David - Anteproyecto - Coregido 11052020

APOYO A LAS ACTIVIDADES DEL LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL
Y ACOMPAÑAMIENTO EN LA PROYECCIÓN DE ADQUISICIÓN DE EQUIPOS
DEL NUEVO LABORATORIO DE ANALISIS DE ALIMENTOS DEL EDIFICIO
DE CIENCIA ANIMAL DE LA UFPS SEDE CAMPOS ELISEOS, MUNICIPIO LOS
PATIOS
LUIS DAVID GOMEZ BLANCO
UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE
PLAN DE ESTUIDOS DE INGENIERIA PECUARIA
2020
APOYO A LAS ACTIVIDADES DEL LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL Y
ACOMPAÑAMIENTO EN LA PROYECCIÓN DE ADQUISICIÓN DE EQUIPOS DEL
NUEVO LABORATORIO DE ANALISIS DE ALIMENTOS DEL EDIFICIO DE CIENCIA
ANIMAL DE LA UFPS SEDE CAMPOS ELISEOS, MUNICIPIO LOS PATIOS
LUIS DAVID GOMEZ BLANCO
Código. 1630600
Práctica Profesional
Tutor
CAMILO E. GUERRERO ALVARADO

Zootecnista, PhD.
Cotutora
Diana Nataly Galvis
Tecnóloga Química
Docente Asignatura Práctica Profesional

JORGE ALEXANDER RUBIO PARADA
M.Sc. Ingeniero de Producción Animal
UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE
PLAN DE ESTUDIOS DE INGENIERÍA PECUARIA
SAN JOSE DE CÚCUTA
2020
Contenido
1. INTRODUCCIÓN......................................................................................................................4
2. PROBLEMA..........................................................................................................................6
2.1. Titulo......................................................................................................................................6
2.1.1. Planteamiento del problema.........................................................................................6
2.1.2. Formulación del problema............................................................................................7
3. Justificación............................................................................................................................7
4. Objetivos................................................................................................................................8
4.1. Objetivo general.....................................................................................................................8
4.2. Objetivos específicos..............................................................................................................9
5. Marco referencial...................................................................................................................9
5.1 Marco Conceptual................................................................................................................11
5.2. Marco contextual..................................................................................................................12
5.3 Marco Teórico......................................................................................................................12
6. DISEÑO METODOLÓGICO..............................................................................................28
6.1. Población y muestra.............................................................................................................28
6.2. Planteamiento de la práctica.................................................................................................28
7. Participantes en este proceso................................................................................................29
8. RECURSOS DISPONIBLES (Materiales, institucionales y financieros).............................30
8.1. Materiales:............................................................................................................................30
8.2. Institucionales......................................................................................................................30
8.3. Financieros...........................................................................................................................31
9. Cronograma..........................................................................................................................31
10. Bibliografía............................................................................................................................32
1. INTRODUCCIÓN
La nutrición animal como ciencia tiene como objeto cumplir con los requerimientos
nutricionales de distintas especies, en el cual esta aferrado a sus estados fisiológicos de
cada uno de ellos para que logren alcanzar los mejores parámetros productivos y
reproductivos, esto va acompañado tanto en cantidad como en calidad del producto. Los
laboratorios de Nutrición Animal permiten obtener mediante los análisis hechos en sus
instalaciones las características bromatológicas de diferentes productos que se usan para la
alimentación de nuestros animales en los diferentes sistemas de producción existentes.
El laboratorio de nutrición animal adscrito al programa de Ingeniería Pecuaria, se
encuentra localizada en la Sede Campos Elíseos perteneciente a la Universidad Francisco
de Paula Santander Municipio de Los Patios.
Dentro del laboratorio se evalúan análisis bromatológicos de muestras
especialmente para uso de nutrición animal con el fin de determinar composiciones
químicas (materia seca (MS), ceniza (Mn), proteína cruda (PC), Extracto etéreo (EE),
Fibra de Detergente Neutro (FDN), Fibra de Detergente Acido (FDA), Celulosa y lignina ),
estas prácticas son establecidas por el plan de estudios de ingeniería pecuaria, para las
asignaturas de Nutrición de Monogástricos, nutrición de Rumiantes, de igual manera
servicios de extensión, con referencia a análisis nombrados anteriormente, y brindar
asistencia en trabajos de investigación a los planes de estudio pertenecientes a la facultad.
Con la ayuda de análisis bromatológico se podrá conocer:

Composición cuantitativa y cualitativa tanto del alimento como de las materias
primas.
Observar su estado de higiene y toxicológico
Medición de la dieta de los animales, con base a sus regímenes alimenticios
específicos.
Analizar alteraciones y/o contaminantes.
A raíz de lo anterior se obtendrá análisis más extensos respecto a las muestras, además se
podrá mejorar los niveles nutricionales, salud, y economía.
Los equipos a utilizar en el laboratorio de análisis de alimentos serán de mucha utilidad
debido a la incorporación de nuevos equipos que no se contaban en el laboratorio de
nutrición animal y que serán necesarios para un análisis bromatológico completo; uno de
ellos es el del digestor Kjeldahl cuya función nos permite realizar análisis de proteínas a las
muestras, entre otros.
El objetivo de la presente práctica profesional, será apoyar las diferentes actividades
que se llevan a cabo en el laboratorio de nutrición animal en cuanto a realización de análisis
bromatológicos, elaboración del manual de usuario tanto para el laboratorio de nutrición,
como para el laboratorio de análisis de alimentos, el cual contendrá funciones, capacidades,
condiciones ambientales y manejo de los equipos dentro de dichos laboratorios y la
cotización de equipos y materiales necesarios para el nuevo laboratorio de análisis de
alimentos.
2. PROBLEMA
2.1. Titulo
APOYO A LAS ACTIVIDADES DEL LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL Y
ACOMPAÑAMIENTO EN LA PROYECCIÓN DE ADQUISICIÓN DE EQUIPOS DEL
NUEVO LABORATORIO DE ANÁLISIS DE ALIMENTOS DEL EDIFICIO DE
CIENCIA ANIMAL DE LA UFPS SEDE CAMPOS ELÍSEOS, MUNICIPIO LOS
PATIOS.
2.1.1. Planteamiento del problema
En el laboratorio de nutrición animal se elaboran diversos tipos de análisis con el
propósito de tener información bromatológica sobre las muestras. En ellas se podrá realizar
análisis de MS, MN, EE, FDN, FDA de cualquier tipo de alimento que se desee examinar.
No obstante, el manejo de equipos es de uso exclusivo por la(el) encargada(o), dado aquel
estudiante no se encuentra capacitado para el manejo de los equipos. Con el manual se
podrá apoyar el estudiante para que opere los equipos por cuenta propia, algo que no se ve a
diario, dado que puedan causar un deterioro del equipo por no conocer su funcionamiento o
en el peor de los casos un accidente.
Gracias al moderno laboratorio de análisis de alimento del edificio de ciencia animal
se conseguirá hacer múltiples análisis bromatológicos (físico-químico) con la
implementación de nuevos equipos sofisticados, a fin de elaborar estudios completos a las
materias primas a diferencia del laboratorio de nutrición animal, sin embargo, no se ha
establecido una cotización real de equipos y materiales a utilizar. Por lo cual se elabora una
gestión de equipos actuales del laboratorio de Nutrición animal, y se desarrolla una
cotización de equipos actuales y faltantes para el nuevo laboratorio.
2.1.2. Formulación del problema
¿Es importante el apoyo del estudiante de Ingeniería pecuaria en las actividades del
laboratorio de nutrición animal, así como el acompañamiento en la proyección de la
dotación del laboratorio de Ciencia Animal en la sede Campos Elíseos?
3. Justificación
Los análisis físico-químicos también llamados análisis bromatológicos que se efectúan
durante la transformación de las dietas para los animales domésticos son de vital
importancia, pues a través de estos se conocerá la calidad del alimento, lo que impacta en
salud, el rendimiento y la eficiencia reproductiva en la producción. (Hernadez). Por lo cual
el uso de equipos debe estar a cargo de personal capacitado para su ejecución.
Mediante el manual, se busca, introducir a los estudiantes al conocimiento de las
composiciones de cada alimento, sus características tanto físicas como químicas,
nutricionales, microbiológicas, manejo de muestras y manejo de resultados que debería
esperar en cada prueba, con el fin de que el alimento cumpla con los parámetros de calidad,
adquiriendo habilidades que serán útiles como ingeniero pecuario, es por eso que se
elaborara de manera detallada los procedimientos que se deben tener en cuenta al momento
de manejar un equipo para facilitar una capacitación y adiestramiento de los estudiantes y/o
profesores, y así evitar posibles errores que se puedan cometer dentro del laboratorio. Con
la elaboración del manual se pretende que los estudiantes y/o profesores puedan conocer las
condiciones de trabajo que se expondrá el equipo y su dominio dentro del aula sin ningún
inconveniente.
4. Objetivos
4.1. Objetivo general
Brindar apoyo y acompañamiento a las diferentes actividades que se desarrollan en
los laboratorios de Nutrición Animal y el nuevo laboratorio de Ciencia Animal de la UFPS,
Sede Campos Elíseos.
4.2. Objetivos específicos
Realizar un manual de usuario de equipos existentes del laboratorio de nutrición
animal
Elaborar el presupuesto de equipos del laboratorio de análisis de alimentos de la
UFPS sede Campos Elíseos, Municipio Los Patios
Apoyar las actividades a desarrollar en el laboratorio de nutrición animal (Análisis
Bromatológicos, trabajos de extensión e investigación, entre otras).

