INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA MICROBIANA

Práctica 1:

AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE
MICROORGANISMOS DE INTERÉS
INDUSTRIAL

Grupo: 8QV2
SECCIÓN 1 EQUIPO 4
Integrantes:
Hernández Castillo Moisés Isaac

Zamudio Sanchez Leisdy Evelin

Avila Mena Luis Eduardo

Mejia Morales Aketzali

Arreguin Gonzalez Yolanda

 OBJETIVOS

● Aislar microorganismos de interés industrial a partir de muestras obtenidas de

diferentes ambientes y condiciones.
● Seleccionar microorganismos de interés industrial que cumplan con los
criterios de selección primaria.
● Seleccionar microorganismos proteolíticos y proteolíticos halofílicos con base
en el cumplimiento de los criterios de selección buscados.
● Seleccionar microorganismos degradadores de colorantes con base en la
presión de selección.
● Aislar microorganismos productores de ácidos orgánicos.
● Aislar levaduras para producción de biomasa.
● Obtener la concentración óptima de NaCl de los amilolíticos halofílicos.
● Visualizar los halos de inhibición con la ayuda de Lugol.

RESULTADOS:
PRODUCTORES DE ÁCIDOS ORGÁNICOS.

Fuente de M.O. aislado Medio de Presión de Criterio de Selección 1° y

Aislamiento cultivo selección selección 2°

Queso de Medio Foster pH 4-5 Vire del 1.- Crecimiento

puerco Hongo más Incubación a indicador en en carbono
Filamentoso carbonato 28°C el medio 2.- Halo de
Aguacate solubilización
Malteada
Tabla 1. Resultados de aislados de hongos productores de ácidos orgánicos.

Halo de
solubilización

Figura 1.- Hongo de aguacate Figura 2.- Hongo de queso de Figura 3.- Hongo de malteada
puerco

Morfología colonial: Morfología colonial: Morfología colonial:

 DEGRADADORES DE COLORANTES.

Fuente de M.O. aislado Medio de Presión de Criterio de Selección 1° y

Aislamiento cultivo selección selección 2°

Medio Colorante colonias con 1.- Observación

Suelo Bacteria Mineral Azoico Halo de de actividad
Líquido 200 ppm inhibición o metabólica en
del mismo el medio
color del 2.- Halo de
medio inhibición por
degradación
del colorante
Tabla 2. Resultados de aislados de degradadores de colorantes.

LEVADURAS.

Fuente de M.O. aislado Medio de Presión de Criterio de Selección 1° y

Aislamiento cultivo selección selección 2°

Jitomate Visualización 1.-

por tinción Visualización
Papaya Crecimiento de Gram o de Morfología
Levadura Medio SDA a pH 5 Azul de colonial por
Plátano Algodón tinción
2.- Crecimiento
de colonias en
Queso de diferentes
puerco fuentes de
carbono y
sustratos
 Tabla 3. Resultados de aislados de levaduras.

Figura 4. Presencia de un halo de inhibición en el medio. Figura 5. Placa sin presencia de halo en el medio

PROTEOLITICOS Y PROTEOLÍTICOS HALOFÍLICOS.

Fuente de M.O. aislado Medio de Presión de Criterio de Selección 1° y

Aislamiento cultivo selección selección 2°

1.- Colonias
Fuente de con halo de
carbono / Prueba de Inhibición
Queso de Bacteria Medio MEH Fuente de lugol positiva transparente
puerco carbono con 2.- Crecimiento
sal de colonias en
diferentes
concentracione
s de sal.
Tabla 4. Resultados de proteolíticos y proteolíticos halofílicos

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE AMILOLÍTICOS Y AMILOLÍTICOS HALOFÍLICOS.

