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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

SEDE MEDELLÍN

Cultivos Primarios
Luisa Fernanda Múnera Gómez1 Nataly González Carvajal 2
Carrera Ingeniería Biológica, Facultad Ciencias, Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín
lfmunerag@unal.edu.co1 nagonzalezca@unal.edu.co2

Marzo 30, 2017

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Resumen

Los cultivos celulares son un modelo de estudio in vitro constituido por células que pueden crecer y mantenerse en suspensión por un
determinado periodo de tiempo y en condiciones controladas, estos cultivos pueden ser obtenidos a partir de explantes de biopsias,
fragmentos escindidos desde un órgano o tejido o como en el caso del siguiente informe, a partir de fluidos orgánicos como la sangre.
La obtención de cultivos primarios puede constituir un problema si no se realiza de manera óptima, el cultivo de linfocitos es un
método rápido que provee el número adecuado de células en división, el método es relativamente simple, consiste en obtener una
muestra de sangre con una jeringa, para la proliferación de los linfocitos es necesario cultivarlos en un medio de cultivo especial a
base de suero y estimulados mediante la adición de fitohemaglutinina. Para detener la división celular y obtener la mayor cantidad de
metafases, se utiliza colcemid, como agente que evita la polimerización del huso mitótico.
Con estos procedimientos se espera obtener un cariotipo que sea de fácil visualización, esto depende de emplear una buena técnica en
la obtención del extendido cromosómico.
Finalmente, obtener un índice mitótico (IM) apropiado y un correcto conteo cromosómico serán la muestra de que desde el cultivo de
linfocitos hasta el extendido cromosómico fueron llevados a cabo de manera correcta para tener resultados apropiados.

Palabras Clave: Cultivos, Cromosomas, Cariotipo, Metafase, In Vitro,

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1. Introducción Los cromosomas no solamente tienen un número constante en

Cultivos primarios: Un cultivo se denomina cultivo primario
cuando las células o tejidos procedentes de un ser vivo crecen
sin haber pasado previamente por una fase de crecimiento in
vitro (fuera del cuerpo), conservan la morfología de las
células del órgano del que fueron aisladas, sus cromosomas
tienen un número diploide (2n), su crecimiento in vitro es
limitado y hay inhibición por contacto.
El estar más cercanas a las células que las originaron, se ve
reflejado en una mejor actividad y funcionalidad similar a su
ambiente natural, por lo que en aislamientos primarios de
cepas virales éstas tienen mayor sensibilidad que una Línea
Celular ya establecida. Igualmente para la producción de
vacunas los cultivos primarios son recomendables por tener
una baja probabilidad de que se transformen en malignos. [1]
cada especie, sino a demás presentan estructura y morfología
definida. [2]
Los cultivos primarios son el tipo de cultivo más utilizado, se
puede obtener a partir de explantes primarios o de
suspensiones de células disgregadas, en estos cultivos se
pierden las interacciones célula-célula y las interacciones de
la célula con la matriz extracelular. Sin embargo, las células
son capaces de proliferar y la población celular crece
notablemente. Cuando las células ocupan toda la superficie
disponible se dice que han alcanzado la confluencia. En esta
etapa, las células establecen contactos entre ellas que inhiben
su proliferación y el crecimiento se detiene. Por eso, al cabo
de un tiempo hay que trasplantar las células a un nuevo
soporte. Esta operación se denomina subcultivo o pase.