5. MARCO REFERENCIAL
USO Y APLICACIÓN DE LAS NORMAS DE ESTÁNDARES DE CALIDAD,
PARA LAS NECESIDADES DEL LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL
Y ANÁLISIS DE ALIMENTOS. LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL Y
ANÁLISIS DE ALIMENTOS UFPS (Tatiana, 2017)
El propósito de este trabajo fue realizar las condiciones e infraestructura del
laboratorio en el que se encuentra, por lo cual se efectuó un estudio detallado del espacio
disponible para cada zona de trabajo, y que éste se encuentra en un camino hacia la
certificación, donde cada espacio debe contar con las condiciones óptimas como son pisos,
pinturas, tamaño de mesones, extractores de gases y olores, ventilación, iluminación, techos
y almacenamiento de los reactivos y materiales para un correcto funcionamiento del nuevo
laboratorio de Nutrición Animal y Análisis de Alimentos, para la implementación de las
normas de seguridad y de estándares de calidad que exige entre otras cosas, manejo y
almacenamiento adecuado para los reactivos y donde a nivel local puede ser suficiente una
certificación bajo la norma ISO 9001-2008 para diferenciarse de la competencia y ganar
cuota de mercado, licitaciones públicas, entre otros objetivos; se busca que los estudiantes
de los diferentes planes de estudios que solicitan servicio de extensión e investigación o que
hacen parte de las prácticas de laboratorio de Nutrición de Monogástricos y N. De
Rumiantes, que no cuentan con formación química, hagan un manejo óptimo, poniendo en
práctica las precauciones y condiciones de uso que se encuentran en las hojas de seguridad,
de las sustancias con las que allí se trabaja.

ACOMPAÑAMIENTO EN LAS ACTIVIDADES DESARROLLADAS EN EL
LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL Y LA ELABORACIÓN DE LAS
HOJAS DE SEGURIDAD DE LOS REACTIVOS DEL COMPLEJO PECUARIO DE
LA UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER SEDE CAMPOS
ELÍSEOS MUNICIPIO LOS PATIOS (Duvan, 2019)
Se actualizó la base de datos de reactivos que se encontraba en el laboratorio y
realizo hojas de seguridad de cada uno de ellos con el fin de tener información detallada
acerca del modo de empleo, las precauciones y medidas en casos de emergencia que se
puedan presentar al momento de manejar sustancias o reactivos.
Se brindó apoyo general en las actividades de análisis bromatológicas de materias
primas tratadas en el laboratorio dadas por asignaturas (nutrición monogástrica, rumiantes),
igualmente apoyo a las prácticas de Biorremediación de Ingeniería Biotecnológica y
Química de los suelos de Ingeniería Ambiental (Análisis de Bicarburos de petróleo TPH), y
apoyo en los trabajos de investigación a los planes de estudio pertenecientes a la facultad.,
se ofreció apoyo en la verificación del nuevo edificio de la cede Campos Elíseos
(laboratorio de ciencia animal), donde se ubicarán los laboratorios de Nutrición Animal,
Reproducción y Genética; el apoyo consistió en observar y verificar que se cumplieran con
las características que se pidieron desde un inicio en el plano, y además se hicieron ciertas
sugerencias pensando en el avance tecnológico de los equipos y en la distribución de los
mismos.
5.1 Marco Conceptual
Bromatología: Es el análisis químico de los alimentos para determinar su
composición.
Control de calidad: Es un conjunto de técnicas y actividades de carácter operativo,
utilizadas para verificar los requisitos relativos a la calidad de las pruebas de un
laboratorio.
Manual: Orientación a una persona por medio de técnicas o normas que conllevan a
un mejor uso de instrumento o equipo
5.2. Marco contextual
El laboratorio de Nutrición Animal perteneciente a la facultad de Ciencias Agrarias y del
Ambiente de la UFPS, y forma parte del plan de estudios de Ingeniería Pecuaria.
Brinda servicios de extensión, investigación y por supuesto académicos referentes a
Análisis bromatológicos o químico de alimentos.
1.3 Marco Teórico
El uso de caracterización de equipos es indispensable para el personal de trabajo ya que
tendrá un adecuado manejo y control de los mismos.
Cotización de equipos
Para una cotización de equipos, lo primero a realizar es una descripción de productos el
cual sus especificaciones concuerden con lo establecido, otro factor de interés son sus
antecedentes, ya que con ello se averiguará si la empresa contiene equipos de buena
calidad, además de su entrega y garantía del producto por parte de otras empresas, y por
último la entrega de equipos deberá ser entregados sin ningún defecto de fábrica y de igual
manera se obtenga completos a lo facturado.
1.3.1 Análisis Bromatológicos
Para realizar un completo análisis bromatológico de materias primas es indispensable
efectuar las siguientes pruebas:
 Materia Seca, Cenizas, Proteína, Vitamina, Extracto etéreo, Fibra de detergente
neutro, Fibra de detergente acida, Fibra cruda, Aminoácidos, Energía.
1.3.2 Materia seca
La muestra se expone a una deshidratación de 105- 108 ºC para determinar el nivel de MS,
que serán aprovechados por el animal. Los nutrientes a obtener son: Hidratos de carbono,
cenizas (minerales), Extracto etéreo, proteína. (Natali, 2008)
1.3.3 Cenizas
Para realizar el análisis es indispensable que la muestra se incinere a temperaturas entre los
500 y 600°C, temperatura a la cual algunos minerales se volatilizan, tales como el yodo y el
selenio (De Gracia, 2011). Se trabaja en la mufla y se inicia a una temperatura de 350° C,
alcanzado dicha temperatura se debe mantener alrededor de una hora y posteriormente se
eleva a 550°C y se deja por dos horas, pasado el tiempo se debe disminuir hasta los 50°C,
al situarse a esta se extrae la muestra y se deja enfriar en el desecador por una hora y
seguidamente se pesa. (Natali, 2008)
1.3.4 Extracto Etéreo

Para la realización de extracción de grasa se debe tener un balón soxhlet limpio, y un dedal
de soxhlet, en este se agrega ± 2,000 de muestra seca en el interior del dedal y
posteriormente se pesa, luego se pone una cubierta en la parte superior del dedal con una
torunda de algodón para evitar posibles pérdidas de partículas que puedan pasar por el
balón, colocar el dedal con la muestra en el equipo de soxhlet, añadir 200 ml de éter de
petróleo o etílico al balón de soxhlet, previamente se conecta el balón al tubo extractor y
este al condensador. Se debe mantener una corriente de agua a través del condensador para
lograr la condensación de vapores del solvente, se enciende el equipo y se realiza la
extracción durante 8 horas, transcurrido el tiempo se procede a sacar el dedal de la muestra
y conectar al rotavapor para realizar la recuperación del solvente, después de este proceso
desconectar el equipo y dejar el balón destapado a temperatura ambiente para la
eliminación de los restos del éter. Colocar el balón en estufa a 105°C durante 30 minutos
para eliminar la posible humedad, y a continuación, colocar en un desecador para que enfrié
y no se hidrate. Por último, pesar el balón con el contenido. (Natali, 2008)
1.3.5 Fibra Detergente Neutra
Se pesa 0,3 a 0,5 gr de muestra seca y se deposita en el baso Berzelius posteriormente se
agrega solución detergente neutro (FDN) 50 ml y el antiespumante este ultimo 3 gotas, se
monta en el equipo de fibra a una T° de 100 °C alrededor de 60 min, pasado el tiempo se
retira del equipo y se hace su respectiva filtración con el fin de eliminar la solución, se
adiciona acetona de 20 ml, 20 ml, 15, ml y se procede a la filtración al vacío, se extrae la
muestra para ser depositada en los crisoles gooch y se lleva al horno a secar por 12hrs a
105°C, transcurrido el tiempo se pasa al desecador se deja reposar 30min y se procede a
hacer el pesaje para determinar el porcentaje de la fibra. (Natali, 2008)

