Manual BMI 2024-1 2CM12 Limpio

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA

Departamento de Formación Básica Disciplinaria
Academia de Bioquímica Médica I
MANUAL DE LABORATORIO
DE
BIOQUÍMICA MÉDICA I
SEMESTRE: AGOSTO 2023-ENERO 2024
C I U D A D D E M É X I C O
2 0 2 3
DEPTO. DE FORMACIÓN BÁSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA, IPN
NOMBRE DEL ALUMNO(A):
No. BOLETA: SEMESTRE: 2°
GRUPO: 2CM EQUIPO:
PROFESORES
LABORATORIO:
LABORATORIO:
LABORATORIO:
Vo. Bo.
No. PRÁCTICA FECHA
PROFESOR (A)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

Agosto 2023- Enero 2024
PROFESORES DE LA ACADEMIA
Alfredo Montiel Márquez
Amaranta Sarai Valdez Guerrero
Araceli Posadas Mondragón
Argentina Hernández Ramos
Arturo Díaz Martínez
Carlos Castañeda González
Cristina López Gloria
Eunice Dalet Farfán García
Feliciano Tamay Cach
Francisco Javier Castañeda Ibarra
Jessica Elena Mendieta Wejebe
José Guadalupe Trujillo Ferrara
Juan Guillermo Ordorica Vargas
Julio César Quintana Pérez
Luz María Chirino Castillo
Miguel Andrés Valdez Guevara
Mónica Ordorica Morales
Mónica Yosefit Hernández Hinojosa
Reyna Elizabeth Barbosa Cabrera
Samuel Álvarez Almazán
Selene Amásis Guillén Castro
AUXILIARES DE LABORATORIO EN SERVICIO SOCIAL

Monserrat Cervantes Salinas

MISIÓN
La Escuela Superior de Medicina del Instituto Politécnico Nacional es una institución de educación médica,
pública, laica y gratuita con un proceso histórico que la compromete a atender de manera prioritaria a la
población más desprotegida con énfasis en la integración de la docencia, investigación y servicio en el contexto
del siglo XXI. Forma médicos cirujanos y parteros de sólida preparación clínica, quirúrgica y epidemiológica
con liderazgo científico y enfoque de atención integral, de excelencia a nivel nacional e internacional, los
cuales se desempeñan profesionalmente en el Sistema Nacional de Salud con base en la estrategia de atención
primaria, sentido ético y humanitario, con una permanente actualización médica. Forma posgraduados capaces
de generar investigación, innovación y difusión del conocimiento que contribuyan al desarrollo científico,
tecnológico y sustentable del país.
VISIÓN
La Escuela Superior de Medicina es una Institución educativa líder, innovadora, de excelencia, enfocada a la
estimulación del desarrollo científico, y dinámico del conocimiento en el área de la salud, rectora en educación
médica de vanguardia, que forma médicos profesionales, mediante programas académicos de calidad
acreditados, vinculados con instituciones de salud y comunidades científicas manteniendo su carácter público,
laico y gratuito, para dar respuesta a los problemas prioritarios de salud con énfasis, en la población más
desprotegida. Formando integralmente profesionales a nivel licenciatura y posgrado, médicos de excelencia
con liderazgo y gran sentido humanitario, a través de un proceso educativo de calidad con un aprendizaje
centrado en el alumno, fundamentado en la ciencia, con responsabilidad social; así como pos-graduados e
investigadores en el contexto científico y tecnológico de la salud, con impacto nacional e internacional hacia
la mejora continua que cumplan con las normas institucionales y de calidad definidas.

CALENDARIO DE ACTIVIDADES
CURSO DE BIOQUÍMICA MÉDICA I
PRIMER SEMESTRE 2023-2024 (2024-1)
AGOSTO 2023-ENERO 2024
FECHA DE INICIO: Lunes, 28 agosto de 2023

FECHA DE TERMINACIÓN: Lunes, 22 de enero de 2024
DÍAS DE SUSPENSIÓN: Miércoles, 01 de noviembre de 2023
Jueves, 02 de noviembre de 2023
Lunes, 20 de noviembre de 2023
VACACIONES Lunes 25 de diciembre 2023 al Viernes 05 de enero 2024

EXÁMENES
Primer Examen Parcial: Lunes, 02 de octubre de 2023
Temas de teoría: 1. Composición Química del Organismo Humano
2. Agua, Soluciones, Ácidos, Bases, pH y Soluciones Reguladoras
3. Estructura y Función de Proteínas
Prácticas de laboratorio: 1. Introducción 04 al 08 de septiembre de 2023
2. Soluciones 11 al 15 de septiembre de 2023
3. Electrólitos y pH 18 al 22 de septiembre de 2023
4. Soluciones reguladoras 25 al 29 de septiembre de 2023
Segundo Examen Parcial: Miércoles, 22 de noviembre de 2023
Temas de teoría: 4. Termodinámica, Catálisis y Enzimas
5. Estructura, Función y Metabolismo de Glúcidos
Prácticas de Laboratorio: 5. Proteínas 09 al 13 de octubre de 2023
6. Cinética Química 16 al 20 de octubre de 2023
7. Cinética Enzimática 23 al 27 de octubre de 2023
8. Carbohidratos 06 al 10 de noviembre de 2023
Tercer Examen Parcial: Viernes, 12 de enero de 2024
Temas de teoría: 6. Bioenergética y Ciclo del ácido Cítrico
7. Estructura Función y Metabolismo de Lípidos.
8. Estructura y Función de Ácidos Nucleicos y Genética Molecular
Prácticas de Laboratorio: 9. Oxidaciones Biológicas 27 de noviembre al 01 de
diciembre de 2023
10. Lípidos 04 al 08 de diciembre de 2023
11. Ácidos Nucleicos 11 al 15 de diciembre de 2023
Examen Extraordinario: Viernes, 19 de enero de 2024
Temas: Todo el curso
Examen a Título de Suficiencia: Martes, 30 de enero de 2024
Temas: Todo el curso
NOTA: Todos los exámenes se efectuarán en el horario de 7:00-9:00 en el lugar que sea asignado a cada grupo.

Reglamento Interno de la Materia

CAPITULO I. DE LA INSCRIPCIÓN Y ORGANIZACIÓN DE Artículo 10. Los profesores controlarán la asistencia a clases
LOS ALUMNOS de teoría y laboratorio, llamando lista de presentes al inicio de
las sesiones, con un periodo de tolerancia de 15 minutos. No
Artículo 1. La Unidad de Aprendizaje de Bioquímica hay retardos. En las sesiones de laboratorio, los alumnos que
Médica I es impartida por los profesores de la Academia de lleguen después del periodo de tolerancia no podrán
Bioquímica Médica I del Departamento de Formación Básica permanecer en la sesión.
Disciplinaria.
Artículo 11. Los alumnos (damas y caballeros) asistirán de
Artículo 2. Para quedar inscritos y tener derecho a asistir al manera obligatoria a las clases de teoría, prácticas de
curso, los alumnos deberán: laboratorio y exámenes con uniforme blanco que incluye bata,
a) Aparecer en las listas oficiales del Sistema de pantalón, zapato cerrado (no tenis) y sin ningún tipo de
Administración Escolar del IPN. accesorio o prenda, así como portando en la solapa izquierda
b) Llenar y entregar una forma de registro y control interno del uniforme su credencial de alumno vigente, como lo marca
que les proporcionarán los profesores de grupo el primer el inciso VII del artículo 107 del Reglamento Interno del
día de clases. I.P.N. Quien no cumpla con este requisito no podrá
permanecer en la sesión, y se hará acreedor a la falta
c) Entregar una fotografía reciente, de tamaño infantil.
correspondiente.
Artículo 3. Los incisos b y c mencionados en el artículo
Artículo 12. Durante las sesiones tanto de Teoría como
anterior, deben cumplirse a más tardar una semana después
Laboratorio, los alumnos deberán activar el modo silencioso
de iniciado el curso.
de sus teléfonos celulares, para no interrumpir el trabajo.
Artículo 4. Cada grupo deberá elegir en la primera semana
Artículo 13. Las inasistencias a teoría y laboratorio se
de clases un representante, que será su vocero oficial, quien
podrán justificar dentro de los tres días hábiles siguientes, con
tratará los asuntos académicos relacionados con el curso ante
la documentación oficial pertinente (es de particular interés la
sus profesores o la Academia.
participación a Congresos). Debido a la falta de recursos, en
CAPÍTULO II. DE LA ORGANIZACIÓN DEL CURSO caso de no asistir al laboratorio, el alumno podrá
Artículo 5. El curso de Bioquímica Médica I es Teórico- justificar la falta, pero no reponer la práctica.
Práctico y se desarrolla mediante tres tipos de actividades: Artículo 14. Las actividades de otras materias, realizadas en
a) Clases de Teoría. Se imparten en las aulas de la Escuela el horario correspondiente a Bioquímica Médica I, no se
Superior de Medicina, asignadas a cada grupo al inicio consideran justificantes de falta.
del curso. CAPÍTULO IV. DEL TRABAJO EN EL LABORATORIO
b) Prácticas de Laboratorio. Que se realizan en los Artículo 15. Por razones de disciplina y seguridad, ninguna
Laboratorios de enseñanza de la Academia de persona podrá trabajar en el laboratorio sin bata larga de
Bioquímica Médica I. laboratorio blanca, gogles y guantes de cirujano. El alumno que no
c) Actividades complementarias. Las que sean asignadas por cumpla este requisito deberá abandonar el recinto y se hará
los profesores, y que complementen las actividades acreedor a la falta respectiva.
académicas. Artículo 16. Queda estrictamente prohibido fumar e ingerir
Artículo 6. En las clases de Teoría se desarrollan los temas alimentos o bebidas en el laboratorio. En la misma forma, los alumnos
del programa con la participación de los alumnos. deberán abstenerse de recibir visitas, así como sentarse en las mesas
Artículo 7. En las prácticas de Laboratorio los alumnos de trabajo, o realizar cualquier tipo de acciones indisciplinadas.
realizan experimentos sobre temas que complementan la Artículo 17. Para trabajar en el laboratorio los alumnos
teoría, y resuelven problemas aplicativos. formarán equipos, con base en las instrucciones que reciban
Artículo 8. Las actividades complementarias, versarán sobre del profesor al inicio del curso.
tópicos de interés para la formación de los alumnos. Artículo 18. Cada equipo de trabajo será responsable del
CAPITULO III. DE LA ASISTENCIA material de vidrio, utensilios, reactivos, aparatos, etc. que utilice
durante el desarrollo de la práctica. Antes de iniciar la práctica
Artículo 9. Como se indica en los incisos IV y VI del artículo
deberán revisar cuidadosamente dicho material y anotar en el vale
107 del Reglamento Interno del I.P.N., es obligación de los
cualquier anomalía que observe, ya que de no hacerlo se harán
alumnos asistir con puntualidad y regularidad a las clases de
responsables de los daños que presente el material y deberán
teoría y prácticas de laboratorio en los horarios que les serán
reponerlo en un plazo máximo de quince días, con nota de compra.
notificados al inicio del curso.

Artículo 19. Al terminar la práctica, el equipo deberá dejar tolerancia no podrán presentar examen, ni permanecer en el
la mesa de trabajo limpia y en orden, como la recibió. salón.
Artículo 20. Los alumnos no podrán abandonar el Artículo 27. Durante los exámenes, los alumnos no podrán
laboratorio hasta que la práctica termine, o cuando sean llevar consigo teléfonos celulares.
autorizados por el maestro. Sí un alumno abandona el Artículo 28. Cuando por causa justificada (ver artículo 13
laboratorio sin autorización, se hará acreedor a la falta de ese del presente Reglamento) un alumno no pueda asistir a
día. presentar un examen ordinario, deberá proceder según el
Artículo 21. El alumno deberá entregar un reporte escrito de artículo 46 del Reglamento General de Estudios.
la práctica, que formará parte de su evaluación de laboratorio. Artículo 29. Cada evaluación departamental ordinaria se
CAPITULO V. DE LA EVALUACIÓN integrará por el 25-35% de la calificación del examen de
Artículo 22. La evaluación final de la Unidad de teoría, más 30% de la calificación de laboratorio, más 35-45%
Aprendizaje, se hará con base en tres Evaluaciones Parciales de la calificación de actividades complementarias del periodo
Ordinarias, y en su caso los Exámenes Extraordinario y a correspondiente.
Título de Suficiencia. Artículo 30. La acreditación de la Unidad de Aprendizaje de
Artículo 23. Las calificaciones quedarán registradas en el Bioquímica Medica I se obtendrá promediando las tres
acta de evaluación correspondiente con un número entero de evaluaciones parciales ordinarias. La calificación mínima
cero a diez. En calificaciones superiores a 6 con fracciones de aprobatoria es de 6 (seis) referirse al Artículo 42 y 43 del
cinco décimas o más, la calificación se aumentará al entero Reglamento General de Estudios.
inmediato superior. En calificaciones inferiores a 6, las Artículo 31. Cuando un alumno no apruebe o intente
fracciones decimales serán consideradas nulas. mejorar su calificación ordinaria, deberá presentar el Examen
Artículo 24. La evaluación parcial ordinaria de la Unidad de Extraordinario, que incluye el total de los contenidos de la
Aprendizaje se hará tomando en cuenta los resultados Unidad de Aprendizaje. Referirse al Artículo 45 del
obtenidos en: Reglamento General de Estudios.
a) El examen parcial departamental de los temas revisados Artículo 32. La calificación mínima aprobatoria del
en el aula. Examen Extraordinario será de 6 (seis). Cuando un alumno
presente este examen para mejorar la calificación ordinaria
b) La calidad de su trabajo en el laboratorio y de sus informes
obtenida, su calificación final será la más alta.
de las prácticas.
CAPITULO VI. OTROS
c) Las actividades académicas complementarias.
Artículo 33. Cualquier caso no contemplado en este
Artículo 25. Los exámenes departamentales ordinarios,
Reglamento deberá someterse por escrito, a la Academia de
extraordinario y a título de suficiencia, se realizarán en el
Bioquímica Médica I, para su discusión y resolución
lugar, fecha y hora que se dará a conocer al inicio del curso.
inapelable.
Artículo 26. Todos los grupos deberán iniciar los exámenes
departamentales a la hora programada. Los sinodales de
examen controlarán la asistencia, llamando lista de presentes ACADEMIA DE BIOQUÍMICA MÉDICA I
al inicio del examen, con un periodo de tolerancia de 15 AGOSTO 2023
minutos, los alumnos que lleguen después del periodo de

Normas de Seguridad en el Laboratorio

El manejo inapropiado de sustancias, materiales y equipo que 3. Material de vidrio.
se encuentran en el laboratorio, representa peligro tanto a la o Debe examinar todo el material de vidrio antes de utilizarlo,
salud de las personas, como a la integridad de las instalaciones para detectar la existencia de grietas o roturas. En el caso de
y equipo de trabajo. Es por ello por lo que se deben obedecer que encuentre material defectuoso, repórtelo de inmediato
las Reglas de seguridad que se enlistan a continuación, al encargado del laboratorio para que se lo cambie.
clasificadas en los siguientes grupos: o No use el material de vidrio con orillas cortantes, con
1. Sustancias químicas cuarteadoras, o en general en mal estado.
2. Material biológico y animales de laboratorio o Debe transportar, mover o manipular sólo la cantidad de
3. Material de vidrio material de vidrio que pueda manejar con seguridad.
4. Equipo eléctrico e instalaciones de gas o Use pinzas, franela o guantes de asbesto para transportar
5. Orden y limpieza o mover recipientes de vidrio calientes.
1. Sustancias químicas. o Nunca deje material roto para ser lavado, repórtelo y tírelo a la basura.
o Cada sustancia debe tener etiqueta de identificación, si no o No deje vidrios rotos sobre la mesa o en cualquier otro
es así, no los utilice. lugar en donde pueda causar accidentes.
o Antes de utilizar una sustancia, verifique que se trata del o Al calentar recipientes de vidrio, use llama suave al
reactivo correcto y que tiene la concentración requerida. principio del calentamiento.
o Identifique la naturaleza de la sustancia y el tipo de peligro o Limpie inmediatamente los materiales que goteen o se
que implica su manejo; ¿es veneno?, ¿qué tan tóxico es?, derramen, mediante uso de la franela u otros materiales
¿es inflamable?, ¿es corrosivo? para embeber el líquido y evitar que se disperse.
o Evite el contacto o exposición innecesaria con sustancias o En caso de líquidos tóxicos derramados, protéjase
químicas, utilice el equipo de protección adecuado y adecuadamente y ventile el área.
disponible: bata larga, lentes, guantes, campana extractora, etc. 4. Equipo eléctrico e instalaciones de gas.
o No pipetee sustancias químicas directamente, utilice la prepipeta. o No use equipo eléctrico defectuoso.
o Evite inhalar productos químicos y sus vapores. o Verifique que los enchufes y conexiones estén en buenas
o Trabaje y mantenga bajo la campana los reactivos condiciones; en caso de que existan cables desnudos o en
corrosivos o volátiles. mal estado, repórtelos inmediatamente.
o Los hidrocarburos ligeros y solventes deben manejarse lejos del o Maneje el equipo eléctrico y sus conexiones con las manos
fuego u otras fuentes de calor. Empleé baño maría para calentarlos. secas y cerciórese que el piso se encuentra seco. Mantenga
seco el espacio alrededor del equipo eléctrico.
o Para diluir los ácidos, estos deben verterse lentamente en
el agua, agitando cuidadosamente. o Antes de encender el mechero, revise que tanto éste como la
manguera se encuentren en buen estado, verifique que esté
o No vierta agua directamente sobre el ácido porque adecuadamente conectado a la tubería de gas (tubos de color
provocará salpicaduras. amarillo) y retire todo material inflamable cercano.
o No deje sobre la mesa tapones de frascos de ácidos u otras o En caso de accidente, retírese inmediatamente y cierre la
sustancias corrosivas, porque se pueden contaminar o dejar llave de paso que se encuentra bajo la tarja de cada mesa.
residuos corrosivos que podrían causar quemaduras. 5. Orden y limpieza.
2. Material biológico y animales de laboratorio. o Una vez verificado el buen estado del material de vidrio,
o Para el manejo de estos materiales protéjase adecuadamente lávelo para asegurar su limpieza.
según sea el caso. Usando guantes, cubre boca, etc. o Mantenga siempre limpia y en orden su área de trabajo.
o Para la manipulación y el sacrificio de los animales de o No intercambie el contenido de los frascos de reactivo.
experimentación siga las indicaciones del Profesor. Use sólo los tapones de los recipientes correspondientes.
o Maneje cuidadosamente las muestras biológicas (sangre, orina, o Cuando requiera volver a llenar sus frascos reactivos, transfiera
saliva, etc.) para evitar contaminaciones de personas y del frasco de almacenamiento, la cantidad necesaria a través de
materiales. un vaso de precipitados, no devuelva el sobrante al envase
o Todo el material biológico, equipos y de desecho original, busque otro frasco reactivo y vierta el sobrante. Nunca
(cadáveres, muestras biológicas, algodón, gasas, guantes, emplee pipetas para efectuar este procedimiento.
jeringas, etc.) deberán ser incinerados adecuadamente,
ACADEMIA DE BIOQUÍMICA MÉDICA I
para lo cual, deberá usted seguir las instrucciones del
Profesor para dejarlos convenientemente preparados. 2023

SIMBOLOS DE SEGURIDAD
FLAMABLE VENENO
EXPLOSIVO RADIOACTIVO
CORROSIVO GAS COMPRIMIDO
INFLAMABLE OXIDANTE
EXPLOSIVO NIVEL DE RIESGOBAJO
CORROSIVO IRRITANTE
VENENO DAÑO AMBIENTAL

ÍNDICE
No. Páginas
1. INTRODUCCIÓN…………………………………….. 1
2. SOLUCIONES………………………………………… 8
3. ELECTRÓLITOS y pH……………………………..... 14
4. SOLUCIONES REGULADORAS………………........ 17
5. PROTEÍNAS………………………………………… 22
6. CINÉTICA QUÍMICA Y CATÁLISIS……………… 31
7. CINÉTICA ENZIMÁTICA………………………… 40
8. CARBOHIDRATOS………………………………… 47
9. OXIDACIONES BIOLÓGICAS…………………… 54
10. LÍPIDOS……………………………………………….. 60
11. ÁCIDOS NUCLEICOS……………………………….. 65
12. APÉNDICE I………………………………………… 71
13. APÉNDICE II…………………………………………. 74

PRÁCTICA No. 1
INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO
Se revisarán conceptos y procedimientos de importancia para el trabajo en el laboratorio. El alumno deberá
previamente haber leído y sujetarse al Reglamento de la Academia de Bioquímica I.
• Las actividades de laboratorio constituyen una parte importante del aprendizaje de la materia de Bioquímica
Médica I, complementando las actividades de la materia impartidas en el aula.
• Es obligación del alumno la asistencia puntual, así como participar de forma activa, obtener resultados de
los experimentos y entregar el reporte de este.
• Es obligación del alumno registrar los resultados de cada experimento que obtiene durante el desarrollo de
cada práctica y de la sección de “Evidencias de aprendizaje”, siendo este último apoyo complementario de
los resultados.
• Será de suma importancia cumplir de forma obligatoria con las medidas de seguridad, comportamiento, uniforme
y accesorios como: guantes, anteojos de protección o caretas transparentes, cubre bocas y bata larga.
EJERCICIO 1. DISTRIBUCIÓN DE LOS ALUMNOS.
a. Antes de entrar al laboratorio, todos los alumnos deberán portar, debidamente abotonada la bata de
laboratorio y tener listo su material de trabajo.
b. Cuando el profesor lo indique, los alumnos colocarán su mochila en el lugar que les sea asignado.
c. Siguiendo las instrucciones de su profesor, localizar la mesa de trabajo de su equipo, dirigirse a ella e
inmediatamente antes de realizar cualquier actividad, deberán colocarse los gogles y guantes de forma
obligatoria. No podrán permanecer durante la sesión del laboratorio si no cumplen con este requisito.
d. En la mesa de trabajo, localizar la toma de corriente, desagües, tuberías y sitios donde puede trabajar.
e. Observar y ubicar la mesa de trabajo con respecto a la campana de extracción, regadera, extintores, zonas
de seguridad y rutas de evacuación.
f. Identificar el uso de cada una de las tuberías que encuentre en la mesa de trabajo y marcarlas con masking tape.
Esperar a que su profesor confirme que el etiquetado es correcto.
g. Localizar la posición de las válvulas de apertura de cada tubería.

