemolinfa es el de las branquias puede variar
tejido responsable de conducir de café-claro a oscuro. La condi-
los nutrientes, oxígeno, desechos, ción de este órgano se determina
metabolitos, hasta el lugar en tomando varias lamelas branquia-
donde son requeridos o desecha- les con la ayuda de unas pinzas y

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Figura 1. Órganos utilizados para la toma de muestras de tejidos para el análisis en fresco.
unas tijeras finas y depositándolas
posteriormente en un portaob-
jetos limpio (Fig. 1). Se aplican
unas gotas de de agua limpia sin
destilar a las branquias, se cubren
con el cubreobjetos haciendo una
ligera presión en él y se observa
la muestra bajo el microscopio.
No debe usarse agua destilada
para recubrir las branquias ya que
este tipo de agua puede afectar la
observación de la muestra. En este
tipo de muestras puede detectar-
se la presencia de protozoarios,
epicomensales, microalgas, bacte-
rias filamentosas, melanización y
necrosis (Fig. 2).
• Hepatopáncreas: Algunas de las
funciones del hepatopáncreas son
la digestión, absorción y almace-
namiento de nutrientes. Las mues-
tras de este órgano se obtienen
removiendo el cefalotórax y los
tejidos adyacentes hasta dejarlo
al descubierto. El hepatopáncreas
esta rodeado de una membrana
que debe ser removida cuidadosa-
mente con la punta de unas tijeras
finas. La muestra se toma cortan-
do unos pocos milímetros cúbicos
de tejido, el cual se coloca en un
portaobjetos que tenga unas gotas
de agua limpia sin destilar (Fig. 1).
Se cubre la muestra con un cubre-
objetos, se hace una ligera presión
en él y se observa la muestra del
tejido bajo el microscopio. Con
este tipo de muestras se puede
detectar el contenido de lípidos
en los microtúbulos del hepato-
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páncreas (nivel 0 a 4), necrosis
hepatopancreatitis o NHP, y mela-
nización.
• Intestino y Ampolla rectal: La fun-
ción del intestino es la de trans-
portar los desechos desde el moli-
no gástrico y el hepatopáncreas al
exterior del camarón. La colecta
de este órgano se realiza hacien-
do un corte con unas tijeras finas
a lo largo de la región dorsal del
abdomen. Este corte debe realizar-
se sobre la cutícula sin penetrar
mucho el músculo, procurando
evitar dañar el intestino. Con unas
pinzas se remueve el tejido corta-
do, se toma el intestino y éste se
deposita en un portaobjetos que
tenga unas gotas de agua limpia
sin destilar (Fig. 1). Con una aguja
de disección se corta el intestino
dejando expuesto el contenido
intestinal. Se coloca un cubreobje-
tos con una ligera presión, para su
observación bajo el microscopio.
Otro procedimiento empleado es
sujetar la punta del intestino colo-
cado en el portaobjetos, haciendo
una ligera presión a lo largo del
mismo con la ayuda de unas pin-
zas, procurando exprimir y sacar
el contenido intestinal. La ampolla
rectal se obtiene cortando longi-
tudinalmente el último segmento
abdominal. Esto deja expuesta la
ampolla rectal, la cual es remo-
vida y su contenido extraído y
observado de la forma descrita
anteriormente. Por medio de este
procedimiento pueden observarse
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Figura 2. Ejemplos de signos de trastornos detectables por medio del análisis en fresco. Lamela branquial con epibiontes
(A) y bacteria filamentosa (B), microtubulo del hepatopáncreas con necrosis hepatopancreatitis o NHP (C), gregarinas en
el interior del intestino (D) y extraídas del mismo (E). La barra es igual a 40µ.
algunos parásitos como gregarinas
y los trofozoitos de este de parási-
to, el grado de infestación puede
describirse por sus niveles (1-4).
Métodos complementarios
La detección de los virus del síndro-
me de Taura (TSV), mancha blanca
(WSSV) y necrosis hipodérmica y
hematopoyética infecciosa (IHHNV) se
hace mediante la toma de una muestra
de las branquias frescas y su tinción
con hematoxilina y eosina (H&E).
Este método se basa en la visualiza-
ción microscópica de los cuerpos de
inclusión intranucleares que los virus
generan en el interior de las células
infectadas. Este protocolo requiere de
personal familiarizado con los cuerpos
de inclusión que generan los virus,
los cuales sólo se observan en los
organismos moribundos que presen-
ten signos severos de enfermedad, y
se trata de un método de detección
presuntivo que no puede remplazar
la detección por medio de biología
molecular, histopatología, o ELISA. El
procedimiento para teñir las branquias
es el siguiente: alcohol al 70% (15 a 60
min.), alcohol al 50% (15 min.), agua
destilada (5 min. / 6 veces), hematoxi-
lina (25 min.), agua de la llave (25
min.) y eosina acuosa al 2% (2 min.).
Finalmente, la muestra se enjuaga
brevemente con agua destilada y se
coloca en un portaobjetos para su
observación. Los cuerpos de inclusión
se detectan porque se tiñen de color
rojizo a púrpura, y por su tamaño
(2-3 veces más grandes que el de
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un núcleo). También pueden usarse
muestras fijadas en Davidson’s previa-
mente prehidratadas. Si la muestra fue
fijada recientemente en Davidson’s, es
recomendable dejar el tejido en alco-
hol al 70% por 1-1.5 h antes de iniciar
la prehidratación, sin embargo si es
una muestra mas antigua debe ser
dejada en alcohol por 24 h.
Existen algunos kits comerciales
de diagnóstico para algunos virus de
camarón (WSSV, TSV, THV, IHHNV),
siendo uno de los mas usados el
Shrimple®. Este producto es rápido,
fácil de usar y con resultados y sensi-
bilidad aceptables. El sistema emplea
anticuerpos monoclonales que reac-
cionan selectivamente con el virus del
camarón.
El análisis en fresco de los cama-
rones es una practica cada día es más
empleada entre los acuicultores. El
adecuado conocimiento de estas téc-
nicas, aunado al desarrollo de nuevos
protocolos y al acumulo de experien-
cias entre los acuicultores, sugiere que
el análisis en fresco puede ser en corto
tiempo una herramienta de gran ayuda
y un elemento clave en la prevención
de enfermedades de camarón.
1 Responsable del Laboratorio de Patogenicidad Bacteriana y
Programa PRONALSA-FMVZ .
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad
Autónoma de Tamaulipas.
Km. 5 Carr. Cd. Victoria - Mante, Cd. Victoria, Tamaulipas, México,
87000. E-mail: gaguirre@uat.edu.mx
2Jefe del Cuerpo Académico de Acuacultura y Responsable del
Laboratorio de Biología Molecular.
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad
Autónoma de Tamaulipas.
Km. 5 Carr. Cd. Victoria - Mante, Cd. Victoria, Tamaulipas, México,
87000. E-mail:jgsanchez@uat.edu.mx
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