Merlo Ortega Aimee Aketzalli. Práctica " Aislamiento y electroforesis de DNA plasmídico".

Ramírez García Ruth Marbella Sección 2

INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica que se
utiliza de forma generalizada en la que,
fundamentalmente, se aplica corriente
eléctrica a moléculas biológicas, ya RESULTADOS
sean ADN, proteínas o ARN y se separan
en función de si son más grandes o
pequeñas.
Por lo que debemos saber que los
plásmidos son pequeños fragmentos de
ADN que se pueden unir a los elementos
apropiados, circularizar, y luego
introducirse en bacterias, donde
pueden ser propagados unto con el
cromosoma bacteriano. Estos pequeños
círculos que contienen el ADN clonado
son llamados plásmidos. Cada célula
bacteriana suele producir muchas
copias de un plásmido, a diferencia de Imagen 1. Gel con muestras
su propio cromosoma del cual hace una
DISCUSIÓN
copia única. El hecho de que los
Como podemos observar en la figura 1,
plásmidos son más pequeños y en mayor
tenemos un gel en el que se colocaron 8
número que el cromosoma del huésped
muestras, teóricamente sabemos que
hace que sea más fácil aislarlos en forma
las isoformas observadas corren de
pura.
OBJETIVO diferente manera en el gel,
• Realizar un aislamiento de DNA dependiendo del tamaño de la
plasmídico bacteriano molécula.
• Obtener el DNA del plásmido El circular relajado queda al inicio, no
puc18, mediante el método de avanza mucho; el lineal queda en
MINI-PREP medio y el enrollado avanza más.
• Realizar una electroforesis en gel Gracias a esto y a la forma que tienen,
de agarosa del plásmido podemos identificarlos en la figura 1.
obtenido y discutir sobre las En la muestra 2 podemos apreciar el
formas moleculares obtenidas. circular relajado al inicio, en medio el
lineal y al final el superenrollado; al igual
que en la muestra 4 y 7. Sin embargo, en
la muestra 8 solo se logra apreciar 1
isoforma que es la lineal.
La estructura relajada, viaja de una
manera más lenta debido a que
Merlo Ortega Aimee Aketzalli.
Ramírez García Ruth Marbella
corresponde a un DNA que quedó muy
dañado, y se fragmenta.
La estructura lineal se debe a que una
hebra se rompió, provocando que su
corrimiento sea menor que el enrollado,
pero mayor que el relajado.
Por último, el superenrollado viaja de
una manera más rápida, ya que su
estructura se mantuvo intacta.
La utilización de bromuro de etidio es
fundamental para poder colorear y
observar el recorrido de DNA a través del
soporte de agarosa, se pone de
manifiesto con luz UV. Se trata de un
compuesto intercalante, es decir, que
tiene afinidad para unirse al DNA, pues
se introduce entre sus bases apiladas.
Esto se debe a su geometría plana y su
estructura aromática, que interacciona
favorablemente con el interior hidrófobo
de la doble hélice. En menor medida,
interacciona también con DNA mono
catenario. Su utilidad deriva así mismo
de su fluorescencia, exaltada al
encontrarse en un entorno hidrófobo, es
decir, al estar unido al DNA. Se excita
con luz ultravioleta de onda corta, a
ciertos nm y emite su fluorescencia
como luz visible, de color rosado
anaranjado. En la electroforesis, se utiliza
para teñir el DNA, para revelar su
posición en el gel. El recorrido de DNA
puede ser de diferentes maneras, esto
dependerá de la calidad con que se
realizó el procedimiento de aislamiento
de DNA plasmídico. La estructura
superenrollada viaja más rápido a través
del soporte de agarosa ya que se
mantiene intacta su estructura. La
estructura lineal de DNA se debe a que
una hebra del DNA se rompió haciendo
Práctica " Aislamiento y electroforesis de DNA plasmídico".
Sección 2
que su recorrido sea más lento que el
anterior mencionado y por último la
estructura relajada corresponde a que
el DNA se quedó muy dañado y se
fragmenta ocasionando que su
recorrido sea más lento que las otras dos
estructuras.
CONCLUSIÓN
✓ Es posible aislar DNA plasmídico y
ponerlo de manifiesto con
bromuro de etidio y luz UV en una
placa de agarosa con azul de
bromofenol, mediante el empleo
de la electroforesis.
✓ El DNA plasmídico, de acuerdo
con sus diferentes
conformaciones puede correr a
diferentes velocidades en un gel
durante la electroforesis.
✓ Se puede observar la calidad de
aislamiento de DNA, debido a la
observación de las zonas
recorrido, este dependerá de la
estructura de este, que puede se
super enrollada, lineal y relajada.
✓ Finalmente, del plásmido
obtenido, la Isoforma que se
obtuvo en mayor proporción Tue
DNA lineal, por lo que se concluye
que el aislamiento fue de buena
calidad.
BIBLIOGRAFÍA
o Lehninger, A. Bioquímica, 2ª ed.
Omega, Barcelona, 1978
o Bioquímica 3ª Ed. (2002) C.
Mathews, K. van Holde, K. Ahern.
Pearson Educación S.
o Principios de Bioquímica 3ª/4ª
edición. (2000/2005) David L.
Nelson y M. M. Cox. Editorial
Omega
Merlo Ortega Aimee Aketzalli. Práctica " Aislamiento y electroforesis de DNA plasmídico".
Ramírez García Ruth Marbella Sección 2
o Laguna José; "BIOQUÍMICA";
Editorial FOURNIER S.A México D.F
Pág. 315-320
o Ingeniería Genética; consultado
07/06/2023https://www.agro.uba
.arigori.pdf Sambrook J, Russell
DW (2001) "Clonaje Molecular":
Manual de laboratorio, edición.
Cold Spring Harbor Laboratory
Precc