Crecimiento de microorganismos gramnegativos en diferentes

medios de cultivo y Observación de morfología colonial.

Alvarado Cabrera Luz Clarita.

Práctica No. 9 Crecimiento de microorganismos gramnegativos en diferentes medios de cultivo

Cuestionario

1. Menciona la característica de la pared celular de las bacterias Gramnegativas.

Este tipo de pared celular Gram-negativa, consta de tres estructuras: una membrana interna, una capa de
peptidoglicano, y una membrana externa.

2. Da 5 ejemplos de microorganismos Gramnegativos.

1. Escherichia coli.
2. Salmonella typhi.
3. Salmonella enteritidis.
4. Haemophilus influenzae.
5. Bordetella pertussis.

3. ¿Qué componentes deben estar presentes en un medio de cultivo?

Dependerá del tipo de medio de cultivo que se dice observar pero en lo general los medios de cultivo
tienen que tener los siguientes componentes.

• Peptonas
• Extractos
• Fluídos corporales
• Sistemas amortiguadores
• Indicadores de pH
• Agentes reductores
• Agentes selectivos
• Agar

4. Menciona el fundamento del Mac Conkey.

El agar MacConkey es un medio de cultivo sólido que permite el aislamiento exclusivo de bacilos Gram
negativos. Por esta razón es un medio selectivo y además permite distinguir entre bacilos fermentadores y
no fermentadores de la lactosa, lo que lo hace un medio diferencial. Es uno de los medios de cultivo más
utilizado en un laboratorio de microbiología.

El fundamento de este medio se puede explicar a través de la descripción de sus componentes, pues cada
uno posee una finalidad que determina una propiedad del mismo.

• Sales biliares y cristal violeta

En este sentido, el agar MacConkey tiene una composición compleja. En primer lugar contiene sales
biliares y cristal violeta.
 Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de bacterias Gram positivas y algunos bacilos
Gram negativos exigentes. A su vez favorece el desarrollo de los bacilos Gram negativos que no son
afectados por estas sustancias. Por ello es un medio selectivo.

Se dice que es ligeramente selectivo en comparación a otros medios que igualmente inhiben el
crecimiento de bacterias Gram positivas y también de la mayoría de las bacterias Gram negativas.

• Peptonas, polipectonas y lactosa

Contiene sustancias que aportan los nutrientes necesarios a los microorganismos que se desarrollan
en este medio, como las peptonas, polipectonas y la lactosa.
La lactosa es el punto clave para que el medio sea un medio diferencial, pues los microorganismos
que poseen la capacidad para fermentar la lactosa desarrollaran colonias rosadas fuertes.
Algunas bacterias pueden fermentar la lactosa lentamente o débilmente, desarrollando colonias
color rosado pálido y siguen siendo lactosa positiva.
Las que no fermentan la lactosa utilizan las peptonas como fuente de energía, produciendo
amoníaco, alcalinizando el medio. Por ello las colonias que se originan son incoloras o transparentes.

• Indicador de pH
El cambio de color se logra a través de otro compuesto esencial que posee el agar MacConkey.
Este compuesto es el indicador de pH, que en este caso es el rojo neutro.
La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos mixtos. Los mismos acidifican el
medio a un pH por debajo de 6,8.
Esto hace que el indicador de pH vire hacia a una tonalidad rosada intenso. La intensidad del color
puede variar dependiendo el pH final.

• Agua destilada, cloruro de sodio y agar

Por otra parte, contiene agua destilada y cloruro de sodio que le dan la hidratación y equilibrio
osmótico al medio. Finalmente, el medio contiene agar, que es la base que proporciona la
consistencia de medio sólido.

El medio agar MacConkey preparado debe tener un pH final ajustado a 7,1 ± 0,2.

5. ¿Qué otros medios de cultivo, diferentes a los empleados en esta práctica, pueden ser utilizados para el
crecimiento de gramnegativos?

• Agar BCYE
• Agar BHI con antibióticos
• Agar Campy con sangre
• Agar chocolate
Anexo cuadro 1

Vire del indicador (pH) Fuente de

Tipo de carbono
medio Indicadores Inhibidores
Ácido neutro básico fermentable

Agar No
6.8-8.0 rojo a amarillo Glucosa
nutritivo selectivo

Mac Sales biliares, cristal

Selectivo Rojo neutro 6.8-8.0 rojo a amarillo Lactosa
Conkey violeta

Moderada Sales biliares,

XID mente Rojo fenol 6.4-8.2 amarillo a rojo cristal violeta, citrato y Suero de leche
selectivo tiosulfato

Verde Altamente Lactosa y

Rojo fenol 6.4-8.2 amarillo a rojo Colorante verde brillante
brillante selectivo sacarosa
Sales biliares, cristal
Salmonell violeta, citrato y el
Selectivo Rojo neutro 6.8-8.0 rojo a amarillo Lactosa
a shigella colorante verde
brillante

Práctica No. 11 Observación de morfología colonial

Cuestionario
1. ¿Se presentó la misma morfología en los diferentes medios de cultivo?, si hubo variaciones explica ¿a
qué crees que se deban?
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2. ¿Qué entiendes por el término butirosa?
Grasoso, lipídico, aceitoso y términos similares
3. ¿Qué entiendes por el término friable?
Tendencia de una sustancia solida a romperse en pedazos más pequeños por fricción
4. ¿Cuál es la importancia de realizar la morfología colonial de las bacterias?
La realización de la identificación morfológica de las características de una bacteria nos ayudan a definir
el perfil de esta.
5. ¿Por qué crees que varía el tamaño de las colonias bacterianas?
El tamaño es un parámetro que está determinado genéticamente, pero los valores concretos para cada
raza o cepa de bacterias vienen influidos por una serie de condiciones ambientales (nutrientes, sales,
temperatura, tensión superficial, etc).
• N. Rodríguez Salaza, “Bacterias Gram negativas: pared celular” (2018) https://www.paradais-
sphynx.com/ciencias-naturales/bacterias-gram-negativas.htm
• https://www.ejemplos.co/20-ejemplos-de-bacterias-gram-positivas-y-gram-negativas/
• http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/curso/UNI_02/u2c2s1.htm#:~:text
=Los%20constituyentes%20habituales%20de%20los,es%20s%C3%B3lido%20adem%C3%A1s%20c
ontiene%20agar.
• http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf
• https://www.lifeder.com/agar-macconkey/
• https://sinonimos.woxikon.mx/es/butiroso
• https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/03forma.htm#:~:text=El%20tama%C3%B1o%20es%20un
%20par%C3%A1metro,%2C%20tensi%C3%B3n%20superficial%2C%20etc).
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