1.3.6 Fibra Detergente Acida
Se pesa 0,3 a 0,5 gr de muestra seca y se deposita en el baso Berzelius posteriormente se
agrega solución detergente acida (FDA) 50 ml y el antiespumante este ultimo 3 gotas, se
monta en el equipo de fibra a una T° de 100 °C alrededor de 60 min, pasado el tiempo se
retira del equipo y se hace su respectiva filtración con el fin de eliminar la solución, se
adiciona acetona de 20 ml, 20 ml, 15, ml y se procede a la filtración al vacío, se extrae la
muestra para ser depositada en los crisoles gooch y se lleva al horno a secar por 12hrs a
105°C, transcurrido el tiempo se pasa al desecador se deja reposar 30min y se procede a
hacer el pesaje para determinar el porcentaje de la fibra. (Duvan, 2019)
1.3.7 Fibra Cruda
Este análisis se pesa 1 gr de muestra y se calienta en el vaso Berzelius sobre el extractor de
fibra con solución de H2SO4 al 1,25 % en agua destilada hasta su ebullición alrededor de 30
min, posteriormente al tiempo se retira del equipo y se procede a filtrar con tela de hilo, se
recoge y se hace el mismo procedimiento pero esta vez con solución de KOH al 1,25%, se
filtra y se procede a un lavado con Etanol (20 ml) y acetona (20 ml), se recoge la muestra y
es llevado al secado por 6hrs, posterior a eso, se introduce al desecador por 30 min y se
pesa la muestra. (Duvan, 2019)
1.3.8 Lignina
Para este análisis utilizamos la muestra residuo de FDA la cual se lleva en el crisol a un
vaso de precipitado que contiene una lámina pequeña de agua destilada, se mezcla la
solución saturada de permanganato de potasio (KMnO4 con la solución amortiguadora
(esta solución no debe recibir rayos de luz) para lignina relación 2:1; se agrega 25ml de la
mezcla de KMnO4 hasta cubrir el contenido del crisol, se agita con la varilla de vidrio para
que se produzca la reacción y se rompan los grumos, posterior a esto se agrega agua
destilada para restringir el flujo de la solución fuera del crisol, se continua revolviendo,
verificando el volumen del crisol y corrigiendo con agua destilada la perdida que se
presente en éste. Es importante verificar que el color durante todo el proceso permanezca
de color púrpura la solución, el periodo es de 90min en donde se debe agitar siempre con la
misma varilla. Filtrar al vacío el crisol pasados los 90min, para aplicar solución des
mineralizadora hasta la mitad de la capacidad del crisol y dejar en reposo por 15min más y
filtrar nuevamente al vacío. Añadir nuevamente solución des mineralizadora hasta la mitad
del crisol lavando las paredes del crisol, y dejar en reposo por 20min. Verificar que el
residuo en el crisol este de color blanco y lavar con etanol al 80% tres veces y dos veces
más con acetona. Llevar al horno por 16hrs a una T° de 100°C. Se retira la muestra se lleva
al desecador por 30min y se procede a pesar para determinar el porcentaje. (Natali, 2008)
1.3.9 Energia Bruta
Para su elaboración se efectúa de la siguiente manera:
Pesar ± 1 g de muestra previamente molida y seca, Llevar la muestra a la prensa para
compactarla y crear la pastilla. Nos ubicamos en el vaso de disgregación en el alambre de
cromo-níquel ajustamos el hilo de ignición. En este sistema ajustamos el crisol de cuarzo,
separamos los dos lados del hilo de ignición, se toma la pastilla con unas pinzas se ubica
dentro del crisol, esta pastilla debe quedar encima del hilo de ignición y este a su vez debe
quedar separado. Se cierra el vaso de disgregación y se presuriza para que quede con 30
atm de presión. Ubicamos el vaso dentro del equipo. Damos en la Tecla F2 para incluir los
datos de medición, se ingresa el peso de la muestra, calibración 0, recipiente de

disgregación 1, Q ext 1 50, Q ext 2 0 presionamos la tecla F1 = OK. El equipo preguntará
si el depósito está lleno, y si desea cerrar la cubierta, la temperatura a trabajar debe ser de
22°C ± 3°C, además el calorímetro se trabaja con agua normal, y mostrará la temperatura
de inicio de prueba e, iniciará el análisis, tendrá un tiempo de 17 minutos, pasado este el
calorímetro mostrará el dato de energía en la pantalla. Se prosigue a abrir la cubierta del
equipo y se retira el vaso de disgregación. Se retira el seguro y se procede a sacar el
oxígeno (despresurizar) que queda dentro del vaso e disgregación, una vez hecho esto se
continúa destapando el vaso de disgregación. Se retira el crisol de cuarzo y observamos que
el hilo de ignición se ha quemado completamente. Se limpia correctamente el crisol de
cuarzo, y se seca los demás componentes del vaso de disgregación, una vez terminado todo
este proceso se debe vaciar el agua del depósito del calorímetro. (Natali, 2008)
1.3.10 Proteína Bruta
Para la realización de proteína bruta se escogió el método Kjeldahl el cual consta de tres
etapas fundamentales que son: Digestión o mineralización del nitrógeno, Destilación del
amoniaco y valoración del destilado. (Natali, 2008)
1. Digestión o mineralización
Tarar un vaso de precipitado de 25mL y dependiendo de la cantidad de nitrógeno teórico
que tenga la muestra se pesa exactamente 0,5000 o 1,0000 g en la balanza analítica, se
prosigue a colocar las muestras en tubos de digestión Kjeldahl y añadir las pastillas
catalizadoras y seguidamente 20mL de H2SO4 concentrado. Ubicar los tubos en el equipo
de digestión el cual debe estar conectado a un scrubber que es el encargado de recibir los
gases que se producen durante la digestión; si no se cuenta con el scrubber se puede utilizar
la campana extractora de gases para que cumpla esta función. La temperatura debe ser
alrededor de los 440°C, en este momento se da inicio al proceso de digestión que tiene un
tiempo estimado de dos horas, este tiempo varía dependiendo del tipo de muestra que se
trabaje ya que entre mayor contenido de nitrógeno tenga, puede emplear un poco más del
tiempo esperado. Cuando el líquido esté de color verde claro o azul se ha generado sulfato
de amonio y se da por finalizada la digestión, se retira del tubo de digestión y se deja
enfriar hasta temperatura ambiente.
2. Destilación del amoníaco.
A continuación, se lleva los tubos de digestión al equipo de destilación y se dispensan 20
mL de agua destilada para lograr la disolución total de los sulfatos y de restos del ácido
sulfúrico utilizado en la digestión y seguido se agrega lentamente 80 mL de solución de
hidróxido de sodio al 34%, para evitar salpicaduras. Para saber si el contenido dentro del
tubo de digestión está listo para su destilación, este debe tomar una coloración grisácea o
azul oscura. Se recoge el destilado en un vaso de precipitado de 600 ml que contiene 100ml
de ácido bórico con siete gotas del indicador mixto, esta mezcla tendrá un color violeta que
al ir destilando tomará una coloración verde, con todo listo, se procede a dar inicio al
equipo para que se realice la destilación, la cual tiene un tiempo estimado de cinco minutos.
El destilado se recoge como borato de amonio, retira el vaso con el destilado y se realiza la
valoración del borato de amonio con solución estándar de ácido sulfúrico
3. Valoración del destilado.
Se titula el destilado que es borato de amonio con una solución de ácido sulfúrico 0.1000N
hasta cambio de color del indicador mixto. El punto final de la titulación se da con el viraje
de la solución de verde a un color entre café oscuro o fucsia, anotar los mL de solución de
ácido sulfúrico sodio 0.1000N consumidos en la valoración.
Cálculo del porcentaje de nitrógeno total

(V × N × 0,014)
% N total= × 100
g muestra
1.3.11 Aminoácidos
La determinación y cuantificación de aminoácidos no solo es importante para estimar el
valor nutritivo de alimentos destinados a consumo humano y animal, sino que permite
relacionar la composición aminoacídica de la proteína con sus características de
funcionalidad tecnológica y biológica. Además, es creciente el número de aplicaciones
como la detección de posibles adulteraciones en alimentos y bebidas o la determinación de
aminoácidos, péptidos o derivados potencialmente tóxicos producidos por las nuevas
técnicas de procesado de alimentos.
1.3.12 Vitaminas Liposolubles
Las vitaminas A, D, E, K y los carotenoides activos de provitamina A están siendo
determinados principalmente utilizando HPLC. Ball ha escrito una amplia revisión de los
ensayos de vitaminas liposolubles en alimentos. (Willy, s.f.)
Saponificación y extracción
Para la saponificación de las vitaminas A, E, se utiliza muestras de aproximadamente entre
2 a 10 gr y para vitamina D 10 a 30g de la muestra. Se saponifican preferentemente bajo
nitrógeno utilizando una mezcla de etanol o metanol, agua, un antioxidante tal como ácido
ascórbico, hidroquinona, pirogalol o BHT e, hidróxido de potasio acuoso. El antioxidante
debería agregarse a la muestra antes de la adición de la solución de hidróxido de potasio
necesaria para la saponificación. Si ha de determinarse vitamina D3, se pipetea una cantidad
apropiada de estándar de vitamina D2 en la solución alcohólica dentro del frasco de

saponificación. La cantidad de estándar interno de vitamina D2 agregada deberá ser similar
a la cantidad de vitamina D3 esperada en la muestra y viceversa. El Cuadro 1 muestra un
ejemplo de la proporción de estos reactivos.
Cuadro 1. Proporción de reactivos para saponificación en vitaminas A, E, D.
VITAMINA A
PESO DE LA Alcohol (ml) Ácido ascórbico Hidróxido de potasio
MUESTRA(G)
2-5 50 (metanol) 0,25 g 5 ml (50%)
5-10 100 (etanol) 1,0 g (+ 0.04 Na2S) 12 g (+ 20 mi de agua)
10-20 150 (etanol) 1,0 g 50 ml (80%)
VITAMINA E
PESO DE LA Alcohol Ácido ascórbico Hidróxido de potasio
MUESTRA (G) (ml)
2-5 G 50 ml 0,25 g 5 ml (50%)
(metanol)
10 G 150ml 1,0 g 50 ml (60%)
(etanol)
5-10 G 100ml 1,0 g + 0,04 g 12 g + 20 ml de agua
(etanol) Na2S
VITAMINA D
PESO DE LA Alcohol (ml) Antioxidante Hidróxido de potasio
MUESTRA(G)
16 G 150 ml etanol 1 g pirogalol 30 g KOH + 75 ml H20