Agosto 2023-Enero 2024
1
Evidencias de aprendizaje
1. Ilustrar la mesa de trabajo señalando la posición de las tomas de corriente, desagües y válvulas de flujo.
2. Ilustrar la distribución del laboratorio e indique las zonas de seguridad, posición del equipo de seguridad y
la ruta de evacuación desde la mesa.
3. En el esquema anterior, marcar la posición de las válvulas de apertura.
EJERCICIO 2. VALE DE RESGUARDO DEL MATERIAL DE LABORATORIO.
a) Localizar en la charola el vale de resguardo del material de laboratorio (documento que enlista el material
para realizar cada práctica) seguidamente revisar cuidadosamente cada una de las piezas, indicando en el
vale cualquier defecto en el material. En ninguna circunstancia se deberá desplazar la charola de la mesa de
trabajo a ningún otro sitio.
b) Etiquetar con masking tape cada pieza que lo identifique. Reunir en la charola el material que desconozca y
preguntar a su Profesor. Para esta Práctica y las posteriores, favor avisar al Profesor para que le revisen el
ejercicio o experimento, en caso de no avisar y desechar el ejercicio o experimento, no se podrá incluir en el
Reporte de Laboratorio.
c) Al terminar de revisar todo el material, completar los datos solicitados en el vale, (fecha, grupo, equipo,
responsable, etc.) y entregarlo al personal técnico de laboratorio. En las siguientes prácticas, el vale se
entregará al inicio de cada sesión con tolerancia de 10 minutos.
d) Al terminar cada práctica el equipo tiene la obligación de ordenar el material limpio dentro de la charola,
limpiar la mesa y solicitar al personal técnico que tendrá que revisar y levantar el material de su mesa de
trabajo, quienes les tendrán que devolver el vale que se entregó al inicio de la práctica.
1. ¿Cuál es el uso de cada una de las siguientes piezas de material de laboratorio?

Pipeta Mortero
Bureta Tubo de ensayo
Probeta Válvula de Bunsen
Matraz Erlenmeyer Matraz aforado
Pinza para tubo de ensayo Vaso de precipitados
Reóforos Cristalizador
Tubos para centrífuga clínica Tubos Falcón
2
EJERCICIO 3. MANEJO DEL MECHERO.
a) No encender el mechero hasta que su profesor se lo indique.
b) Conectar el tubo de látex del mechero a la llave de gas, la que debe estar completamente cerrada, con la manija
en posición transversal respecto de la salida del gas. No olvidar que la tubería de gas es de color amarillo.
c) Verificar que el tornillo de control de flujo de gas esté abierto más o menos a la mitad de su capacidad total.
El flujo de gas se puede disminuir girando el tornillo en el sentido de las manecillas del reloj y aumentar en
sentido contrario.
d) Encender el mechero aproximando la flama de un cerillo o encendedor al borde de la parte superior del
mechero e inmediatamente abrir la llave de gas, lo cual debe hacerse lentamente, avanzándola hasta que
esté aproximadamente a 45 grados con el tubo del gas. Tener cuidado de no acercar su rostro, pelo u objetos
inflamables al mechero al momento de encender, ni cuando esté encendido. Al usar el mechero no deberá
portar guantes clínicos hechos de látex o polietileno, tener cuidado, ya que son inflamables.
e) Ajustar la cantidad de aire que entra, usando el arillo de control de flujo de aire, hasta que la flama tenga
una zona central de color azul claro rodeada de otra de color azul oscuro o violeta. La parte más caliente se
encuentra en la punta de la zona interna. Cuando la combustión es incompleta, por falta de oxígeno, la flama
presenta color amarillo.
1) En el esquema siguiente, indicar el tipo de mechero, así como las partes que se indican.
1
a
2
c 3
b
2) Ilustrar la forma correcta de encender el mechero.

3
EJERCICIO 4. COMO CALENTAR UN LÍQUIDO EN UN TUBO DE ENSAYO.
a) Agregar a un tubo de ensayo agua de la llave hasta un 20% de su capacidad y sujetarlo con pinzas para tubo
de ensayo.
b) No olvidar quitarse los guantes de látex cuando se emplee el mechero.
c) Colocar el tubo sobre la flama del mechero, inclinar aproximadamente a 70o. Nunca calentar un tubo de
ensayo en el fondo o en posición vertical debido a que se puede proyectar su contenido.
d) Mover el tubo cuidadosamente casi sobre la flama de arriba hacia abajo, para que el líquido se caliente de
manera homogénea.
e) Durante el calentamiento dirigir la boca del tubo hacia un lugar donde no se encuentre ninguna persona o
material que se pueda dañar.
f) No observar de ninguna manera directamente la boca de un tubo de ensayo que se está calentando, aunque
esté fuera de la flama del mechero.
g) Continuar calentando hasta lograr que el agua hierva, sin proyectarse.
h) PROHIBIDO calentar tubos de ensayo con solventes orgánicos directamente a la flama del mechero.
Hacerlo siempre en baño María.
i) Al terminar cualquier experimento apagar el mechero para evitar accidentes.
1. Describir e ilustrar la forma correcta de manejar la pinza para tubo ensayo
2. Ilustrar la forma correcta de calentar un líquido en un tubo de ensayo.
EJERCICIO 5. INSTALACION DE UN BAÑO MARÍA.
a) Identificar y reunir el siguiente material: soporte universal, anillo de hierro, rejilla de asbesto, mechero de
Fischer o Bunsen y un vaso de precipitados de 600 mL.
b) Ensamblar el anillo en el soporte a la altura adecuada para que la parte más caliente de la flama del mechero
quede a nivel del anillo. Colocar la rejilla de asbesto sobre el anillo.
c) Agregar agua de la llave al vaso de precipitado únicamente al 50% de su capacidad y colocarlo sobre la
rejilla. Agregar pequeños trozos de papel en el vaso con agua a modo de “cuerpos de ebullición”.
d) Encender el mechero y calentar a la temperatura que le indique su profesor.

4
1) Ilustrar el montaje del aparato.
2) ¿Por qué no se debe llenar el vaso completamente?
3) ¿Por qué se emplean los cuerpos de ebullición?
EJERCICIO 6a. MANEJO DE REACTIVOS LÍQUIDOS: SEGURIDAD.
a) Usar siempre la pre - pipeta, nunca pipetear con la boca para manejar con seguridad los reactivos líquidos.
b) Al abrir un frasco de reactivo, colocar el tapón sobre la mesa en posición invertida, para evitar
contaminación. Vaciar la cantidad necesaria en un vaso de precipitados y de ahí usar el reactivo.
c) Para extraer el líquido utilizar una pipeta o un gotero limpio. Nunca vaciar reactivos directamente del frasco
para evitar escurrimiento.
d) Usar una pipeta de 10 mL, para transferir 5 mL de agua de un vaso de precipitados a un tubo de ensayo en
su mesa y en la campana de extracción. Repetir hasta que pueda realizarlo con seguridad.
1) Describir la forma de uso de la pre - pipeta.
2) Utilizar las técnicas que se aprendió para medir los volúmenes de los utensilios que le solicite su profesor.
EJERCICIO 6b. MANEJO DE REACTIVOS LÍQUIDOS: PREPARACION DE SERIES.
a) Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4.
b) Agregar en el tubo 1 la cantidad de 2.5 mL de agua. En el tubo 2 la cantidad de 1.25 mL de agua. En tanto
que en el tubo tres deposite 8 mL de agua y en el tubo 4, deposite 0.6 mL de agua.
c) Utilizar para cada tubo de ensayo una pipeta de capacidad adecuada. Repetir este ejercicio hasta que pueda
realizarlo con seguridad y precisión.
1. Elaborar un esquema que describa este experimento.
2. Describir que pipetas utilizó para cada uno de los volúmenes indicados.
3. ¿Cuántos tipos de pipetas existen?

5
EJERCICIO 6c. MANEJO DE REACTIVOS LÍQUIDOS: TITULACIÓN.
a) Reunir el material siguiente: Soporte universal, pinza para bureta (Lincoln), bureta, matraz Erlenmeyer.
b) Instalar la pinza para bureta sobre el soporte a una altura conveniente para colocar adecuadamente la bureta.
c) Armar la bureta colocando la llave del lado derecho de la escala, la cual debe quedar correctamente orientada
(escala de 0 arriba y escala de 25 abajo).
d) Colocar la bureta con las pinzas teniendo cuidado que este bien sujeta, con la escala hacia el observador y
a la altura adecuada por arriba del matraz Erlenmeyer.
e) Emplear siempre un vaso de precipitados de 100 mL para llenar la bureta, teniendo cuidado que la llave se
encuentre cerrada. Con la finalidad de evitar escurrimientos, colocar un vaso de precipitados debajo de la
bureta.
f) Para “purgar” la bureta abrir completamente la llave para que el líquido salga rápidamente y pueda arrastrar
las burbujas de aire. Posteriormente, aforar al volumen total y colocar el matraz Erlenmeyer.
g) Abrir la llave lentamente y dejar salir el líquido (agua) de la bureta en cantidades fijas de: 1mL, 5 mL, 6
mL, 10 mL hasta 25 mL, agitando constantemente el matraz Erlenmeyer. Aprender a leer con precisión la
escala de la bureta. Manejar con soltura y seguridad la llave de la bureta y el matraz.
1) Ilustrar el dispositivo de titulación.
2) Identificar el tipo de aforo de la bureta utilizada.
3) Describir la forma correcta de leer el volumen en la bureta.
EJERCICIO 7. MANEJO DE REACTIVOS SÓLIDOS.
a) Preparar un sobre de papel encerado, el cual será proporcionado por su profesor de laboratorio. Escribir en
el sobre el nombre y cantidad de reactivo que se le asignó, número de equipo y grupo.
b) Encender la balanza y esperar a que se estabilice la lectura. Colocar una charola de papel encerado en el
plato de la balanza. Cuando se estabilice, presione el botón de tarar, para llevarlo a cero.
c) Abrir el recipiente del reactivo y colocar la tapa sobre la mesa, boca arriba, para evitar la contaminación.

6
d) Con una espátula retirar el reactivo del recipiente y pesar la cantidad de NaCl depositándolo sobre la charola.
Si se rebasa la cantidad deseada, regresar el exceso de reactivo al respectivo recipiente usando la espátula.
Nunca regresar al recipiente original un reactivo que caiga fuera del sobre o por encima de la mesa.
e) Al terminar de pesar la cantidad deseada, verter el reactivo pesado al sobre y cerrarlo con cinta masking
tape y conservar para utilizar en la siguiente práctica.
f) Cerrar inmediatamente el frasco de reactivo para evitar que se hidrate o contamine. Asegurarse que la mesa
y la balanza queden limpias.
1) Ilustrar la balanza, señalando la posición del botón de encendido-apagado y del botón de tara.
2) Pesar las muestras que le solicitó su profesor.
EJERCICIO 8. TARAR TUBOS PARA CENTRIFUGAR.
a) Localizar la balanza de dos platillos y la centrífuga refrigerada.
b) Añadir a dos tubos Falcon de capacidad de 15 mL la cantidad de 5 mL de agua de la llave como marca la
escala del propio tubo.
c) Colocar en dos frascos gerber cada tubo y mantenerlos a la mano cuando se requiera en la balanza.
d) Ajustar las pesas de medición en la posición de cero en una balanza de dos platillos. Asegurarse de que la
aguja o fiel de la balanza esté en posición cero. Si no lo está, girar cuidadosamente las pesas de ajuste en el
sentido que sea necesario hasta lograr el equilibrio.
e) Retirar los tubos de los frascos gerber, colocar cada frasco en cada platillo, cuidando que el más pesado
quede del lado izquierdo.
f) Deslizar las pesas de medición de la balanza hasta lograr que el fiel vuelva a la posición de equilibrio,
posteriormente colocar los tubos nuevamente en cada frasco y observar que se encuentren balanceados.
g) De no estar en equilibrio, use una pipeta y añadir agua de la llave al tubo más ligero hasta lograr que el fiel
de la balanza regrese al equilibrio. Al equilibrar los tubos ya puede centrifugar.
1) Ilustrar la balanza de platillos señalando la posición de las pesas de ajuste y las de medición.
2) Explicar por escrito el resultado de la centrifugación.

7
PRÁCTICA No. 2
SOLUCIONES
Una solución es un sistema homogéneo, formado por dos o más sustancias químicas. Está formada por un
solvente en el cual se dispersa uno o más solutos. Cuando ambos son líquidos miscibles, se acostumbra a
nombrar solvente al que se encuentra en mayor cantidad. En las soluciones acuosas siempre se considera el
agua como solvente. La relación que existe entre las cantidades de soluto y solvente en una solución se llama
concentración.
Existen varias formas de expresar la concentración de una solución. Las de uso más frecuente son:
• MOLARIDAD (M). Número de moles de soluto en un litro de solución. Un mol se define como el
peso molecular en gramos de una sustancia, o sea la masa de una sustancia que contiene el mismo
número de átomos o moléculas que hay en 12 g de 12C. (6.022 x 1023 o Número de Avogadro).
• MOLALIDAD (m). Número de moles de soluto en 1000 g de solvente.
• NORMALIDAD (N). Número de equivalentes químicos de soluto en un litro de solución. Si
dividimos los gramos de un mol entre la valencia del compuesto se obtiene el peso equivalente
químico.
• OSMOLARIDAD (OsM): Número de osmoles en un litro de solución. Un osmol es la cantidad de
soluto en gramos que proporciona el número de Avogadro de partículas en solución.
• PORCENTUAL (%). Expresa el porcentaje de soluto en una solución. Existen diferentes tipos:
• Porciento en peso (% p/p). Número de gramos de soluto en 100 g de solución. Esta es la forma como
se expresa la pureza de los reactivos químicos.
• Porciento en volumen (% v/v). Número de mililitros de soluto en 100 mL de solución.
• Porciento en peso-volumen (% p/v). Número de gramos de soluto en 100 mL de solución. Si no se
indica expresamente la relación de porcentaje, esta es la concentración porcentual que se debe usar.
• FRACCIÓN MOLAR (xi). Número de moles de una sustancia en una solución entre la suma de los
moles de todos los componentes de esta.
DIÁLISIS
Ejemplos de membranas dialíticas son el celofán y el colodión. La base del tratamiento de pacientes renales
descompensados es la diálisis, la cual es útil también para eliminar sustancias nitrogenadas, medicamentos en
exceso o exceso de acidez en sangre. Médicamente se refieren diversos tipos de diálisis tales como:
hemodiálisis y la diálisis peritoneal.

8
ÓSMOSIS Y PRESIÓN OSMÓTICA

Si dos soluciones de diferente concentración están separadas por una membrana semipermeable, el solvente de
la solución menos concentrada difunde a la de mayor concentración. Esto se explica termodinámicamente
porque la solución diluida tiene una tendencia de escape o presión de vapor muy grande. Esta tendencia de
escape o presión de vapor es muy baja cuando la solución está concentrada. Este fenómeno es conocido como
ósmosis y ejerce una presión osmótica, propiedad coligativa de gran importancia fisiológica ya que interviene
en la regulación del volumen de sangre circulante, así como en la formación o eliminación de edemas tisulares,
y es la razón por la cual el paciente diabético elimina frecuentemente grandes cantidades de orina (poliuria).
Esta última está ocasionada por la alta concentración de glucosa en sangre y forma parte de la triada sintomática
clásica del diabético: polifagia, polidipsia y poliuria. La medición de la presión osmótica se lleva a cabo
mediante el dispositivo llamado OSMÓMETRO. Este requiere de una membrana semipermeable y aunque las
que más se acercan a la perfección son las de ferrocianuro de cobre y las de pergamino, por ser más fácil de
conseguir, se utilizará una membrana dialítica de colodión (celulosa) que proporciona una medida aproximada
de la presión osmótica. La columna de sacarosa ejercerá finalmente una presión que se opone al paso del agua
(Presión Hidrostática). Calculando ésta, se puede conocer la presión osmótica ya que ambas son iguales.
Esto se hace mediante la fórmula: π = hρg donde,

π = presión osmótica
h = altura a la que asciende la solución de sacarosa (en metros)
ρ = densidad de la solución de sacarosa (1.088 g/mL), (convertirla a kg/m3)
g = aceleración debida a la gravedad (9.81 m/s2)
Efectuando esta operación encontramos la presión osmótica en Pascales. Para obtener atmósferas usamos la
siguiente equivalencia: una atmosfera igual a 1.013 x 105 Pascales
EXPERIMENTO 1. PREPARACIÓN DE SOLUCIONES PORCENTUALES.

• Utilizar la cantidad de NaCl que pesó en la práctica anterior.
• Preparar una solución de NaCl al 5% considerando que la pureza del reactivo es de 100%.
• Conservar la solución para el experimento de diálisis.
• Registrar sus resultados.