Mediante el cultivo de linfocitos en sangre periférica y
utilizando técnicas especiales, es posible observar y analizar
los cromosomas con el microscopio.
Se estimula el crecimiento de los linfocitos con el uso de
diferentes lectinas, una de ellas es la fitohemaglutinina.
El ordenamiento de los cromosomas según su tamaño y
localización del centrómero, se llama cariotipo.
Existen dos tipos de cultivo celular primario:
-Cultivos en monocapa: las células crecen adheridas sobre un
soporte sólido (plástico o vidrio). El anclaje al sustrato es un
prerrequisito para la proliferación celular. Es el método
utilizado para la mayoría de las células excepto para las
hematopoyéticas.
-Cultivos en suspensión: las células se encuentran dispersas
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en el medio de cultivo. Su crecimiento no depende del
anclaje. Este tipo de cultivo se restringe a las células
hematopoyéticas, células madre, líneas celulares
transformadas y células tumorales. Alcanzan la confluencia
cuando el número de células es grande y los nutrientes son
insuficientes. [3]
Después de obtener la muestra, un cultivo primario puede
lograrse permitiendo que las células migren a partir de un
fragmento de tejido adherido a un sustrato adecuado o
mediante la disgregación del tejido mecánica o
enzimáticamente, para producir una suspensión celular,
algunas de las cuales se adherirán al sustrato.
Las enzimas que se utilizan con mayor frecuencia para la
disgregación del tejido son preparaciones crudas de tripsina,
colagenasa, elastasa, pronasa, dispasa, DNasa y hialuronidasa,
solas o en combinaciones. Las preparaciones crudas de las
enzimas (con otras proteasas contaminantes) son mejores
disgregando el tejido que las enzimas purificadas. [4]
Un cultivo primario de linfocitos de sangre periférica tiene
como ventaja la obtención del cariotipo del sistema vivo del
cual se obtuvo la muestra inicial.
La citogenética es el campo de la genética que comprende el
estudio de la estructura, función y comportamiento de los
cromosomas. En este trabajo se estandarizó una técnica para
el cultivo de linfocitos humanos y la obtención de cariotipos,
la cual consistió en: primero, la toma de muestras sanguíneas;
después, el cultivo de sangre periférica; posteriormente, la
cosecha de linfocitos y por último, la elaboración de
laminillas para visualizar los cromosomas. [5]
Objetivo: Obtener un cultivo de linfocitos humanos de sangre
periférica donada por alumnos del curso fundamentos en
cultivos celulares del cual se pueda estandarizar una técnica
para la obtención de cromosomas a partir de dicho cultivo y
determinar el número cromosómicos y el índice mitótico de
los cariotipos obtenidos.
2. Metodología
2.1. Siembra del cultivo: Materiales y métodos.
Medio de cultivo RPMI Muestra de sangre
1640 periférica heparinizada
estéril
SBF (suero fetal Antibiótico Penicilina-
bovino) estreptomicina (en caso
de que sea requerido)
PHA 10 % Frascos o platos de
(Fitohemaglutinina) cultivo
Jeringas de volumen Cámara de Flujo
variable Laminar
Micropipetas y puntas Todos los reactivos
para micropipetas de deben estar temperados
volumen varibale a 37ºC al momento de
iniciar el procedimiento
Tabla 1. Materiales necesarios para efectuar la siembra del cultivo.
Tomado de: Laboratorio de Genética y Biotecnología Animal
Universidad Nacional de Colombia - Sede Medellín
Se tomó una muestra de sangre de la donante del grupo
3, mujer de 27 años de edad, no presenta enfermedades
graves que comprometan su sistema inmune, en el
momento de la toma de la muestra, esta presentaba un
cuadro de infección viral; se obtuvieron 3 ml de sangre
venosa.
Antes de proceder con el cultivo se debe asegurar la
esterilidad de los materiales a utilizar. Para esto se
debió poner a irradiar con luz ultravioleta entre 15 a 20
minutos aproximadamente todos los utensilios que iban
a intervenir en el procedimiento.
Para asegurar la asepsia del operador, esté debe lavar
sus manos hasta la altura del codo con una solución
jabonosa de preferencia yodada, y antes de ingresar las
manos a la cámara de flujo laminar, realizar un lavado
con alcohol al 70%. Otros aspectos a tener en cuenta
son: llevar el cabello recogido y usar tapabocas para
evitar el ingreso a la cámara de cualquier agente
biológico externo.
Posteriormente en un frasco de vidrio se hacen las
mezclas de medio de cultivo y suplementos pertinentes