8G l00 ml etanol 1 g ascorbato 12 g KOH + 50 ml H20
sódico
24 G 90 ml etanol 0,5 g ácido 30 ml (60%)
ascórbico
El tiempo normal de saponificación de la vitamina A y E es de 15-45 minutos a diferencia
de la vitamina D que es aproximadamente 20-45 minutos con temperaturas que fluctúan de
80 a 100°C (reflujo). Las vitaminas son extraídas de la solución de saponificación por
medio de un solvente adecuado, por ejemplo, éter dietílico, tertbutil metil éter, n-hexano, 3
a 4 veces con volúmenes que fluctúan de 50-150 ml. Los extractos combinados son lavados
a pH neutro con agua (2-4 veces, 50-150 ml).
Evaporación y dilución
Se agregan aproximadamente 2-5mg de BHT al extracto antes de la evaporación
utilizando un evaporador rotatorio bajo un vacío parcial y a una temperatura que no exceda
50°C. Deben tomarse medidas para remover restos de agua tales como secar con sulfato de
sodio, o destilación azeotrópica con etanol o tolueno o el uso de papel filtro para separación
de fases. El residuo es redisuelto utilizando de preferencia la fase móvil u otro solvente
compatible con HPLC de tal modo de obtener una concentración apropiada para la
inyección dentro de la columna de HPLC. Esta la solución final de la muestra.
HPLC
Principalmente, pueden utilizarse dos modos de cromatografía (fase normal y fase
reversa) tanto para la cuantificación de las vitaminas. En tocoferoles el sistema de fase
normal tiene claras ventajas dado que todos los vitámeros son separados mientras que los
sistemas de fase reversa no separan β-tocoferol de y-tocoferol. La detección se realiza
preferentemente mediante fluorescencia debido a su mayor selectividad, a partir de las
múltiples posibilidades para lograr buenas separaciones. Los estándares y soluciones se
controlarán espectrométricamente en relación a la pureza y utilizar la concentración
corregida para el cálculo.
Para la vitamina D una alícuota del extracto de la muestra concentrada se inyecta en el
sistema HPLC semipreparativo y la fracción de la vitamina D es recogida vía corte de
bandas. La ventana de tiempo para el corte de banda debe haberse determinado previamente
utilizando una mezcla estándar de vitamina D y debería ser lo más angosta posible.
La fracción del corte de banda obtenida en la HPLC semipreparativa debe llevarse a
sequedad y redisolverse en un solvente compatible con la fase móvil del sistema
analítico de HPLC analítico. Se inyectan alícuotas de la solución obtenida y se identifican y
cuantifican los picos de vitamina D2 y D3 utilizando el método estándar interno. (En el
Cuadro 4 se presentan las condiciones de los dos sistemas). (Roche, 1988)
Condiciones de los sistemas de cromatografía para vitamina A
Para el sistema de fase Normal (FN) se debe tener los siguientes requisitos: Columna tipo
acero inoxidable; 125x4,0 nm, Fase estacionaria Lichrosorb Si 60(Merck); 5 μm, en fase
móvil n-hexano: 2-propanol (98:2), con Flujo de l,0ml/min, a una presión de 35 bar,
volumen de inyección de 20-50 μl, con detención de Fluorescencia; Em: 470 nm Ex: 325
nm. Con un tiempo de retención de aproximado a 6 min, un estándar estimado a 2 μg/ml
(6,6 Ul/ml) y para su cálculo reencuentro de área o altura. Ahora para el sistema de fase
reversa (FR) se debe tener en cuenta: Columna tipo Acero inoxidable; 250x4,0 nm, con
Fase estacionaria Hypersil ODS (Shandon) de 5μm y una fase de móvil de Metanol: H2O
(93:7), con Flujo de 0,8 ml/min, a una presión de 60 bar, el volumen de inyección es de 20
μl, con detención ultravioleta 325 nm. Con un tiempo de retención de aproximado a 5 min,
un estándar estimado a 2 μg/ml (6,6 Ul/ml) y para su cálculo reencuentro de área o altura
Condiciones de los sistemas de cromatografía para tocoferoles
Para el sistema de fase Normal (FN) se debe tener los siguientes requisitos: Columna tipo,
Acero inoxidable de 125x4,0 nm, con fase estacionaria tipo Lichrosorb Si 60 (Merck)
5 μm; en fase móvil con n-Hexano: Dioxano (97:3), Flujo de l,0 ml/min, a una presión de
35 bar, a un volumen de inyección de 20-50 μl, con detención de Fluorescencia Em: 292
nm; Ex: 330 nm; Con un tiempo de retención de α-tocoferol 5,4;β tocoferol 8,7; γ
tocoferol 9,7; δ-tocoferol 14,9 minutos respectivamente, a un estándar aproximado de
10 μg/ml α-tocoferol y para su cálculo reencuentro de área o altura. Ahora para el sistema
de fase reversa (FR) se debe tener en cuenta: Columna tipo Acero inoxidable de 125x4,0
nm; con Fase estacionaria Hypersil ODS (Shandon); 5 Î¼m; y una fase de móvil de
Metanol: H2O (98:2), con Flujo de 0,5 ml/min, a una presión de 60 bar, el volumen de
inyección es de 20 μl, con detención ultravioleta a 285 nm. Con un tiempo de retención de
α-tocoferol 12,0; β tocoferol 10,5; γ tocoferol 8,7; δ-tocoferol 5,4 minutos respectivamente,
un estándar estimado de 10 μg/ml α-tocoferol y para su cálculo reencuentro de área o altura.
Condiciones de los sistemas de cromatografía para vitamina D

Para el sistema de fase Normal (FN) se debe tener los siguientes requisitos: Columna tipo,
Acero inoxidable de 250x4,0 nm, con fase estacionaria tipo Lichrosorb Si 60 (Merck);
5 μm; en fase móvil con n-Hexano: 2-Propanol (95:5), Flujo de l,0 ml/min, a una presión de
70 bar, a un volumen de inyección de 500 μl, con detención de ultravioleta a 265 nm. Con
un tiempo de retención fracción de vitamina D: 17 minutos. Ahora para el sistema de fase
reversa (FR) se debe tener en cuenta: Columna tipo Acero inoxidable de Acero inoxidable;
250x4,0 nm; con Fase estacionaria VYDAC 201 TP 54; y una fase de móvil de
Acetonitrilo: Metanol (91:9), con Flujo de 0,8 ml/min, a una presión de 35 bar, el volumen
de inyección es de10 μl, con detención ultravioleta a 265 nm. Con un tiempo de retención
de Vitamina D2: 18; Vitamina D3: 21,5 respectivamente, un estándar estimado de 0,18 μ/ml
y para su cálculo método de estándar interno por medio de recuento de área o altura
Vitamina K
Digestión enzimática y extracción
Tres gramos de la muestra o 15,0 g de fórmula se suspenden en agua, buffer fosfato y 1 g
de lipasa. La mezcla es incubada durante 120 min. a 37°C. Se agrega 10 ml de etanol, el
estándar interno y 1 g de carbonato de potasio y se extrae la vitamina 2 veces con 15 ml de
hexano.
Evaporación y dilución
Los extractos combinados son concentrados utilizando un evaporador rotatorio bajo vacío
parcial y a una temperatura que no exceda 40°C. Deben tomarse medidas para remover
restos de agua tales como secar con sulfato de sodio, o destilación azeotrópica con etanol o
tolueno o el uso de papel filtro para separación de fases. El residuo es redisuelto en un
pequeño volumen de n-hexano (1,5-2,0 ml).
HPLC
Sistema semipreparativo
Un estándar de vitamina K1 es cromatografiado en el sistema HPLC semipreparativo y las
condiciones optimizadas de tal manera de obtener un tiempo de retención reproducible para
el pico de vitamina K1 y el pico de fenilacetato de colesterol en el rango de 2,0-4,5 minutos.
Sistema HPLC analítico
Una mezcla de estándar de vitamina K1 y fenilacetato de colesterol debe ser
cromatografíada en el sistema HPLC analítico y las condiciones cromatográficas ajustadas
hasta que se obtenga una resolución completa de los compuestos de interés.
Condiciones de los sistemas de cromatografía para vitamina K
Para el sistema de fase Normal (FN) se debe tener los siguientes requisitos: Columna de
módulo de compresión radial 8x10, con fase estacionaria Resolve Silica; 5μm; en fase
móvil con n-Hexano: 2-Propanol (99,9:0,1), Flujo de 2,0 ml/min, a un volumen de
inyección de 100-150 μl, con detención de ultravioleta a 269 nm. Con un tiempo de
retención de 2,0-4,5minutos. Ahora para el sistema de fase reversa (FR) se debe tener en
cuenta: Columna de Módulo de compresión radial 8x10; con Fase estacionaria Resolve
C18; 5 nm; y una fase de móvil de Metanol: 2-Propanol: Acetato de etilo: Agua
(450:350:145:135), con Flujo de 2,0 ml/min, y un volumen de inyección es de 20-50 μl,