9
Evidencias de aprendizaje:
1) Describa detalladamente los cálculos que hizo para conocer la cantidad de agua destilada que es necesario
añadir al NaCl del sobre para que la solución sea al 5%.
2) Al considerar que la solución de NaCl es al 5%, calcule las concentraciones siguientes y detalle los cálculos
correspondientes. Molaridad, Normalidad, mEq/mL, mg/mL, moles%, Osmolaridad.
EXPERIMENTO 2. DIÁLISIS
a) Humedecer por inmersión en agua destilada durante 10 minutos el tubo de colodión o celofán, que
actuarán como una membrana, de aproximadamente 6 cm de largo por 2.5 cm de diámetro.
b) Durante los 10 minutos preparar dos tubos de ensayo limpios y etiquetarlos. Añadir al tubo uno 2 mL
de NaCl al 5% y 5 gotas de AgNO3. Al tubo número dos agregar 2 mL de solución de almidón al 1% y
2 gotas de solución de lugol. Agitar y observar la reacción que ocurre en cada tubo. Etiquetar como
testigo de cloruros y testigo de almidón respectivamente.
c) Pasado los 10 minutos de inmersión del colodión, cerrar un extremo de la membrana con un hilo de
algodón para obtener un saco. Desechar el agua destilada utilizada, enjuagar el vaso y llenar con agua
destilada nuevamente hasta un tercio de su volumen.
d) Llenar la membrana con una mezcla de 1 mL de solución de NaCl al 5% y 10 mL de solución de
almidón al 1%.
e) Cerrar cuidadosamente el otro extremo de la membrana, enjuagar con agua destilada y sumergir en el
vaso de precipitados con agua destilada, cuidando de no tocar las paredes.
f) Determinar la presencia de almidón y de cloruros en el líquido que rodea a la membrana del vaso de
precipitados, a tiempo 0 (inmediatamente después de sumergir el saco), 15, 30, 45 y 60 minutos.
g) Registrar sus resultados en la tabla siguiente:
Tiempo (min) Presencia de cloruros Presencia de almidón
0
15
30
45
60
Nota: Registrar los resultados como “positivo” o “negativo”
1) Ilustrar el montaje del experimento.
2) Explicar los resultados de la diálisis.

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EXPERIMENTO 3. MEDIDA DE LA PRESIÓN OSMÓTICA POR EL MÉTODO DIRECTO.

El osmómetro consiste en un recipiente que contiene una solución de sacarosa 1 M teñida con rojo neutro
conectado a un capilar de polietileno por el cual asciende el nivel del líquido (ver esquema de la tabla). El
recipiente es el cuerpo de una jeringa hipodérmica de 5 mL que presenta dos bandas de hule; la del extremo
inferior permite la fijación de una membrana de celofán humedecido previamente durante 5 minutos en agua
destilada. La banda superior sirve para sellar el orificio de llenado de la cámara. Por la parte correspondiente
al pivote, se le agrega el trocar metálico de un catéter el cual se introduce en el extremo de un capilar de
polietileno. El extremo inferior de la jeringa se sumerge en un vaso de precipitados con agua destilada. El
dispositivo lo instala el personal técnico del laboratorio.
Nota: cualquier error en el montaje del osmómetro se manifestará por salida de solución coloreada del
dispositivo.
a) Cuando el Profesor le indique, en el osmómetro marcar el nivel de la solución de sacarosa contenido en el
tubo capilar, el cual será el tiempo cero.
b) Medir cada 15 minutos el nivel ascendido hasta los 90 minutos.
c) Registrar sus resultados en la tabla siguiente:
Tiempo Altura π
min. mm Atm
0
15
30
45
60
75
90
1. Graficar el tiempo en minutos en el eje de las abscisas (eje x) y la altura en milímetros en el eje de las
ordenadas (eje y).
2. Calcular la presión osmótica en atmosferas y complete la tabla.
3. ¿Cuándo deberá detenerse el proceso osmótico?

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4. ¿Depende sólo de la altura la presión osmótica? Explique.

5. ¿Influye el radio del capilar en la presión osmótica? Explique.
6. ¿La sacarosa y el colorante dializan? Explique.
7. Identificar en el esquema de la tabla de resultados todas las partes del osmómetro.
EXPERIMENTO 4. PREPARACION DE SOLUCIONES.

• Preparar 50 mL de solución 0.5 M de CH3-COOH considerando los siguientes datos: El ácido acético tiene
un peso molecular de 60, la pureza del reactivo es de 99.7% y la densidad a 20°C es de 1.06 g/mL.
• Conservar para utilizar en el experimento siguiente.
• Registrar sus resultados
1) Describa detalladamente los cálculos que hizo para conocer el volumen de CH3COOH concentrado que
utilizó para preparar los 50 mL de dicha solución. R = _________ mL.
2) Considerando que la solución es 0.5M calcule las concentraciones siguientes detallando los cálculos:
% (p/v) =
Normalidad =
mmoles/L =
gramos/L =
mEq % =
Osmolaridad =
EXPERIMENTO 5. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN POR TITULACIÓN.

• Emplear la solución de CH3COOH (solución problema) que se preparó en el experimento 4.
• En un matraz Erlenmeyer de 250 mL colocar 10 mL de la solución de CH3COOH problema, midiéndolos con
la mayor exactitud posible.
• Añadir 2 gotas de fenoftaleína y titular utilizando solución de NaOH 0.2N. El punto de titulación se observará
cuando persista por más de 1 minuto un ligero color rosa.
• Registre los resultados.
1) Calcule el gasto teórico de NaOH 0.2 N
12
2) ¿Cuántos mL de NaOH 0.2 N gastó para neutralizar los 10 mL de la solución de ácido acético?
R = _________ mL
3) De acuerdo con los resultados que obtuvo y considerando que la solución de NaOH es exactamente 0.2 N.
¿Cuál es la verdadera normalidad del ácido acético problema?
4) Escriba el concepto de titulación ácido-base.
EXPERIMENTO 6. DIFUSIÓN SIMPLE EN LÍQUIDOS.

• Llene casi completamente una probeta de 100 mL con agua de la llave.
• Espolvorear con un aplicador de madera, unos granitos de azul de metileno sobre la superficie del agua.
• Observe el fenómeno que se lleva a cabo.
• Registre sus resultados.
• A continuación, caliente con sus manos la probeta en la parte media.
• Nuevamente observe que ocurre al agregar calor.
1) Ilustre el experimento.
2) ¿Es uniforme el descenso del colorante por la columna de agua?
3) ¿Qué sucede al calentar la parte media de la probeta?
4) ¿Qué es disolución, convección y difusión?

13
PRÁCTICA No. 3
ELECTRÓLITOS y pH
Las sustancias que permiten el paso de la corriente se conocen como electrólitos y a los que no manifiestan
esta propiedad como no electrólitos. A esta capacidad de dar paso a la electricidad se le conoce como
conductancia, propiedad que se debe a la movilidad de los iones.
Los electrólitos de clasifican en fuertes y débiles de acuerdo con el grado de disociación y facilidad con que
conducen la corriente eléctrica.
• Los electrólitos fuertes se disocian completamente como las sales minerales, los hidróxidos de metales
alcalinos, y los ácidos fuertes. En los líquidos del organismo encontramos ejemplos de electrolitos
fuertes: NaCl, KCl y CaCl2, entre otros.
• Son electrólitos débiles la mayor parte de los compuestos orgánicos como los ácidos: láctico, pirúvico,
urea y otros compuestos nitrogenados.
Disueltos en el agua corporal hay ejemplos de compuestos no electrólitos como glucosa y glicerol.
CONDUCTIVIDAD
La conductividad de las soluciones electrolíticas depende exclusivamente de las moléculas disociadas, y por
lo tanto depende del grado de disociación y de la concentración de los electrólitos presentes. Entre mayor sea
la concentración, mayor será la conductividad, hasta un límite determinado en el cual se hace constante y luego
disminuye, explicándose esto porque cuando la concentración de cationes y aniones es grande, interfieren entre
sí y en tal caso los cationes tienen una menor libertad para desplazarse debido a la interacción con los aniones
cercanos en la solución y viceversa.
Esta explicación se puede aprovechar para describir la fuerza iónica de una solución, ya que, al no desplazarse
libremente las moléculas en la solución, la “concentración activa” o “actividad” de las soluciones es menor
que la concentración real, por lo tanto:
I = (½) ∑Cz2
La fuerza iónica (I) es la semisuma de los productos de la concentración (C) de los iones presentes por sus
respectivas valencias (z) al cuadrado. Se sabe que las fuerzas de atracción entre iones de carga con signos
contrarios disminuyen rápidamente al crecer las distancias. En las soluciones concentradas, en las que los iones
se encuentran más cercanos, se hacen mayores y por lo tanto la actividad se hace menor, en las soluciones muy
diluidas la actividad y la concentración efectiva son equivalentes entre sí.

14
EXPERIMENTO 1. ELECTRÓLISIS DEL AGUA.

• Coloque un cristalizador sobre un fondo blanco y agregue 50 mL de solución de NaCl al 10%.
• Introducir en la solución dos electrodos de carbón conectados a una fuente de energía como el puente de
Wheatstone o una pila de 6 ó 9 V.
• Observe la formación de gas en ambos electrodos, agregue 5 gotas de azul de bromofenol exactamente entre
ambos electrodos como indicador.
• Observe los cambios de coloración en la solución cercana a los electrodos.
a) Anote las reacciones que se llevan a cabo en cada uno de los electrodos, incluida la del indicador.
b) Ilustre el proceso de la electrólisis del agua.
EXPERIMENTO 2. CONDUCCIÓN DE CORRIENTE EN ELECTRÓLITOS FUERTES Y DÉBILES.

• Coloque la solución de HCl 0.5M en un vaso de precipitados de 100 mL en cantidad suficiente para que tenga
contacto con los electrodos en una tercera parte de su longitud.
• Introducir los electrodos conectados a una fuente d energía y observe el paso de la corriente eléctrica
manifestado por la intensidad de la luz emitida por el foco, como se indique en el siguiente esquema:
Lámpara
Fuente
• Observe la intensidad luminosa con relación a la distancia entre los electrodos, sin ponerlos en contacto.
• Repita el experimento usando CH3COOH 0.5M.
• Registrar sus resultados en la siguiente tabla, valorando por medio de cruces la intensidad luminosa y la
variación observada.
Solución Intensidad luminosa Variación con la distancia
HCl 0.5M
CH3COOH 0.5M

15
1) Ilustre y explique sus resultados.
EXPERIMENTO 3. PREPARACIÓN DE SOLUCIONES A pH DIFERENTES.

• Con base en los cálculos previamente realizados preparar 100 mL del par de soluciones que le indique su
profesor.
• Preparar HCl a pH = 1.4, 1.7 y 2.0 a partir de HCl al 37% de pureza y densidad de 1.18 g/mL.
• Preparar CH3COOH a pH = 3.07, 3.22 y 3.37 a partir de CH3COOH al 99.7% de pureza, densidad de 1.06
g/mL y pKa = 4.74
• Prepare 50 mL de una dilución 1:10 de cada una de las soluciones asignadas.
• Conservar para el siguiente experimento.
Evidencia de aprendizaje:
1) Detalle los cálculos de todas las soluciones indicadas en el experimento.
2) Calcule la concentración y el pH de las diluciones preparadas.
3) Explique el por qué se le asignaron ese par de soluciones para preparar.
EXPERIMENTO 4. ACIDEZ VERDADERA Y ACIDEZ DE TITULACIÓN.

• Determinar el pH con el potenciómetro y tiras reactivas de cada una de las soluciones que preparó en el
experimento anterior.
• A continuación, coloque en un matraz Erlenmeyer una alícuota de10 mL de una de las soluciones preparadas,
titule con NaOH 0.1N y añada 2 gotas de fenolftaleína como indicador.
• Repita el paso anterior con las otras tres soluciones preparadas cada una por separado.
• Registrar sus resultados en la tabla siguiente:
TITULACIÓN
pH
Solución Gasto de NaOH 0.1N mL Concentración
N
teórica Teórico Colorimétrico Potenciométrico Teórico Experimental N real
HCl
HCl 1:10
CH3COOH
CH3COOH 1:10

16
PRÁCTICA No. 4
SOLUCIONES REGULADORAS
A las soluciones reguladoras se les pueden añadir cantidades relativamente grandes de ácidos o álcalis sin
alterar de manera significativa su pH. Esta acción amortiguadora se debe a la presencia en la solución de un
sistema formado por un ácido o una base débil y su sal correspondiente. Si se toma como ejemplo una solución
que contenga un ácido débil, al que representaremos por HA y su sal, representada por BA los hidrogeniones
existentes en ella procederán únicamente de las moléculas ácidas, que se disocian como sigue:
El equilibrio de la reacción está dado por la siguiente ecuación:
Donde Ka es la constante de disociación del ácido. De esta ecuación se deduce que la concentración de
hidrogeniones es:
La relación entre estas dos constantes es, sin embargo, tan sensiblemente constante en condiciones ordinarias
que podemos afirmar que la concentración de A- es igual a la concentración de la SAL. Sustituyendo una
expresión por otra en la ecuación anterior tenemos:
Si se toman logaritmos negativos en ambos términos de la ecuación, (manipulación matemática para manejar
números muy pequeños o grandes), queda así:
Ahora bien, si -log [H+] es igual a pH, por analogía podemos decir que –log de Ka es igual a pKa por lo que:

17
Por otra parte, por las leyes de los logaritmos, las expresiones –log de ([Ácido]/[Sal]) y + log de ([Sal]/[Ácido])
son iguales y la segunda puede reemplazar a la primera, de tal modo que hechas todas las modificaciones la
ecuación queda finalmente como sigue:
Esta ecuación se conoce con el nombre de Ecuación de Henderson–Hasselbalch y nos indica que el pH de una
solución que contenga un ácido débil y su sal está determinado por el valor de pKa (constante para cada ácido)
y por el logaritmo del cociente que resulta de dividir la concentración de la sal entre la concentración del ácido.
Por ejemplo, el valor de la constante de disociación Ka del ácido acético es de 1.8 x10 -5. El valor de su pKa es
por lo tanto igual a 4.74. Si tenemos una solución reguladora que posea iguales cantidades de CH3COOH y
CH3COONa en concentración 0.1N, el pH de esa solución sería de:
Además de servir para la preparación de soluciones de pH conocido, las soluciones reguladoras tienen dentro
del organismo un papel de importancia capital que es el de evitar que aumente o disminuya de manera
importante la concentración de iones hidrógeno, ya que la vida humana es posible en límites muy estrechos de
pH, es decir, para la sangre arterial un pH de 7.40 y para sangre venosa y líquidos intersticiales 7.35. Este
último es menor por tener más CO2 y por lo tanto más H2CO3 producido metabólicamente. Se sabe que los
límites máximos de pH en los que por algunos minutos puede permanecer el organismo sin sufrir muchas
alteraciones son de 7.0 a 7.8. En los líquidos donde existen y actúan al mismo tiempo varios sistemas
amortiguadores, como sucede en la sangre, el ácido o la base que entra es amortiguado por todos los sistemas
presentes de manera proporcional a la eficacia de cada uno de ellos.
La regulación fisicoquímica tiene lugar en todos los medios que contienen reguladores, constituidos
principalmente por ácidos o bases débiles y sus sales. Por ejemplo, el de fosfatos H2PO4-/HPO4= con un pKa2
de 7.2 (o de 6.8 a la temperatura corporal), es el principal amortiguador intracelular.
El principal amortiguador extracelular en la sangre y líquidos intersticiales es el sistema bicarbonato
H2CO3/HCO3- con un pKa de 6.1.

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En el interior del eritrocito, además del bicarbonato, el amortiguador de mayor importancia es el de

hemoglobina reducida / oxihemoglobinato (HHb/HbO2). Otros sistemas son los de proteínas y aminoácidos.
Todos estos sistemas funcionan de manera inmediata cuando existen excesos de álcali ó ácido ya que un cambio
del pH afecta la estructura y la actividad de las proteínas, la distribución de otros iones entre las células y el
líquido extracelular, la actividad de hormonas y fármacos, etc.
Comportamiento ácido-base de la glicina. Existen sustancias de mucha importancia en bioquímica como son
los aminoácidos y las proteínas los cuales tienen grupos ácidos y básicos, por lo que actúan como anfolitos. En
esta práctica se determinarán las curvas de titulación de la glicina con HCl y con NaOH.
La glicina es un aminoácido que tiene un carboxilo cuyo pk a se denomina pka1 y un grupo amino cuyo pka se
denomina pka2. Una propiedad conocida de los aminoácidos es el punto isoeléctrico (pI) que es el pH en que
el aminoácido tiene carga neta 0 en solución, y en este caso se calcula con la siguiente fórmula:
EXPERIMENTO 1. APRECIACIÓN DEL PODER REGULADOR Y EFECTO DE LA

CONCENTRACIÓN
• Preparar 50 mL de una solución amortiguadora con el valor de pH que le indicará su profesor (7.0, 7.2, 7.4 y
8.0), emplear KH2PO4 0.01 M y Na2HPO4 0.01 M (pKa2 = 7.2).
• Preparar 50 mL de una solución amortiguadora con el valor de pH que le indicará su profesor (7.0,7.2, 7.4 y
8.0), emplear KH2PO4 0.1 M y Na2HPO4 0.1 M (pKa2 = 7.2).
• Medir el pH potenciométrico y colorimétrico de las soluciones anteriores y registrar los resultados en la tabla.
• Armar dos dispositivos de titulación (llenar, purgar y aforar), uno será para titular con HCl 0.1 N las soluciones
amortiguadoras preparadas previamente y el otro dispositivo será para titular con NaOH 0.1 N.
• Añadir una alícuota de 10 mL de la solución amortiguadora que preparó en un matraz Erlenmeyer de 250
mL, medir con una pipeta volumétrica de 10 mL. Añadir 5 gotas de azul de timol y titular con HCl 0.1 N
hasta observar el cambio de color de amarillo a rojo. Repetir la titulación para cada solución
amortiguadora preparada por duplicado.
• Agregar una alícuota de 10 mL de la solución amortiguadora que preparó en otro matraz Erlenmeyer de
250 mL, medir con una pipeta volumétrica de 10 mL. Añadir 5 gotas de azul de timol y titular con NaOH
0.1 N hasta observar el cambio de color de amarillo a azul. Repetir la titulación para cada solución
amortiguadora preparada por duplicado.

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• Registre los resultados en la siguiente tabla.
pH pH Gasto de Gasto de
Concentración
teórico Colorimétrico Potenciométrico HCl 0.1 N NaOH 0.1 N
7.0 0.01
7.0 0.1
7.2 0.01
7.2 0.1
7.4 0.01
7.4 0.1
8.0 0.01
8.0 0.1
1) Describir detalladamente los cálculos que realizó para cada uno de los pH solicitados.
2) Explicar la coincidencia o no, entre sus resultados y el cálculo teórico.
3) Explicar los resultados con base en la teoría.
EXPERIMENTO 2. CURVAS DE TITULACIÓN DE LA GLICINA.

• Añadir 30 mL de solución de glicina 0.1 N en un vaso de precipitados de 100 mL, con la ayuda de su profesor
agregar una barra magnética y colocar sobre una placa de agitación, medir el pH y sin retirar el electrodo
titular con NaOH 0.1 N como se encuentra indicado en la tabla y registrar sus resultados.
• Añadir 30 mL de solución de glicina 0.1 N en otro vaso de precipitados de 100 mL, con la ayuda de su
profesor agregar una barra magnética y colocar sobre el agitador, medir el pH y sin retirar el electrodo titular
con HCl 0.1 N, como se encuentra indicado en la tabla y registrar sus resultados.

