Preparación de soluciones Buffer y sus aplicaciones

bioquímicas a partir del fosfato

Christian Esteban Sanabria 5400609 - Juliana González Otálvaro 5400614

Ingid Natalia Castro Forero 5400615 - Lizeth Valeria Medina Silva 5400620

Universidad Militar Nueva Granada, Facultad de Ingeniería Ambiental

Resumen

En el experimento desarrollado, se abordaron conceptos clave relacionados con el pH y los

sistemas buffer, con el objetivo de evaluar la capacidad buffer de una solución de fosfato. Se realizaron
cálculos precisos para preparar disoluciones buffer con concentraciones específicas y pH objetivo. La
evaluación experimental de la capacidad buffer reveló que el sistema buffer de fosfato era más resistente a
cambios de pH ácido que alcalino. Esta observación se basó en la adición gradual de ácido o base a la
disolución buffer y la medición del pH resultante.

La comparación entre los valores teóricos y experimentales de pH arrojó un porcentaje de error del 7,06%,
lo que indica la existencia de imprecisiones en la preparación de las soluciones y en los procedimientos de
la práctica. Estas imprecisiones pueden atribuirse a diversas fuentes de error en el laboratorio. La práctica
también resaltó la importancia del uso del pH metro como herramienta esencial para medir con precisión
el pH de las soluciones.

………………………………………………………………………………………………………………..