mencionados en la Tabla 1.
Para el caso de nuestro equipo de trabajo (grupo 3), se
realizaron dos cultivos, uno en condiciones normales y
otro sin agregar ningún tipo de antibiótico.
Finalmente se llevan los frascos a una incubadora con
una temperatura controlada de 35°C y son cultivados
por 52 Horas.
2.2. Obtención de extendidos cromosómicos: Materiales y
métodos.
Antimitótico: Colcemid Pipetas Pasteur Plásticas
(10ug/ml)
KCL 0.075 M, temperado Tubos cónicos Plásticos
a 37°C de 15ml
Metanol grado analítico Recipiente ámbar para el
fijador
Ácido acético glacial Portaobjetos nuevos
Etanol 70% Pinzas, Mechero, Gasa,
Guantes
Centrifuga Cámara de extracción
Tabla 2. Materiales necesarios para la obtención de extendidos
cromosómicos, cosecha, fijación y goteo. Tomado de: Laboratorio de
Genética y Biotecnología Animal Universidad Nacional de Colombia
- Sede Medellín
Cosecha: una hora antes se agrega antimitótico Colcemid 80
µl, se homogeniza el medio por agitación suave y se incuba a
37°C.
Pasado este tiempo se debe homogenizar y pasar el líquido a
un falcon de 15 ml y centrifugar a 1000 rpm durante 7
minutos, descartar el sobrenadante con pipeta, teniendo en
cuenta no retirar la nube de linfocitos que se encuentran en la
parte superior del pellet como se muestra en la figura.
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Figura 1. Obtención de extendidos cromosómicos a partir de sangre
periférica de mamíferos. Imagen tomada de: Laboratorio de Genética
y Biotecnología Animal Universidad Nacional de Colombia - Sede
Medellín
Los linfocitos que quedan en el falcon deben ser aforados con
KCl hasta 9 ml e incubar a 37.5 °C por 7 minutos, el KCl
hace que las células se expandan y los cromosomas también,
de esta manera se pueden ver más claramente, más adelante
se puede observar que esta técnica acompañada de un
adecuado goteo son fundamentales para la correcta
visualización y posterior conteo de los cromosomas.
Pasados los 7 minutos se debe centrifugar y descartar el
sobrenadante y resuspender el pellet.
Figura 2. Estructura de un cromosoma metafásico. Imagen tomada
de: http://geneticabioterio.wordpress.com/cromosomas/
Los cromosomas metafásicos presentan cuatro formas
básicas, se clasifican de acuerdo a la longitud de sus brazos p
y q así como por la posición del centrómero.
Figura 3. Tipos de cromosomas por la posición de los brazo p y q, y
por la del centrómero. Tomado de
http://barbaracarcamo01.blogspot.com.co/p/cromosomas.html
Fijación: Las muestras son fijadas con solución Carnoy
(metanol-ácido acético, a una proporción de 3:1), la muestra
debe ser aforada con este fijador hasta 7 ml y se debe hacer
acompañado de una agitación vigorosa para evitar que los
cromosomas se formen en grumos que dificulten la correcta
visualización.
Mantener la muestra en fijador mínimo durante 10 minutos a
temperatura ambiente, centrifugar a 1000 rpm durante 7
minutos, descartar el sobrenadante y resuspender el pellet en
fijador completando un volumen final de 7ml.
Repetir los pasos anteriores hasta obtener un sobrenadante
translúcido.
Goteo: Descartar el sobrenadante obtenido en la última
centrifugación y resuspender el pellet en 0.5 ml de fijador
fresco, limpiar los portaobjetos con gasa impregnada de
Etanol 70%, introducir los portaobjetos limpios en agua
destilada con hielo y sacarlos de forma horizontal para
remover los excesos de agua.
Se dejaron caer dos o tres gotas del material celular sobre la
superficie de cuatro portaobjetos e inmediatamente se pasó
por la flama de un mechero.
Los portaobjetos fueron marcados con un lapicero punta de
diamante en un extremo, utilizando el código asignado al
cultivo (16-3N1 y 2, 16-3SA1 y 2).
2.3. Coloración:
Giemsa 5%
Pipeta Pasteur Plástica
Pinzas
Mechero
Tabla 3. Materiales necesarios para la coloración de los cromosomas.
Tomado de: Laboratorio de Genética y Biotecnología Animal
Universidad Nacional de Colombia - Sede Medellín
Se agregó una solución de Giemsa de 5 a 8 minutos
directamente sobre la placa y luego se lavó con abundante
agua destilada. Finalmente, se flameó con un mechero hasta
que el portaobjetos quedó completamente seco.
Las placas fueron observadas en 40X para visualizar las
células y en 100X para hacer el conteo cromosómico.
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mismo lugar y tratar de no perder muestra es la clave de que