20
Titulación con Titulación con

Glicina 0.1 N Glicina 0.1 N
HCl 0.1N NaOH 0.1 N
mL Acumulativo pH mL Acumulativo pH
0 0 0 0
2 2 2 2
3 5 3 5
4 9 4 9
5 14 5 14
5 19 5 19
5 24 5 24
1 25 1 25
1 26 1 26
1 27 1 27
1 28 1 28
0.5 28.5 0.5 28.5
0.5 29 0.5 29
1) Graficar los valores acumulativos de HCl con signo negativo y a los de NaOH con signo positivo, en el eje
de las abscisas (X) y el pH en el eje de las ordenadas (Y).
2) Identificar en la gráfica los valores de pK1 y pK2.
3) Calcular el punto isoeléctrico (pI) sabiendo que: pK1 + pK2.
2

21
PRÁCTICA No.5
PROTEÍNAS
Su nombre deriva del griego proteios que significa “primordial” o fundamental; contienen en su molécula C,
H, O, N y en ocasiones P y S. El nitrógeno constituye en promedio el 16%. Por hidrólisis dan  aminoácidos,
los cuales varían en número, cantidad y posición en cada proteína. La actividad de una proteína depende de su
conformación espacial, por lo que agentes físicos y químicos que alteran los diferentes enlaces son capaces de
anularla. Algunos de los agentes desnaturalizantes más comunes son ácidos o bases, detergentes, metales
pesados, solventes orgánicos, alcaloides, calor, radiación ultravioleta, rayos x, ondas ultrasónicas, sales
inorgánicas, sustancias orgánicas como urea, guanidina, agentes reductores, agentes oxidantes, etc. Las
proteínas desnaturalizadas pierden su actividad, modifican su solubilidad y precipitan. Tal como existen en la
naturaleza se denominan proteínas nativas. Las propiedades fisicoquímicas y biológicas características de las
proteínas se deben a los aminoácidos que las constituyen y las reacciones coloridas que se utilizan para su
análisis en realidad detectan la presencia de un aminoácido específico. Muchas de las propiedades químicas de
las proteínas son comunes a varias especies por que contienen el mismo tipo de aminoácidos, por lo que para
caracterizar una proteína es necesario estudiar sus propiedades fisicoquímicas las cuales dependen del peso
molecular, de su carga eléctrica neta y de la conformación que adopte la molécula.
REACCIONES QUÍMICAS.
• REACCIÓN DE MILLÓN: Es específica para el grupo fenólico y por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen este grupo funcional, como el fenol, ácido salicílico, timol, tirosina y todas aquellas
proteínas que contengan tirosina.
• REACCIÓN DEL BIURET: Todas las moléculas que contengan dos o más uniones peptídicas, por lo tanto,
todas las proteínas y péptidos no menores de 3 unidades, dan positiva a esta reacción. El nombre se debe al
compuesto biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Cuando una proteína o un
polipéptido se hacen reaccionar con CuSO4 en solución alcalina se produce un color característico púrpura
o violeta. El color se debe a un complejo que resulta al unirse el cobre con los átomos de nitrógeno de los
enlaces peptídicos. Esta reacción nos sirve para diferenciar las proteínas y péptidos de los aminoácidos y su
utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrólisis, la reacción será negativa cuando la hidrólisis sea
completa.
• REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS: Las proteínas que contengan los aminoácidos cisteína
y cistina cuando se tratan con álcalis concentrados, desprenden H 2S, el cual se puede reconocer por su olor

22
desagradable y característico, o bien, por la formación de un precipitado negro de PbS al reaccionar con
(CH3COO)2Pb.
• REACCIÓN XANTOPROTÉICA: Esta reacción se debe a la formación de nitroderivados aromáticos por
reacción del ácido nítrico sobre grupos aromáticos que poseen algunos aminoácidos como la fenilalanina,
la tirosina y el triptófano. Por lo tanto, la dan positiva todas aquellas proteínas que tengan aminoácidos
aromáticos en su molécula.
• REACCIÓN DE LA NINHIDRINA: Es una de las reacciones más sensibles para identificar aminoácidos
en general, ya que detecta una parte de aminoácido en 1 500 000 partes de agua. Aminoácidos y muchas
aminas primarias dan un color violeta característico. La prolina da coloración amarilla. Por su sensibilidad
esta reacción se emplea para valoración cuantitativa de aminoácidos por colorimetría.
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS.
• DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS: Cuando la estructura altamente ordenada de una proteína se
somete a la acción de agentes fisicoquímicos desnaturalizantes, queda reducida al llamado polímero
estadístico o cadena de aminoácidos y además pierde toda actividad biológica. Algunos de los agentes
desnaturalizantes más importantes son los metales pesados, los ácidos fuertes y el alcohol.
• PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS POR METALES PESADOS: Las proteínas cuando se encuentran en
solución a pH superiores a su punto isoeléctrico son capaces de reaccionar con diferentes metales pesados
formando los correspondientes proteinatos insolubles. Tomaremos como ejemplo dos proteínas, la peptona
y la gelatina y observaremos su reacción, en forma simultánea frente a los metales pesados: Fe, Ag, Hg, y
Pb.
• PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS POR EFECTO DE ÁCIDOS FUERTES: Los ácidos fuertes son
capaces de desnaturalizar a las proteínas formando productos de desnaturalización insolubles conocidos
como metaproteínas.
• PUNTO ISOELÉCTRICO: Las proteínas al igual que los aminoácidos son moléculas anfóteras. Es decir, pueden
reaccionar con ácidos o con álcalis. En medio ácido las proteínas se combinan con los iones hidrógeno y quedan
con carga positiva. En medio alcalino liberan protones y quedan con carga negativa. El pH en el cual una proteína
no posee carga eléctrica neta se denomina punto isoeléctrico, a este pH la proteína presenta su mínima solubilidad
y generalmente precipita, teniendo además una viscosidad máxima.

23
EXPERIMENTO 1. REACCIÓN DE MILLÓN.

• Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y enumerar del 1 al 5, colocar 2 mL de la solución indicada
en el tubo correspondiente de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubo Solución
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Caseína al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albúmina al 2%
• Añadir 5 gotas del reactivo de Millón a cada tubo.

• Incubar todos los tubos al mismo tiempo en baño María a ebullición durante 5 minutos. ¡PRECAUCIÓN!
• La presencia de tirosina se pone de manifiesto por la aparición de un precipitado blanco el cual por acción del
calor se vuelve rojo. La presencia de sales y soluciones muy alcalinas, pueden interferir en esta reacción.
• Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta práctica.
1) Escribir la composición del reactivo de Millón y explicar cuál es el mecanismo propuesto para esta reacción.
2) Ilustrar sus resultados.
EXPERIMENTO 2. REACCIÓN DEL BIURET.

• Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, añadir 1 mL de la solución indicada en
el tubo correspondiente de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubo Solución
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Caseína al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albúmina al 2%
• Añadir 2 mL de solución de NaOH al 10% en cada tubo ¡PRECAUCIÓN!

• Agregar 5 gotas de solución de CuSO4 al 1% en cada tubo.

24
• Agitar los tubos y observar la reacción que se produce en cada caso. La aparición de una coloración violeta
o rosa en no más de 20 minutos debe considerarse como prueba positiva.
1) ¿Se puede considerar la reacción del biuret como característica para todas las proteínas? ¿Por qué?
2) Escribir la reacción.
EXPERIMENTO 3. REACCIÓN XANTOPROTÉICA.

• Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, colocar 2 mL de la solución indicada
Tubo Solución
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Caseína al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albúmina al 2%
• Añadir 1 mL de HNO3 concentrado a cada tubo ¡CON CUIDADO!

• Incubar en baño María a ebullición durante 2 minutos. Observar una coloración amarilla característica.
• Enfriar y añadir 1ml de NH4OH concentrado, resbalar cuidadosamente por las paredes del tubo, para estratificar,
cuidando de no agitar el tubo.
• Observar un anillo naranja en la interfase.
1) Escribir la reacción.
2) ¿Se puede considerar esta reacción general para todas las proteínas?
3) Explicar por qué se tiñe de amarillo la piel al contacto con el HNO3.
4) Ilustrar sus resultados

25
EXPERIMENTO 4. REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS.

• Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, añadir 2 mL de la solución indicada
Tubo Solución
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Caseína al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albúmina al 2%
• Agregar 2 mL de NaOH al 10% a cada tubo ¡PRECAUCIÓN!

• Incubar en baño María a ebullición durante 2 minutos.
• Añadir a todos los tubos 0.5 mL de solución de Pb (CH3COO)2.
• Colocar los tubos en baño María a ebullición por 10 min. El oscurecimiento de la solución o la formación
de un precipitado negro indica la presencia de aminoácidos azufrados.
1) Escribir la reacción química que se ha efectuado.
2) ¿Qué sustancias pueden interferir en esta reacción?
EXPERIMENTO 5. REACCIÓN DE NINHIDRINA.

• ¡PRECAUCIÓN! Para la realización de este experimento usar guantes o pinzas para manipular el papel
filtro.
• Colocar 6 cuadros de papel filtro Whatman No. 1 de medidas 2 x 2 cm sobre una hoja blanca y numerar del
1 al 6 (procurando rotular el papel con lápiz, no tinta).
• Agregar1 gota sobre cada cuadro de papel filtro de las soluciones siguientes:

26
Papel Solución
1 Agua destilada
2 Prolina al 2%
3 Peptona al 2%
4 Caseína al 2%
5 Gelatina al 2%
6 Albúmina al 2%
• Añadir una gota de solución de Ninhidrina en butanol al 0.1% a cada papel.

• Colocar el papel en el horno a 110 °C durante 10 minutos ¡PRECAUCIÓN! Avisar a su Profesor.
2) ¿Qué sustancias dan positiva la reacción de la Ninhidrina, además de las proteínas, péptidos y aminoácidos?
TABLA DE RESULTADOS DE ALGUNAS PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS
REACCIÓN
Sustancia
Millón Biuret Xantoprotéica aa azufrados Ninhidrina
Agua destilada
Prolina
Peptona al 2%
Gelatina al 2%
Caseína al 2%
Albúmina al 2%
PROPIEDADES FÍSICO–QUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

EXPERIMENTO 6. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS POR METALES PESADOS.
• Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4, agregar 1 mL de peptona al 2% a
cada tubo. Rotúlelos como P1–P4 (P=peptona).
• Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4, agregar 1 mL de gelatina al 2% a
cada tubo. Rotúlelos como G1–G4 (G=gelatina).
• A los tubos 1 de ambas series agregar 2 gotas de solución de FeCl3 al 2%
• A los tubos 2 de ambas series agregar 2 gotas de solución de AgNO3 al 2%
• A los tubos 3 de ambas series agregar 2 gotas de solución de HgCl2 al 2%

27
• A los tubos 4 de ambas series agregar 2 gotas de solución de Pb (CH3COO) 2 al 2%

• Observar y registrar los cambios; posteriormente agregue hasta completar a 5 gotas a cada tubo y repita la
observación.
• Registrar sus resultados en la tabla, evaluando por medio de cruces (de + a +++) según la turbiedad del precipitado:
Tubos 2 gotas 5 gotas

Solución
Serie P Serie G Serie P Serie G
1 FeCl3
2 AgNO3
3 HgCl2
4 Pb (CH3COO) 2
1) ¿Tiene alguna influencia el pH en el efecto de los metales pesados sobre las proteínas?
2) ¿Tienen todos los metales pesados el mismo efecto precipitante sobre las proteínas?
EXPERIMENTO 7a. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS POR EFECTO DE ÁCIDOS FUERTES.

• Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5.
• Añadir 1 mL de la solución indicada en el tubo correspondiente de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubo Solución
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Caseína al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albúmina al 2%
• Añadir a cada tubo 1 mL de CCl3COOH al 5%, estratificando por las paredes del tubo.
• Observar y registrar sus resultados valorando el grado de turbidez de 0 a +++ en la siguiente tabla:
Solución CCl3COOH al 5%
Agua destilada
Peptona al 2%
28
Caseína al 2%
Gelatina al 2%
Albúmina al 2%
1) ¿Cómo puede explicar el efecto desnaturalizante del CCl3COOH y en general de cualquier ácido?
EXPERIMENTO 7b. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS EN ORINA

• Preparar 2 tubos de ensayo, etiquetar y marcar un tubo como orina normal y el otro como orina de paciente
nefrótico, agregar 3 mL de la orina correspondiente a cada tubo.
• Añadir 2 mL de la mezcla HNO3-CH3OH resbalando lentamente por la pared a cada tubo, para estratificar.
• Observar y registrar sus resultados (positivo o negativo).
Tubo Muestra HNO3-CH3OH
1 Orina normal
2 Orina de pac. nefrótico
1) Explicar el fenómeno observado.
2) Ilustrar y describir lo que sucede en la interfase.
EXPERIMENTO 8. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS POR EFECTO DEL ALCOHOL.

• Preparar una serie de 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, añadir 2 mL de la solución indicada
Tubo Solución
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Caseína al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albúmina al 2%
6 Orina de nefrótico
• Agregar cuidadosamente 3 mL de CH3CH2OH al 96° a cada tubo.

• Observar y registrar los resultados valorando la turbidez de 0 a +++ en la siguiente tabla:
Solución CH3CH2OH
29
Agua destilada
Peptona al 2%
Caseína al 2%
Gelatina al 2%
Albúmina al 2%
Orina de nefrótico
1) ¿Observa turbidez en todos los tubos?
2) Ilustrar y describir lo que sucede en cada tubo.
EXPERIMENTO 9. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA CASEÍNA.

• Agregar los reactivos, según se indica en la tabla siguiente:
Solución / Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Agua destilada mL 8.4 7.8 8.8 8.5 8.0 7.0 5.0 1.0 7.4
Ácido acético 1N mL - - - - - - - - 1.6
Ácido acético 0.1N mL - - 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 -
Ácido acético 0.01N mL 0.6 1.2 - - - - - - -
Caseína al 5% en acetato de sodio 0.1N mL 1 1 1 1 1 1 1 1 1
• Agitar los tubos y observe el grado de turbidez o la precipitación que se produce en el tiempo cero (en el
momento) y después de 15’ y 30’.
• Registrar sus observaciones en la tabla valorando con cruces.
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Observación al tiempo cero
Observación a los 15´
Observación a los 30´
pH teórico
1) Calcule el pH teórico de cada tubo, aplicando la ecuación de Henderson-Hasselbalch y regístrelo en la tabla.
2) ¿Cuál es el punto isoeléctrico de la caseína? Calcule y discuta sus resultados comparando con el teórico.
3) Ilustrarlos resultados.

30
PRÁCTICA No.6
CINÉTICA QUÍMICA Y CATÁLISIS
De acuerdo con la Ley de Acción de Masas, la velocidad de una reacción química depende de la concentración
de las sustancias que intervienen en la reacción. Esta Ley establece que: “La magnitud de una reacción es
proporcional a la masa activa de las sustancias reaccionantes presentes en ese momento”. El término
masa activa significa la concentración molecular o sea, la cantidad presente por unidad de volumen. Si
reaccionan:
La velocidad V1 con que reaccionan A y B para producir C y D depende de la concentración de cada reactivo
y de la afinidad que tengan para reaccionar entre sí, pero como esto se puede considerar constante, podemos
decir que: V1 = k1[A][B].
La velocidad V2 con que reaccionan C y D para producir A y B depende a su vez, de la concentración de C y

D y de la afinidad. Por lo tanto, podemos decir también que: V2 = k2[C][D]. Cuando se alcanza el equilibrio
químico, las dos velocidades son iguales. Es decir: V1 = V2
Sustituyendo estos valores por sus equivalentes, tenemos:
Como el cociente de dos constantes es siempre igual a una constante podemos decir que:
Que es la expresión matemática de la Ley de Acción de Masas y keq se conoce como Constante de Equilibrio.

31
VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN QUÍMICA

Las reacciones químicas de acuerdo con el número de moléculas que toman parte de ellas se clasifican en:
Monomoleculares: Cuando participa una sola molécula. Ejemplo: A → B
Bimoleculares: Cuando participan dos moléculas. Ejemplo: A + B → AB
Trimoleculares: Cuando participan tres moléculas simultáneamente. Ejemplo: A + B + C → ABC
Las reacciones trimoleculares son muy raras y reacciones de más de tres reaccionantes no se conocen. Cuando
se estudia la cinética de una reacción, tiene más importancia conocer el orden de la reacción que el tipo. El
orden de una reacción nos indica la relación entre la velocidad y la concentración de los reactivos, por lo que
se clasifican en:
Reacciones de orden cero. Su velocidad no es afectada por la concentración. Está determinada por algún
otro factor limitante como absorción de luz, velocidad de difusión, etc.
Reacciones de primer orden. Su velocidad de reacción es directamente proporcional a la concentración de
una de las sustancias reaccionantes.
Reacciones de segundo orden. Su velocidad de reacción es proporcional a la concentración de dos
sustancias reaccionantes.
La mayor parte de las reacciones enzimáticas se caracterizan por seguir el modelo correspondiente a las
reacciones de primer orden. Matemáticamente la reacción puede representarse así:
dt= tiempo, dc = concentración del material, Ke = constante específica de velocidad de reacción
Si representamos por a la concentración inicial de material y por x la cantidad que ha reaccionado en el tiempo
t, la expresión a-x significa concentración del material en el tiempo t. La ecuación anterior puede expresarse
en función de a, x y t y al integrarla nos queda:
Cuando se ha completado la descomposición de la mitad del material, la ecuación se simplifica y queda:

32
Donde t1/2 es el período de vida media, es decir, el tiempo necesario para que se descomponga la mitad de una
cantidad dada de material reaccionante.
Desde hace muchos años se sabía en forma empírica que la velocidad de muchas reacciones aumenta al
aumentar la temperatura. Arrhenius encontró una relación que expresa matemáticamente la forma como la
temperatura afecta la velocidad de una reacción, la cual está dada por la siguiente ecuación:
La cual indica que el cambio en el logaritmo natural de la constante de velocidad de una reacción es inversamente
proporcional al cuadrado de la temperatura absoluta multiplicada por la constante de los gases. E es la energía de
activación. Actualmente se considera que para que las moléculas puedan reaccionar deben ser primero activadas,
es decir, requieren una cantidad de energía E. Integrando entre límites la ecuación de Arrhenius:
Si consideramos que E = 1200 calorías al aumentar la temperatura de 22°C a 32°C, tendríamos:

33
Esto quiere decir que por cada 10°C de aumento la velocidad de la reacción se duplica. En la mayor parte de
las reacciones se observa este aumento bajo ciertas temperaturas límites.
Se sabe que muchas reacciones químicas son afectadas por el pH del medio o el aumento de [H+], sobre todo
aquellas en las que participan ácidos. Actualmente se acepta que las moléculas deben ser activadas antes de
que puedan reaccionar. Aparentemente el pH ácido favorece la ionización y el estado iónico se puede
considerar como un estado activado.
La velocidad de una reacción química frecuentemente es afectada por la presencia de “sustancias extrañas”
que permanecen inalteradas al terminar la reacción. Cualquier sustancia que sea capaz de acelerar una reacción
química y que no sea consumida por ellas, se denomina catalizador y el proceso se conoce con el nombre de
catálisis. La función de un catalizador es disminuir la energía de activación, por lo que las moléculas son
activadas con menor cantidad de energía produciéndose reacciones más rápidas. En un principio se supuso que
los catalizadores actuaban por “presencia”. Es decir, que no intervenían en los procesos que catalizaban. Sin
embargo, actualmente se acepta que el catalizador se combina con el sustrato formando un complejo
intermediario inestable y altamente reactivo. Supongamos la reacción: A + B → AB. Esta reacción en
condiciones normales se efectúa muy lentamente, pero si se añade un catalizador C apropiado, tenemos: A +
B + C → (AC) + B → AB + C. Estas reacciones son rápidas y el catalizador puede ser usado una y otra
vez. Estas sustancias pueden ser de naturaleza inorgánica o bien sustancias orgánicas complejas producidas
por las células y son denominadas enzimas. La sacarosa es un disacárido no reductor, pero al hidrolizarse, cada
molécula libera una molécula de glucosa y una de fructosa, ambas reductoras. Basándose en esto es posible
visualizar y cuantificar la hidrólisis de la sacarosa midiendo la concentración de azúcares reductores con algún
reactivo apropiado. Una característica importante entre los catalizadores inorgánicos y las enzimas es que
ambos solo son capaces de acelerar un proceso que ya está en marcha. Para esta práctica emplearemos como
enzima la sacarasa, también conocida como invertasa o fructofuranosidasa; la cual, es una de las enzimas
mejor conocidas y estudiadas. Actúa hidrolizando los azúcares que contienen fructosa. Así hidroliza la
estaquiosa (tetrasacárido), la rafinosa (trisacárido), y alcanza su máxima velocidad con la sacarosa (disacárido).
Se puede medir la hidrólisis observando el cambio en la rotación óptica o valorando el poder reductor de los
productos obtenidos.

