18/03/2011

Biología Celular y Molecular. PRACTICA # 1. “USO DEL MICROSCOPIO.” Objetivo: El alumno utilizara distintos tipos de microscopios, tomando en cuenta sus cuidados y las técnicas adecuadas para su manejo, además de llevar a cabo la tinción de Gram e identificara organismos Gram positivo y Gram negativos en una muestra problema que le brindara el instructor. Introducción: El microscopio es un excelente auxiliar de gran precisión en el desarrollo de los trabajos microbiológicos de un laboratorio. El microscopio es un instrumento capaz de amplificar cientos y hasta miles de veces la imagen de los microorganismos, los cuales no son visibles a simple vista. Su nombre deriva de las raíces “Micros” que significa pequeño y “Scopeo” que significa ver, por lo tanto significa ver lo pequeño. Existen diferentes tipos de microscopios tales como: Microscopio de luz ultravioleta. Microscopio de contraste de fases. Microscopio electrónico. Microscopio compuesto: se denomina así porque los del objeto se logra mediante la combinación de dos juegos de lentes: los objetivos y los oculares. El microscopio compuesto es el más comúnmente usado en los laboratorios escolares e incluso industriales, por lo que a continuación describiremos más detalladamente su estructura. Sistema de soporte.(pie y brazo) sostiene a todo el microscopio Sistema eléctrico de iluminación. Depende de los caprichos de cada productor. Sistema mecánico. Todo accesorio capaz de moverse para optimizar las funciones de las diferentes partes Sistema óptico. Conjunto de elementos que posibilitan el incremento de visibilidad: oculares, platina, condensador, corredera de platina, revolver, diafragma, oculares, espejos de conducción, objetivos (2.5x lupa débil. 5x lupa fuerte, 10x

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Este objetivo no tiene tope por lo que es necesario cuidar de no romper el cubreobjetos con la lente del objetivo.15-0. Cambiar al objetivo seco fuerte y aclarar la imagen con el tornillo micrométrico. Terminar de aclarar la imagen moviendo el tornillo micrométrico. 100x inmersión) OBJETIVO LUPA SECO DEBIL SECO FUERTE INMERSION Manejo del microscopio:     AUMENTOS 5X 10X 40-60X 100X DISTANCI FRONTAL 20-25 mm 5-6 mm 0. enfocar la imagen usando para ello el tornillo micrométrico.  Hacer esquemas y anotaciones de lo observado. anotando el objetivo con el que se observa. Este objetivo tampoco tiene tope por lo que se debe cuidar no bajarlo demasiado. mediante observación lateral de la operación. hasta que la imagen sea lo más clara posible. Para cambiar de campo de observación se debe mover la preparación mediante el carro de la platina arriba-abajo o hacia la derecha o la izquierda. cambiar al objetivo de inmersión.5-0. Montar la preparación a observar.  Observar la preparación. Con la lente objetiva de menor aumento en el eje.    Mover el condensador si la luz es inadecuada.15 mm 0. para ello se debe colocar una gota de aceite de inmersión entre la lente del objetivo y el cubreobjetos.18/03/2011 seco débil. 2 . observando la operación lateralmente. Encender la fuente de iluminación.02 mm El banco y la mesa deben estar a la altura que le permita al observados usar el microscopio en posición vertical de manera confortable.  Finalmente si es necesario. 40-60x seco fuerte.