Las imágenes se podrán visualizar en los resultados. los cromosomas queden bien dispuestos en el portaobjetos;
por otro lado la tinción no debe exceder los 10 minutos para
3. Resultados evitar tonalidades muy fuertes y esto pudiera interferir con la
correcta observación de estos.
3.1. Cultivo primario: en la obtención del cultivo primario Cabe resaltar que en algunas preparaciones no se contabiliza
de linfocitos de sangre periférica se hicieron dos muestras, el número correcto de cromosomas debido a que algunos de
una con antibiótico y otra sin estos; ambas fueron mantenidas ellos se superponen y esto dificulta el conteo.
con las mismas condiciones, tanto la muestra con antibiótico A continuación se muestran algunas de las mitosis y células
como la que no los tenía se mantuvieron libres de virus y/o obtenidas
bacterias, una buena técnica de asepsia en este caso es
fundamental; la adecuada manipulación de reactivos, equipos
e implementos se hace esencial para mantener la integridad de
las muestras.
La variabilidad de los resultados puede ser atribuida a
factores propios del laboratorio, tanto externos como
humedad, temperatura y altitud, así como factores internos
como origen y calidad de reactivos, aparatos y equipos.

Figura 6. Cromosomas a 40x (16-3N2). Imagen tomada por Múnera

Luisa. Universidad nacional de Colombia sede Medellín.

Figura 4. Cultivo primario de sangre periférica. Imagen tomada por

Ortiz Juan J. Universidad nacional de Colombia sede Medellín.

Figura 7. Cromosomas a 40x (16-3SA1). Imagen tomada por

González Nataly. Universidad nacional de Colombia sede Medellín.

Figura 5. Cultivo primario de sangre periférica. Imagen tomada por

Ortiz Juan J. Universidad nacional de Colombia sede Medellín.

3.2. Extendido cromosómico: Lo más importante del trabajo

fue tratar de obtener preparaciones de buena calidad, donde
los cromosomas se encuentren extendidos y sea fácil su
observación.
Una adecuada técnica de goteo y tinción juegan un papel
fundamental en este paso de la práctica, controlar la distancia
a la que se deja caer la gota, no gotear más de dos veces en el
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Figura 8. Cromosomas a 100x (16-3N2). Imagen tomada por Múnera

Luisa. Universidad nacional de Colombia sede Medellín.

Figura 10. Cariotipo normal de una mujer, obtenido por cultivo de

linfocitos de sangre periférica y bandas replicativas. Tomado de:
Chromosomal abnormalities in both parents of a child with multiple
congenital defects.

Gracias a los procesos realizados anteriormente, se obtienen

resultados de un cariotipo femenino aparentemente normal,
Figura 9. Cromosomas a 100x (16-3SA1). Imagen tomada por aunque en algunas células no se realiza un conteo correcto de
Múnera Luisa. Universidad nacional de Colombia sede Medellín. los cromosomas esto se evaluara a fondo en las discusiones.