con detención ultravioleta entre 269/277 nm. Con un tiempo de retención de Vitamina
K1 26; y un estándar interno de 42 minutos respectivamente, un estándar estimado de 2,5
ug/ml y para su cálculo método de estándar interno por medio de recuento de área o altura
1.3.1 VITAMINAS HIDROSOLUBLES
Vitamina B1 (Tiamina)
Extracción y desfosforilación
Pesar alrededor de 25 (g) está se hidroliza utilizando ácido sulfúrico 0,1 M durante 15 min
a 121°C. El pH de la mezcla enfriada se ajusta a 4,5 a través de la adición de buffer acetato.
Se agregan 500 mg de Takadiastasa y la suspensión se incuba al menos por 20 minutos a
45°C. Debe mencionarse que las condiciones de incubación dependen del tipo de enzima y
del lote utilizado, así como también del tipo de muestra y pueden variar considerablemente.
(Bell, 1984)
Purificación y reacción del tiocromo
El extracto puede ser purificado si es necesario a través de una columna de intercambio
iónico, como Amberlite CG 50 (100-200 mesh). La tiamina es retenida en el intercambio
iónico y luego es diluida con ácido clorhídrico 0,15 M. El diluido se ajusta a un volumen
definido con ácido clorhídrico (0,15 M). Alícuotas de esta solución se mezclan con
isobutanol, una solución de hidróxido de sodio (50%), una solución de hexacianoferrato de
potasio (5%) y se agita vigorosamente durante 60 segundos. En una serie paralela con los
mismos reactivos, se prepara un blanco bloqueando la reacción a través de la adición de
cloruro de benceno-sulfonilo. Se agrega cloruro de sodio después de la oxidación para

optimizar la extracción. Después de la centrifugación se toman 10 ml del extracto de
isobutanol, se mezcla con 0,5 ml de etanol y se mide la fluorescencia en contra del blanco.
Es importante seguir exactamente el protocolo para obtener resultados reproducibles.
c) HPLC (Derivatización en precolumna)
El tiocromo formado como se describió en el procedimiento anterior puede también
cuantifícarse utilizando HPLC. Este enfoque es de algún modo más fácil debido a que la
reacción es detenida por la adición de ácido, el tiocromo es purificado a través de una
extracción de fase sólida y el extracto obtenido medido por HPLC en un sistema de fase
reversa. (Bognar, 1981).
Condiciones cromatografía de la tiamina
Para la cromatografía se de realizar con una columna de acero inoxidable de 250x4,0 nm,
con una fase estacionaria de Bakerbond C8; 5 μm y una fase móvil de Buffer fosfato:
Metanol, 2-propanol (63: 27: 10), con un flujo de 0,8 ml/min y un volumen de inyección de
20 μl, para su detención se utiliza fluorescencia Ex: 366 nm; Em: 435nm con un tiempo de
retención aproximado a 5 minutos
Derivatización postcolumna
La cuantificación de la tiamina también puede lograrse utilizando un sistema HPLC de fase
reversa que separa en gran medida la tiamina de los otros componentes. En una etapa de
derivatización postcolumna se realiza la oxidación a tiocromo mezclando el eluyente con la
solución de ferricianato alcalino seguida por detección fluorescente

Vitamina B2 (Riboflavina)
Para la extracción de B2 se pesa 10 gr de muestra y se hace el mismo procedimiento
previamente realizado en la B1. (Bognar, 1981)
Precipitación y dilución
La mezcla acidificada es llevada a volumen con ácido sulfúrico 0,1M y es filtrada después
de mezclarla completamente. Una alícuota del filtrado es mezclada con volúmenes iguales
de metanol y luego centrifugada. Dos partes del sobrenadante transparente son diluidas con
una parte de agua e inyectada al sistema HPLC. Este tipo de preparación de muestra evita la
obstrucción de la columna por una posible precipitación después de la inyección. Es muy
importante proteger la muestra y los extractos de la luz. Toda la manipulación de la muestra
deberá realizarse en frascos de vidrio ámbar y las soluciones mantenerse en la oscuridad.
Condiciones de HPLC para riboflavina
Se debe contar con una columna de 250x 4,0 nm de acero inoxidable, con una fase
estacionaria de RP18 ejemplo Spherisorb (16) 5 μm y fase móvil de Metanol: H2O (35:65)
o (70:30) o mezclas de metanol con buffers o PIC B6, B7. Con detención de Fluorescencia
Ex:445-50 nm: Em: 525-30 nm
Piridoxina “B6”
La vitamina B6 es extraída de la muestra por hidrólisis ácida. Las condiciones
recomendadas por AOAC son HC1 0,44 M durante 2 h a 121°C para productos de plantas y
HC1 0,055 M durante 5 h a 121°C para productos animales. Debe mencionarse que la
hidrólisis ácida puede liberar vitámeros-B6 a partir de glucósidos y por lo tanto llevar a una
sobrestimación del contenido biodisponible. Después de la hidrólisis, las soluciones son
neutralizadas a un pH 5,0 con una solución de hidróxido de sodio. La dilución del extracto
se realiza con agua para obtener concentraciones de aproximadamente 100 ng/ml. (AOAC,
1990)
Microorganismo de ensayo y método
El microorganismo de ensayo, Saccharomyces carisbergensis es mantenido en un agar-
APT. El subcultivo es preparado por incubación hasta 24 h a 30°C en el medio de
fermentación que contiene B6. El medio de cultivo se utiliza para el ensayo (Laboratorios
Difco, Detroit USA). Los tubos se llenan con el medio (10 ml), y se agregan 25, 50 y 100
del extracto o de una solución estándar. Seis tubos para blanco no contienen ningún aditivo.
Los tubos son sometidos a un baño de vapor durante 10 minutos a 100°C. Después de
enfriarse, todos los tubos con excepción de 2 blancos son cada uno inoculados con 1 gota
de inóculo y luego incubados durante 16-18ha30°C.
Medición de la turbidez
La turbidez de la suspensión celular se mide a 580 mn después de mezclar bien. Para el
cálculo, se utiliza un estándar y se debe corregir el blanco.
Vitamina B12
La vitamina B12 es extraida de la muestra con agua o buffer a una temperatura de
aproximadamente 100°C durante 10-30 minutos con la adición de cianuro de potasio. El pH
del extracto se ajusta a 6 ya sea con hidróxido de potasio o ácido clorhídrico. La dilución
del extracto se realiza con agua para obtener concentraciones de aproximadamente 2
mg/ml.
Microorganismos de ensayo y método
El microorganismo de ensayo, Lactobacillus leichmanii es mantenido en un agar de cultivo
de Micro-Ensayo (Laboratorios Difco, Detroit USA; no. 031902). El subcultivo es
preparado por incubación hasta 16-18 h a 37°C en el medio de fermentación que contiene
B12 (caldo de micro inoculación (Difco no. 0320-02). El medio de cultivo Difco no. 0457-
15 se utiliza para esta prueba. Los tubos se llenan con el medio (10 ml), y se agrega 25, 50
y 100 μl del extracto o solución estándar. Seis tubos para blanco no contienen ningún
aditivo. Los tubos son sometidos a un baño de vapor durante 10 minutos a 100°C o
autoclavados durante 5 min a 121°C. Después de enfriarse, todos los tubos con excepción
de 2 blancos son cada uno inoculados con 1 gota de inóculo y luego incubados durante 16-
18 h a 37°C.
La turbidez de la suspensión celular se mide a 580 nm después de mezclar bien. Para el
cálculo se utiliza una curva estándar y se debe corregir el blanco.
Ácido Fólico
Extracción y de conjugación
El material (equivalente a aproximadamente 1 μg de ácido fólico) se mezcla bien con
buffer fosfato pH 6,1 y se autoclave durante 5 minutos a 121°C. Después de enfriar, se
agrega una solución de páncreas de pollo y se incuba durante 18 horasa37°C. La enzima es
desactivada ebulliendo la solución durante 5 minutos. Después de enfriar, la solución es
diluida a un volumen definido con una solución de ácido ascórbico 2% y filtrada. El
contenido estimado de ácido fólico en el extracto de muestra debiera corresponder a
aproximadamente 0,2-0,4 ng/100 μl.
El cultivo liofilizado del microorganismo de ensayo, Lactobacillus casei (NCIB 10463) es
suspendido en tubo de vidrio que contiene el medio (Medio ácido fólico L. casei Difco no.
0822 -15-9) y ácido fólico y se incuba durante 20 horas a 37°C (cultivo I). (Bell, 1984)
Una gota de este cultivo densamente turbio se traslada a un nuevo tubo que contiene 5,0 ml
del medio de ensayo y ácido fólico. Este tubo es nuevamente incubado durante 20 horas a
37°C (cultivo II). El medio de ensayo que contiene 20 mg de cloranfenicol por litro es
inoculado con 2 ml de cultivo II. Los tubos son llenados con el medio (4 ml), y se agregan
25, 50 y 100 μl del extracto o de la solución estándar. Seis tubos para blanco no contienen
ningún aditivo. Los tubos son incubados durante 23 horas a 42°C.
La turbidez de la suspensión celular se mide a 660 nm después de mezclar bien. Para el
Acido pantoténico
El material es agitado con agua durante 30 minutos a 37°C en un agitador. Si el material
contiene grandes cantidades de grasa, es recomendable remover los lípidos. Esto se realiza
agregando al agua, por ejemplo 20 ml de acetato de etilo. Se utiliza la capa acuosa para el
procedimiento posterior. El extracto acuoso es diluido a un volumen definido con agua y se
filtra. La leche en polvo y materiales similares son extraídos autoclavando la suspensión
acuosa a 100°C por 30 min. Después de enfriar, el pH se ajusta a 4,5 con ácido sulfúrico, se
diluye con agua a un volumen definido y se filtra. El pH de la solución filtrada se ajusta a
6,8 con hidróxido de sodio y se ajusta a un volumen definido. Esta solución es utilizada
para el ensayo microbiológico.
El microorganismo de ensayo Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) se hace crecer en un
caldo inóculo Bacto-Micro esterilizado (Laboratorios Difco Detroit USA; no. 0320-02)
durante 24 horas a 37°C. Se realiza una segunda transferencia del cultivo utilizando 6 ml
del medio e inoculando con 0,1 ml del primer cultivo. Este es el inóculo para el ensayo
(cultivo 2). Los tubos son llenados con el caldo de ensayo (Difco; medio de ensayo de
pantotenato no. 0604-15), se agregan volúmenes iguales de agua (5 ml a cada uno) y se
añaden 250, 500 y 1000 μl del extracto o de la solución estándar. (Bell, 1984)
Los tubos usados como blancos no contienen ningún aditivo. Los tubos son cubiertos y
esterilizados durante 10 minutos a 118°C. Después de inocular con 100 μl del cultivo 2 los
tubos son incubados durante 19 horas a 37°C. Luego, los tubos son sometidos a un baño de
vapor durante 5 minutos a 100°C para detener el crecimiento.
Biotina
Extracción y digestión enzimática
El material de ensayo es calentado en ácido sulfúrico 1M durante 30 minutos a 118°C. El
extracto es luego neutralizado a un pH de 7,5 con hidróxido de sodio 20% y diluido a un
volumen definido con agua. Las alícuotas (5-10 ml), esperando que contengan 5-30 ng de
biotina (0,1-0,6 ng/ml), son diluidas con una solución de papaína (10 mg/ml) a un volumen
de 50 ml e incubadas toda la noche (aproximadamente 18 h) a 37°C. La enzima es
desactivada autoclavando durante 10 minutos a 118°C. Luego el extracto es centrifugado,
filtrado y se utiliza la solución transparente para el ensayo microbiológico. La papaína
usada para el ensayo debe revisarse antes (compuestos que interfieren dan como resultado
un valor alto de blanco). (Frigg & Brubacher, 1976)
Microorganismos de ensayo y método
El microorganismo de ensayo Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) se hace crecer en un
caldo inóculo Bacto-Micro esterilizado (Laboratorios Difco Detroit USA; no. 0320-02)
durante 24 horas a 37°C. Una segunda transferencia del cultivo se realiza utilizando 6 ml
del medio e inoculando con 0,1 ml del primer cultivo. Este es el inóculo para el ensayo
(cultivo 2). Los tubos son llenados con el caldo de ensayo (Difco; medio de ensayo
Bactobiotin no. 419-15), se agregan volúmenes iguales de agua (5 ml a cada uno) y 250,
500 y 1000 μ del extracto o de la solución estándar. Los tubos usados como blancos no
contienen ningún aditivo. Los tubos son cubiertos y esterilizados durante 10 minutos a
118°C. Después de inocular con 100 μ del cultivo 2 los tubos son incubados durante 19
horas a 37°C. Luego, los tubos son sometidos a un baño de vapor 100°C durante 5 minutos
a para detener el crecimiento.
Acido nicotínico y nicotinamida (niacina)
Extracción y digestión enzimática
El material conteniendo aproximadamente 300 μg de niacina es hidrolizado en 125 ml de
ácido sulfúrico 0,1 M durante 15 minutos a 110°C. Después de enfriar, el pH se ajusta a 4,5
utilizando acetato de sodio, se agregan 500 mg de Takadiastasa y la mezcla es incubada
durante 20 minutos a 45°C. La solución es acidificada con 25 ml de ácido sulfúrico 30%, es
diluida a 250 ml con agua y filtrada. 50 ml del filtrado se acidifican con 1 ml de ácido
sulfúrico 30% y se agrega gota a gota (2-6 ml) de una solución de permanganato de potasio
3% hasta que permanezca el color rosado. El exceso de permanganato es destruido por la
adición de una solución de peróxido de hidrógeno 3% hasta que desaparezca el color
rosado. Se suspende 1 g de sílice tratada (tierra de diatomeas) con 25 ml de la solución
oxidada, se agita vigorosamente durante 1 minuto, se centrifuga y se deja decantar. El
niacina absorbido en la sílice tratada es lavado con 25 ml de ácido sulfúrico 0,1 M, se
centrifuga y se deja decantar. Se agregan 25 ml de hidróxido de potasio 0,5 M, se agita

