AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE RHIZOPUS sp EN MUESTRAS

REALIZADAS POR EL METODO DE INOCULACIÓN POR EXPOSICIÓN

L. Martínez, S. Robles, M. Vergara, C. Donado, S. Guzman.

Aprendices del Sena Agropecuario y Agroindustrial de Gaira.
Tecnólogos en Procesos Biotecnológicos Aplicados a la industria.
__________________________________________________________________

RESUMEN reproducción. El género Rhizopus

incluye varias especies, siendo
En el presente trabajo, se realizó un
Rhizopus stolonifer (anteriormente
cultivo inicial por medio de
conocida como Rhizopus nigricans)
inoculación por exposición en el baño
una de las más conocidas debido a
de mujeres del centro S.A.A.G. en
su papel en la descomposición de
caja Petri con agar de arroz
alimentos y su capacidad para causar
previamente formulado y elaborado
daños en frutas y vegetales. Estos
por los aprendices, esto con el fin
hongos son saprófitos, lo que
iniciar un cultivo microbiano, su
significa que obtienen su alimento
completo desarrollo y multiplicación
descomponiendo materia orgánica
bajo las condiciones óptimas dadas
muerta. Pueden encontrarse en una
en laboratorio. Como resultado se
variedad de sustratos, incluyendo
aislaron e identificación hongos del
suelos ricos en materia orgánica,
genero Rhizopus spp tanto en su
frutas y vegetales en
estado macroscópico como
descomposición, y productos
microscópico.
alimenticios. Aunque algunas pueden
causar infecciones en seres humanos
y animales, particularmente en
INTRODUCCIÓN
individuos con sistemas
Rhizopus es un género de hongos inmunológicos debilitados. Estas
que pertenece a la clase infecciones son conocidas como
Zygomycetes y a la familia mucormicosis y pueden ser graves.
Mucoraceae. Estos hongos son muy
comunes en el ambiente y se
encuentran ampliamente distribuidos MATERIALES Y METODOLOGÍA
en la naturaleza. Los hongos
Para estudiar este tipo de hongo en
Rhizopus son generalmente de
un entorno de laboratorio, los
tamaño microscópico, aunque
materiales y métodos son:
pueden formar estructuras visibles a
simple vista en ciertas etapas de su  Cultivo de Rhizopus o
ciclo de vida, la forma común que se esporas de Rhizopus.
asocia con Rhizopus es la de  Azul de lactofenol
esporangios, estructuras asexuales
que contienen esporas de
  Medios de cultivo, Agar de
arroz.
 Placas de Petri estériles.
 Incubadora con control de
temperatura.
 Microscopio.
 Microscopio estereoscópico
(opcional para observar
estructuras en 3D).
 Cinta adhesiva y gasa.
 Equipo de seguridad, como
batas antifluidos guantes y
tapa bocas.
 Plancha de calentamiento
 Ellermeyer
 Agitador magnético y
varilla.
METODOLOGIA
 Preparación del medio de
cultivo: el agar de arroz.
Para esto se pesó:
 200g e arroz
 Agar 15 Gr
 Agua destilada 1000 Ml
 En un ellermeyer se
agregaron los 200g de arroz
junto con los 1000 mL de agua
destilada sobre la plancha
calentadora durante 30 min.
Una vez cocido el arroz se
dejó enfriar y se coló en un
vaso precipitado solo el agua
del arroz.
 Una vez fría por completa el
agua de arroz se le agregaron
los 15 Gr de agar. Hecho este
paso el agar de arroz fue
llevado al autoclave por 15 min
a 121 °c.
 Una vez esterilizado el agar
se reservó en la nevera para
usarlo cuando fuera necesario.
 En 3 cajas Petri con el agar de
arroz ya solidificado se llevó a
3 lugares estratégicos para
realizar la inoculación por
exposición y así iniciar el
cultivo microbiano.
 Se colocaron las cajas de
Petri en una incubadora a la
temperatura adecuada para el
crecimiento de Rhizopus, que
generalmente es alrededor de
25-30 grados Celsius durante
tres (3) días.
 Se tomó una muestra del
cultivo de Rhizopus y fueron
transferidas con ayuda de una
asa recta a la caja de Petri que
contiene el medio de cultivo
estéril solidificado. Se introdujo
en el centro de la caja Petri
una peque porción del cultivo
con ayuda de un asa recta
previamente esterilizada.
 En una placa se agregó una
gota de azul de lactofenol,
posteriormente en un trozo de
cinta que contenía la muestra
adhesiva de adhirió a la placa.
  Se realizó observaciones
periódicas utilizando un Muestra 2. Cultivo de Rizhopus en caja Petri.
microscopio para estudiar el Observado en Microscopio estereoscópico.
crecimiento y las estructuras
del hongo. Se pudo observar la
formación de hifas.

 Se registraron observaciones
y análisis de los datos
obtenidos durante el
crecimiento y desarrollo del
Rhizopus en el medio de
cultivo.
Muestra 3. Cultivo de Rizhopus en caja Petri.

RESULTADOS
DISCUSIÓN DE RESULTADOS.

Colonia color azul – grisáceo Al El ambiente húmedo y cerrado del

microscopio: macrofisionado, baño se convierte en un sitio apto
senicítico, hialino, caracterizado por para el crecimiento de diversas
presencia de rizoides (raíces) especies de hongos, como se
(Muestra 1) muestra en el cultivo por exposición
de placa. El género Rhizopus incluye
(Muestra 3.) Aspecto velloso- una variedad de hongos que
algodonoso desempeñan un papel importante en
la naturaleza, tanto en la
descomposición de materia orgánica
como en la fermentación de
alimentos. Si bien la mayoría de estas
especies son inofensivas, algunas
pueden ser patógenas en ciertas
circunstancias, y otras tienen
aplicaciones útiles en la industria
Muestra 1. Cultivo de Rizhopus en placa. alimentaria y biotecnológica.
Observado en microscopio a un objetivo de
40x.

CONCLUSIONES
Las diferentes estructuras (macro y
microscópicas) presentes en un
hongo son carácter importante en
taxonomía de los diferentes grupos,
pues estas permiten una
identificación preterminada para cada
tipo de hongo.
Por medio de la técnica de
inoculación por exposición de placas
de Petri, fue posible comprobar la
existencia de hongos en el medio
ambiente, favoreciéndose el
crecimiento en condiciones de
humedad con poca ventilación. Se
visualizaron colonias del genero
Rhizopus spp en las que pudimos
observar su morfología macroscópica
y microscópica en donde se
fortaleció el aprendizaje obtenido en
teoría.

BIBLIOGRAFIA
chrome-extension://
efaidnbmnnnibpcajpcglclefindmkaj
/https://
repositorioinstitucional.uaslp.mx/
xmlui/bitstream/handle/i/4391/
Micolog%C3%ADa.pdf?
sequence=3&isAllowed=y
chrome-extension://
efaidnbmnnnibpcajpcglclefindmkaj
/https://www.researchgate.net/
profile/Barnita-Ghosh/publication/
216111963_Current_Commercial_P
erspective_of_Rhizopus_oryzae_A
_Review/links/
02e7e51534084da8e7000000/
Current-Commercial-Perspective-
of-Rhizopus-oryzae-A-Review.pdf