Introducción término "pH" en 1909. La medición precisa se

reemplazó en la década de 1920 con el desarrollo
En la bioquímica existen conceptos
de electrodo de vidrio y pH metro electrónico (
esenciales los cuales son aplicados en la vida
Alméciga Gómez, A. M., & Muñóz Martínez, M.
diaria tales como el pH. La historia del pH
2013). El pH se convirtió en una medida
abarca en los siglos, comenzando con Glauber y
fundamental en química y biología, que permite
Lavoisier en el siglo XVII, que exploraron
ser un indicador que cuantifica la acidez o
sustancias ácidas y alcalinas,en el siglo XIX,
alcalinidad de una solución, representando así la
Arrhenius surgió la teoría de la disociación
concentración de iones hidronio (H3O+)
electrolítica, mientras que Sørensen introdujo el
presente en el medio acuoso y se expresa en una
escala numérica que va desde 0 (altamente
ácido) hasta 14 (altamente alcalino), con 7
siendo neutro, la comprensión del pH abarca
múltiples disciplinas científicas, desde la
química y la biología hasta la medicina y la
ecología (Manuel Torres,& López, F. S. 2000).
El equilibrio del pH es esencial para el
funcionamiento adecuado de los sistemas
biológicos y químicos. En la biología, el pH
óptimo es crucial para la actividad enzimática, la
estructura de las proteínas y la capacidad celular
(Matousek, J. L., & Campbell, K. L. 2002). Los
cambios en el pH pueden desencadenar efectos
negativos, como la desnaturalización de
proteínas o la aparición de reacciones
bioquímicas, además, juega un papel clave en la
absorción de nutrientes por las plantas y la salud
de los ecosistemas acuáticos, donde los cambios
en el pH pueden afectar a la vida acuática,ya que
el agua en cuestiones de pH puede tener la
capacidad de actuar como base o ácido, en el
proceso de autoionización, una molécula de agua
puede donar un protón a otra molécula de agua,
lo que da lugar a la formación de los iones
hidronio (H+) e hidroxilo (OH-)de esta manera,
la molécula de agua puede desempeñar
diferentes funciones según las circunstancias, lo
que demuestra la importancia de comprender la
química de los ácidos y las bases en la
bioquímicas (Mellado, J. M. R., & Galvín, R. M.
1999).
Los ácidos como bases tienen un pH
variado lo que conlleva a estudiar y comprender
los sistemas buffer, los cuales son esenciales ya
que estos están diseñados para mantener un pH
constante y controlado en una solución, y esta
función se logra a través de la capacidad de los
ácidos y las bases conjugadas presentes en el
buffer para neutralizar las cadenas, por ello es
una técnica crucial en el campo de la bioquímica
(Dallos Fuentes, Córdoba Clavijo, M. E. 2021).
Estas soluciones se deben mantener
equilibradas durante experimentos bioquímicos,
lo que resulta esencial para la estabilidad de
muchas moléculas biológicas. Además, las
soluciones Buffer se aplican en una amplia gama
de procesos bioquímicos, como la electroforesis,
la cromatografía y la espectroscopía (Castagnino,
J. M. 2000).
En técnicas de Espectrofotometría UV,
mide la absorción de luz por una muestra en
función de la longitud de onda. Los sistemas
buffer son esenciales para mantener el pH de la
muestra constante, ya que esta puede afectar la
absorbancia de muchas sustancias, incluyendo
proteínas y ácidos nucleicos (Romero, X. I. O.
M. A. R. A. 1999). Especialmente importante
en estudios de cinética enzimática, donde el pH
óptimo de la enzima debe mantenerse constante
para obtener mediciones precisas (Figueroa,
Zapata, & Sánchez, C. P. 2016).
Los sistemas buffer, cuando se añade
ácido a un su sistema, que contiene un ácido
débil (HA) y su base conjugada (A⁻), parte
del ácido se disocia en iones H⁺ y A⁻.
(Fiñana, I. & Fernández, E. 2001).Sin embargo,
en lugar de que los iones H⁺ aumenten el pH
de la solución, reaccionen con los iones A⁻
para formar nuevamente HA y así mantener
el equilibrio (Teijón, J. M. 2006):