34
EXPERIMENTO 1. COMPROBACIÓN DE LA LEY DE ACCIÓN DE MASAS.

• Agregar en un vaso de precipitado de 250 mL de capacidad: 100 mL de agua destilada (medir con una
PROBETA), 1 mL de solución de NH4SCN 0.2 M y 1 mL de solución de FeCl3 0.2M en HCl 0.1N
mezclando hasta lograr la completa homogeneidad. Observar la aparición de una coloración roja, debido a
la formación de (Fe (SCN)3)
• Añadir en cuatro frascos de gerber, 25 mL en cada uno la mezcla reaccionante anterior.
• Agregar a cada vaso los reactivos descritos en la tabla siguiente:
Frasco Reactivo
FeCl3 0.2M en HCl 0.1N NH4SCN 0.2M NH4Cl
1 0.5 mL 0.5 mL --
2 1.0 mL 1.0 mL --
3 -- -- 5.0 mL
4 Testigo --
• Observar y registrar sus resultados, en la siguiente tabla:
Desplazamiento de la Reacción
Frasco
(según la intensidad del color)
1
2
3
4
2) Describir lo que observó de acuerdo con la intensidad de la coloración en cada frasco y, según la Ley de
Acción de Masas y el principio de Le Chatelier, explique el fenómeno.
EXPERIMENTO 2. VELOCIDAD DE DESCOMPOSICIÓN DEL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO (H2O2).

• Colocar un dispositivo de titulación. Llenar la bureta de 25 mL con una solución de KMnO4 0.01M.
• Depositar en un matraz Erlenmeyer de 250 mL un volumen de 5 mL de una solución problema de H2O2
que se encuentra en hielo (pregunte a su profesor) y 2 mL de H2SO4 (1:6) ¡PRECAUCIÓN!
• Calentar la mezcla en un soporte universal con tela de asbesto hasta casi ebullición y en caliente titule con
KMnO4. El punto final de la titulación lo observará cuando persista un ligero color rosa, por exceso de la
solución de permanganato. El H2SO4 y el calentamiento tienen por objeto impedir la formación de MnO2.

35
Haga esta determinación por duplicado y calcule el promedio de las dos determinaciones (esta será su
concentración del problema al tiempo cero).
• Preparar una mezcla de 50 mL de sangre desfibrinada al 0.06% y 50 mL de una solución problema de
H2O2, al momento de realizar la mezcla se inicia el registro del tiempo.
• Depositar alícuotas de 10 mL de la mezcla de reacción en un matraz Erlenmeyer a los 5, 10, 20, 30 y 40
minutos para titular en cada caso, recordando agregar 2 mL de solución de H2SO4 (1:6), calentar hasta
ebullición y titular en la forma ya explicada.
• Registrar sus resultados en la siguiente tabla:
Tiempo/seg KMnO4 0.01M/mL (a – x) moles/litro log a/(a-x) Ke
300 (5´)
600 (10´)
1200 (20´)
1800 (30´)
2400 (40´)
1) Determinar el orden de reacción gráficamente. Para calcular la Ke a cada tiempo se debe utilizar la ecuación:
2) Escribir las reacciones químicas que se han efectuado.
EXPERIMENTO 3. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA

REACCIÓN QUÍMICA.
• Disponer de baños María a diferentes temperaturas (una por equipo) pregunte al Profesor.
• Añadir 0.25 g de KI y agregar 25 mL (medir con PROBETA) de solución de H2SO4 1:6 en un vaso de
precipitado de 100 mL.
• Agitar hasta disolución completa y agregar 25 mL de agua destilada para completar a 50 mL (medir con
PROBETA). Esta solución se denominará Solución de ácido yodhídrico (HI, rotúlelo con este nombre).
• Nota: Considere que se utilizará en este experimento (25 mL) y en el siguiente (25 mL).

36
• Preparar una serie de 5 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 5, agregar los reactivos que se muestra
en la tabla siguiente y pre incube cada tubo según corresponda.
Tubo
1 2 3 4 5
Solución
HI mL 5 5 5 5 5
Na2S2O3 0.02N mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
Almidón No. de gotas 5 5 5 5 5
Pre incubar 5 minutos a: 5 °C 25 °C 40 °C 60 °C 90 °C
• Agregar a cada tubo H2O2 al 0.2%como se indica en la tabla. Nota: Considere realizar cada tubo por separado
con el objetivo de medir con mayor precisión el tiempo en que aparece súbitamente el color azul intenso.
Tubo
1 2 3 4 5
Solución
H2O2 al 0.2% mL 2 2 2 2 2

Temperatura Tiempo de reacción
(°C) (aparición del color azul en segundos)
5
25
40
60
90
1. Escribir las reacciones químicas que se han efectuado.
2. Trazar la gráfica de 1/tiempo de reacción en las ordenadas contra la temperatura en las abscisas.
EXPERIMENTO 4. EFECTO DE LA [H+] SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN QUÍMICA.

• Preparar una serie de 5 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 5.
• Agregar los reactivos según se indica en la tabla siguiente:

37
Tubo 1 2 3 4 5
Solución
HI mL 5 5 5 5 5
Na2S2O3 0.02N mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
Almidón No. de gotas 5 5 5 5 5
H2O destilada mL 5
HCl 0.01N mL 5
HCl 0.1N mL 5
HCl 1N mL 5
HCl 2N mL 5
• Agregar a cada tubo H2O2 al 0.2% como se indica en la tabla. Nota: Considere realizar cada frasco por separado
con el objetivo de medir con mayor precisión el tiempo en que aparece súbitamente el color azul intenso.
Frasco
1 2 3 4 5
Solución
H2O2 al 0.2% mL 2 2 2 2 2
• Registrar sus resultados en la siguiente tabla:

Tiempo de reacción
+
Tubo [H ] (aparición del color azul en 1/t
segundos)
1 1 x 10-7
2 1 x 10-2
3 1 x 10-1
4 1
5 2
1) Trazar una gráfica con el 1/tiempo en segundos en las ordenadas y la concentración de H+ en las abscisas,
sin considerar el tubo 1 (testigo), incluir dentro de la gráfica título y nombre de los ejes.
EXPERIMENTO 5. EFECTO DE UN CATALIZADOR INORGÁNICO SOBRE LA VELOCIDAD DE

HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA
• Prepara dos tubos de ensayo y añadir en cada uno 2 mL de solución de sacarosa 0.05M que se encuentra
en hielo.
• Un tubo quedará como testigo (etiquetar con la inicial T) y al otro agregar 3 gotas de H2SO4 1:6 (etiquetar
como H2SO4).

38
• Incubar en baño María a ebullición durante 15 minutos ambos tubos.

• El tubo que contiene H2SO4 neutralizarlo con 1 mL de NaOH al 10%.
• Añadir al tubo testigo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solución “A” más 2 mL de la solución
“B”. Repetir este mismo paso para el tubo que contiene H2SO4 1:6.
• Incubar ambos tubos en baño María a ebullición por 10 minutos al cabo de los cuales se retiran del baño,
dejándose enfriar.
• Observar si existe un precipitado rojo de Cu2O en ambos tubos.
1) ¿Se puede considerar al H2SO4 como un catalizador? ¿Por qué?
EXPERIMENTO 6. EFECTO DE UN CATALIZADOR BIOLOGICO (ENZIMA) SOBRE LA

VELOCIDAD DE HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA
• Preparar dos tubos de ensayo, añadir a un tubo 2 mL de solución de Sacarosa 0.05M en hielo y 1 mL de
solución reguladora o buffer de NaCH3COO- 0.05M a pH de 4.7. Repetir este mismo paso para el otro tubo.
• Un tubo quedará como testigo (etiquetar con la inicial T) y al otro añadir 0.2 mL de solución de invertasa que
se encuentra en hielo (etiquetar como invertasa), mezclando bien el contenido del tubo.
• Incubar en baño María a 40°C durante 15 minutos ambos tubos.
• Añadir al tubo testigo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solución “A” más 2 mL de la solución
“B” y agitar hasta que se mezcle bien. Repetir este mismo paso para el tubo que contiene la invertasa.
• Incubar ambos tubos en baño María a ebullición por 10 minutos al cabo de los cuales se retiran del baño,
dejándose enfriar.
• Observar si existe un precipitado rojo de Cu2O en ambos tubos.
• Registrar sus resultados, como positivo o negativo.
1) Comparar este experimento con el anterior y explique qué sucede.

39
PRÁCTICA No.7
CINÉTICA ENZIMÁTICA
FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
La vida depende de una serie de reacciones químicas cuyo curso y velocidad están determinados por la
presencia de diversos catalizadores orgánicos denominados enzimas: (del griego en = en, zymo = fermento).
La mayor parte de las reacciones biológicas serían cinéticamente insignificantes si no fuera por las enzimas.
Las enzimas desde el punto de vista químico son compuestos que pertenecen al grupo de las proteínas (aunque
algunas solo funcionan asociadas a un grupo no proteico, grupo prostético o coenzima). Debido a su carácter
proteínico, las enzimas son muy sensibles a cualquier cambio físico, químico, o fisicoquímico. Así, cualquier
cambio en la temperatura, en el pH, en la fuerza iónica, la adición de sales, la presencia de agentes oxidantes
o reductores, la presencia de metales pesados, etc., producen modificaciones profundas en su actividad. En
general, cualquier factor que sea capaz de desnaturalizar a las proteínas será capaz de alterar su actividad.
NATURALEZA QUÍMICA DE LAS ENZIMAS
Estructuralmente todas las enzimas son proteínas simples o complejas. La parte proteínica de las enzimas se
denomina apoenzima, la parte no proteínica puede ser coenzima, si se separa fácilmente de la proteína. Las
coenzimas pueden ser comunes a varias enzimas y no actúan como catalizadores ya que se transforman en la
reacción que catalizan y requieren de otra enzima para regenerar su actividad. La mayor parte de las coenzimas
están relacionadas con las vitaminas. Si la parte no proteínica se encuentra firmemente unida a la proteína por
enlace covalente y no es posible separarla por diálisis, se denomina grupo prostético. Hay varios factores que
afectan la velocidad de una reacción catalizada por enzimas. Algunos de ellos son: temperatura, pH,
concentración de sustrato, concentración de enzima e inhibidores.
Temperatura. La velocidad de las reacciones químicas aumenta al incrementar la temperatura, originando
aumento en la energía cinética y en las velocidades medias de las moléculas con el resultado de una mayor
probabilidad de colisiones efectivas. Sin embargo, las enzimas se inactivan y desnaturalizan a temperaturas
elevadas. La mayor parte de las enzimas tienen una temperatura óptima, en la cual catalizan con una
velocidad máxima.
pH. La actividad de la mayoría de las enzimas depende del pH debido a la participación de iones [H +] o iones
[OH-] en las reacciones, además que se afecta la de los grupos funcionales. La mayoría de las enzimas tienen
un pH óptimo en el cual su actividad es máxima.
Concentración de la enzima. La velocidad de una reacción aumenta en proporción directa a la concentración
de la enzima que la cataliza. La interacción enzima – substrato cumple la Ley de Acción de Masas. Se emplea
40
con frecuencia la velocidad de una reacción como medida de concentración de la enzima manteniendo fija la
concentración de substrato.
Concentración de sustrato. Si se trabaja con una concentración fija de enzima la velocidad inicial de reacción
aumenta incrementando la concentración del sustrato. Con el tiempo se alcanza un máximo y la adición de más
sustrato ya no influye sobre la velocidad, ya que la enzima se saturó.
La velocidad de cualquier reacción cambia al modificarse la temperatura (T°), debido a los cambios de energía
cinética. Generalmente por cada 10 grados centígrados de aumento en la T° se duplica la velocidad, esto se
conoce como la relación de Van´tHoff o coeficiente de temperatura QT10.Sin embargo, debido a la
constitución proteínica de las enzimas, las temperaturas altas pueden producir desnaturalización y una
disminución marcada en la actividad catalítica. Para la gran mayoría de enzimas de animales homeotermos, la
T° óptima está alrededor de 37°C; cerca de los 60°C la mayor parte de las enzimas se inactivan, hecho que se
aprovecha en la técnica de pasteurización.
El pH es uno de los factores que más afecta la actividad de las enzimas, ya que puede afectar la estabilidad de
la molécula por desnaturalización o bien afectar su carga eléctrica. Muchos de los grupos ionizables presentes
en la molécula de la enzima pueden ser necesarios para la catálisis y los cambios de pH afectan el grado de
ionización. Para que se realice la unión en el complejo enzima–sustrato (ES) es necesaria una adecuada
distribución de cargas en ambas moléculas. El pH óptimo es aquel en el cual ciertos grupos funcionales poseen
la carga apropiada para asegurar la formación del complejo ES en las mejores condiciones. Además, como ya
se mencionó, los pH extremos provocan desnaturalización de la molécula enzimática y por tanto inactivación
de la misma. Cada enzima posee un pH óptimo en el cual su actividad es máxima, para la mayoría de las
enzimas la actividad óptima se encuentra entre los valores de pH= 6 a 8. Sin embargo existen excepciones, por
ejemplo, para la pepsina del jugo gástrico es máxima a un pH=1.5 que es muy ácido, o para la fosfatasa alcalina
que se encuentra en huesos y otros órganos cuyo pH=9.5.
Actualmente se acepta que la reacción enzimática se efectúa a través de la formación de un complejo enzima-
sustrato, lo cual puede representarse en forma muy simplificada así:
S + E → [ES] → P + E
Si [E] es la concentración total de enzima y [ES] es la enzima combinada, entonces [E – ES] es la concentración
de enzima libre. Recordando la Ley de Acción de Masas, tenemos:
V1 = K1 – [E – ES] [ES]; V2 = K2 – [ES]; V3 = K3 – [ES]
La velocidad de formación (Vf) del complejo [ES] depende de V1 mientras que la velocidad de degradación
(Vd) depende de V2 + V3. Por lo tanto en el equilibrio tenemos:

41
Vf = Vd es decir: V1 = V2 + V3
Sustituyendo sus valores nos queda: K1[E – ES] [S] = K2[ES] + K3[ES]. Dividiendo ambos miembros entre
K1 y [ES] nos queda:
Simplificando:
Constante de Michaelis-Menten
La constante de Michaelis-Menten se utiliza como una medida de la afinidad entre la enzima y el sustrato,
aunque no es propiamente la constante de afinidad. La constante de Michaelis-Menten (Km) se define como la
concentración de sustrato cuando la reacción adquiere la mitad de su velocidad máxima. Cuando esto sucede:
[E – ES] = [ES]. Y por lo tanto, sustituyendo: Km = [S]. Si en una reacción enzimática se mantiene constante
la concentración de la enzima y todos los demás factores que pueden modificar la actividad, se observa
experimentalmente que al aumentar la concentración del sustrato, aumenta progresivamente la velocidad de la
reacción hasta llegar a un máximo (velocidad máxima) después del cual ya no se afecta la velocidad aunque se
trabaje a concentraciones más altas de sustrato. En algunas enzimas se observa incluso una disminución en la
actividad si se aumenta demasiado la concentración de sustrato.
Durante mucho tiempo se pensó que los catalizadores eran sustancias que actuaban por presencia debido a las
concentraciones tan pequeñas y a que podían recuperarse inalterados al final de la reacción. Sin embargo, se
sabe que la velocidad de reacción de acuerdo a la Ley de Acción de Masas depende de su concentración de tal
manera que la velocidad es directamente proporcional a la concentración de enzima, lo que se expresa
como: V = K[E]. Así que la gráfica que se obtiene al expresar la velocidad de reacción en función de la
concentración de enzima es una recta con pendiente positiva.

42
EXPERIMENTO 1. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

• Agregar los reactivos y pre incubar, según se indica en la tabla siguiente:
Tubos
1 2 3 4 5 6 7
Reactivos
Sustrato almidón 8 mg/mL en Buffer de
mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
fosfatos 0.02M, pH=7
Buffer de fosfatos 0.02M, pH = 7 mL --- 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
Agua destilada mL 5.5 3 3 3 3 3 3
Pre incubar 5 minutos a 25°C 5°C 25°C 40°C 50°C 60°C 90°C
• Posterior a este tiempo, agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubos
1 2 3 4 5 6 7
Reactivos
Enzima (solución de amilasa) mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
• Agitar todos los tubos y colocar nuevamente cada tubo en su respectivo baño como se indicó en la primera
tabla, incubar durante 15 minutos.
• Agregar a todos los tubos, incluso al testigo, 1 mL del reactivo ácido 3,5 dinitrosalicílico (este reactivo
desarrolla un color rojo caoba en presencia de azúcares reductores).
• Agitar bien y colocar en baño María a ebullición durante 10 minutos.
• Retirar y enfriar en baño de hielo.
• Leer en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco.
• Registrar sus resultados en la tabla siguiente.
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Tubo Temperatura Absorbancia
1 25 °C Blanco
2 5 °C
3 25 °C
4 40 °C
5 50 °C
6 60 °C
7 90 °C

43
a) Trazar una gráfica con los datos obtenidos, donde la absorbancia serán las ordenadas y la temperatura en las
abscisas. No se incluye el tubo blanco o testigo.
EXPERIMENTO 2. EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Tubos
Reactivos
1 2 3 4 5 6
Sustrato (sol. de almidón 8 mg/mL) mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Buffer de fosfatos al pH indicado 7 5 6 7 8 9
mL 5 4 4 4 4 4
Pre incubar a 40ºC por 5 minutos
• Agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubos
Reactivos
1 2 3 4 5 6
Enzima (sol. de amilasa) mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
• Agitar los tubos e incubar nuevamente en el baño María a 40oC, durante 15 minutos.
• Agregar a todos los tubos (incluyendo al testigo) 1 mL del reactivo de ácido 3,5 dinitrosalicílico.
• Retirar y enfriar en un baño de hielo.
• Leer en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco
EFECTO DEL pH EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

TUBO pH Absorbancia
1 7 Blanco
2 5
3 6
4 7
5 8
6 9

44
1) Trazar la gráfica correspondiente donde las absorbancias serán las ordenadas y el pH las abscisas.
2) Basándose en sus resultados diga ¿Cuál es el pH óptimo de la amilasa?
3) ¿Cuál es el azúcar que se libera en la hidrólisis de este polisacárido?
EXPERIMENTO 3. EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO SOBRE LA

VELOCIDAD DE REACCIÓN
Tubo
1 2 3 4 5 6 7 8
Reactivos
Sustrato almidón 8 mg/mL en Buffer de
mL 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 7.5 ---
fosfatos 0.02M, pH=7
Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL 7.0 6.5 5.5 4.5 3.5 2.5 --- 8.0
Pre incubar a 40ºC por 5 minutos
Tubo
1 2 3 4 5 6 7 8
Reactivos
Sol. de enzima (amilasa) mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 ---
• Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en el baño María a 40oC, durante 15 minutos.
• Agregar a todos los tubos, incluyendo al testigo, 1 mL del reactivo de ácido 3,5 dinitrosalicílico.
• Leer en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 8 como blanco
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Tubo Concentración de sustrato mg/mL
Absorbancia
1 0.5
2 1
3 2
4 3
5 4
6 5
7 7.5
8 ------ Blanco

45
1) Trazar una gráfica con los resultados obtenidos donde las absorbancias serán las ordenadas y las
concentraciones del sustrato las abscisas.
2) Determinar el valor de KM para el sistema almidón/amilasa en estas condiciones. KM=____ mg de almidón/mL.
EXPERIMENTO 4. EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA

• Agregar los reactivos y preincubar, según se indica en la tabla siguiente:
Reactivos Tubos 1 2 3 4 5 6
Sustrato almidón 8 mg/mL en Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL 1 1 1 1 1 1
Agua destilada mL 5.5 4.9 4.8 4.6 4.2 3.4
Pre incubar a 40°C durante 5 minutos
Tubos 1 2 3 4 5 6
Reactivos
Solución de enzima (amilasa) mL --- 0.1 0.2 0.4 0.8 1.6
• Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en baño María a 40oC, durante 15 minutos.
• Agregar a todos los tubos (incluyendo al testigo) 1 mL del reactivo de ácido 3,5 dinitrosalicílico.
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA EN LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA
Tubo Concentración de enzima
Absorbancia
mg/mL
1 ------- Blanco
2 0.1
3 0.2
4 0.4
5 0.8
6 1.6
1) Trazar una gráfica con base en sus resultados con los valores de absorbancia en las ordenadas y la
concentración de enzima expresada en mg/mL en las abscisas e interpretar la gráfica obtenida.
46
PRÁCTICA No. 8
CARBOHIDRATOS
Los glúcidos o carbohidratos se definen como derivados aldehídicos o cetónicos reales o en potencia de
alcoholes polivalentes que poseen en su molécula uno o más carbonos asimétricos. Estos compuestos se
encuentran presentes en todos los seres vivos, en cantidades variables, desempeñando importantes funciones
estructurales y energéticas. Debe recordarse que todas las propiedades químicas de los glúcidos dependen de
sus grupos funcionales, o sea, grupos alcohol y grupo carbonilo (aldehídico o cetónico). Los glúcidos se
clasifican, según el número de compuestos hidrocarbonados simples que los constituyen, en 3 grupos;
monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los monosacáridos no se pueden desdoblar por hidrólisis en
compuestos más sencillos. A su vez se subdividen, según el número de carbonos que contengan, en: triosas,
tetrosas, pentosas, hexosas, etc. Los oligosacáridos, por hidrólisis, dan pocas moléculas de monosacáridos. En
la naturaleza existen varios disacáridos (sacarosa, lactosa, maltosa etc.) y unos cuantos trisacáridos,
tetrasacáridos y pentasacáridos libres. Se pueden obtener por síntesis química en el laboratorio o por
degradación hidrolítica de polisacáridos. Los oligosacáridos poseen propiedades físicas similares a las de los
monosacáridos. Los polisacáridos, por hidrólisis dan muchas moléculas de monosacáridos. Desde el punto de
vista fisiológico se dividen en dos grupos; polisacáridos estructurales y polisacáridos de reserva. Entre los
primeros tenemos en vegetales: la celulosa, los ácidos pecticos y las hemi celulosas. En animales los más
importantes son los llamados mucopolisacáridos, tales como el ácido hialurónico y el condroitín sulfato,
abundantes en varios tejidos y líquidos como el cuerpo vítreo del ojo, el cordón umbilical, el líquido sinovial,
tendones, cartílagos, etc. Entre los polisacáridos nutrientes o de reserva los más importantes son, en vegetales,
los almidones e inulina y en animales, el glucógeno.
Los glúcidos reciben este nombre debido a que la mayor parte de ellos se caracterizan por tener sabor dulce.
Sin embargo, esta propiedad la presentan solamente los mono y oligosacáridos, ya que los polisacáridos son
generalmente insípidos. Otras propiedades que nos permiten diferenciar glúcidos de bajo peso molecular
(monosacáridos y oligosacáridos) de los de elevado peso molecular (polisacáridos), son su solubilidad en
agua y su capacidad para cristalizar.
Las propiedades químicas de los glúcidos dependen de sus grupos funcionales. Todos los glúcidos poseen en
su molécula grupos alcohol y grupos carbonilo, ya sean aldehídicos o cetónicos. Sin embargo, en algunos
glúcidos estos grupos pueden estar bloqueados y por lo tanto, su reactividad química estará ausente. Una
característica química de los aldehídos y cetonas es su carácter reductor, todos los monosacáridos u
oligosacáridos que tengan libre el grupo aldehídico o cetónico serán reductores, mientras que los polisacáridos
47
y oligosacáridos que tengan bloqueados estos grupos serán no reductores. Todos los glúcidos formados por
varios azúcares (oligo o polisacáridos) se pueden hidrolizar por acción enzimática o de ácidos dando como
producto final los monosacáridos y liberando los grupos reductores bloqueados. Existen varias reacciones
químicas que se utilizan para la identificación de los glúcidos, algunas son generales y otras son específicas
para determinar tipo o incluso específicas para cada azúcar. Entre las más utilizadas tenemos: la formación de
osazonas, esta reacción es una de las de mayor utilidad para la identificación de azúcares por ser específica
para cada azúcar. La dan positiva tanto los monosacáridos como los disacáridos reductores sirviendo para
identificarlos el tiempo que tardan en formar la osazona correspondiente, la forma cristalina de ellas, la
solubilidad en caliente o en frío y los puntos de fusión.
Existen métodos para la determinación de las propiedades de los glúcidos. Molish-Udransky es una reacción
general para todos los glúcidos, debido a que el ácido sulfúrico concentrado que contiene el reactivo hidroliza y
deshidrata a los azúcares obteniéndose furfural o hidroximetil furfural como producto final y estas sustancias son
capaces de reaccionar con el alfa naftol formando un compuesto colorido (violeta): Esta prueba es una de las más
sensibles, la dan positiva soluciones de glucosa al 0.001%. Sin embargo, la reacción no es específica, ya que la
dan positiva los aldehídos, las cetonas, y algunos ácidos orgánicos tales como el fórmico, oxálico, cítrico, etc. La
reacción de Fehling, se emplea para el análisis cualitativo y cuantitativo de azúcares se basan en su propiedad
reductora, aunque esta propiedad no sea específica de ellos. Se sabe que los azúcares reductores son capaces de
reducir diversos iones metálicos como el cobre, bismuto, mercurio, plata, etc., cuando se encuentran estos en
solución alcalina. Este tipo de reacciones son muy empleadas porque los reactivos son estables, existe poca
interferencia con otras sustancias, las reacciones son sensibles y puede usarse la misma reacción para un análisis
cualitativo o cuantitativo. El mecanismo de reacción se lleva a cabo debido a que algunos compuestos orgánicos
que contienen uno o más grupos alcohólicos en su molécula, en este caso el tartrato de sodio, reaccionan en
solución alcalina con los hidróxidos metálicos, formando un complejo soluble, el cual se disocia muy poco,
pero los iones que deja en libertad son suficientes para que produzcan las reacciones de coloración. La
formación de este complejo es esencial para que se produzca un precipitado con la mayor parte de los metales
pesados. El reactivo de Barfoed es una solución de acetato cúprico en ácido acético y una vez más, se determina
la capacidad de los azúcares para reducir el ión cúprico a cuproso (Cu2O). Esta reacción sirve para diferenciar
un monosacárido de un disacárido, ya que los primeros a los tres minutos reducen el reactivo y los disacáridos
necesitan más tiempo para que se lleve a cabo la reacción de reducción, más o menos unos 15 minutos. La
reacción de Bial, sirve para diferenciar pentosas de hexosas, el reactivo consiste en una solución de orcinol en
ácido clorhídrico (HCl) concentrado con una pequeñísima cantidad de cloruro férrico (FeCl3). El fundamento
de esta reacción, igual que la reacción de Molisch, Seliwanoff y otras, se basa en la producción de furfural o

48
hidroximetil furfural cuando se calienta con ácidos concentrados y la reacción de estos con otras sustancias dando
productos coloridos, en este caso las pentosas dan color azul y las hexosas dan color amarillo o café. La
reacción de Seliwanoff sirve para diferenciar aldosas de cetosas. Las cetosas reaccionan rápidamente
mientras que las aldosas lo hacen lentamente. El reactivo es una solución de resorcinol 0.05% en HCl 1:3
recién preparado. Este compuesto es el que se condensa con el furfural o sus derivados dando productos
coloridos. El reactivo de lugol es una solución de yodo en yoduro de potasio. Este reactivo reacciona con
algunos polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas formando un complejo de inclusión
termolábil que se caracteriza por ser colorido, dando un color diferente según las ramificaciones que presenta
la molécula.
EXPERIMENTO 1. ESTRUCTURA CRISTALINA

• Examinar al microscopio los siguientes glúcidos: glucosa, sacarosa, almidón y celulosa.
• Registrar los resultados, realizando los dibujos o esquemas respectivos.
1) ¿Cuáles de estos glúcidos tienen estructura cristalina? ¿Por qué?
EXPERIMENTO 2. FORMACIÓN DE OSAZONAS DE ARABINOSA, GLUCOSA, FRUCTOSA,

GALACTOSA, MALTOSA Y LACTOSA (PROPIEDADES DE LOS
CARBOHIDRATOS).
• Agregar en un tubo de ensayo 0.1 g de alguno de los siguientes carbohidratos (arabinosa, glucosa, fructosa,
galactosa, maltosa o lactosa) dependiendo cual fue seleccionado por su profesor para cada equipo, 2 mL de
solución de clorhidrato de fenilhidrazina al 10% (manejar con guantes) y 3 mL de solución de
NaCH3COO- al 15%.
• Agitar y cubrir el tubo con un tapón de papel procurando que no quede totalmente cerrado.
• Colocar en baño María a ebullición, agitando ocasionalmente.
• Determinar el tiempo en que tardan en aparecer los precipitados y si lo hacen en frío o en caliente. La arabinosa,
glucosa, fructosa y galactosa precipitan en caliente, pero la maltosa y la lactosa en frío por lo que después
de 20 minutos de calentamiento se deben retirar del fuego e inmediatamente enfriar en el hielo.
• Observar al microscopio los cristales de la osazona que se le asignó y la de los otros equipos.
• Registrar sus resultados a través de dibujos o esquemas de cada uno de los cristales.
1) ¿Por qué la glucosa, la manosa y la fructosa dan la misma osazona?
49
2) Escribir la reacción que se efectúa.

EXPERIMENTO 3. REACCIÓN DE MOLISCH-UDRANSKY.
• Colocar en una gradilla 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
• Añadir 3mL de la solución indicada en el tubo correspondiente de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubo Solución
1 Formaldehído
2 Glucosa
3 Fructosa
4 Arabinosa
5 Sacarosa
6 Almidón
• Agregar a todos los tubos 2 gotas del reactivo de Molisch-Udransky (solución de alfa-naftol al 5% en
alcohol) y agitar para mezclar.
• Añadir todos los tubos en la CAMPANA DE EXTRACCIÓN 1 mL de H2SO4 ¡PRECAUCIÓN!,
estratificando (inclinando el tubo y dejando resbalar el ácido LENTAMENTE por las paredes). La reacción
es positiva si aparece en la interfase un anillo de color violeta.
Tubo Solución Resultado
(positivo o negativo)
1 Formaldehído
2 Glucosa
3 Fructosa
4 Arabinosa
5 Sacarosa
6 Almidón
1) Diga por qué la solución de formaldehído da positiva la reacción.
2) ¿Se puede considerar como una reacción útil para diferenciar un glúcido de otro? ¿Por qué?
3) ¿Qué utilidad puede tener la reacción de Molisch-Udransky?
EXPERIMENTO 4. REACCIÓN DE FEHLING.

• Añadir a cada tubo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solución “A” más 2 mL de la solución
“B” y agitar hasta que se mezcle bien.
• Posteriormente añadir a cada tubo 3 gotas de las soluciones como se muestra en la siguiente tabla:
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Tubo Solución
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Arabinosa
4 Sacarosa
5 Almidón
• Colocar todos los tubos en baño María a ebullición durante 5 minutos.
• Dejar enfriar a temperatura ambiente.
• Observar y registrar sus resultados en la tabla siguiente.
Resultado Propiedad de Clasificación: monosacárido,
Tubo Solución
(precipitado rojo o color azul) reductor o no reductor disacárido o polisacárido
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Arabinosa
4 Sacarosa
5 Almidón
1) ¿Qué azúcares dan positiva la reacción de Fehling?
2) Explicar por qué algunos azúcares dan negativa la reacción.
3) Mencionar 3 sustancias que usted considere puedan dar positiva la reacción de Fehling y no sean azúcares.
EXPERIMENTO 5. REACCIÓN DE BARFOED.

• Añadir a cada tubo un volumen de 3 mL del reactivo de Barfoed.
• Añadir 1 mL de la solución indicada en el tubo correspondiente de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubo Solución
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Lactosa
4 Maltosa
• Colocar todos los tubos en baño María a ebullición.
• Observar y registrar el tiempo que tarda en aparecer el precipitado rojo de Cu2O durante la incubación.
• Registrarlos resultados en la tabla siguiente.

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Resultado Propiedad de Clasificación:

Tubo Solución (tiempo de aparición del reductor o no reductor monosacárido o disacárido
precipitado rojo en minutos)
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Lactosa
4 Maltosa
EXPERIMENTO 6. REACCIÓN DE BIAL.

• Agregara cada tubo 3 mL del reactivo de Bial ¡PRECAUCIÓN!
• Añadir 0.5 mL de la solución indicada en el tubo correspondiente de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubo Solución
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Agua destilada
• Colocar todos los tubos en baño María a ebullición durante 5 minutos.
• Retirar, diluir cada tubo con 5mL de agua destilada y agregar 2 mL de CH3(CH2)3OH
• Agitar los tubos, dejar reposar durante 5 minutos.
• Observar y registrar sus resultados en la tabla siguiente.
Tubo Solución Clasificación Resultado
(pentosa o hexosa) (verde o amarillo)
1 Glucosa Testigo negativo
2 Arabinosa
3 Agua
1) Explicar las diferencias observadas.
EXPERIMENTO 7. REACCIÓN DE SELIWANOFF.

• Añadir 1mL de la solución indicada en el tubo correspondiente de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubo Solución
1 Glucosa
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2 Fructosa
3 Agua destilada
• Añadir a cada tubo de ensayo 1 mL del reactivo de Seliwanoff. ¡PRECAUCIÓN!
• Colocar todos los tubos en baño María a ebullición, y mantener exactamente por 60 segundos.
• Sin retirar los tubos del baño María observar los cambios y registrar sus resultados.
• Continuar calentando, observar el cambio de color a intervalos de 1 a 5 minutos y registrar sus resultados.
Las cetosas dan una coloración rojo fuego y las aldosas la dan muy débil y muy lentamente.
Resultados Clasificación
Tubo Solución
color minutos (aldosa o cetosa)
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Agua destilada
1) Observar si hay alguna diferencia en las soluciones
EXPERIMENTO 8. REACCIÓN DEL LUGOL

• Preparar 2 tubos de ensayo y etiquetar.
• En el tubo 1, añadir 2 mL de solución de almidón al 10%
• En el tubo 2, añadir 2 mL de glucógeno
• En ambos tubos agregar una gota de lugol y registrar el color producido en cada uno de ellos.
• Colocar el tubo que contiene el almidón en baño María a ebullición durante 5 a 10 minutos.
• Dejar enfriar a temperatura ambiente.
• Observar lo que sucede con la coloración.
1) ¿Por qué el complejo almidón-yodo es termolábil?
2) ¿Se puede considerar la reacción del lugol característica para cualquier polisacárido?

53
PRÁCTICA No. 9
OXIDACIONES BIOLÓGICAS
La Bioenergética es la manera en que el ser vivo, utiliza y transforma la energía del medio ambiente. A estos procesos
químicos y físicos se les denominaba respiración. Sin embargo para evitar ambigüedades con el proceso de la entrada
y salida de aire de un compartimiento a otro, se aplica el concepto bioquímico de bioenergética, incluyendo este
término los procesos fotosintéticos. Todos los procesos químicos que constituyen la respiración conducen a la
oxidación de sustancias denominadas metabolitos, hasta CO2 y H2O. Por regla general todas las reacciones de
oxidación son exergónicas, es decir, liberan energía cuando se efectúan; en ocasiones toda la energía se libera en
forma de calor, como cuando se quema u oxida un pedazo de madera. Sin embargo un organismo viviente no es una
máquina térmica y, por tanto, debe poseer un mecanismo enzimático que le permita capturar y almacenar la energía
liberada en los procesos de oxidación. La utilización o captura de la energía involucra la participación de enzimas
específicas capaces de catalizar la conversión del ADP en ATP (reacción endergónica).
REACCIONES DE OXIDO REDUCCIÓN

Un compuesto químico puede oxidarse de diferentes maneras. La oxidación típica es aquella en la cual el
oxígeno se une a un compuesto (oxigenación), por pérdida de hidrógeno (deshidrogenación) y cuando se
oxida un compuesto perdiendo electrones o cuando gana valencias positivas.
Ejemplos de oxidaciones
Oxigenación 2Cu + O2→ 2CuO
Deshidrogenación H2S→ S0 + H2
-1e
Pérdida de electrones o ganancia de valencia positiva
Fe++→ Fe+++
Siempre que se efectúa una oxidación, simultáneamente se efectúa una reducción. Es decir, cuando un compuesto se
oxida, otro forzosamente debe reducirse. Como son fenómenos que ocurren simultáneamente se denominan
fenómenos de óxido reducción o reacciones REDOX.
La acción de una sustancia reductora como el hidrosulfito de sodio (NaHSO3), forma leucobases (incoloras) cuando
actúa sobre colorantes oxidados como el azul de metileno (indicador de óxido-reducción). El proceso inverso
(oxidación por pérdida de hidrógeno) se puede realizar en diferentes condiciones y determinar el tiempo de reacción.
54
La mayor parte de la energía que utilizan los seres vivos deriva de los procesos de oxidación, y en cada oxidación
se desprende una determinada cantidad de energía que el organismo aprovecha para realizar las funciones vitales
y para efectuar fenómenos sintéticos endergónicos. Todas las oxidaciones biológicas se caracterizan por su
rapidez y por la suavidad con que se realizan, todas se llevan a cabo en medio acuoso, a pH generalmente neutro
y a bajas temperaturas. Esto hace pensar que todos estos procesos están catalizados por enzimas. Warburg fue
uno de los primeros investigadores que trató de explicar las oxidaciones biológicas suponiendo una activación del
oxígeno. Actualmente se sabe que en los tejidos existe un sistema de enzimas que contienen hierro, mediante el
cual el oxígeno molecular se activa y actúa como un agente oxidante. Wieland consideraba que el proceso básico
en la oxidación de los metabolitos es la activación del hidrógeno por la acción de enzimas denominadas
deshidrogenasas, las cuales transportan el hidrógeno a diferentes aceptores que pueden ser el oxígeno u otros
agentes oxidantes. SzentGyörgyi concilió las dos teorías al suponer que es necesaria la activación del hidrógeno
y también la del oxígeno. Keilin supuso que interviene como eslabón intermediario el citocromo. Sin embargo,
las oxidaciones biológicas no son tan sencillas, pues se ha comprobado que en la oxidación de cada metabolito
interviene una gran cantidad de aceptores de hidrógeno. La glucosa es el más común de los metabolitos debido a
que es una molécula altamente reducida. Cuando se oxida y pierde sus hidrógenos, la liberación de energía de
oxidación no se realiza en forma brusca, sino que intervienen varios transportadores de hidrógeno y se inicia por
la acción de una deshidrogenasa específica que no reacciona directamente con el oxígeno sino que requiere de
intermediarios como el NAD+, flavoproteínas y citocromos. La DESHIDROGENASA SUCCÍNICA (DHS)
cataliza la siguiente reacción:
Por otro lado para la obtención de la fracción mitocondrial del hígado de ratón, se tiene que conocer queel
tejido hepático se dispersa en soluciones isotónicas, el núcleo y las mitocondrias permanecen relativamente
inalterados y pueden separarse con facilidad por centrifugación diferencial.
La citocromo-oxidasa es la última enzima de la cadena respiratoria y es la responsable de la “activación del oxígeno”
para oxidar a los citocromos. Tanto los citocromos como la citocromo-oxidasa son metaloproteínas (porfirinas). La
citocromo-oxidasa se caracteriza por su elevada sensibilidad al cianuro (CN) y al monóxido de carbono (CO). En
el año de 1885 Ehrlich reportó la reacción del indofenol. Observó que inyectando alfa naftol y dimetil-para-
fenilendiamina en animales se formaba en los tejidos una sustancia azul llamada azul de indofenol. La enzima se
denominó indofenol-oxidasa, pero posteriormente se ha podido comprobar que esta enzima sólo oxida al citocromo
c, el cual a su vez oxida al indofenol; por lo cual ahora se le conoce como citocromo-oxidasa.