durante 1 minuto y se centrifuga. Se colocan 20 ml del sobrenadante en un vaso
precipitado, se cubre con un vidrio de reloj y se calienta durante 10 minutos en una
autoclave a 110°C para hidrolizar la nicotinamida a ácido nicotínico. La solución enfriada
se ajusta a un pH de 4,5 con ácido clorhídrico (0,1 M), se transfiere a un matraz
volumétrico de 50 ml y se agregan 3 ml de una solución de bromuro de cianógeno 3% y se
ajusta a volumen con agua. (Frigg & Brubacher, 1976)
Precaución: no inhalar el vapor de esta solución. Tomar todas las precauciones necesarias
para trabajar con compuestos tóxicos.
El matraz se coloca en un baño de agua durante 10 minutos a 75-85°C, y se enfría a
temperatura ambiente. 10 ml de la solución se pipetean en la cubeta del fotómetro, se
agrega 1 ml de ácido clorhídrico 1M y el espectrómetro se ajusta a absorbancia cero. Se
agrega 1 ml de una solución de procaína 5% (5 g en 100 ml de HC1 1M), se mezcla y se
mide la absorción dentro de 15-20 segundos a 420 nm.
En una serie paralela, la muestra es “spiked” con aproximadamente la misma cantidad de
ácido nicotínico (300 μg) como estándar interno.
Para su cálculo se debe tener en cuenta la siguiente formula:
A*N*100/(Z-A)*W*1000= mg de ácido nicotínico/100g muestra
Donde: A: absorbancia de la muestra; Z: absorbancia de la muestra + estándar
interno; N: cantidad de ácido nicotínico como estándar interno en μg; W: peso de la
muestra en g.
Vitamina C
Extracción
Extraer (1-5 g) con 25-50 ml de ácido metafosfórico 0,5% que contiene ditiotreitol 0,2%
(DTT) utilizando un homogeneizador o mediante agitación. Después de la centrifugación,
el extracto es diluido con buffer acetato pH 4,8 que contiene DTT 0,2%, se filtra usando un
filtro de 0,45 μm y se inyecta en el HPLC.
Condiciones de cromatografía para ácido ascórbico
Se debe contar con columna de acero inoxidable 250x4,0m, con fase Hypersil ODS
(Shandon), 5 μm; y en fase móvil con Buffer acetato”: Metanol: Agua (15:40:945), a un
flujo de 0,8 ml/min, con presión de 90 bar, y su volumen de inyección entre 10-20 μl, con
detención de ultravioleta a 254 nm. Con un tiempo de retención de 6 a 8 minutos. A un
estándar estimado de 10 μg/ml y para su cálculo se utiliza el método de estándar externo
por medio de recuento de área o altura. Con un Buffer acetato:36,8 g de acetato de
sodio*3H20 disueltos en 800 ml de agua, 101 ml de ácido acético, pH ajustado a 3,8 y
diluido a 1000 ml con agua.
1.3.2 Equipos para análisis instrumental de alimentos
 GC con detector de FID para análisis de Ácidos grasos
 HPLC con detector UV-Vis & Fluorescencia y derivatización Pickering para análisis
de Aminoácidos.
 NIRS- espectroscopia.
NOTA: Se requiere aire acondicionado Tipo Cassette 36000 BTU/H Equipo o material
Tabla1. Área de vidriera
AREA DE VIDRIERIA
Cantidad Equipo o Material
1 Equipo de osmosis inversa
2 gabinetes para almacenamiento de vidriera
4 Macropipeteadores
2 ventiladores de pared
NOTA: Mesones de trabajo con gabinetes en madera y sus respectivas divisiones con
puerta.
Tabla2. Equipos de análisis de fibra
AREA DE ANALISIS DE FIBRA
Cantidad Equipos
2 Extractores de fibra de seis puestos
1 Analizador de fibra automático
2 planchas calefactoras de vitrocerámica
2 planchas de calentamiento y agitación
2 bombas de vacío
2 baños serológicos
1 Cabina extractora de gases
NOTA: se requiere aire acondicionado tipo mini Split 18000 BTU/H, mesones de trabajo
con gabinetes en madera y sus respectivas divisiones con puerta.
Tabla3. Material de Laboratorio para análisis de Fibra