HA + H⁺ ⇌ A⁻ + H⁺
Si en lugar de eso se agrega base (OH⁻)
a la solución, los iones A⁻ reaccionan con los
iones OH⁻ para formar una pequeña cantidad
de HA y agua (Altamirano Bravo 2014):
A⁻ + OH⁻ ⇌ HA + H₂O
En ambos casos, las reacciones son
reversibles y ayudan a equilibrar los cambios
en la concentración de iones H⁺ y OH⁻,
evitando que el pH se desplace bruscamente
hacia lo ácido o lo básico (Sánchez Canel, J. J.
2011).
La preparación adecuada de soluciones
Buffer facilitan la precisión y la fiabilidad de los
resultados experimentales, en contexto se debe
tener en cuenta la concentración y el pH de una
solución Buffer, rigurosamente ajustados, para
que se adapten a las condiciones específicas del
experimento, asimismo se debe tener presente
cálculos matemáticos y la ecuación de
Henderson-Hasselbalch (Garcés, A., Rivas, &
Rossi, L. 2011).
También la podemos denotar como puede
reescribir así
En la base, la podemos evaluar de la siguiente
manera:
Esta ecuación permite calcular de una
manera rápida y sencilla la estimación en el pH
de una solución amortiguadora, también
conocida como tampón, esta fórmula ofrece una
aproximación al equilibrio ácido-base en una
solución que consta de un par conjugado de
ácido y base (Marcelo Pinilla, L. A. 2015). Esta
fórmula existe en dos formas diferentes: una
aplicable a sistemas amortiguadores compuestos
por un ácido débil y la sal de su base conjugada,
y otra adecuada para una base débil y la sal de su
ácido conjugado, esto con el fin de obtener una
idea general del pH que tendrá una solución
tampón, sin necesidad de cálculos extensos
(Pardo Vázquez, J. P., & Matuz Mares, D. 2014).
Por ello en este informe se abarca
conceptos claves y ecuaciones en relación al pH
y la concentración de la misma, los cuales
permitieron, evaluar la capacidad buffer de
sistemas en este caso a través del fosfato Y
adquirir competencia en la operación y
aplicación del pH metro en entornos de
laboratorio (Caridad,ODOUS científica, 9(1),
2008).
Materiales y métodos
El procedimiento de la práctica se llevó a
cabo en tres pasos, los cuales fueron los
siguientes: en primer lugar, se realizaron los
cálculos para preparar la disolución buffer en
este caso con el fosfato; luego, se procedió a
elaborar dicha disolución mediante la mezcla de
las alícuotas; por último, se llevó a cabo la
determinación de la capacidad del buffer.
En el primer paso se realizaron cálculos
precisos para determinar las cantidades
necesarias de reactivos con el fin de preparar las
dos soluciones stock. Estas soluciones tienen una
concentración específica para cada componente
del sistema buffer. El objetivo era obtener
posteriormente 50 mL del tampón deseado, con
la concentración requerida y el pH objetivo.
Fig. 1 sales de Na2HPO4 y NaH2PO4.
Para la preparación de este tampón, se
emplearon las sales Na2HPO4 y NaH2PO4.
Cada una de estas se procedió a pesar la cantidad
previamente calculada, utilizando una pesa
muestras, con un valor de 0,0899 de sodio
fosfato monobásico y 0,1319 g de fosfato de
sodio dibásico, posteriormente, se transfirió el
material resultante a un vaso de precipitado,
donde se disolvió minuciosamente en agua
destilada con la ayuda de un agitador de vidrio.
Luego, la solución resultante fue trasladada a un
matraz de 25 mL y se ajustó el volumen con
agua destilada, dando lugar a la obtención de las
disoluciones A y B.
Se procedió a la evaluación de pH de las
disoluciones stock (A y B) como se puede ver el
la figura 2, la cual la base Na2HPO4 obtuvo un
pH de 9,24 a comparación del ácido NaH2PO4
el cualarrojo un valor de 4,95.
Fig 2. Evaluación de pH de las disoluciones
stock (A y B)
Luego de la obtención de sus pH
iniciales se realizó la combinación de las
mezclas de las alícuotas y llevadas a un
volumen con agua destilada en un balón aforado
de 50 mL, con ello se determinó el pH de la
disolución buffer (disolución C),