Placa Equipo Muestra AER

5% 15% 20%

1 2 Queso crema 4 3 1.2

2 1 Agua de flores 2.5 2.5 3

3 4 Malteada 0 0 0

4 4 Plátano 0 0 0
5 1 Queso de puerco 0 0 0

6 2 Leche 10 2.5 2.8

7 2 Leche 0 0 0

8 4 Queso de puerco 5.6 2.8 3.8

Tabla 5. Resultados de actividad enzimática de amilolíticos y amilolíticos halofílicos

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Productores de ácidos orgánicos:

Para el aislamiento de estos microorganismos se obtuvieron muestras de queso de
puerco, aguacate y malteada, donde se buscó obtener un aislamiento de cada uno
que cumpliera con la presión de selección en la cual observamos el viraje del color
en el medio Foster para aislamiento debido a que el indicador verde de bromocresol
cambió de azul a amarillo para aquellos microorganimos que son productores de
ácidos orgánicos y, por lo tanto, también observamos hongos filamentosos, en el
medio Foster con carbonatos después de incubarse más tiempo del indicado,
debido a que estos suelen ser de crecimiento lento.
Posteriormente se realizó la selección secundaria mediante la observación del halo
de solubilización en el medio alrededor de la colonia y con esto poder confirmar que
se realizó el aislamiento de microorganismos que producen ácidos orgánicos. Estos
hongos filamentosos necesitan mayor tiempo de incubación pero, como se muestra
en la figura 3, podríamos afirmar que no se obtuvo el resultado esperado debido a
que no se observa a detalle ya que creció en exceso, por lo cual es muy importante
el monitorear las muestras y su incubación para poder observar sin problema los
resultados obtenidos y, si se llega a presenciar el halo de solubilización como en el
caso de la placa en la figura 2.

Levaduras:
La obtención de levaduras en fuentes naturales se logró mediante muestras de
jitomate, papaya, plátano y queso de puerco, esto gracias a que la exposición
prolongada al medio ambiente y su estado de descomposición permitió el
crecimiento de estos microorganismos. Su aislamiento mediante placa basado en
los criterios de selección para las levaduras se basa en el crecimiento y observación
de las morfologías utilizando azul de algodón además de una tinción de Gram para
poder comprobar que el cultivo sea puro y se hayan aislado únicamente levaduras y
no cualquier otro microorganismo que no es de interés.
El proceso industrial para la producción de biomasa de levaduras, consiste en la
propagación de las levaduras de un cultivo en agar a su propagación en
biorreactores, incrementando el volumen en cada fase de propagación. Las
levaduras tienen una amplia aplicación en la biotecnología y son los
microorganismos más utilizados en la investigación médica y en la industria. Uno de
los usos tradicionales de las levaduras es la fermentación, mediante la cual se
pueden obtener bebidas, alimentos y proteínas, entre otros productos (Mejía-
Barajas, et. al. 2016).

Proteolíticos y proteolíticos halofílicos:

Para poder aislar estos microorganismos, las proteasas son universales en
existencia en todos los organismos y son necesarias para
las actividades metabólicas de la célula. Además, las proteasas son las enzimas
hidrolíticas primordiales ampliamente utilizadas en el sector industrial que
representa ~ 65% del mercado mundial de enzimas. (Mokashe, 2018)
Los microorganismos dedicados a la producción de enzimas llamadas proteasas se
dedican a la hidrólisis de las proteínas, es decir, un péptido. El medio utilizado
estaba adicionado con leche, para poder extraer la caseína, la cual ocupa el 80%
del total de proteínas presentes en la leche.
La caseína es una fosfoproteína, lo cual significa que está químicamente unida a
una sustancia que contiene ácido fosfórico, la mayoría de los grupos fosfato están
unidos por los grupos hidroxilo de los aminoácidos serina y treonina La caseína en
la leche se encuentra en forma de sal cálcica como caseinato cálcico; por tanto, el
nombre real del medio es Casinato cálcico agar. (Guevara, et. al., 2014)
Los microorganismos proteolíticos realizan la hidrólisis del enlace peptídico en el
interior de la proteína. Su clasificación se basa de acuerdo al tipo de aminoácidos
que constituyen su sitio activo, así como a la presencia de metales en el mismo, por
lo que se han descrito cuatro grupos: serín-proteasas, aspartíl-proteasas, cisteín-
proteasas y metalo-proteasas (Vigueras, 2019).