3.3. Conteo: Para realizar el conteo se observaron las 4. Discusión

muestras en 40X para ver las células, se contaron 550 células
y las mitosis se observaron en 100X y se contaron 25; en la 4.1. Anticoagulantes en cultivos celulares: Para la
siguiente tabla solo se reporta el conteo de 10 mitosis para las preparación del cultivo existen muchos agentes y/o reactivos
muestras con antibiótico (N) y sin antibiótico (SA). que podrían ser usados pero es aquí donde juega un papel
fundamental los beneficios que uno u otro puedan presentar;
Mitosis Conteo (N) Conteo (SA) los anticoagulantes que se podrían usar a parte de la
1 46 46 fitohemaglutinina (PHA) son:
2 46 46
- Heparina no fraccionada (HNF) y Heparina de bajo peso
3 45 45 molecular (HBPM): Comúnmente se utilizan estos dos tipos
4 46 46 de heparinas como anticoagulantes.
La HNF ha sido utilizada para la prevención y el tratamiento
5 46 45 de la trombosis durante varias décadas.
6 45 44 Las HNF tienen un efecto anticoagulante y propiedades
7 44 46 farmacológicas variables. También presentan una
biodisponibilidad limitada y una respuesta anticoagulante
8 45 46 muy variable.
9 46 46 Las HBPM se obtienen de la HNF por despolimerización. [6]
10 46 45
-Warfarin: Es un anticoagulante oral (por esta razón no es
Tabla 4. Conteo de cromosomas en 10 mitosis, observado en viable para nuestros propósitos), inhibe la producción de
laboratorio de Genética y Biotecnología Animal Universidad factores de coagulación dependientes de la vitamina K, es
Nacional de Colombia - Sede Medellín generalmente suministrado post operatorio, en particular
tomado por pacientes con operaciones de coronarias y con
El conteo de células totales y de mitosis se hace con el fin de
problemas venosos graves.
obtener un índice mitótico IM, y seguido de esto se puede
hacer un cariotipo para la identificación citogenética del
-Fitohemaglutinina (PHA): La PHA integra la fracción
individuo, gracias a los cariotipos se pueden conocer posibles
proteica de las semillas del frijol colorado común Phaseolus
enfermedades o anomalías genéticas y también se puede saber
vulgaris, aglutina tanto hematíes como leucocitos, se une a
por cuál de los progenitores estas enfermedades fueron
determinados oligosacáridos y estimula la mitosis en
adquiridas.
diferentes estirpes celulares, dentro de ellas los linfocitos.
Dadas las propiedades de aglutinar células sanguíneas, la
Para hacer un correcto cariotipo desde las imágenes obtenidas
PHA se utilizó inicialmente como medio para separarlas de
es necesario hacer un tipo de tinción con bandas replicativas,
la sangre total.
estas tiñen tanto el centrómero como la carga genética del
Al demostrarse posteriormente el efecto mitogénico, el
cromosoma y se puede caracterizar por dicho contenido y
espectro de aplicaciones se incrementó y actualmente se usa
posición centromerica, con tinción de Giemsa es muy difícil
como factor estimulante de la proliferación en cultivos,
hacer este tipo de procedimientos para alguien inexperto.
especialmente en los linfocitos.
A continuación se muestra un cariotipo normal de una mujer.
La inmunoterapia sería uno de los campos más beneficiados
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con su uso debido a la capacidad de interacción rápida e
irreversible con los linfocitos, uno de los principales efectores
de la respuesta inmune. Su potencial terapéutico también
podría incluir áreas como la oncología, las infecciones
críticas, los trasplantes, las quemaduras extensivas, las
aplasias medulares e incluso, ser utilizada como agente
adyuvante en la producción de vacunas, pues ha resultado
más efectiva de esta manera que como agente
de inducción.[7]
Luego de conocer brevemente un grupo de anticoagulantes
que se podrían utilizar en el procedimiento anteriormente