Fig 3. pH de disolución buffer
Se etiquetaron dos vasos de precipitados
de 100 mL como "buffer + ácido" y "buffer +
base". En cada uno de ellos se añadieron 25 mL
de la solución buffer que había sido previamente
preparada, y se verificó el valor del pH
resultante. En el vaso identificado como "buffer
+ ácido", se agregaron gradualmente 0,5 mL de
HCl (0,5 M) a los 25 mL de la solución buffer, y
se procedió a determinar nuevamente el valor del
pH. Este proceso se repitió de manera iterativa
hasta que se había agregado un total de 5 mL de
HCl, obteniendo así un total de 10 valores de pH
registrados.
Fig 4. "buffer + ácido" y "buffer + base" en 25
mL
Posteriormente, en el vaso marcado como
"Buffer mas base", se realizó una serie de pasos
similares, pero en esta ocasión se empleó NaOH
0,5 M en lugar de HCl. De manera consecutiva,
se añadieron incrementos de 0,5 mL de NaOH a
los 25 mL de la solución buffer, y se midió el pH
correspondiente en cada etapa. Este proceso fue
repetido hasta que se logró un total de 5 mL de
NaOH añadidos, viendo así otro conjunto de 10
valores de pH.
Finalmente, se procedió a construir dos
gráficos independientes: uno que añadía el
volumen de HCl con los valores de pH
obtenidos, y otro que mostraba la relación entre
el volumen de NaOH añadido y los valores de
pH resultantes, como se puede observar en
resultados.
Resultados
Ecuaciones que se realizaron del buffer fosfato
a. Acido NaH2PO4 :
b. Base Na2HPO4 :
Datos obtenidos
● Vaso precipitado del acido: 51,0106 g
● Acido (NaH2PO4): 0,0873 g
● Vaso precipitado de la base: 50,8409g
● Base(Na2HPO4): 0,1301 g
● pH inicial de la base: 9,24
● pH inicial del ácido: 4,95
● pH inicial del buffer: 6,97
● Concentración inicial de la base: 0,06
● Concentración inicial del ácido: 0,03
Tabla 1. Conteo de pH para buffer con ácido y
base
Figura 1: Gráfica de buffer con ácido
Figura 2: Gráfica de buffer con base
pH experimental del buffer: 6,97
[𝐵𝐴𝑆𝐸]
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔( [𝐴𝐶𝐼𝐷𝑂] )
𝑝𝑘𝑎 teórico encontrado es 7,2
[0,06]
𝑝𝐻 = 7, 2 + 𝑙𝑜𝑔( [0,03] )
𝑝𝐻 = 7, 5
pH teórico del buffer es 7,5
|𝑝𝐻 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙−𝑝𝐻 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜|
% 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑝𝐻 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜
× 100%
|6,97 −7,5|
% 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 7,5
× 100%
% 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 7,06%
Análisis de resultados
Teniendo en cuenta que las disoluciones
amortiguadoras/buffer son aquellas que evitan
los cambios bruscos del pH se deben tener en
cuenta diferentes aspectos como la concentración
de los componentes, la efectividad del buffer y la
determinación del ph, para delimitar su
capacidad, para ello se realizaron los cálculos
respectivos para determinar la cantidad en
gramos del ácido y la base a utilizar a partir de
las concentraciones de dichos compuestos, para
el ácido (NaH2PO2) se pesaron 0.0873g y para
la base (Na2HPO4) 0.1301g, en cada uno se
realizó una disolución con agua y al calcular el
ph inicial se obtuvo un pH óptimo en cada
disolución teniendo en cuenta la escala de ph en
donde el ácido debe estar en el rango de 0 a 6.9 y
la base en la escala de 7.1 a 14.
Al preparar el buffer se obtuvo un ph inicial de
6.97 el cual tiende a ser neutro debido a las
concentraciones de los componentes del buffer.
Se determinó la capacidad del buffer añadiendo
gradualmente 0,5 mL de ácido o base a la
disolución y tomando el pH con el pH-metro
como se observa en la Tabla 1 para determinar si
el sistema era más resistente a un pH ácido o un
pH básico teniendo en cuenta que cuanto mayor
sea la cantidad de ácido o base que se pueda
agregar al sistema antes de que el pH de la
muestra cambie drásticamente, mayor será la
capacidad de resistencia en el ácido o la base.
Se realizaron dos gráficas para observar el
comportamiento de la disolución buffer a medida
que se iba agregando el ácido o la base,
comprando las dos gráficas se pudo inferir que el
sistema buffer es más resistente al ácido que a la
base ya que se pudo agregar más cantidad de
ácido antes que el pH cambiará drásticamente.
Para finalizar se obtuvo un porcentaje de error de
7,06% esté a causa de la imprecisión al pesar los
componentes del sistema y en diversos errores
sistemáticos en los procedimientos realizados
durante la práctica.
Conclusiones
En esta práctica, se pudo aplicar de manera
concreta los conceptos de pH y sistemas buffer
mediante la preparación de una solución buffer
de fosfato. Los cálculos que permitieron
determinar las cantidades de reactivos necesarios
demostraron la importancia de la precisión en el
experimento. La preparación de disoluciones
buffer con concentraciones adecuadas y pH
objetivo es esencial para obtener resultados
confiables en experimentos bioquímicos.
La evaluación experimental de la capacidad
buffer de la solución preparada permitió
comprender cómo los sistemas buffer pueden
resistir cambios bruscos en el pH al añadir ácido
o base. Los resultados obtenidos indicaron que el
sistema buffer era más resistente a cambios de
pH ácido que alcalino.
A través de la comparación entre el pH teórico y
experimental, se pudo calcular un porcentaje de
error del 7,06%. Este resultado sugiere que
existieron imprecisiones en la preparación de las
soluciones, así como en los procedimientos
realizados durante la práctica. Sin embargo, este
porcentaje de error sigue siendo aceptable en el
contexto de la experimentación y puede
atribuirse a diversas fuentes de error sistemático
y aleatorio presentes en el laboratorio.
La práctica también permitió comprender el uso
del pH metro, una herramienta fundamental para
medir con precisión el pH de las soluciones. La
habilidad de operar el pH metro y realizar
mediciones de pH es esencial para garantizar que
las soluciones buffer se mantengan dentro de los
rangos deseados y que los experimentos se
realicen con la mayor exactitud posible.
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