55
EXPERIMENTO 1. OXIDACIÓN POR PÉRDIDA DE ELECTRONES

• En un matraz provisto de tapón con válvula de BUNSEN, agregar 0.5g de fibra de hierro (Fe°) y 5mL de
H2SO4 al 10%.
• Calentar a ebullición y observar la disolución parcial del Fe° (Fierro elemental), formando con el H2SO4
al 10%el producto FeSO4, mediante la siguiente reacción:
Fe° + H2SO4→ FeSO4 + H2.
• Dejar enfriar a temperatura ambiente sin retirar la válvula ya que esta deja escapar el hidrógeno, pero impide
la entrada de aire evitando así la oxidación de la sal ferrosa a sal férrica.
• Una vez enfriada la solución diluir el FeSO4 obtenido, con 50 mL de agua destilada.
• En un mosaico blanco con un plumón divida en cuadrantes (proporcionado en su charola de material de
laboratorio) determine la presencia de sales ferrosas y férricas como se indica a continuación.
Cuadrante superior Cuadrante superior

izquierdo derecho
Cuadrante inferior Cuadrante inferior

izquierdo derecho
• En el cuadrante superior izquierdo agregar 1 gota de solución de FeSO4 que obtuvo en la primera parte del
experimento y 1 gota de (K3[Fe (CN)6]) con el objetivo de comprobar la presencia de sales ferrosas. La
obtención de una coloración o precipitado azul indicará la presencia de sales ferrosas.
• En el cuadrante superior derecho agregar 1 gota de la solución de FeSO4 que obtuvo en la primera parte del
experimento y 1 gota de KSCN al 0.5%. La aparición de un color rojo intenso indicará la presencia de
sales férricas.
• A continuación, se oxidará la sal ferrosa a sal férrica. Añadir en un matraz Erlenmeyer 10 mL de la solución
de FeSO4 que obtuvo en la primera parte del experimento y 3 mL de H2SO4 al 10%, calentar a ebullición
agregando gota a gota una solución de KMnO4 0.1M hasta que persista un color rosa pálido.
• Para comprobar el paso de sal ferrosa a sal férrica, repetir las reacciones con K3[Fe(CN)6] al 0.5% y KSCN
al 0.5%en los cuadrantes inferiores del mosaico.

56
• Registrarlos resultados (+), si observa presencia de sales ferrosas o férricas o (-) si no observa nada en la
tabla siguiente.
Solución K3[Fe(CN)6] KSCN
Sulfato ferroso
Sulfato férrico
1) Escribir las reacciones de identificación que se han efectuado en cada caso.
2) Si el KMnO4 es capaz de oxidar al sulfato ferroso, ¿Qué compuesto se reduce?
3) Escribir la reacción de óxido-reducción que se ha efectuado.
EXPERIMENTO 2. OXIDACIÓN POR DESHIDROGENACIÓN

• Añadir a cada tubo 5 mL de una solución diluida de azul de metileno.
• Añadir al tubo 1 gota a gota una solución recién preparada de Na2S2O4 y contar el número de gotas necesarias para
decolorar completamente la solución de azul de metileno. Repetir este paso para los tubos 2 al 5.
• Someter los tubos a los tratamientos físicos siguientes:
Tubo Tratamientos
1 Testigo Dejar en reposo y registrar el tiempo hasta la re-oxidación del azul de metileno.
2 Calor Colocar en baño María a ebullición y registrar el tiempo para recuperar su color azul.
Agitar enérgicamente a temperatura ambiente y registrar el tiempo hasta recuperar
3 Temp. Amb.
su color azul.
Agregar una gota de H2O2 al 0.4% y mezclar. Continuar agregando el número de
4 H2 O2
gotas necesarias para re-oxidar al azul de metileno (Contar y registrar)
Agregar una gota de FeCl3 al 1% y mezclar. Continuar agregando el número de gotas
5 FeCl3
necesarias para re-oxidar al azul de metileno (Contar y registrar)

Tubo 1 2 3 4 5
Testigo Calor Temp. Amb. H2 O2 FeCl3
Tiempo o número de gotas para la
re-oxidación del azul de metileno.
1) Escribir la reacción química que se ha efectuado en cada caso.

57
REACCIONES BIOLÓGICAS DE ÓXIDO – REDUCCIÓN

EXPERIMENTO 3. OBTENCIÓN DE LA FRACCIÓN MITOCONDRIAL DEL TEJIDO HEPÁTICO
• Depositar en un mortero frío la porción de 1 g de hígado que le proporcione su profesor.
• Macerar hasta obtener una masa homogénea.
• Añadir gradualmente 7 ml de KCl 0.15M frío.
• Vaciar el contenido del mortero en un tubo Falcon de 15 mL.
• Centrifugar a 500 rpm durante 15 minutos a 4oC.
• Separar el sobrenadante a otro tubo Falcon limpio y aforar a 7 mL con KCl 0.15M, desechar el precipitado
• Centifugar el sobrenadante a 3000 rpm durante 15 minutos a 4oC.
• Durante este tiempo de centrifugación, preparar un tubo de ensaye con la etiqueta de “SOBRENADANTE
DE HÍGADO” y otro tubo de ensaye con la etiqueta de “SUSPENSIÓN DE HÍGADO” y mantenerlos en
frío. Estos serán utilizados más adelante.
• Terminado el centrifugado, separar el sobrenadante en el tubo de ensaye con la etiqueta de
“SOBRENADANTE DE HÍGADO” y conservar en frío.
• Posteriormente, el residuo o pellet que quede en el tubo Falcon añadir 7mL de KCl 0.15M para re-suspender y
vaciar en el tubo de ensaye con la etiqueta de “SUSPENSIÓN DE HÍGADO”. Conservar en frío.
EXPERIMENTO 4. DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA SUCCINATO

DESHIDROGENASA.
Reactivo Tubo 1 2 3 4 5 6
Azul de metileno 0.002M mL 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
Succinato de sodio 0.1M mL --- 0.5 0.5 --- 0.5 0.5
Malonato de sodio 0.1M mL --- --- 0.5 --- --- 0.5
Agua destilada mL 1.5 1.0 0.5 1.5 1.0 0.5
Suspensión de hígado mL 0.5 0.5 0.5 --- --- ---
Sobrenadante de hígado mL --- --- --- 0.5 0.5 0.5
Mezclar bien el contenido de cada tubo y añadir
Vaselina mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
• Una vez agregada la vaselina no agitar el contenido de los tubos e incubar en baño María de 37-40°C.

58
• Registrar sus resultados, realizando lecturas en los tiempos 0, 5, 10 y 15 minutos, considerando el grado de
decoloración con cruces (de una a tres) en la tabla siguiente:
Tubo
1 2 3 4 5 6
Tiempo
0 min.
5 min.
10 min.
15 min.
1) ¿En cuál de las fracciones de hígado deben encontrarse las mitocondrias y por qué?
2) Describir cómo actúa el malonato de sodio en esta reacción.
3) Explicar sus resultados sobre la base del análisis del contenido de cada tubo.
EXPERIMENTO 5. LOCALIZACIÓN Y DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA CITOCROMO-OXIDASA

Reactivo Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Alfa naftol al 0.15% en etanol al 10% mL 0.5 --- 0.5 0.5 0.5 0.5 --- 0.5 0.5 0.5
Dimetil-para-fenilendiamina al 0.15% mL 0.5 0.5 --- 0.5 0.5 0.5 0.5 --- 0.5 0.5
Agua destilada mL 1.0 1.5 1.5 2.0 0.5 1.0 1.5 1.5 2.0 0.5
KCN al 0.01% NO PIPETEAR mL
--- --- --- --- 0.5 --- --- --- --- 0.5
0.5 mL = 10 gotas
Sobrenadante de hígado mL 1.0 1.0 1.0 --- 1.0 --- --- --- --- ---
Suspensión de hígado mL --- --- --- --- --- 1.0 1.0 1.0 --- 1.0
• Agitar los tubos y dejar incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.

• Observar la aparición del azul de indofenol y registrarlos resultados en la tabla siguiente.
Tubo
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo
0 min.
5 min.
10 min.
15 min
1) Escribir la reacción de formación del azul de indofenol.
2) Explicar por qué no se usó vaselina en este experimento.
3) Explicar sus resultados sobre la base del análisis del contenido de cada tubo.

59
PRÁCTICA No.10
LÍPIDOS
Este es un conjunto heterogéneo de moléculas orgánicas cuyas propiedades comunes son su insolubilidad en
agua y solubilidad en solventes no polares como el benceno, cloroformo, éter, etc. Por lo que este grupo incluye
sustancias de muy diversa estructura. Suelen ser moléculas de número relativamente alto de átomos de carbono
e hidrógeno y bajo en átomos de oxígeno; ciertos lípidos también poseen átomos de fósforo, nitrógeno y azufre
en su molécula. Cualquier clasificación presenta sus limitaciones y la nomenclatura puede producir falsas
interpretaciones ya que idéntica terminología ha sido empleada por diferentes autores para denominar a
distintos grupos de lípidos. Los lípidos son los compuestos más recientemente estudiados por ejemplo:
prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos, etc., ya que este tipo de sustancias hace poco se consideraban
complejas y de poco interés. Las funciones de los lípidos son muy variadas y las más aceptadas actualmente
son las siguientes:
a) Función estructural, principalmente en las membranas celulares,
b) Actúan como material energético y de reserva,
c) Intervienen en el transporte de compuestos energéticamente activos,
d) Componentes protectores de la pared celular de ciertas bacterias, plantas, insectos y vertebrados,
e) Sustancias de gran actividad biológica como vitaminas y hormonas; las cuales se consideran como
verdaderos reguladores metabólicos,
f) Actúan como aislante térmico y protección alrededor de determinados órganos
Una de las formas de identificación en la práctica es la reacción de Hanus a través del grado de insaturación
de los ácidos grasos que forman parte de un lípido es uno de los factores determinantes de sus propiedades
físicas, químicas y fisiológicas. Se ha observado que aparecen más dobles enlaces en los triacilgliceroles de
almacenamiento y en los lípidos estructurales cuando la temperatura ambiente disminuye. Los dobles enlaces
disminuyen el punto de fusión por lo que se cree que sea un mecanismo del organismo para impedir la
cristalización de los lípidos en los tejidos. El reactivo de Hanus es una solución de yodo y bromo que nos
permite determinar el grado de insaturación de un lípido midiendo la capacidad que tiene para fijar halógenos
en su molécula. Una de las reacciones más usadas para la identificación de acilglicéridos es la formación de
acroleína o aldehído acrílico, el cual se puede obtener por deshidratación del glicerol o de cualquier
glicérido y se reconoce fácilmente por su fuerte olor acre característico.
En esta práctica de lípidos no podemos dejar de mencionar a las membranas ya que hacen posible la existencia
de organismos complejos porque separan las células en el interior de los tejidos y los organelos celulares,
formando compartimientos con propiedades fisicoquímicas diferentes, lo que permite una diferente
60
organización; y cada compartimiento se vuelve una parte individual de un conjunto más complejo. Se ha
comprobado que las membranas son complejos lipoprotéicos que contienen de 60% a 75% de proteína y
de 25% a 40% de lípidos. En este experimento se usarán monocapas lipídicas como modelos de membrana.
Al estratificar butanol sobre agua y agregar un lípido, éste se situará en la interfase, orientandose la parte polar
lipídica a la fase acuosa, y la parte hidrofóbica a la fase orgánica. Si ahora se coloca un colorante se puede
observar la difusión pasiva a través de la membrana.
La reación de LIEBERMANN-BURCHARDS, es a través de que el anhídrido acético se puede condensar
con los grupos –OH en posición 3 de los esteroles como en el colesterol y dar los correspondientes ésteres. Si
el esterol tiene un doble enlace en posición 5, se produce además una epimerización y una deshidratación
en presencia de ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado, dando como resultado una serie de compuestos de
estructura desconocida que se caracterizan por tener colores que van del rojo al azul y del azul al verde. Esta
reacción es por lo tanto específica para todos los esteroles que contengan un OH en posición 3 y un doble
enlace en posición 5.
EXPERIMENTO 1. REACCIÓN DE HANUS.

• Preparar una serie de 4 tubos de ensayo etiquetar y numerar del 1 al 4.
• Añadir 3 mL de la solución indicada en el tubo correspondiente de acuerdo con la tabla siguiente:
Tubo Solución
1 Solución clorofórmica al 10% de aceite de algodón
2 Solución clorofórmica al 10% de aceite de cártamo
3 Solución clorofórmica al 10% de monoestearilglicerol
4 Solución clorofórmica al 10% de aceite de ricino
• Añadir a cada tubo 5 gotas del reactivo de Hanus y agitar vigorosamente.
• Proteger de la luz con una bolsa negra y colocar debajo de la mesa.
• Registrar lecturas a tiempos de 20, 40, 60 y 80 minutos, observando el grado de decoloración (perdida del
color rosa) de cada tubo en la tabla siguiente:
Solución clorofórmica 20 min 40 min 60 min 80 min

Aceite de algodón
Aceite de cártamo
Monoestearilglicerol
Aceite de ricino

61
EXPERIMENTO 2. EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS DE CEREBRO.

• Macerar completamente una muestra de cerebro (obtenido de carnero o cerdo) en un mortero, hasta obtener
una consistencia homogénea. En este paso NO AGREGAR NINGÚN TIPO DE SOLUCIÓN, hasta
obtener la consistencia deseada.
• Agregar gradualmente 20 mL de una mezcla 200:100:1 de cloroformo-metanol-ácido clorhídrico y con
el pistilo del mortero mezclar perfectamente bien.
• Agregar 2 mL de HCl 1N (NO OLVIDAR), mezclar y vaciar el contenido en tubo Falcon de 50 mL.
• Centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos.
• Separar la fase metanólica (trasnparente). con una pipeta Pasteur, colóquelo en un tubo de ensaye rotulado
previamente como fase metanólica.
• El paquete celular se encuentra en la interfase (desechar en bolsa amarilla).
• Extraiga la fase clorofórmica (rojo oscuro) colóquelo en un tubo de ensaye rotulado previamente como
fase clorofórmica.
• La fase clorofórmica se usará para la identificación del colesterol (separación cromatográfica de
fosfolípidos y la formación de membranas) y la metanólica servirá para la identificación de cerebrósidos.
EXPERIMENTO 3. IDENTIFICACIÓN DE FOSFOLÍPIDOS DE CEREBRO POR CROMATOGRAFÍA

EN CAPA FINA.
• De la fase clorofórmica obtenida en el experimento anterior y con la ayuda del profesor aplicar una gota
con una pipeta Pasteur en una cromatoplaca, aproximadamente a 2 cm de altura de la base. Repetir el mismo
procedimiento en otra cromatoplaca.
• Permitir que el cloroformo se evapore e introducir las 2 placas en una cámara de vidrio que contenga como
solvente de elución, una mezcla de cloroformo–metanol–ácido acético–agua (65:25:8:4).
• Dejar desarrollar las cromatoplacas hasta el frente del solvente ya marcado; retirar las cromatoplacas y
dejarlas secar.
• Una cromatoplaca se revelará con ninhidrina que pondrá de manifiesto la presencia de los
fosfoaminolípidos, la reacccion se lleva a cabo al calentarse a 100°C por 10 minutos.
• La otra cromatoplaca será revelada en cámara de Iodo sublimado.
1)
62
2) Mida los desplazamientos del frente de solvente y de cada una de las manchas en las cromatoplacas reveladas
para calcular el Rf de cada una de ellas e intente identificar a qué lípido corresponde. Utilice en anexo II
para ello.
EXPERIMENTO 4. REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS Y DE CEREBRÓSIDOS
• En un tubo de ensaye agregue 1 mL de la fase metanólica obtenido en la extracción de lípidos de cerebro
y compruebe la presencia de cerebrósidos utilizando la reacción de Molisch–Udransky cuya técnica y
fundamento ya han sido descritos anteriormente (Práctica No. 8 “Carbohidratos”)
• Registrar sus resultados positivo o negativo.
EXPERIMENTO 5. REACCIÓN DE LA ACROLEÍNA

• Preparar 2 tubos de ensayo secos y etiquetarlos.
• Agregar a los dos tubos de ensayo una pequeña cantidad de KHSO4, aproximadamente la punta del
abatelenguas.
• A un tubo de ensayo añadir 5 gotas de glicerina.
• A otro tubo de ensayo agregar 5 gotas de cualquiera de estas soluciones: aceite de algodón, cártamo o
girasol.
• Calentar en Baño María a ebullición hasta observar el desprendimiento de los vapores o calentar
directamente a la flama del mechero hasta observar el desprendimiento de los vapores, según la indicación
de su Profesor.
• Retirar los tubos y percibir los vapores de forma indirecta y tratar de identificarlos. ¡PRECAUCIÓN!
• Registrarlos resultados.
1) ¿Se puede considerar esta reacción general para cualquier lípido? ¿Por qué?
2) Escribir la reacción que se ha efectuado.
EXPERIMENTO 6. REACCIÓN DE LIEBERMANN-BURCHARDS

LA SIGUIENTES REACCIONES DEBEN REALIZARSE ESTRICTAMENTE BAJO LA
SUPERVISIÓN DEL PROFESOR
• Preparar 2 tubos de ensayo y etiquetarlos.
• En el tubo 1 agregar 3 mL de solución clorofórmica de colesterol puro.
• En el tubo 2, agregar 3 mL de la fase clorofórmica obtenido de la extracción de lípidos de cerebro en el
experimento 2.
63
• Añadir a ambos tubos, 1 mL de (CH3CO)2O anhídrido acético y mezclar.

• Finalmente, añadir 2 mL de H2SO4 concentrado de forma lenta, resbalándolo por las paredes del tubo.
EXPERIMENTO 7. PERMEABILIDAD DE LA BICAPA LIPÍDICA

• Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y enumerar del 1 al 4.
• Agregar los reactivos según se indica en la siguiente tabla. Al añadir las soluciones, realizarcon mucho
cuidado resbalando por las paredes del tubo para estratificar.
Reactivo Tubo 1 2 3 4
Agua destilada mL 5 5 5 5
Azul de metileno más monoestearato de glicerilo en butanol mL 2 --- --- ---
Azul de metileno más fosfolípidos en butanol* mL --- 2 --- ---
Azul de metileno más colesterol en butanol mL --- --- 2 ---
Azul de metileno en butanol mL --- --- --- 2
* NOTA: 2 mL de la fase clorofórmica (obtenida del exp. 2) evaporar hasta sequedad en baño María a
ebullición (cuidando que no se queme), el residuo se disuelve con 2 mL de azul de metileno en butanol y
agregar este contenido al tubo 2 de la serie.
• Dejar los tubos en reposo procurando moverlos lo menos posible y haga observaciones a las 2, 4, y 24 horas.
• Registrar los resultados.
1) ¿Observó el paso del colorante en todos los tubos? Explique a qué se debe esa diferencia.