descrito (menos los anticoagulantes orales), se concluye que
la mejor opción es la fitohemaglutinina, por sus
características mitogénicas es ideal para llevar a cabo el
proceso de la visualización de los cromosomas.
Por otro lado, la PHA con sus propiedades
inmunoterapeuticas puede ayudar a potenciar la esterilidad de
los medios de cultivo, este compuesto ayuda a mantener el
medio libre de bacterias y virus que son muy dañinos en
cualquier tipo de investigación; esta premisa también nos
ayuda a entender el por qué los medios libres de antibióticos
no se contaminaron a pesar de ser un medio ideal para el
desarrollo de microorganismos nocivos para este.
Otra explicación al porque no hubo contaminación del medio
se puede deber a una correcta técnica de asepsia, pero se debe
recordar que la donante de la sangre del grupo 3 presentaba
un cuadro de infección viral, entonces, ¿por qué esta no se
contamino? Se puede decir que la infección presentada por
esta mujer no tenía compromiso bacteriano y se encontraba en
el periodo final de latencia donde ya el virus fue atacado por
el sistema inmunológico y solo quedan los síntomas del daño
celular; bajo este análisis podemos decir que no había
presencia de virus ni bacterias en la muestra donada por esta
mujer y por esta razón no se contamino.
4.2. CO2 en los cultivos: El CO2 en los cultivos celulares es
importante para ayudar a mantener un pH óptimo en estos y
permitir así un crecimiento correcto; sin embargo existen
varios tipos de cultivos que no dependen del CO2 y otros más
que pueden desarrollarse con o sin presencia de este.
El objetivo de cultivar células, tejidos u órganos es
mantenerlos en desarrollo in vitro con las condiciones más
parecidas posibles a las in vivo, dependiendo de lo que se
desea cultivar varia o no sus requerimientos de CO2.
Para el cultivo de linfocitos de sangre periférica de esta
práctica, no fueron sometidos a atmosfera controlada de CO2,
los linfocitos pueden desarrollarse por cierto periodo de
tiempo sin esta condición gracias a que la sangre no depende
de CO2 para regular el pH, la sangre es un tampón fisiológico
muy eficiente por contener hemoglobina, debido tanto al
cambio de pK que experimenta al pasar de la forma oxidada a
la reducida, como a la gran abundancia de esta proteína en la
sangre (15 % del volumen total sanguíneo).
La oxihemoglobina (pK= 7,16) es un ácido más fuerte que la
desoxihemoglobina (pK= 7,71). Los valores de pK son tales
que determinan que en la disociación siguiente, el valor x sea,
aproximadamente, 0,7.
HbH+ x + O2 → HbO2 + xH+
Esta propiedad de la hemoglobina, de cambiar su valor de pK,
demuestra el efecto tampón, permite el transporte de una
determinada cantidad de CO2 liberada en los tejidos. La
hemoglobina oxigenada que llega a los tejidos se disocia
liberando O2, un proceso que está favorecido por el estado de
los tejidos (baja pO2, menor pH y alta pCO2). [8]
Según la literatura los linfocitos se deben incubar por 72
horas para proceder al goteo, en esta práctica se cultivaron
por 52 horas, tiempo establecido prácticamente porque es el
mínimo necesitado por las células para hacer dos ciclos de
división y están en condiciones ideales para el estudio,
transcurrido este tiempo también hay garantía de que el
cultivo no alcanzo a acidificar el medio y esta es otra causa
por la cual no se requiere atmosfera controlada de CO2, para
un protocolo de incubación de mayor tiempo si es aconsejable
usar la incubadora con una temperatura de 37°C y al 5% de
CO2.
Otra razón por la cual no se utilizó una atmosfera de CO2, es
el buffer fosfato utilizado en el medio de cultivo. Los buffer
fosfato y Heppes son capaces de mantener el sistema tampón
sin depender de presencia de CO2.
4.3. Índice mitótico: Una primera aproximación de la medida
del ciclo celular puede hacerse, contando un determinado