Amilolíticos y amilolíticos halófilos:

Existen diversas maneras del uso de la biotecnología que requieren de la
producción de ciertas enzimas que ayudan y facilitan este proceso como lo son las
amilasas, las cuales son enzimashidrolasas que ayudan a digerir los carbohidratos,
catalizando la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 entre las unidades de
glucosa al digerir el glucógeno y el almidón para formar fragmentos de glucosa
(dextrinas, maltosa) y glucosa libre. Por ello se requiere de su producción en
grandes cantidades y se contemplan a las bacterias para producirlas, sinembargo
como mencionan (Olicon-Hernández & col, 2022) antes de colocar un plásmidopara
la hiperproducción de amilasa en biorreactores de algunas bacterias, primero es
necesario seleccionar, aislar y conocer el potencial biotecnológico de estos
microorganismos, ahí es donde radica la importancia de los fundamentos
biotecnológicos.
Con la presión de la selección, también es posible enriquecer comunidades
microbianas que posean la actividad deseada.
En nuestro caso, la Tabla 5, muestra los resultados obtenidos de dicho aislamiento
y, mediante el crecimiento en los medios adicionados con sal, podemos observar
que las placas 1, 2, 6 y 8 tuvieron un crecimiento favorable y, en relación a su
actividad enzimática concluimos que los microorganismos aislados son únicamente
amilolíticos, debido a que si fueran halófilos, no habríamos obtenido un crecimiento
en un medio que no contenga sal ya que estos necesitan de ella para poder crecer.

Degradadores de colorantes:
Durante el desarrollo experimental no se aisló ningún microorganismo degradador
de colorantes, esto se debió a varios factores como el analista,la selección de la
muestra a examinar o el microorganismo que estaba presente y no logró su
crecimiento para poder aislarse y seguir con la metodología.
La importancia de la degradación de los colorantes es un problema ambiental, ya
que este tipo de compuestos no puede eliminarse con los métodos de tratamiento
convencionales.
La biodegradación de colorantes se lleva a cabo mediante distintos procesos. Se
pueden utilizar cultivos mixtos que contengan dos grupos generales de especies, el
primero conformado por organismos que no participan en la degradación del
colorante, pero que estabilizan el consorcio microbiano, y un segundo grupo que
incluya a las especies involucradas en el rompimiento del grupo funcional de la
molécula y la transformación de los productos metabólicos resultantes. Otra manera
de llevar a cabo la biodegradación es mediante microorganismos aislados que son
capaces de degradar los colorantes. Por último, para llevar a cabo la biodegradación
se puede emplear la remediación enzimática (Kandelbauer & Guebitz 2005)

CONCLUSIONES

● Con base en los resultados obtenidos, se aislaron diferentes grupos de

microorganismos provenientes de distintas muestras.
● Se obtuvieron hongos filamentosos productores de ácidos orgánicos que
cumplieron con la presión de selección y el criterio de selección
● La medición de la actividad relativa enzimática de los microorganismos
amilolíticos, amilolíticos halófilos , proteolíticos y proteolíticos halófilos fue de
manera indirecta con la medición del halo formado en la colonia.

BIBLIOGRAFÍA
● Olicón-Hernández, D. R., Guerra-Sánchez, G., Porta, C. J., Santoyo-Tepole,
F., Hernández-Cortez, C., Tapia-García, E. Y. & Chávez-Camarillo, G. M.
(2022). Fundaments and Concepts on Screening of Microorganisms for
Biotechnological Applications. Mini Review. Current Microbiology, 79(12).
https://doi.org/10.1007/s00284-022-03082-2
● Ottoni JR, Rodríguez e Silva T, Maia de Oliveira V, Zambrano Passarini MR.
Characterization of amylase produced by cold-adapted bacteria from Antarctic
samples. Biocatal Agric Biotechnol. 2020;23:101452. doi:
10.1016/j.bcab.2019.101452.
● Mejía-Barajas, Jorge A, Montoya-Pérez, Rocío, Cortés-Rojo, Christian, &
Saavedra-Molina, Alfredo. (2016). Levaduras Termotolerantes: Aplicaciones
Industriales, Estrés Oxidativo y Respuesta Antioxidante. Información
 tecnológica, 27(4), 03-16. https://dx.doi.org/10.4067/S0718-
07642016000400002
● Pacasa-Quisbert, et. al. (2017). Comunidad de hongos filamentosos en
suelos del Agroecosistema de Kiphakiphani, Comunidad Choquenaira-
Viacha. Journal of the Selva Andina Research Society, 8(1), 2-25.
Recuperado en 20 de abril de 2023, de http://www.scielo.org.bo/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S2072-92942017000100002&lng=es&tlng=es.
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