64
PRÁCTICA No.11
ÁCIDOS NUCLEICOS
El control de todos los procesos vitales en la forma tan ordenada que realiza una célula, como son la
transformación de energía en sus diferentes formas, la síntesis de moléculas propias, la degradación de los
metabolitos, el transporte de diferentes materiales a través de sus membranas, la formación de nuevas células, la
diferenciación celular, la creación de nuevos seres, etc.; se puede explicar debido a la existencia de proteínas
específicas, fundamentalmente enzimas. Sin embargo, para la biosíntesis de proteínas las moléculas que poseen
la información necesaria son el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el ácido ribonucleico (RNA). Estas moléculas
son los llamados ácidos nucleicos. Rompiendo la máxima bioquímica de que todas las enzimas son proteínas, se
descubrió que algunos RNA pueden funcionar como catalizadores. Los ácidos nucleicos reciben este nombre
debido a que en el año de 1871 el químico suizo Friedrich Miescher logró aislar del núcleo celular una sustancia
que llamó nucleína, la cual debido a su carácter ácido se denominó posteriormente ácido nucleico.
Sin embargo, existen otros tipos de ácidos nucleicos. El ácido desoxirribonucleico se encuentra
fundamentalmente en el núcleo y es el que posee la información genética y la transmite al citoplasma y por ser
capaz de replicarse puede transmitir la información de padres a hijos. En la célula, fuera del núcleo, normalmente
existen tres tipos de ácidos ribonucleicos que son: el ácido ribonucleico ribosomal(RNAr), el ácido ribonucleico
mensajero (RNAm), y el ácido ribonucleico soluble o de transferencia (RNAt). El RNAr se encuentra en los
ribosomas y su peso molecular es de 2 000 000. El RNAm tiene un peso molecular de 300000, se forma en el
núcleo y lleva la información al citoplasma. El RNAt tiene un peso molecular de 25 000 a 30 000 y se encuentra
disuelto en el citoplasma. El DNA es una de las biomoléculas más grandes que se conocen hasta ahora y su peso
molecular es mayor a un billón.
Tanto el DNA como el RNA se encuentran asociados con proteínas fuertemente básicas (histonas o protaminas)
formando las llamadas nucleoproteínas. La estructura química es similar en todos los ácidos nucleicos, todos
están constituidos por bases púricas, bases pirimídicas, pentosa y ácido fosfórico. El DNA tiene como bases
púricas adenina y guanina, como bases pirimídicas, citosina y timina, como pentosa la 2-desoxiribosa y ácido
fosfórico H3PO4. Los ácidos ribonucleicos tienen como bases púricas la adenina y guanina y como bases
pirimídicas uracilo y citosina, como pentosa la D–ribosa y H3PO4.
Los ácidos nucleicos son macromoléculas formadas por la unión de varios nucleótidos. Un nucleótido se puede
considerar como un éster fosfórico de un nucleósido, que es la unión de una base púrica o pirimídica con
una pentosa. Los mononucleótidos se unen entre sí por medio de un enlace fosfodiester 3’- 5’, formando los
polinucleótidos.
65
Por otro lado cuando se desea purificar una sustancia se deben seleccionar las células o tejidos que se van a
utilizar como materia prima. En el caso del DNA esta selección es en especial importante porque el contenido de
DNA es pequeño en la mayor parte de las células. La célula ideal será aquella que tenga una relación
núcleo/citoplasma alta, como en los linfocitos y células del tumor ascítico de Ehrlich. Sin embargo, no es
fácil obtener este tipo de células por lo que frecuentemente se usan órganos típicamente linfoides como el timo
y el bazo. El primer paso en la extracción del DNA es la homogeneización del tejido. Este paso puede
degradar en parte la molécula del DNA si no se toman las precauciones necesarias, la solución reguladora es de
citrato 0.01M y NaCl 0.14M, a pH de 7.2 a 7.4; la fuerza iónica de esta solución hace insoluble a la
desoxirribonucleoproteína. Si se centrifuga este homogeneizado, en el residuo quedarán los restos celulares y
las desoxirribonucleoproteínas insolubles. En el sobrenadante se encuentran compuestos solubles como la
mayor parte de los ácidos ribonucleicos.
Al homogeneizar el tejido se liberan las enzimas de los lisosomas, entre ellas la DNAsa, la cual hidroliza el DNA.
Se sabe que el Mg++es indispensable para la actividad de esta enzima; si en la solución existe citrato, éste se
une al Mg++ e impide la acción de la DNAasa. Otra forma de evitar la acción hidrolítica de la enzima es trabajar
a temperaturas bajas (0°C a 2°C). El siguiente paso en la purificación está basado en que las
desoxirribonucleoproteínas y el DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, mientras que la mayor
parte de las proteínas precipitan en estas condiciones. Si el residuo se suspende en solución de NaCl 2.6 M y se
centrifuga, el residuo insoluble estará formado fundamentalmente por proteínas, mientras que el DNA
permanecerá en solución. Este DNA se puede precipitar selectivamente por la adición selectiva de 2 volúmenes
de alcohol etílico al 95% formándose un precipitado blanco fibroso, el cual se puede recoger por rotación de un
agitador de vidrio con pequeños salientes.
Existen varios métodos para identificar y cuantificar a los ácidos nucleicos. El método más utilizado es el
espectrofotométrico, el cual está basado en que tanto el DNA como el RNA absorben a 260 nm. La absorbancia
es proporcional a la concentración del ácido, por lo tanto, el medir la absorbancia es un método cuantitativo muy
sensible y sencillo, pero no distingue entre DNA y RNA. Es de gran utilidad cuando las muestras están puras.
Una reacción muy utilizada para identificar y cuantificar DNA es la llamada reacción de Dische, la cual está
basada en que el reactivo de difenilamina reacciona específicamente con el DNA dando una coloración azul
cuya intensidad es proporcional a la concentración de DNA. En realidad, la especificidad de esta reacción no
es absoluta, ya que la difenilamina es un reactivo específico para las 2-desoxipentosas en general, pero en
condiciones normales la cantidad de azúcares capaces de interferir es despreciable.

66
EXPERIMENTO 1. OBTENCIÓN DEL DNA DE BAZO.

• Agregar 300 mL de solución reguladora de Citrato 0.01M-NaCl 0.14M, pH=7.2 fría, en un vaso de
licuadora previamente enfriado.
• Hacer funcionar la licuadora a baja velocidad y añadir los trozos de bazo de todos los equipos, esperar a que
se homogenice completamente el primero antes de añadir el segundo y así sucesivamente.
• Terminada la adición, continuar homogeneizando por 30-60 segundos más.
• Vaciar a tubos Falcon de 50 mL teniendo cuidado de tarar los tubos opuestos ¡PRECAUCIÓN!
• Al terminar la centrifugación, DESECHAR EL SOBRENADANTE, tener cuidado de NO DESECHAR
EL RESIDUO INSOLUBLE O BOTÓN.
• Añadir al botón 15 mL de solución de Citrato 0.01M-NaCl 0.14M, pH=7.2 fría, homogenizar y centrifugar
a 5000 rpm durante 5 min para lavar el DNA.
• Desechar el sobrenadante cuidando de no perder el botón de precipitado.
• Añadir 15 mL de solución de NaCl 2.6 M fría al residuo insoluble que contiene el DNA y residuos celulares.
• Agitar el tubo hasta obtener un completo homogenizado. El DNA es soluble en esta solución mientras que
la mayor parte de las proteínas son insolubles.
• Al terminar la centrifugación, DECANTAR EL SOBRENADANTE que contiene el DNA en solución
en un vaso de precipitados de 100 mL y DESECHAR EL RESIDUO INSOLUBLE, que contiene restos
celulares y proteínas insolubles.
• Al sobrenadante obtenido que se encuentra en el vaso de precipitados añadir lentamente el doble del
volumen (o en su defecto agregue aprox. 30 ml) obtenido del sobrenadante de alcohol etílico al 95%,
procurando que la fase de alcohol quede en la parte superior.
• Observar la formación de un precipitado blanco, denso, en la interfase.
• Registrarlos resultados.
1) Explicar por qué se utilizó bazo como materia prima y no otro órgano cualquiera.
2) ¿Sería conveniente utilizar solución reguladora de fosfatos para la extracción del DNA? ¿Por qué?
3) ¿Por qué es conveniente trabajar durante toda la extracción a baja temperatura?

67
EXPERIMENTO 2. CARACTERIZACIÓN Y ANÁLISIS CUANTITATIVO DEL DNA.

• Añadir a cada tubo las soluciones según se indica en la tabla siguiente:
Tubos
1 2 3 4 5 6
Solución[DNA] mg/mL
1 mL 2
0.5 mL 2
0.25* mL 2
0.125* mL 2**
Problema mL 2
Agua destilada mL ---- 2 2 2 2 ---
Volumen final mL 2 2 2 2 2 2
Nota: *Estas concentraciones son a partir de la transferencia de 2 mL de la mezcla
anterior del tubo.
**En este tubo del volumen final de 4 mL, pipetear 2 mL y descartarlo.
• Añadir a todos los tubos 4 mL de reactivo de Dische y agitar vigorosamente.
• Incubar los tubos en baño María a ebullición por 10 minutos.
• Enfriar los tubos en baño de hielo-agua para leer en el espectrofotómetro.
• Registrarlos resultados en la tabla siguiente.
[DNA]
Tubo Absorbancia
mg/mL
1 1
2 0.5
3 0.25
4 0.125
5 -------- Blanco
6 Problema
Evidencias de aprendizajes
1) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde las absorbancias serán las ordenadas y los mg de
DNA las abscisas.
2) Interpolar la absorbancia del tubo No. 6 para encontrar la concentración de DNA (mg/mL) y calcular la
cantidad total de DNA en su problema.

68
EXPERIMENTO 3. CARACTERIZACIÓN Y ANÁLISIS CUANTITATIVO DEL RNA

Tubos
1 2 3 4 5 6
Solución[RNA] mg/mL
0.1 mL 3
0.05 mL 3
0.025* mL 3
0.0125* mL 3**
Problema mL 3
Agua destilada mL ---- 3 3 3 3 ---
Volumen final mL 3 3 3 3 3 3
Nota: *Estas concentraciones son a partir de la transferencia de 3mL de la mezcla
anterior del tubo.
**En este tubo del volumen final de 6mL, pipetear 3mLy descartarlo.
• Añadir a todos los tubos 6 mL del reactivo de orcinol ácido y 0.4 mL del reactivo de orcinol-alcohol y
agitar vigorosamente.
• Incubar los tubos en baño María a ebullición por 10 minutos.
• Enfriar los tubos en baño de hielo-agua para leer en el espectrofotómetro.
• Registrar los resultados en la tabla siguiente.
Tubo [RNA] mg/mL Absorbancias

1 0.1
2 0.05
3 0.025
4 0.0125
5 ------- Blanco
6 Problema
1) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde las absorbancias serán las ordenadas y los mg de
RNA las abscisas.
2) Interpolar los valores de absorbancia de su problema y determinar la concentración real en mg/mL.

69
EXPERIMENTO 4. DETERMINACIÓN DE FOSFATO TOTAL

Tubo
Reactivo 1 2 3 4 5 6
Buffer de acetato 0.1M pH 4.0 mL 7 7 7 7 8 8
Reactivo molibdato al 2.5% mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solución de vitamina C al 1% reciente mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Agua destilada mL 2
Solución tipo 1 M/mL 2
Solución tipo 2.5 M/mL 2
Solución tipo 5 M/mL 2
Problema DNA 1
Problema RNA 1
• Incubar los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos.

• Registrar los resultados en la tabla siguiente
Tubo [FOSFATO] Absorbancia

M/mL
1 ------- Blanco
2 1
3 2.5
4 5
5 Problema DNA
6 Problema RNA
1) Construir la curva tipo para fosfato con los datos de la tabla, donde las absorbancias serán las ordenadas y
los M/mL de las soluciones tipo las abscisas.
2) ¿Cómo afecta el medio ácido al enlace 3’-5´diéster fosfato?
3) ¿Cómo afecta el medio alcalino al enlace 3’-5´diéster fosfato?

70
APÉNDICE I
GLOSARIO DE REACTIVOS QUÍMICOS
Reactivo Fórmula
Acetato Cúprico (Acetato de cobre II) Cu (CH3COO)2
Acetato de plomo Pb (CH3COO)2
Acetato de sodio NaCH3COO-
Ácido 3,5 - dinitrosalicílico C7H4N2O7
Ácido acético CH3-COOH
Ácido clorhídrico HCl
Ácido nítrico HNO3
Ácido sulfúrico H2SO4
Ácido tricloroácetico CCl3COOH
Ácido yodhídrico HI
Alcohol Butílico (Butanol) CH3 (CH2)3OH
Alcohol Etílico (Etanol) CH3CH2OH
Alcohol Metílico (Metanol) CH3OH
Alfa-Naftol C10H8O
Anhídrido acético (CH3CO)2O
Azul de metileno C16 N3H18SCl
Azul de timol C27H30O5S
Bisulfato de potasio KHSO4
Cianuro de potasio KCN
Citrato de sodio Na3C6H5O7
Clorhidrato de fenilhidracina C6H5NHNH3+Cl-
Cloroformo CHCl3
Cloruro de Amonio NH4Cl
Cloruro Férrico (Cloruro de hierro III) FeCl3
Cloruro de Mercurio (Cloruro de mercurio II) HgCl2
Cloruro de potasio KCl
Cloruro de sodio NaCl
Difenilamina C12H12N
Dimetil-para-Fenilendiamina C8H12N2

71
Ferricianuro de potasio K3[Fe (CN)6]

Formaldehído CH2O
Fosfato diácido de potasio KH2PO4
Fosfato monoácido disódico Na2HPO4
Fosfato ácido HPO4
Fosfato de dihidrógeno H2PO4
Hidrosulfito de sodio Na2S2O4
Hidróxido de amonio NH4OH
Hidróxido de sodio NaOH
Malonato de sodio CH2(COOH)2
Nitrato de plata AgNO3
Orcinol C7H8O2
Óxido cuproso Cu2O
Óxido de manganeso MnO2
Permanganato de potasio KMnO4
Peróxido de hidrogeno H2O2
Resorcinol C6H6O2
Succinato de sodio C4H4Na2O4*6H2O
Sulfato Cúprico (Sulfato de cobre II) CuSO4
Sulfato ferroso FeSO4
Sulfocianuro de amonio NH4SCN
Sulfocianuro férrico (Fe (SCN)3)
Sulfocianuro de potasio KSCN
Sulfuro de plomo (II) PbS
Tiosulfato de sodio Na2S2O3
Yoduro de potasio KI

72
REACTIVOS ESPECIALES
Nombre Composición
Azul de Bromofenol C19H10Br4O5S al 0.1% en etanol indicador ácido - base
Barfoed Solución de acetato cúprico (CuC4H6O4) en ácido acético
Solución de orcinol en ácido clorhídrico concentrado con cloruro de hierro (III)
Bial
en mínima cantidad.
Dische Difenilamina en ácido acético concentrado y ácido sulfúrico concentrado
Fehling A Sulfato de cobre (CuSO4) cristalizado
Fehling B Sal de Seignette (tartrato mixto de potasio y sodio KNaC4H4O6·4H2O)
Fenoftaleína C20H14O4 al 0.1% en etanol, indicador ácido - base
Hanus Solución de ácido acético glacial y yodo mono-bromuro (IBr)
Lugol Yodo en yoduro de potasio
Millón Mercurio en ácido nítrico concentrado + agua.
Molisch-Udransky Solución de alfa naftol al 0.15% en etanol al 10%
Ninhidrina en butanol CH3 (CH2)3OH en butanol
Orcinol - ácido Solución de cloruro férrico al 10% con ácido clorhídrico concentrado
Orcinol alcohol Disolución de orcinol en etanol
Seliwanoff Solución de resorcinol 0.05% en ácido clorhídrico 1:3 recién preparado

73
APÉNDICE II
VALORES DE Rf DE FOSFOLIPIDOS
Lípido 1 2 3
Fosfatidil serina-4,5-bisfosfato 0.09
Lisofosfatidil colina 0.1 0.12
Fosfatidil serina-4-fosfato 0.15
Esfingomielina 0.025 0.21
Fosfatidil colina 0.39 0.32 0.3
Fosfatidil inositol 0.47 0.48
Fosfatidil serina 0.5 0.59 0.39
Ácido fosfatídico 0.79
Fosfatidil etanolamina 0.81 0.88 0.85
Lípidos Neutros 0.98
1. Solvente: Cloroformo-Metanol-Ácido acético-Agua, 50:25:8:4 (v/v). Calculados con datos de Skipski VP,
Peterson RF and Barclay M (1962) "Separation of Phosphatidyl Ethanolamine, Phosphatidyl Serine and
Other Phospholipids by Thin-Layer Chromatography". J. Lipid Res. 3:467-470.
2. Solvente: Cloroformo-Metanol-Ácido acético-Agua, 25:15:4:7 (v/v). Calculados con datos de Skipski VP,
Peterson RF and Barclay M (1964) "Quantitative Analysis of Phospholipids by Thin-Layer Chromaograpy".
Biochem. J. 90:374-378.
3. Solvente: Cloroformo-Metanol-Ácido acético-Agua, 55:43:3:4 (v/v). Datos de Medh JD and Weigel PH

(1989) "Separation of Phosphatidyl Inositols and Other Phospholipids by Two-Step One-Dimensional Thin-
Layer Chromatography". J. Lipid Res. 30:761-764.

74

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA

SEMESTRE: AGOSTO 2023-ENERO 2024

NOMBRE DEL ALUMNO(A):

No. BOLETA: SEMESTRE: 2°

GRUPO: 2CM EQUIPO:

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

AUXILIARES DE LABORATORIO EN SERVICIO SOCIAL

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

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FECHA DE INICIO: Lunes, 28 agosto de 2023

VACACIONES Lunes 25 de diciembre 2023 al Viernes 05 de enero 2024

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Reglamento Interno de la Materia

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Normas de Seguridad en el Laboratorio

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

CORROSIVO GAS COMPRIMIDO

EXPLOSIVO NIVEL DE RIESGOBAJO

VENENO DAÑO AMBIENTAL

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

6. CINÉTICA QUÍMICA Y CATÁLISIS……………… 31

11. ÁCIDOS NUCLEICOS……………………………….. 65

12. APÉNDICE I………………………………………… 71

13. APÉNDICE II…………………………………………. 74

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

EJERCICIO 1. DISTRIBUCIÓN DE LOS ALUMNOS.

g. Localizar la posición de las válvulas de apertura de cada tubería.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

3. En el esquema anterior, marcar la posición de las válvulas de apertura.

EJERCICIO 2. VALE DE RESGUARDO DEL MATERIAL DE LABORATORIO.

1. ¿Cuál es el uso de cada una de las siguientes piezas de material de laboratorio?

EJERCICIO 3. MANEJO DEL MECHERO.

a) No encender el mechero hasta que su profesor se lo indique.

2) Ilustrar la forma correcta de encender el mechero.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

EJERCICIO 4. COMO CALENTAR UN LÍQUIDO EN UN TUBO DE ENSAYO.

b) No olvidar quitarse los guantes de látex cuando se emplee el mechero.

g) Continuar calentando hasta lograr que el agua hierva, sin proyectarse.

i) Al terminar cualquier experimento apagar el mechero para evitar accidentes.

1. Describir e ilustrar la forma correcta de manejar la pinza para tubo ensayo

2. Ilustrar la forma correcta de calentar un líquido en un tubo de ensayo.

EJERCICIO 5. INSTALACION DE UN BAÑO MARÍA.

d) Encender el mechero y calentar a la temperatura que le indique su profesor.

1) Ilustrar el montaje del aparato.

2) ¿Por qué no se debe llenar el vaso completamente?

3) ¿Por qué se emplean los cuerpos de ebullición?

EJERCICIO 6a. MANEJO DE REACTIVOS LÍQUIDOS: SEGURIDAD.

1) Describir la forma de uso de la pre - pipeta.

EJERCICIO 6b. MANEJO DE REACTIVOS LÍQUIDOS: PREPARACION DE SERIES.

a) Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4.

1. Elaborar un esquema que describa este experimento.

3. ¿Cuántos tipos de pipetas existen?

EJERCICIO 6c. MANEJO DE REACTIVOS LÍQUIDOS: TITULACIÓN.

1) Ilustrar el dispositivo de titulación.

2) Identificar el tipo de aforo de la bureta utilizada.

3) Describir la forma correcta de leer el volumen en la bureta.

EJERCICIO 7. MANEJO DE REACTIVOS SÓLIDOS.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MÉDICA I

2) Pesar las muestras que le solicitó su profesor.

EJERCICIO 8. TARAR TUBOS PARA CENTRIFUGAR.

a) Localizar la balanza de dos platillos y la centrífuga refrigerada.