si lo transportas será en posición vertical y sujetándolo contra tu cuerpo. Los diez mandamientos del microscopio.   Por ningún motivo se desarmara alguna parte del microscopio.    Las preparaciones a observar deben estar siempre limpias de grasa de las manos. de no ser así limpiarlas usando solamente papel especial (papel ceda) para evitar el rayado de las lentes  En caso de haber usado aceite de inmersión deberá limpiarse con un papel ceda impregnado con una solución de éter. Para su traslado debe ser tomado con una mano del brazo y con la otra mano por debajo del soporte o base. de preferencia destilada para evitar la precipitación de sales.18/03/2011 Cuidados del microscopio. En caso de alguna duda. 3 . o falla deberá preguntarle al profesor a cargo. puesto que el pegamento con el que se fija las lentes es soluble en esta mezcla. ya que solamente deben hacerlo personas calificadas. Toda persona que maneje un microscopio deberá tener en cuenta que es un instrumento de alto costo de precisión y delicado. por lo que debe tomar los siguientes cuidados:    El microscopio debe ser guardado en un lugar seco y fresco al cubierto del polvo. ocasionalmente el tornillo micrométrico se limpiara con aceite o grasa especial. Las lentes del microscopio deberán quedar limpias la terminar de trabajar con el microscopio. Antes de su uso hay que revisar que las lentes estén limpias. alcohol y acetona. Las partes del soporte deben ser limpiadas con una franela húmeda con agua. el tornillo micrométrico no requiere de aceite. No lo golpearas. 1. teniendo cuidado de no usar la mezcla en exceso.

nunca le pondrás grasa o aceite en sus partes mecánicas. 5. Nunca usaras disolventes para limpiar las lentes. notificaras al encargado para que t asignen otro microscopio. excepto el ocular y eso si te lo pide el maestro 6. No lo arrastraras sobre la mesa cuando se encuentre encendido o recién apagado. siempre y cuando no tengas un ocular menor de 8X ni mayor a 12. solo en caso de que sea muy necesario para retirar el exceso de aceite de inmersión y lo harás muy rápidamente.18/03/2011 2. ni lo guardaras junto con sustancias corrosivas. 9. 3. 4. No le desmontaras ninguna pies. No lo colocaras en el borde de la mesa ni lo tendrás cerca de la llama del mechero. 7. MATERIALES MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO MICROSCOPIO (SENCILLO) PICETA ASA MICROBIOLOGICA O ALAMBRE DE PLATINO GOTEROS CUBREOBJETOS Y PORTAOBJETOS PUENTE DE TINCIONES MECHERO FISCHER 4 . siempre apagaras la lámpara inmediatamente y no moverás el microscopio hasta que la lámpara se haya enfriado. 10. Limpiaras el microscopio periódicamente. si se encuentra alguna avería o cualquier otra irregularidad. Limpiaras siempre las lentes con papel ceda. pasaras al seco fuerte o inmersión. Al iniciar tu observación comenzaras con el seco débil. Lo inspeccionaras siempre antes de usarlo. porque se funde el foco. ni tampoco intentes desarmarlo y menos forzar su funcionamiento. luego si es necesario. 8.5x. usando un poco de vapor de aliento. Cuando termines de hacer tus observaciones.

Safranina: el coloran6te de safranina es útil en la tinción de Gram principalmente para teñir bacterias. Dejarlo reposar y filtrar. mezclar con un volumen igual de solución “B”. 5 . Solución de yodo yoduro “lugol”: esta solución identifica el almidón en los alimentos y tejidos vegetales. estas adquieren un color morado. a) *cristal violeta alcohol etílico al 95% preparación: disolver 2 g de cristal violeta en 20ml de alcohol. Disolver 1g de yodo y 3g de KI en 300 ml de H2O destilada. Diluya la solución en 4 partes de agua destilada (20-80ml respectivamente).18/03/2011 UN PORTA ASA REACTIVOS: SAFRANINA LUGOL ALCOHOL-CETONA CRISTAL VIOLETA MUESTRAS: LEVADURA DE CERVEZA CULTIVOS DE QUESO CEBOLLA (TELA DELGADA) SANGRE Preparación de reactivos: Cristal violeta: es una solución utilizada para teñir bacterias. y sirve como mordiente en la tinción de bacterias por la técnica de Gram. b) *oxalato de amonio *agua destilada preparación: diluya 0.8 de oxalato de amonio en 80 ml de agua destilada. *Agua destilada. *Yodo *Yoduro de potasio.

