COLORES Y MOLÉCULAS COLORANTES

Todos los tejidos animales son incoloros. La primera utilización para teñir un tejido animal fue
en 1714 que empleó una solución de azafrán en vino para facilitar la observación de las fibras
musculares.
A partir de 1856, aparecen los colorantes de anilina.
Un colorante es una sustancia que puesta en contacto con un soporte adecuado, se une a él
de forma perdurable transmitiéndole su color.

TIPOS DE COLORANTES

- Naturales: son escasos, se obtienen a partir de ciertas plantas o insectos, son muy
usados siendo los más conocidos nucleares la hematoxilina y el carmín y
citoplasmáticos la safranina y la orceína.
- Artificiales: son derivados de la anilina, inicialmente se obtienen del alquitrán de
carbón, en la actualidad se sintetizan en el laboratorio.

NATURALEZA QUÍMICA DE LOS COLORANTES

El soporte fundamental de los colorantes naturales son los anillos aromáticos derivados del
benceno. El benceno es una sustancia incolora. A los radicales químicos responsables de la
modificación molecular a la que se debe la aparición del color, reciben el nombre de grupos
cromóforos.
Cromógeno = grupo cromóforo + anillo cromático
Grupos auxocromos = son los responsables de que el colorante tenga mayor afinidad por la
estructura que se va a teñir.

CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES SEGÚN SUS GRUPOS CROMÓFOROS

- Colorantes nitrados y nitrosados (ácido pícrico)

- Colorantes azoicos (sudán rojo y negro)
- Colorantes derivados de la antraquinona (rojo de alizarina S)
- Colorantes derivados de la acridina
- Derivados de las iminas quinónicas
- Derivados del difenilmetano
- Derivados del xanteno (pironina, rodamina)
- Derivados del ftalocianinas (azul y amarillo alcian)

CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES SEGÚN SUS GRUPOS AUXOCROMOS

- Colorantes básicos: cromógeno de baja intensidad y carácter débilmente ácido +

grupos auxocromos catiónicos fuertemente básicos.
- Colorantes ácidos: cromógeno de baja intensidad débilmente básico + grupo
auxocromo ácidos
- Colorantes neutros: carácter salino entre colorantes ácidos y básicos para formar un
precipitados insolubles en agua.
- Colorantes indiferentes: no poseen ni carácter ácido ni básico ni salino definido
(mecanismo de impregnación física)
- Colorantes metacromáticos: la mayor parte de los tejidos tienden a teñirse con una
tonalidad semejante a la del colorante usado (ortocromasia)

MECANISMOS GENERALES DE LA COLORACIÓN

- De carácter físico: están ligados a las propiedades de disolución e impregnación del

colorante sobre el tejido. En el caso de la disolución el colorante es más soluble en el
tejido que en el disolvente y en el caso de la impregnación queda atrapada entre la
maya de células y fibras que constituyen el tejido.
 - De carácter físico-químico: los colorantes de carácter ácido tiñen las estructuras
básicas y viceversa, por electroabsorción.
- De carácter histoquímico: están basadas en el desarrollo de una reacción química entre
el colorante y la estructura objeto de tinción, de forma que se produce un nuevo
cromógeno responsable del color obtenido.

TIPOS DE MECANISMOS
- Las coloraciones progresivas: se detiene la coloración en el momento en el que se ha
obtenido el color deseado. La estructura va tomando color hasta que paramos la
coloración cuando vemos que se ha conseguido el color deseado.
- Las coloraciones regresivas seguidas de diferenciación: se prolonga la coloración hasta
que el tejido quede sobrecoloreado y se usa un diferenciador (alcoholes de alta
graduación, ácidos, alumbres) que elimina los colorantes de los tejidos.
- Las coloraciones sobre piezas en bloques: consiste en teñir la muestra antes de ser
dividida en cortes.
● Tiempos de coloración varían según:
a) naturaleza de la pieza
b) grosor de los cortes
c) calidad y duración de la fijación
d) marca del colorante
e) grado de maduración
f) temperatura

COLORANTES NUCLEARES

Hematoxilina: es un colorante natural que se extrae del árbol hematoxylon campechianum. Fue
usado para teñir la seda y la lana en 1862. Se encuentra en forma de cristales rosados o
amarillentos solubles en agua y alcohol.

OXIDACIÓN DE LA HEMATOXILINA
Para que la hematoxilina pueda usarse, debe ser oxidada, este proceso puede ocurrir de forma
espontánea (4-6semanas) o ser de forma artificial a través de agentes químicos.
La hemateína = rojo vinoso
El proceso de oxidación del colorante puede ser acelerado mediante agentes oxidantes
artificiales como el óxido de mercurio, el yodato potásico y el clorato potásico.
Es aconsejable usar los oxidantes a mitad de concentración para dejar confluir la maduración
de forma espontánea con el oxígeno atmosférico.
Las soluciones básicas aceleran la oxidación
La laca más usada es la producida a partir del alumbre alumínico potásico.

- Hematoxilina de Harris: es la laca de hematoxilina más usada en la coloración rutinaria

de los núcleos celulares. Al ser regresiva, requiere una diferenciación ácida meticulosa
para obtener la intensidad deseada de coloración
- Hematoxilina de Mayer: es muy selectiva para colorear cromatina nuclear y por ser
progresiva no requiere diferenciación.

Ejemplos de lacas: hematoxilina crómica y hematoxilina férrica

OTROS COLORANTES NUCLEARES

- Carmín: es un colorante natural de color rojo púrpura, que se extrae de una cochinilla.
Es una molécula muy compleja y a día de hoy es irrelevante
- Fucsina: tiene muy poco uso, pero siguen siendo muy empleados para teñir materiales
extracelulares en coloraciones de tejido conjuntivo y en algunas técnicas histoquímicas.
Las bases simples se llaman Rosanilinas
- Safranina: es una sustancia de carácter básico derivado de las acinas que tiñe de color
rojo brillate y es de elección en la coloración específica de los cromosomas. El agente
fijador son los líquidos que tienen cromo o tetraóxido de osmio.
- Galocianina o azul de celestina B: son básicas derivadas de las oxazinas, son
susceptibles a combinarse con iones metálicos. Pueden teñirse como basófilas y como
acidófilas.
- Rojo nuclear extra o rápido: es una antraquinona sulfunada que se usa en forma de
laca de Aluminio de gran apetencia por los núcleos celulares y escasa reactividad frente
a estructuras químicas. Provocan un color azul o negro.