MATERIAL DE LABORATORIO
Cantidad Material Cantidad Material
10 vasos precipitado 2000 mL. 10 vasos precipitado 1000 mL.
10 vasos precipitado 600 mL. 10 vasos precipitado 250 mL
10 vasos precipitado 100 mL 10 Vasos precipitados 50 ml
10 Vasos precipitados 25 ml 10 Probetas 25 ml
10 Probetas 50 ml 10 Probetas 100 ml
10 Probetas 250 ml 10 Probetas 500 ml
10 Probetas 1000 ml 4 Kitasato con desprendimiento
lateral 1000 mL
10 Embudos de vidrio 4 Kitasato con desprendimiento
lateral 2000 mL
4 Embudo buchnner 1200 mm 10 Agitadores de vidrio
5 Agitadores magnéticos 10 vaso polietileno 100 mL
30 crisoles de filtración porosidad 30 crisoles gooch porosidad #1
#1 capacidad 75 mL (Vidrio)
20 balones fondo redondo cuello 10 mortero de porcelana tamaño
largo 100 mL mediano
10 mortero de porcelana tamaño 10 Erlenmeyer 2000 Ml
grande
5 Frasco lavador
Tabla4. Equipos de área de secado y calcinación
AREA DE SECADO Y CALCINACION
Cantidad Equipo Cantidad Equipo
1 Horno de secado Memmert 2 Hornos de secado Memmert UN
UN750 260
1 Micromolino 2 Horno mufla Capacidad 5 L
2 horno microondas grandes
Tabla5. Material de Laboratorio para secado y calcinación
MATERIAL DE LABORATORIO
Cantidad Material de Laboratorio Cantidad Reactivos (Merck)
30 Capsulas de porcelana tamaño 4 kg Silica gel
mediano
3 Espátula 1kg Sacarosa grado reactivo
3 Pinzas para laboratorio 1kg Cuarzo
30 Crisoles de porcelana 1kg Caolín
NOTA: Se requiere aire acondicionado tipo mini Split 24000 BTU/H, mesones de trabajo
Tabla6. Equipos para almacenamiento de reactivos
ALMACENAMIENTO DE REACTIVOS
Cantidad Equipos o Materiales

1 Campana de extracción para productos químicos
1 AOAC (official methods of analysis of AOAC international, 20th edition
2016)
1 Gabinete reactivos acidos- bases.
1 Gabinete liquido inflammable
NOTA: Se requiere aire acondicionado tipo mini Split 18000 BTU/H , mesones de trabajo
Tabla7. Equipos para área de pesaje
AREA DE PESAJE
2 Balanzas analíticas +/- 0,0001 g
1 Determinador de humedad
1 Pesas de calibración
1/2
19 Juego de Tarnices 3´´(75 mm),2 ´´(63 mm), 2´´(50 mm), 1 1/2´´(37,5 mm),
1´´(25 mm), 3/4´´(19 mm), 1/2´´(12,5 mm), 3/8´´(75 mm), ´´(9,5 mm),1/4
´´(6,3 mm), No. 4 (4,75 mm),8 (2,36 mm), 10 (2 mm),16 (1,18 mm), 20 (850
um), 30 (600 um), 40 (425 um), 50 (300 um), 60 (250 um)
NOTA: Mesones de trabajo con gabinetes en madera y sus respectivas divisiones
con puerta.
Tabla8. Equipos para área de calidad de agua
AREA CALIDAD DE AGUA

Cantida Material/Equipo Cantidad Material/Equipo
1 Multiparámetro 1 Oxímetro
1 pH-metro portátil 1 Sacarosa grado reactivo
1 Medidor de conductividad portátil 1 Espectrofotómetro UV-VIS Marca
HACH (Pruebas de nitritos, nitrato,
amonio, nitrógeno)
1 pH- metro de mesa 1 Refractómetro
1 Kit de análisis de agua (maletín
HACH)
Tabla9. Reactivos para análisis de agua
REACTIVOS (Marca Merck)
Cantida Nombre Comercial Cantidad Nombre Comercial
1 Sulfito de sodio 1 Solución Buffer pH 4,00
1 Solución Buffer pH 7,00 1 Solución Buffer pH 10
1 Cloruro de potasio 3M 1 Solución Certipur KCL 1412 us/cm
1 EDTA 1 KG 1 Refractómetro
1 Kit de análisis de agua (maletín 1 KIT HACH (Nitraver, nitriver,

HACH) Nessler, alcohol polivinil)
Tabla10. Equipos para determinación de proteína
AREA DE DETERMIANCION DE PROTEINA
1 Digestor automático de 20 puestos marca Buchí
1 Plancha de calentamiento con agitación
1 Unidad de destilación marca Buchí
1 Scrubber marca Buchí
Tabla11. Materiales de vidriera para análisis de proteína
MATERIAL DE VIDRERIA
20 Erlenmeyer 500 ml boca ancha 20 Erlenmeyer 250 ml boca ancha
20 Erlenmeyer 1000 ml boca ancha 10 pipetas volumétrica 25 ml tipo A
10 pipetas graduadas 5 ml tipo A 10 pipetas volumétrica 50 ml tipo A
5 bureta 50 ml tipo A 5 soporte para bureta con respectiva pinza
10 balón aforado 25 ml tipo A 10 balón aforado 50 ml tipo A
10 balón aforado 2000 ml tipo A

Tabla12. Reactivos a utilizar para análisis de proteina
REACTIVOS (Marca Merck)
10Kg ácido bórico 300 Pastillas catalizadoras Kjeldahl
20Kg hidróxido de sodio comercial 100 Gr Acido nicótico
1 Verde de bromocresol
Tabla13. Equipos para determinación de grasa
AREA DETERMINACION DE GRASAS
Cantida Equipo Cantidad Equipo
2 Extractor de soxhlet 6 puestos 1 Extractor soxhlet automático
marca E&Q tamaño del balón de
250 ml
1 Rotavapor Dynamic pro marca 4 (cajas) Cartuchos de celulosa 25*100 caja de
Buchi unidades
Tabla14. Reactivos a utilizar para determinación de grasa
Reactivos (Marca Merck)

10 L Éter de petróleo 10 L bencina de petróleo
1Kg Acido esteárico 1L n-Hexadecano
Tabla15. Equipos para área de concentrados
AREA DE CONCENTRADOS
Cantida Equipo Cantidad Equipo
2 balanzas con tablero para materias 1 Extrusora
primas capacidad de 5 kg
1 Pelletizadora 1 Molino de carne
1 Molino de martillos
NOTA: Se requiere aire acondicionado tipo mini Split 18000 BTU/H y aire acondicionado
tipo Cassette 36.000BTU/H, mesones de trabajo con gabinetes en madera y sus respectivas
divisiones con puerta.
Tabla16. Materiales necesarios para el área de concentrados
MATERIAL DE VIDRERIA
5 probetas plásticas 1000 ml 5 probetas plásticas 2000 ml
10 vasos de polietileno 100 ml 10 vasos de polietileno 50 ml
10 poncheras plásticas de diferente 20 bandejas de aluminio para secado de