Alcohol-cetona: utilizado como diluyente y decolorante en las tinciones. Observar al microscopio con todos los objetivos. 6 . El calor se controla pasando cada vez el portaobjetos sobre el dorso de la mano para cuidar que este tenga una temperatura soportable. para esto pasar varias veces el portaobjetos sobre la flama. Fijar el frotis a la flama. *cetona. Una vez que el frotis se ha secado completamente. agregando alcohol-cetona (15-30 segundos) Cubrir el frotis con safranina (15-30segundos) Lavar con agua corriente y dejar secar al aire. Cubrir el frotis con cristal violeta (dejar actuar 1 minuto) Lavar el exceso de colorante con la piseta Cubrir el frotis con lugol (dejar actuar 1 minuto) Lavar el exceso de lugol con la piseta Decolorar la preparación. Mezclar 25ml de esta solución con 75 ml de H2O destilada. Elaboración del frotis: Colocar una gota de agua sobre un portaobjetos y en ella disolver una pequeña parte de colonia. Colocando un portaobjeto en Angulo de 45ᵒ con el portaobjetos. *alcohol etílico al 95%. Preparación: mezclar 60ml de alcohol absoluto y 40 ml de acetona. Disolver 2. extender la suspensión de microorganismos. colocarlo sobre una caja Petri o sobre un puente de tinción y practicarle la tinción de Gram.5g de safranina en100 ml de alcohol etílico al 95%. *agua destilada. cuidando que no hierva la preparación. Tinción de Gram.18/03/2011 *safranina. A esto se le llama extensión de los microorganismos o frotis. *alcohol.

diferentes tipos de microorganismos tanto en su estado natural. puesto que pude observar en el microscopio. Se aprendieron y reconocieron las partes del microscopio además de manejarlo correctamente. Se lograron los objetivos de la práctica. Es una pequeña tela extraída de la cebolla. Cocos vistos en la muestra del cultivo de queso son Gram negativas por su 7 . Muestra de levadura de cerveza hidratada en agua y vista al microscopio.18/03/2011 Resultados. como en tinciones. observada al microscopio.

explican perfectamente tres microscopios que son: microscopio de luz. Aunque la mayoría de los libros de biología manejan la microscopia. en el manual (microbiología general) aparecen varios. Discusión. Muestra de sangre vista al microscopio con la tinción de Gram aplicada. para ser utilizado con eficacia en el laboratorio. Realmente se dan las bases físicas principalmente en el primer libro citado. En el manual se nos habla un poco sobre la historia del microscopio. En “fisiología celular” de A. donde se hablan de lo importante de las características de la luz para ser manipuladas de la mejor manera que nos convenga. y es en donde se pueden conocer las partes del microscopio fácilmente. el polarizante y el de interferencia.C. Encontramos que en “Biología celular” de Jack Burke. También se dan a conocer los cuidados que se deben tomar en cuenta para el buen funcionamiento del microscopio. 8 . Muestra de sangre vista al microscopio sin aplicar ninguna técnica de tinción. microscopio electrónico y el microscopio de contraste de fases. no toman en cuenta algunos microscopios. Giese solo encontramos el microscopio de campo oscuro.18/03/2011 pared celular pintada en rosa.

Dado que en una tinción simple no se pueden apreciar distintos tipos de microorganismos y en las tinciones diferenciales siempre se podrán diferenciar mínimo dos tipos de organismo en el frotis. Esta utiliza las diferencias de e índices de refracción y produce el contraste por interferencia. radica en el sistema mediante el cual se paran los rayos interferentes (Un prisma). pero su diferencia con el microscopio de fases. Tales tinciones son: Tinción de Gram. y todos tienen principios físicos. Produce una imagen casi tridimensional y es útil para observar organismos vivos en el interior de animales vivos. En este libro se menciona su utilidad primordial de diferentes microscopios. Las tinciones son de gran ayuda en microscopia debido a que gracias a los colorantes utilizados en las tinciones se logran apreciar con más claridad los microorganismos.18/03/2011 esto es difícil de encontrar en algún libro . Tinción Zielh-Nielssen 9 . pero hablan poco de cómo utilizarlo en el laboratorio ya que esto es muy importante. ya que utilizan la luz para amplificar una imagen. Dependiendo del tipo de tinción. además de poder identificar algunos organelos que contienen los antes mencionados. porque los demás libros sólo dan el fundamento de la microscopia. En Microbiología encontré otro microscopio que no se había mencionado: Microscopia de Normanski.. Conclusiones. se podrán observar los organismos.

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