número de células (por ejemplo 1000 células y 30 metafases)
y viendo cuántas de ellas están en mitosis. Esto es lo que se
denomina índice mitótico: número de células en mitosis
dividido por número total de células contadas.
Para esta práctica se pidió contar 500 células y 10 mitosis;
con estos datos se obtiene un índice mitótico de 10/500 =
0,02; el grupo 3 conto 25 mitosis y 550 células para un índice
mitótico de 0,045 o 4.5% mitosis por célula.
El índice mitótico en individuos sanos en cultivos de 72
horas, en las condiciones controladas de un laboratorio, fue en
adultos de entre 18-40 años de edad entre 0,03 y 0,07 (según
literatura). [9]
4.4. Reacción alérgica: En una reacción alérgica participan
distintas células (linfocitos, mastocitos, basófilos,
eosinófilos etc.) y múltiples moléculas, algunas de ellas
específicas del alérgeno que desencadena la reacción
(anticuerpos o inmunoglobulinas) y otras sustancias que son
mediadoras de la respuesta alérgica, comunes para los
distintos alérgenos (histamina, triptasa, etc.). [10]
La reacción alérgica se produce cuando el sistema
inmunológico reacciona de manera exagerada ante algo que
generalmente está presente en el ambiente y es inocuo para la
mayoría de la gente.
Muchas personas son alérgicas a la penicilina, dicho
antibiótico es usado en cultivos celulares y si la persona
donante no sabe que es alérgico a dicho compuesto la
reacción se verá reflejada en el cultivo, la fitohemaglutinia es
una lectina, dicha lectina reacciona a algunos receptores de la
sangre cuando la persona es alérgica a uno de estos
componentes, esta lectina puede hacer que proliferen
demasiado los leucocitos o por el contrario no hay
proliferación, simplemente están los linfocitos con la
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capacidad mínima de reacción. La reacción alérgica como tal
no sucede en el cultivo, es innata de la persona donante y se
representa en el cultivo.
4.5. Colcemid o Colchicina: Colcemid es un inhibidor
competitivo para la Colchicina.
La Colchicina se une lentamente y requiere 2 h para alcanzar
el equilibrio a 37 ° C, mientras que, Colcemid se une más
rápidamente y el equilibrio se alcanza en el intervalo de 4,5
min.
En contraste con la interacción Colchicina - tubulina, es casi
irreversible, la unión de Colcemid a la tubulina es libremente
reversible.
Además, aunque la Colchicina no se une tubulina en O "C,
existe una unión sustancial de Colcemid a tubulina a esta
temperatura.
Estas diferencias dificultan la posibilidad de un mecanismo
único para la aparente competencia entre estos dos ligandos
para el mismo sitio de unión. [11]
Por otro lado Colchicina es un antimitótico sintético, el
bloqueo de este ocurre desde los inicios de la prometafase
hasta la anafase tardía, mientras que el Colcemid sólo detiene
la proliferación celular en las etapas previas a la metafase.
[12]
Utilizar Colcemid o Colchicina depende de lo que se desee
obtener, si el objetivo es detener el ciclo celular con la
finalidad de hacer conteos cromosómicos para obtener índice
mitótico lo mejor es usas Colcemid, por otra parte si se desea
estudiar los cambios ocurridos en diversas etapas del ciclo
celular es mejor usar Colchicina.
De no usar Colcemid no habría variación en el resultado
siempre y cuando se garanticen aproximadamente 2 horas o
un poco más de exposición a Colchicina, de no hacer esto sí
podrían haber cambios considerables en los registros de la
práctica.
4.6. Goteo y Fijación: El goteo y la fijación en este tipo de
estudios es crucial ya que una buena técnica de estos
permitirán observar resultados certeros, al realizar un mal
goteo existe la posibilidad de perder muestra del portaobjetos
y en consecuencia podrán darse malos resultados como por
ejemplo un coteo aberrante de cromosomas, esto
acompañando de una mala fijación hará que los cromosomas