tamaño material
5 Palas para pesaje
Tabla17 Equipos para área de residuos
AREA DE RESIDUOS DE MATERIAL
Cantidad Equipo/Material
1 Enfriador tipo botellero
6. DISEÑO METODOLÓGICO
6.1. Población y muestra.
Análisis a las materias primas con que se elaboraran concentrados durante el primer
semestre del 2020, de igual manera los concentrados realizados en la planta por parte de los
estudiantes con el fin de corroborar si cumplen con las características que ofrecen los
mismos, además la elaboración de cotización de equipos y materiales para el laboratorio de
análisis y alimento.
Se trabajará con las diferentes muestras que ingresen al laboratorio de nutrición y se
apoyará en los análisis de las investigaciones que se realicen en el laboratorio con
estudiantes y docentes
6.2. Planteamiento de la práctica
Se realizará un inventario de equipos y materiales presentes en el laboratorio de nutrición
animal y se complementará con un manual de usuario sobre sus funciones y manejo dentro
del complejo con la finalidad de evitar accidentes o daños de los mismos.
De igual manera, se acompañará continuamente en las actividades desarrolladas en el
laboratorio de Nutrición Animal, y se pondrán en práctica para analizar las materias primas
con las que se trabajan en la planta de concentrados, y los concentrados que se realicen
durante el primer semestre del 2020, para poder evaluar la calidad de los mismos.
Se realizó la cotización de equipos y materiales para nuevo laboratorio de análisis de
alimentos del edificio de ciencia animal
6.3. Apoyo a las actividades realizadas en el laboratorio
Se dará apoyo a los docentes encargados de las asignaturas de Nutrición de Monogástricos
y Nutrición de Rumiantes y a la asistente encargada del laboratorio, en cada una de las
prácticas realizadas ya sea académicas o de laboratorio con análisis bromatológicos (MS,
Cz, EE, FDN, FDA, celulosa, lignina), también a los trabajos de extensión e investigación
por parte de los planes de estudios de la Facultad de Ciencias Agrarias y del Medio
Ambiente, en la realización de las prácticas de análisis bromatológicos desarrolladas en el
laboratorio de nutrición animal que sean solicitadas durante esta práctica profesional
AGREGAR UN FLUJOGRAMA CON LAS ACTIVIDADES QUE SE VAN A
DESARROLLAR
7. Participantes en este proceso
1. Camilo Ernesto Guerrero A, docente de la asignatura N. de Monogástricos, con quien se
realizan análisis de bromatología a los concentrados que se elaboren en la planta para
alimentación de los animales de la finca San Pablo, a las cuales se les debe determinar
MS, cenizas, FDN, FDA, FB, EE, lignina y celulosa.
2. Diana Nataly Galvis M, asistente del Laboratorio de Nutrición Animal y Análisis de
Alimentos quien brinda información sobre cada actividad y dirige las prácticas
bromatológicas realizadas.
3. Luis Fernando Escalante R, docente de la asignatura N. de Rumiantes con el cual se
trabajan dos muestras de diferentes pastos a las cuales se les debe determinar MS,
cenizas, FDN, FDA, FB, EE, lignina y celulosa.
8. RECURSOS DISPONIBLES (Materiales, institucionales y financieros)
8.1. Materiales:
Inventario de equipos, materiales y reactivos; así como carpetas de ingresos, prácticas y uso
de cada uno de los equipos con los que cuenta el laboratorio.
8.2. Institucionales
Las actividades que se realizaran durante la práctica profesional se llevaran a cabo en el
laboratorio de nutrición animal, inscrito a la facultad de ciencias agrarias y del medio
ambiente de la UFPS sede campos Elíseos. En la cual cuenta con un área de 85m2 (8,70 de
ancho por 9,80 de largo). La edificación cuenta con una oficina que brinda servicio de
internet, desde donde se realizaran actividades de investigación y búsqueda de artículos, y
herramientas que favorezcan en el desarrollo de este trabajo.
8.3. Financieros
4. Recursos propios:
5. Transporte $ 432000
6. Papelería $100.000
7. Objetos personales $150.000
8. Alimentación $400.000
9. Cronograma
FEB MARZO ABRIL MAYO JUNIO JULIO
S S S S S3 S4 S S S S S S S S S S S S S S S S
1 2 1 2 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Inducción al
laboratorio
nutrición
animal
Inducción al
laboratorio
ciencia
animal
Diagnóstico
del
laboratorio
ciencia
animal
Elaboración
de cotización
de
Equipos/mate
riales
Análisis
bromatológic
os
Revisión
literaria
Análisis de
resultados
discusión de
resultados
conclusiones
entrega y
sustentación
otras
actividades
10. Bibliografía
AOAC. (1990). Offical methods of Analysis. 15 .
Bell, J. (1984). Microbiological assay of vitamins of the B-group in foodstuffs.
Bognar, A. (1981). Determination of thiamine and riboflavin in food by using HPLC.
Alemania.
Duvan, F. R. (Noviembre de 2019). ACOMPAÑAMIENTO EN LAS ACTIVIDADES
DESARROLLADAS EN EL LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL Y LA
ELABORACIÓN DE LAS HOJAS DE SEGURIDAD DE LOS REACTIVOS DEL
COMPLEJO PECUARIO DE LA UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA
SANTANDER SEDE CAMPOS ELISEOS MUNICIPIO LOS PATIOS. Cucuta,
Colombia .
Frigg, M., & Brubacher, G. (1976). Biotin deficiency in chicks fed a wheat-based diet. En
Vitamin and Nutrition (págs. 314-321).

Irma Tejada de Hemández, J. M. (s.f.). EMPLEADOS, ANALISIS BROMATOLOGICO DE
ALIMENTOS. Tecnica pecuaria.
Natali, V. D. (2008). INSTRUCTIVO DE PRACTICAS ACADEMICAS DEL
LABORATORIO DE NUTRICION ANIMAL Y ANALISIS DE ALIMENTOS.
Cucuta, Colombia .
Roche, G. (1988). Analytical methods for vitamin and carotenoides in feed.
Tatiana, A. A. (Noviembre de 2017). USO Y APLICACION DE LAS NORMAS DE
ESTANDARES DE CALIDAD, PARA LAS NECESIDADES DEL
LABORATORIO DE NUTRICCION ANIMAL Y ANALISIS DE ALIMENTOS
UFPS. Cucuta, Colomiba .
Willy, S. (s.f.). Analisis de Vitaminas .

David - Anteproyecto - Coregido 11052020

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APOYO A LAS ACTIVIDADES DEL LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL

Y ACOMPAÑAMIENTO EN LA PROYECCIÓN DE ADQUISICIÓN DE EQUIPOS

DEL NUEVO LABORATORIO DE ANALISIS DE ALIMENTOS DEL EDIFICIO

DE CIENCIA ANIMAL DE LA UFPS SEDE CAMPOS ELISEOS, MUNICIPIO LOS

LUIS DAVID GOMEZ BLANCO

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE

PLAN DE ESTUIDOS DE INGENIERIA PECUARIA

ACOMPAÑAMIENTO EN LA PROYECCIÓN DE ADQUISICIÓN DE EQUIPOS DEL

NUEVO LABORATORIO DE ANALISIS DE ALIMENTOS DEL EDIFICIO DE CIENCIA

ANIMAL DE LA UFPS SEDE CAMPOS ELISEOS, MUNICIPIO LOS PATIOS

LUIS DAVID GOMEZ BLANCO

CAMILO E. GUERRERO ALVARADO

Docente Asignatura Práctica Profesional

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE

PLAN DE ESTUDIOS DE INGENIERÍA PECUARIA

SAN JOSE DE CÚCUTA

2.1.1. Planteamiento del problema.........................................................................................6

2.1.2. Formulación del problema............................................................................................7

4.1. Objetivo general.....................................................................................................................8

4.2. Objetivos específicos..............................................................................................................9

5.1 Marco Conceptual................................................................................................................11

5.2. Marco contextual..................................................................................................................12

5.3 Marco Teórico......................................................................................................................12

6.1. Población y muestra.............................................................................................................28

6.2. Planteamiento de la práctica.................................................................................................28

7. Participantes en este proceso................................................................................................29

8. RECURSOS DISPONIBLES (Materiales, institucionales y financieros).............................30

nutricionales de distintas especies, en el cual esta aferrado a sus estados fisiológicos de

instalaciones las características bromatológicas de diferentes productos que se usan para la

alimentación de nuestros animales en los diferentes sistemas de producción existentes.

El laboratorio de nutrición animal adscrito al programa de Ingeniería Pecuaria, se

encuentra localizada en la Sede Campos Elíseos perteneciente a la Universidad Francisco

de Paula Santander Municipio de Los Patios.

Dentro del laboratorio se evalúan análisis bromatológicos de muestras

especialmente para uso de nutrición animal con el fin de determinar composiciones

asignaturas de Nutrición de Monogástricos, nutrición de Rumiantes, de igual manera

servicios de extensión, con referencia a análisis nombrados anteriormente, y brindar

asistencia en trabajos de investigación a los planes de estudio pertenecientes a la facultad.

Con la ayuda de análisis bromatológico se podrá conocer:

Observar su estado de higiene y toxicológico

Medición de la dieta de los animales, con base a sus regímenes alimenticios

Analizar alteraciones y/o contaminantes.

podrá mejorar los niveles nutricionales, salud, y economía.

Los equipos a utilizar en el laboratorio de análisis de alimentos serán de mucha utilidad

debido a la incorporación de nuevos equipos que no se contaban en el laboratorio de

muestras, entre otros.

El objetivo de la presente práctica profesional, será apoyar las diferentes actividades

que se llevan a cabo en el laboratorio de nutrición animal en cuanto a realización de análisis

bromatológicos, elaboración del manual de usuario tanto para el laboratorio de nutrición,

como para el laboratorio de análisis de alimentos, el cual contendrá funciones, capacidades,

condiciones ambientales y manejo de los equipos dentro de dichos laboratorios y la

cotización de equipos y materiales necesarios para el nuevo laboratorio de análisis de

APOYO A LAS ACTIVIDADES DEL LABORATORIO DE NUTRICIÓN ANIMAL Y

ACOMPAÑAMIENTO EN LA PROYECCIÓN DE ADQUISICIÓN DE EQUIPOS DEL

NUEVO LABORATORIO DE ANÁLISIS DE ALIMENTOS DEL EDIFICIO DE

CIENCIA ANIMAL DE LA UFPS SEDE CAMPOS ELÍSEOS, MUNICIPIO LOS

2.1.1. Planteamiento del problema

En el laboratorio de nutrición animal se elaboran diversos tipos de análisis con el

estudiante no se encuentra capacitado para el manejo de los equipos. Con el manual se

en el peor de los casos un accidente.

Gracias al moderno laboratorio de análisis de alimento del edificio de ciencia animal