INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO
AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO
INTRODUCCIN
Los plsmidos son molculas de DNA extracromosomal
los cuales estn presentes en algunas clulas
bacterianas, levaduras y hongos. Los mismos poseen
DNA de doble hebra, mayormente son circulares pero
tambin se han encontrado plsmidos lineales. La
replicacin de los plasmidos es independiente de la
replicacin del cromosoma del husped ya que los
plasmidos poseen su propio origen de replicacin.
Los plsmidos poseen un inters singular en Ingeniera
Gentica por ser uno de los sistemas vectores ms
sencillos de usar. Un vector de clonacin es un sistema
que permite introducir en una clula hospedadora un
fragmento de DNA que se pretende clonar; en esta
clula hospedadora el vector se replica y expresa, en su
caso. La molcula que resulta de la unin de un DNA
vector con el DNA de inters (denominado entonces
"inserto") se denomina molcula de vector recombinante.
Existen diversos mtodos para el aislamiento de
plasmidos. Las tcnicas de Minipreps o mini
preparaciones de plasmidos, permiten la recuperacin
de plasmidos de DNA circular sobre el DNA cromosomal.
El tratamiento de las clulas con una base de pH alto o
un detergente interrumpe el apareamiento de las bases
nitrogenadas, ocasionando que el DNA cromosomal se
desnaturalice y se separe. Por el contrario la
configuracin superenrrollada del plasmido se mantiene
estable. La lisis alcalina es el mtodo mayormente
utilizado para el aislamiento de plasmidos circulares
proveniente de clulas bacterianas.
OBJETIVOS
Obtener el DNA del plsmido pUC18.
Realizar una electroforesis en gel de agarosa
del plsmido obtenido.
Discutir acerca de las formas moleculares
obtenidas en el desarrollo experimental.
RESULTADOS
En la siguiente imagen se observa la electroforesis
realizada en un soporte de agarosa y se ve el
corrimiento del DNA plasmdico que obtuvimos.
Ilustracin 1.Corrimiento de DNA
plasmdico en un soporte de agarosa.
1
INTERPRETACION DE RESULTADOS
El recorrido de DNA en el gel de agarosa con azul de
bromofenol puede ser de diferentes maneras, esto
depender de la calidad con que se realiz el
procedimiento de aislamiento de DNA plasmdico. En el
extremo inferior de la imagen donde se observa en
corrimiento de DNA se pueden observar los fragmentos
de RNA, los cuales viajan ms rpido atravesando la
malla que crea la agarosa, de manera ascendente se
puede observar la zona perteneciente a el DNA
plasmdico con su estructura sper enrollada, despus
la estructura lineal, luego la relajada y en el extremo
superior se encuentra la zona de aplicacin junto con
fragmentos de DNA cromosmico.
DISCUSION
La utilizacin de bromuro de etidio es fundamental para
poder colorear y observar el recorrido de DNA a travs
del soporte de agarosa, se pone de manifiesto con luz
UV, aprovechando las propiedades de irradiacin que
genera con el DNA. El corrimiento de DNA plasmdico
que obtuvimos fue el penltimo, se observa una mayor
cantidad de RNA, despus de DNA con estructura sper
enrollada, seguida de la estructura lineal y por ltimo la
relajada. La estructura sper enrollada viaja ms rpido
a travs del soporte de agarosa ya que se mantiene
intacta su estructura. La estructura lineal de DNA se
debe a que una hebra del ADN se rompi haciendo que
su recorrido sea ms lento que el anterior mencionado y
por ltimo la estructura relajada corresponde a que el
DNA se qued muy daado y se fragmenta ocasionando
que su recorrido sea ms lento que las otras dos
estructuras.
CONCLUSIONES
Es posible aislar DNA plasmdico y ponerlo de manifiesto
con bromuro de etidio y luz UV en una placa de agarosa
con azul de bromofenol, mediante el empleo de la
electroforesis.
Se puede observar la calidad del aislamiento de DNA,
debido a la observacin de las zonas de recorrido, este
depender de la estructura del mismo, que puede ser
sper enrollada, lineal y relajada.
Obtuvimos mayor recorrido de DNA conservando su
estructura sper enrollada, por lo que se concluye que el
asilamiento fue de buena calidad.
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AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO

PREGUNTA EXTRA

Estructura Bromuro de Etidio. Se trata de un compuesto

intercalante, es decir, que tiene afinidad para unirse al
DNA, pues se introduce entre sus bases apiladas. Esto
se debe a su geometra plana y su estructura aromtica,
que interacciona favorablemente con el interior hidrfobo
de la doble hlice. En menor medida, interacciona
tambin con DNA monocatenario.
Su utilidad deriva asimismo de su fluorescencia, exaltada
al encontrarse en un entorno hidrfobo, es decir, al estar
unido al DNA. Se excita con luz ultravioleta de onda
corta, 254 nm, y emite su fluorescencia como luz visible,
de color rosado-anaranjado.
En la electroforesis, se utiliza para "teir" el DNA, para
revelar su posicin en el gel. Se puede baar el gel tras
la electroforesis en una disolucin de bromuro de etidio, BIBLIOGRAFA
o bien incorporar ste a la disolucin de agarosa con la
que se prepara el gel. Lenhinger AL, Nelson DL. Principios de
Bioquimica. 5 Ed.Barcelona: Ediciones
Omega; 2005
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/r
eactivos.htm
Fundamentos de bioqumica estructural; Jos
Mara Teijn; Editorial Tebar.
https://bacteriologiaclinica.wikispaces.com