sean poco claros para realizar un buen conteo.
En el caso de nuestro grupo en algunas mitosis no se contaba
el número correcto de cromosomas, esto teniendo en cuenta
que la donante es una mujer sana sin ninguna afección
conocida y/o problemas de índole genético llegamos a la
conclusión de que los cromosomas pueden estar superpuestos
unos sobre otros, hubo perdida de material a la hora del goteo
o una mala fijación puede dejar varios cromosomas muy
cercanos sin una identificación consistente y por esta razón
dos cromosomas pequeños pueden ser confundidos con un
cromosoma grande.
Conclusiones
 Se logran cultivos libres de contaminación siguiendo los
correctos pasos de asepsia. Esto da evidencia de lo fácil
pero importante que debe ser tener en cuenta estas normas
de higiene y esterilidad dependiendo del tipo de
laboratorio y de cultivos que se manejen.
 Se obtuvieron resultados muy afines en el índice mitótico
(0,04) en comparación con otros artículos donde el valor
de este varía entre 0,03 y 0,07. Esto demuestra que
aunque en algunas mitosis no se contaron los cromosomas
esperados es a causa de una técnica poco estilizada y no
por posibles problemas que pueda tener la donante.
 A la hora de hacer un cultivo se debe tener presente las
especificaciones del medio para así saber bajo qué
condiciones se deben cultivar las células, específicamente
si se cultivan o no en atmosfera de CO2.
 Si bien en la industria existen muchos anticoagulantes que
nos pueden servir en el cultivo, la fitohemaglutinina tiene
ese beneficio de costo y de ser un excelente antimitótico
que es necesario para obtener los resultados esperados, se
debe saber muy bien que se va a analizar y como proceder
para poder escoger correctamente los reactivos y medios a
usar.
 El uso de Colcemid o Colchicina va ligado a los
resultados que se esperan obtener, ambos son efectivos si
se conoce bien cómo proceder con ellos, ambos presentan
altas tasas de resultados certeros según la literatura pero
es crucial manejar los tiempo necesarios para garantizar
los resultados.
Referencias
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Haydée, Técnicas de cultivos celulares e ingeniería de tejidos,
Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Cuajimalpa Av.
Vasco de Quiroga 4871, Col. Santa Fe Cuajimalpa, Deleg.
Cuajimalpa de Morelos, C.P. 05348, México, D. F. Febrero de
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cultivo celular, departamento de investigación y extensión,
Bizkaia España, 2013.
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[5] Las Amibas, Obtención de cromosomas a partir del cultivo de
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[6] Trejo I. Carlos, Anticoagulantes: Farmacología, mecanismos de
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[7] Ruiz Álvarez Vladimir, Hernández Triana Manuel, Aspectos
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terapéutica médica, Instituto de nutrición e higiene de los
alimentos, laboratorio de bioquímica y fisiología, ciudad de la
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[8] Túnez Fiñana Isaac, Galván Cejudo Aurora, Fernández Emilio,

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Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina,
Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo Ochoa,
Córdoba.
[9] Ostrosky Wegman Patricia, contribuciones originales El índice
mitótico y la cinética de proliferación linfocitaria en el
monitoreo biológico. Laboratorio de toxicogenética del instituto
de investigaciones biomédicas de la UNAM. México1994.
[10] Sanz Larruga María Luisa, Goikoetxea Lapresa María José,
Los análisis de sangre para el estudio de la
alergia, Departamento de Alergología e Inmunología Clínica
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